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早期糖尿病视网膜病变患者血清相关细胞因子的检测
目的 应用抗体芯片技术研究早期糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中细胞因子表达谱及其水平变化,并探讨其临床意义.方法 32例2型糖尿病患者,其中16例合并轻中度非增殖性糖尿病视网膜病变(NPDR组),16例未合并视网膜病变(DM组).应用Raybiotech人类细胞因子抗体芯片同步检测血清中42种细胞因子水平的变化.以8名健康志愿者作为正常对照组.结果 与DM组相比,NPDR组中性粒细胞活化剂(ENA-78)、生长相关基因(GRO)、调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)、血管生成素、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血小板源性生长因子(PDGF)的水平均显著升高(P<0.05);而IL-1α表达水平下降(P<0.05).在芯片所包含的42种细胞因子中ENA-78的水平变化明显,NPDR组是DM组的1.88倍和正常对照组的3.6倍.结论 早期DR患者血清中部分细胞因子表达水平存在差异,提示炎症反应在DR发生和发展中起重要作用,细胞因子有可能成为DR临床早期预警的标志物.
关键词： 早期糖尿病视网膜病变 细胞因子 血清 抗体芯片 -
抗体芯片在类风湿关节炎患者滑液与血浆蛋白检测中的应用
目的 应用抗体芯片研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑液与血浆蛋白表达谱的差异.方法 选取3例RA患者的血浆和滑液标本,用抗体芯片试剂盒同时检测507种蛋白质的表达,筛选配对滑液与血浆差异表达的蛋白(差异＞2.0倍).结果 筛选出67种在RA滑液中明显高表达的蛋白质,其中10种为新发现的滑液蛋白,包括IL-28A、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)-6、FGF-结合蛋白(FGF-binding protein,FGF-BP)、血管生成素(angiopoietin)4、刺鼠相关蛋白(agouti-related protein,AgRP)、食欲素(orexin)A、抵抗素样分子(resistin-like molecule,RELM)-β、肾母细胞瘤过度表达基因(nephroblastoma overexpressed,NOV)/CCN3、生长分化因子相关血清蛋白(growth and differentiation factor-associated serum protein,GASP) -2/WFIKKN、膜卷曲相关蛋白(membrane frizzled-related protein,MFRP).芯片分析未显示滑液中低表达的蛋白质.结论 揭示RA患者滑液蛋白质表达谱的特点可以为研究RA滑膜炎和(或)骨破坏的发生机制提供新的线索.
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蛋白质芯片技术对脐血浆生物活性成分的分析
目的 通过高通量筛选、检测脐血中细胞因子的种类和含量,全面了解脐血浆生物活性成分及表达水平.方法 取10位健康足月分娩产妇脐静脉血2 ml和健康成年女性志愿者捐献的外周静脉血2 ml,应用抗体芯片RayBio~((R)) Biotin Label-besed Human Antibody Array Ⅰ一次性检测507种细胞因子表达水平,两样本中细胞因子比值大于或小于两倍以上者为有显著差异.结果 在蛋白质芯片检测所包括的507种细胞因子中,脐血浆中有94种成分显著高于对照组,28种成分显著低于对照组.结论 抗体芯片技术能高通量、平行性检测脐血浆生物活性成分及表达水平,为深入研究脐血细胞因子积累了数据.
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耳背静脉割刺治疗扁平疣疗效观察
扁平疣是人类乳头瘤病毒引发的一种常见的疾病,多见于面部.在临床上多采用CO2激光、冷冻等治疗方法,均有一定疗效,但局部易遗留色素沉着、瘢痕,且复发率高,故不易为患者接受[1].我们用耳背静脉割刺疗法治疗扁平疣取得较好的疗效,并应用细胞因子抗体芯片的方法初步探讨其作用机制[2].
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洋川芎内酯Ⅰ通过PIGF通路诱导内皮细胞血管生成
探讨洋川芎内酯Ⅰ在血管内皮细胞模型中的促血管生成作用,并初步探索其作用机制.用MTT 方法考察洋川芎内酯Ⅰ对人微血管内皮细胞(HMEC-1)细胞活力的影响;用管腔形成实验观察洋川芎内酯Ⅰ对人微血管内皮细胞管腔结构形成的影响;用血管生成抗体芯片技术检测洋川芎内酯Ⅰ处理后人微血管内皮细胞中多种血管生长因子的变化情况,探寻其可能的作用机制.结果表明,洋川芎内酯Ⅰ在浓度等于或低于50μmol/L时对HMEC-1细胞活力无明显影响.管腔形成实验发现洋川芎内酯Ⅰ组管腔长度和支点数目较空白对照组均明显增多,说明洋川芎内酯Ⅰ能显著促进人微血管内皮细胞形成管腔结构,且表现出一定的浓度依赖性趋势.作用机制研究表明,洋川芎内酯Ⅰ对胎盘生长因子(PIGF)有明显的上调作用.这些结果提示,洋川芎内酯I可能是通过上调PIGF而促进人微血管内皮细胞的血管生成.
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基于琼脂糖膜为载体的抗体芯片工作条件的优化
目的:优化以琼脂糖修饰的玻片为载体的抗体微阵列的制备方法,提高微阵列信噪比及检测灵敏度.方法:选取单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)作为待检的靶蛋白,在琼脂糖膜上首先固定MCP-1捕获抗体,经过洗涤、封闭,然后依次加入标准抗原、生物素标记的检测抗体以及亲和素标记的cy3,分别孵育、洗涤后,激光共聚焦扫描仪扫描获取图像,分析各点的荧光强度,根据荧光强度确定捕获抗体的佳固定时间、温度以及适宜的洗涤缓冲液.结果:与4、37 ℃过夜固定相比,捕获抗体室温(25 ℃左右)过夜固定时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性高;捕获抗体过夜固定比固定2 h获得更高的检测灵敏度;另外,通过比较相同pH值不同溶质缓冲液的洗涤效应,pH 7.4的缓冲液PBST可获得更优信号强度.结论:本研究优化了以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列的反应条件,提高了微阵列的检测灵敏度.
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鼻病毒诱导哮喘急性加重的相关蛋白靶标筛选
目的 筛选鼻病毒诱发哮喘急性加重的相关蛋白靶标.方法 使用抗体芯片技术筛选出鼻病毒感染后的哮喘患者气道上皮细胞表达变化的蛋白,经过免疫沉淀捕获这些蛋白并通过质谱分析鉴定出这些有显著改变的蛋白,为了增强实验结果的可信度,也设置了鼻病毒感染及未感染的正常人气道上皮细胞作为对照组.结果 鼻病毒感染的哮喘患者气道上皮细胞与未感染鼻病毒的哮喘患者气道上皮细胞组间共筛选出3种差异蛋白,ATP合酶β亚基和桥粒连接蛋白1在感染组分别下调36.1倍和9.3倍、乳铁蛋白上调12.4倍.结论 ATP合酶β亚基、桥粒连接蛋白1、乳铁蛋白可能作为未来辅助诊治鼻病毒诱导哮喘急性加重的蛋白靶标.
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抗体芯片技术在卵巢癌诊断中的应用进展
蛋白质组学相关技术的发展使得对复杂蛋白表达模式,蛋白间相互作用,翻译后修饰的大规模分析变为可能,其中的抗体芯片在生物学研究中尤其是在血清中筛选鉴定肿瘤标志物方面已表现出巨大的潜力.目前,抗体芯片常用的抗体仍然是单克隆抗体,但是高特异性,高亲和力并能利用现有数据库大规模生产的重组抗体是研究的趋势.卵巢癌致病的生物学机制至今不明,用抗体芯片来鉴定卵巢癌组织中的异常表达蛋白进而进行肿瘤的早期诊断及治疗监测是目前研究的热点.本文将对抗体芯片基本原理与分类以及在卵巢癌诊断中的应用做一简要综述.
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泡型肝包虫病患者血清炎症因子的抗体芯片检测及分析
目的 应用抗体芯片技术检测并分析泡型肝包虫病患者血清中炎症因子的表达及临床意义.方法 选取泡型肝包虫病患者与健康对照组血清标本各3份,利用抗体芯片技术检测血清样品中炎症因子的水平,采用AAH-INF-G3数据分析软件进行分析.结果 与对照组比较,泡型肝包虫病患者血清中多种炎症细胞因子(CSF-2/3、IL-1α、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12p70、IL-13、IL-15、IL-17A、MCP-1/2、MIG、IFN-γ、TNF-α/β、TGF-β)表达水平发生显著变化(Fold change>2,<0.5;信号值>400).其中IL-1α、IFN-γ、TNF-α/β等细胞因子升高(2倍以上),IL-12p70、MCP-2等细胞因子下降(3倍以上).结论 免疫调节相关炎症因子可能参与泡型肝包虫病慢性炎症反应,可能是揭示泡型肝包虫病免疫逃逸机制的重要切入点.
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采用抗体芯片筛选鼻咽癌放射治疗抵抗相关的炎性因子
目的:采用抗体芯片筛选鼻咽癌放射治疗(放疗)抵抗相关的炎性因子.方法:以放疗抵抗鼻咽癌CNE2-IR细胞与放疗敏感鼻咽癌CNE2细胞的细胞蛋白质及其细胞培养上清为样本,采用抗体芯片(AAH-INF-3)比较炎性因子的表达差异,采用免疫组织化学方法检测差异炎性因子IL-8在放疗抵抗与敏感鼻咽癌组织(每组30例)中的表达.结果:炎性因子IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)在CNE2-IR细胞中的表达水平高于CNE2细胞,CNE2-IR细胞分泌的IL-8和GM-CSF水平也高于CNE2细胞,而CNE2-IR细胞分泌的基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase 2,TIMP-2)水平低于CNE2细胞; IL-8在放疗抵抗鼻咽癌组织中的表达明显高于放疗敏感鼻咽癌组织.结论:IL-8,GM-CSF,ICAM-1和TIMP-2表达或分泌异常可能在鼻咽癌放疗抵抗中具有重要作用,为进一步研究鼻咽癌放疗抵抗的分子机制提供了新线索.
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重组血管基膜衍生多功能肽对肺腺癌A549细胞信号蛋白磷酸化水平的影响
目的 研究重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)对人肺肺癌A549细胞信号蛋白磷酸化水平的影响,初步探索rVBMDMP抗肿瘤作用的分子机制.方法 体外培养肺腺癌A549细胞,制备全细胞抽提液,采用信号转导抗体芯片检测rVBMDMP处理前后A549细胞信号蛋白磷酸化水平变化.结果 rVBMDM作用后磷酸化水平升高的包括黏着斑激酶FAK、细胞凋亡相关蛋白死亡受体(Fas)、死亡配体(FasL)、半胱胺酸蛋白酶蛋白(Caspase-6)、Fas相关因子1(FAF1)、和脆性组氨酸三联体蛋白(FHIT)等79个蛋白,下调的有整合蛋白αv、β1和β3、细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及核转录调节因子NF-kB等30个蛋白.结论 rVBMDMP抗肿瘤作用的分子机制可能与激活整合蛋白受体途径和死亡受体途径,以及使Bcl-2蛋白发生去磷酸化有关.
关键词： 肺癌 重组血管基膜衍生多功能肽 抗体芯片 分子机制 -
抗体芯片分析炎性细胞因子在复发性鼻息肉中的表达
目的:应用抗体芯片分析复发性鼻息肉黏膜组织中炎性细胞因子的表达.方法:用生物素标记从鼻息肉组,复发性鼻息肉组及对照组患者鼻黏膜组织中提取的总蛋白,然后与预先点有40个主要炎症相关细胞因子的特异抗体的抗体芯片膜反应,目标蛋白与辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗链霉生物素抗体结合并曝光显示反应信号,后用激光扫描仪将其转化为图像文件进行分析.结果:与对照组相比,鼻息肉患者组血清中多种炎性细胞因子包括促炎因子、抗炎因子、趋化因子、某些细胞因子受体等的表达水平大幅度提高;而复发性鼻息肉中较鼻息肉高表达的主要是趋化因子,在鼻息肉中高表达的促炎因子在复发性鼻息肉中呈现低表达趋势.结论:鼻息肉与复发性鼻息肉组织中细胞因子的表达存在差异;趋化因子高表达在鼻息肉复发中起重要作用.
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抗体蛋白芯片技术应用研究进展
蛋白组学是继基因组学后的生命科学发展迅速崛起的一个领域,蛋白质组学能全面、动态、定量地分析标本中蛋白质种类和数量的改变.健康和疾病时蛋白质表达谱的改变.蛋白质芯片是继基因芯片之后,作为基因芯片功能的补充发展起来的.Uetz等[1]命名用酵母双杂交系统构建的蛋白质芯片,首次把蛋白质芯片的概念用于全基因组范围内的蛋白质研究.蛋白芯片技术能有效地运用蛋白组学的有效功能,用于临床、药物学、信号转导通路、细胞周期调控、细胞结构和神经生物学等广泛领域的研究[2-3].
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丛集性头痛患者炎症细胞因子分析
目的 应用抗体芯片分析丛集性头痛患者在头痛急性发作期及发作间期血清中炎性细胞因子的表达变化,探索炎性细胞因子在丛集性头痛发病中可能的作用.方法 收集6例丛集性头痛患者急性发作期及发作间期的全血标本离心取血清藏于-80℃冰箱.将生物素做标记的上述12份血清标本,与预先备好的40个主要炎症相关细胞因子特异抗体芯片行膜反应,目标蛋白与红外荧光剂标记的抗链霉生物素抗体结合并曝光,采用红外荧光扫描仪扫描为图像文件后进行分析.结果 与发作间期相比,丛集性头痛患者急性发作期血清中多种炎性细胞因子表达水平明显升高,其中炎性因子IL-1β(44.18 vs.68.46)、IL-6(23.08 vs.36.40)、IL-8(151.87 vs.328.12)、IL-13(23.93 vs.38.87)、MCP-1(454.80 vs.725.75)及MIP-1β(265.08 vs.515.74)在两组间表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 多种炎性细胞因子在丛集性头痛的发病过程中有升高,提示可能有炎症参与丛集性头痛的发病,但具体机制尚需进一步的研究.
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抗体芯片筛选黄芩苷诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用靶点
目的 采用凋亡抗体芯片筛选黄芩苷诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用通路和靶点,探讨黄芩苷诱导胃癌细胞凋亡的相关机制.方法 采用MTT法检测黄芩苷对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用人凋亡抗体芯片双抗体夹心检测法筛选出黄芩苷(120 μmoL· L-1)组与对照组的差异表达蛋白;采用Western Blot法对筛选出的差异蛋白Caspase-3、Caspase-8、FasL、XIAP进行验证,增加对Fas、Caspase-9、TRAIL蛋白的检测.结果 与对照组比较,20 ～ 320 μmoL·L-1的黄芩苷在24～96 h不同时间点可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),且呈浓度和时间依赖性;80,120,160 μmoL·L-1黄芩苷均可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡(P＜0.01),且呈浓度依赖性;凋亡抗体芯片检测结果表明,120μmoL·L-1黄芩苷组的bad、Caspase-3、Caspase-8、FasL、HSP60、TRAIL R4、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、p21、p27、p53和SMAC等蛋白表达明显上调,而XIAP蛋白表达显著下调,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜ 0.01).Western Blot验证实验结果表明,160 μmoL·L-1浓度组的FasL蛋白相对表达量显著上升(P＜0.001);120,160 μmoL· L-1浓度组的Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas、TRAIL蛋白相对表达量显著上升(P＜0.01,P＜0.001),XIAP蛋白相对表达量显著下调(P＜ 0.001).结论 黄芩苷诱导胃癌细胞凋亡的抗肿瘤作用机制与FasL、TRAIL介导的死亡受体有关;抗体芯片是有效的靶点筛选手段,可用于药物作用靶点和药理机制研究.
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远华蟾蜍精通过调节应激与凋亡通路诱导结直肠癌细胞的凋亡
目的：研究远华蟾蜍精对结直肠癌（CRC）细胞活力及凋亡的作用，并分析其抑制细胞活力及诱导细胞凋亡的机制。方法四甲基偶氮唑盐法检测远华蟾蜍精对CRC细胞活力的影响，细胞核荧光染色及流式细胞术检测TBG对肿瘤细胞凋亡的作用；免疫荧光检测线粒体膜电位及细胞内ROS水平，Western blotting及应激与凋亡信号抗体芯片检测TBG作用于肿瘤细胞后凋亡相关蛋白表达变化。结果 TBG以浓度和时间依赖关系显著抑制HCT116、SW480的细胞活力；TBG诱导HCT116细胞发生核固缩，形成凋亡小体，增加Annexin V阳性细胞率；TGB上调细胞p53基因和Bax蛋白表达，促进Caspase9和PARP发生片段化；抗体芯片发现该药诱导肿瘤细胞中Bad磷酸化和PARP片段化，抑制了IΚBα、TAK1蛋白磷酸化和Survivin蛋白表达。结论TBG通过诱导细胞凋亡而显著抑制CRC细胞活力，其凋亡诱导作用可能与p53介导的Bax通路活化及IAP通路的阻断相关。
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大鼠放射性口腔黏膜炎病损组织细胞因子检测及意义
[目的]检测大鼠放射性口腔黏膜炎形成过程中病损局部组织内细胞因子,探讨其动态变化规律及意义.[方法]获取接受单次30 Gy x线照射后5 d、8 d、14 d的大鼠口腔黏膜组织,采用抗体芯片技术检测19种细胞因子;荧光定量PCR检测8种炎性相关因子的mRNA水平;ELISA定量检测IL-1α、IFN-γ、TIMP-1.[结果]抗体芯片技术检测到,照射后Frac、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α 5种细胞因子水平下降;IL-1β、LIX、VEGF、β-NGF 4种细胞因子照射前后水平无明显差异;照射后水平上升幅度＜2倍的有CINC-2、GM-CGF、Leptin、MCP-1和MIP-3α 5种细胞因子,上升幅度≥2倍的有CINC-3、INF-γ、IL-1α和TIMP-1 4种细胞因子.Real-time PCR检测到抗凋亡相关基因Bcl-2,以及IL-6、TNF-α、VEGF及IL-1β的mRNA表达水平下降;而促凋亡相关基因Bax、中性粒细胞局部募集相关基因CINC和TLR-9表达上升.IL-1α、IFN-γ、TIMP-1的ELISA检测结果与前两种检测结果一致.[结论]大鼠抗体芯片和荧光定量PER、ELISA检测结果互相佐证了病损组织内的细胞因子在口腔黏膜炎发生、发展、演进中呈现分泌受阻和表达增加的动态变化并发挥调控作用.
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蛋白质组学在系统性红斑狼疮研究中的应用进展
蛋白质组(proteome)是指细胞或组织在某一特殊环境、阶段或状态下表达的全套蛋白质谱,这一研究领域称为蛋白质组学(pmteomics),即高通量地确定某一细胞组织或器官的全套蛋白质的特征,包括表达水平、结构和功能特征,用于此项工作的技术有二维电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)、质谱(mass spectrometry)分析和蛋白质芯片技术等,后者又分抗体芯片和捕获芯片质谱联用,如表面增强激光解吸离子化(surfaceenhanced laser desorption/ionization,SELDI)蛋白质质谱芯片.
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大鼠动脉粥样硬化病变组织致炎-抗炎因子抗体芯片分析
目的 探讨动脉粥样硬化初始时病变部位细胞因子的变化.方法 腹腔注射酵母多醣诱发炎症叠加卵清蛋白激发免疫反应的方法,在高脂饮食的基础上诱导大鼠动脉粥样硬化.电镜检测主动脉壁泡沫细胞,抗体芯片试剂盒RayBio(R) Rat Cytokine Antibody Array 1.1检测主动脉壁细胞因子.结果 电镜下模型组见单核细胞穿过内膜层迁移至增宽的内皮下间隙并在内膜下聚集,形成血源性的单核细胞泡沫化,即典型的AS病变.抗体芯片显示除Fractalkine、IL-6外所有致炎因子均呈升高趋势,所有抗炎因子均呈微弱降低趋势.结论 炎症免疫刺激是AS发生的诱因之一,众多致炎因子与抗炎因子之间的平衡被打破是导致AS的重要原因.
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抗体芯片检测泡型包虫病肝组织凋亡因子的表达
目的 应用抗体芯片技术检测并分析泡型包虫病组织中凋亡因子的表达及其临床意义.方法 收集6例青海大学附属医院泡型包虫病患者手术切除的肝组织标本(包括病变边缘带和正常肝组织),提取组织蛋白并利用抗体芯片技术检测其凋亡因子水平,采用AAH-APO-G1软件进行数据分析.结果 边缘带肝组织中5种凋亡因子(Bad、Fas、IGFBP-3、P21及XIAP)表达水平与正常肝组织比较,其差异有统计学意义(P＜0.05),其中Bad、Fas、IGFBP-3及P21表达水平上调,XIAP的表达水平下调.结论 凋亡相关因子在泡型包虫病的疾病进展中发挥相关作用,可能与泡型包虫病的免疫逃逸机制存在联系,而促凋亡因子与抑制性凋亡因子之间也存在某些功能失衡.因此更深入的探究凋亡因子的作用机制对泡型包虫病诊断和治疗具有重要的参考意义.
