诊断铁缺乏蛋白芯片检测性能的研究

目的 对蛋白芯片检测平台在诊断铁缺乏人群时的实际检测性能进行研究.方法 用干扰性实验分析蛋白芯片检测血清铁蛋白(SF)与可溶性转铁蛋白受体(sTfR)的抗干扰能力;以同一批次点样后的多次重复性检测实验分析其检测稳定性;以对同一实验结果的重复检测分析其检测时效.结果 白蛋白、甘油三油酸酯均不对SF、sTfR的检测结果产生干扰;已建立的蛋白芯片检测系统在一次点样后至少可保存38 d;此检测系统的检测时效可以定为22 d.结论 诊断铁缺乏的蛋白芯片具有可用于实际应用的检测性能.

检测3种发热性疾病IgM抗体的微孔板蛋白质芯片的研制

[目的]针对风疹、麻疹、流行性乙型脑炎3种病毒建立能同时1次检测3种病毒IgM抗体的微孔板蛋白质芯片.[方法]将风疹、麻疹和乙脑3种病毒的特异抗原阵列于PVDF微孔板内,建立了在1个反应孔内能同时检测风疹、麻疹、乙脑等3种IgM抗体的蛋白质芯片检测方法.以ELISA实验为对照,通过对239份临床血清样本的分析,系统评价了该芯片系统的灵敏性和特异性.[结果]该芯片检测风疹、麻疹、乙型脑炎病毒的灵敏性分别为91.67%、100%、94.12%,特异性分别为99.53%、99.50%、99.10%,与ELISA实验的总符合率依次为98.74%、99.58%、98.74%.[结论]本研究建立的微孔板蛋白质芯片检测方法具有准确、简便、快捷、高通量等特点,具有良好的应用前景.

生牛乳中乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台的评价研究

目的 对本研究前期建立的用于乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台进行评价.方法 使用3份生牛乳样品,批内重复8次检测,计算批内精密度;另对3份生牛乳分别重复8个批次检测,计算批间精密度.对高浓度标准品稀释3个浓度后,进行稀释回收率试验;另对3个浓度基础液分别进行加标回收率试验;取10份生牛乳样品,分别用蛋白质芯片检测平台与商用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行检测并对结果进行方法学比较.结果 用于生牛乳中乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台的批内精密度在9.79％ ～ 15.90％之间,批间精密度在11.63％～23.38％之间;稀释回收率在79.8％ ～ 129.7％之间,加标回收率在105.7％ ～ 133.9％之间;经比较,两种方法的相关系数r=0.825 2,差异有统计学意义(t=4.132,P＜0.05),配对比较t检验结果显示两种方法差异无统计学意义(t=1.282,P＞0.05).结论 本研究建立的用于乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台能够满足实验室检测需要,尚有操作偏倚需进一步优化.

蛋白质芯片检测牛乳中乳铁蛋白条件的优化研究

目的 优选并确定蛋白质芯片检测牛乳中乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)的检测条件.方法 利用蛋白质芯片技术,采用双抗夹心的方式,通过点样探针选择试验、点样一致性试验、棋盘滴定试验、浓度倍比试验、生物检测限试验及检测下限试验终优化出针对目标蛋白的佳检测条件.结果 终确定以Lf鼠单抗75#为点样探针,预点样46点,46点至90点为点样一致性区段;点样探针浓度为0.5 mg/ml,检测抗体效价为1∶2 000,在0.6～ 612ng/ml之间剂量-反应关系呈现S型曲线,其线性范围在9.56 ～ 306 ng/ml之间;检测下限为1.68 ng/ml,生物检测限为3.59 ng/ml;建立了对Lf具有佳回归系数(r =0.998)的回归方程与标准曲线.结论 此研究优化了利用蛋白质芯片技术检测Lf的试验条件,为建立定量检测Lf的蛋白质芯片平台奠定了基础.

蛋白质芯片快速诊断铁缺乏的准确性分析

目的 对蛋白质芯片检测平台快速诊断铁缺乏人群的准确性与发现铁储量不足的能力进行分析.方法 采用免疫比浊法与蛋白质芯片法进行血清铁蛋白与可溶性转铁蛋白受体的方法学对照试验.计算蛋白质芯片法的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、约登指数及Kappa值.对两种方法所得铁储量进行配对比较t检验.结果 蛋白质芯片法诊断铁缺乏与比浊法相比,灵敏度较高、特异性较好、具有较高的诊断价值与真实性;其判断铁缺乏的能力与比浊法具有高度的一致性.但蛋白质芯片法筛查出更多有可能铁储量不足的情况,能更好地起到快速筛查的作用.结论 蛋白质芯片法作为快速筛查工具能同时检测SF和sTfR,对铁缺乏的诊断准确性较高,可用于进一步的应用研究.

蛋白质生物芯片

蛋白质芯片是一种新型的蛋白质分析技术,具有平行、快速、自动化检测、识别或纯化多元蛋白质的功能,在蛋白质功能分析、医学诊断,药物筛选和生物工业具有潜在的广泛应用前景.本文仅简要地介绍目前已经发展起来的几项有代表性的蛋白质芯片技术.

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术在医学中的应用

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术是近几年兴起的一个新方法.它是一种基于质谱技术与蛋白质芯片技术结合的研究方法,为研究蛋白质的结构、属性和功能提供了可靠的技术平台.

413运用蛋白质芯片科学阐明东洋医学的证以及开发诊断支持系统

电针胃经经穴促进大鼠胃黏膜修复过程中相关蛋白磷酸化的研究

目的:探讨电针促胃黏膜修复过程中对相关蛋白磷酸化的影响.方法:20只SD大鼠分为空白组、模型组、针刺非穴组和针刺穴位组,每组5只.使用无水乙醇灌胃法制作大鼠胃黏膜损伤模型.针刺非穴组取"足三里""梁门""四白"穴旁的对照点,针刺穴位组取"足三里""梁门""四白"穴,每次电针30 min,每日1次,共治疗7 d.对大鼠的胃黏膜细胞分别进行磷酸化抗体蛋白芯片检测,同时筛选720种磷酸化蛋白的表达差异,并进行比较.结果:模型组胃黏膜损伤指数与空白组比较显著升高(P＜0.01);针刺穴位组胃黏膜损伤指数低于模型组和针刺非穴组(P＜0.01),而与空白组比较差异无统计学意义(P＞0.05).蛋白芯片分析示:针刺穴位组与针刺非穴组均可上调模型大鼠的蛋白磷酸化的水平(≥1.5倍),但针刺穴位组上调的蛋白大多数参与了细胞的增殖,而针刺非穴组只有几种蛋白参与细胞增殖;同时针刺穴位组与针刺非穴组还可下调蛋白磷酸化水平(≥1.5倍),且针刺组下调的蛋白参与抑制细胞凋亡,而针刺非穴组下调的蛋白基本不参与细胞活动.结论:电针足阳明胃经穴可引起大鼠胃黏膜损伤后修复信号蛋白的磷酸化水平发生变化,提示电针促进胃黏膜修复的机制与胃黏膜损伤后修复信号蛋白的磷酸化有关.

基因芯片及其在中医药研究中的应用思考

随着人类基因组计划应运而生的生物芯片技术,正激起了生命科学研究者的广泛兴趣.生物芯片包括基因芯片(gene chip)、蛋白质芯片(protein chip)、组织芯片(tissue chip)三种.目前完善的是基因芯片,又称基因微阵列(gene microarray)、DNA芯片(DNA chip)或cDNA微矩阵(cDNA Microarray).基因芯片以其高通量、简便、缩微、多参数、集约化、平行化等优点,正成为目前基因表达分析的有力的工具.中医药学如何面对新技术,抓住机遇,促进发展,值得深思.笔者认为基因芯片的应用将为中医药现代化提供良好契机.

蛋白质芯片技术在中医药研究中的应用概况

蛋白质芯片具有高通量性、敏感性、可重复性、稳定性和自动化的特点,相关技术目前已被广泛应用于生物医学研究的各个领域.蛋白质芯片技术在中医药研究中的应用主要集中于诊断辨证的客观化、针灸机理、药理机制及药效评价等研究,以上研究从微观层面证实了针灸、中药对机体的调节方式是多途径、综合性的,同时为从生理、病理、药理等微观机制的改变阐释中医药理论提供了可能.

生物芯片及其应用

1 生物芯片简介生物芯片(biochip)是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术,它主要是指通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建的微型生物化学分析系统,以实现对细胞、蛋白质、DNA以及其他生物组分的准确、快速与大信息量的检测.常用的生物芯片分为三大类:基因芯片(Gene chip, DNA chip, DNA microarray)、蛋白质芯片(Protein chip)和芯片实验室(Lab-on-a-chip).生物芯片的主要特点是高检测量、微型化和自动化.

桃过敏原组分检测蛋白质芯片的制备及验证

目的 制备用于检测血清中针对几种桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片,为针对桃过敏原组分过敏患者的临床诊断提供快速可靠的方法.方法 合成6种常见的桃过敏原组分的编码基因,分别将其插入pGAPZαA酵母表达载体,AvrⅡ单酶切线性化后,电转毕赤酵母SMD1168,表达和纯化相应的桃过敏原组分蛋白,并制备蛋白质芯片;用蛋白芯片检测临床血清样本中针对桃过敏原组分蛋白的抗体,与ImmunoCAP法相比,验证蛋白质芯片检测的灵敏度和特异性.结果 用酵母表达系统成功表达并纯化了4种桃过敏原组分Pru p 1、Pru p 3、Pru p 4和Pru p 7,制备了能进行质量控制的检测血清桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片.检测了疑似桃过敏患者血清41例,结果以ImmunoCAP法为金标准,蛋白芯片检测血清Pru p 1、Pru p 3和Pru p 4抗体的灵敏度分别为40%、100%和100%,特异性为78%、50%和100%;对上述3种组分抗体的综合检测灵敏度为86%,特异性为96%.针对缺乏ImmunoCAP检测结果的Pru p 7抗体,蛋白芯片检测出6份阳性的血清样本,均为桃过敏患者.结论 桃过敏原组分检测芯片在灵敏度和特异性方面与ImmunoCAP相当,血清用量少,优化后有望成为临床桃过敏检测的一种新方法.

利用蛋白质芯片技术筛查多发性硬化患者的自身抗体

目的 用高通量蛋白质芯片技术筛选多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)患者血清中可能存在的自身抗体,为筛选新的疾病辅助性诊断的指标奠定基础.方法 15例MS患者作为疾病组,选取同样数量MS阴性并无其他自身免疫疾病的性别和年龄相匹配的健康人15位作为健康对照组.两组组内随机分为3个小组,血清充分混匀后,采用高通量蛋白质芯片法检测MS患者血清中可能存在的自身抗体.结果 通过高通量蛋白质芯片技术检测及与对照组分析比对,共筛出MS患者血清27种自身抗体.其中阳性率较高为SLC16A4、NOL3和DTX1,提示其可能是MS患者血清中特异性自身抗体的靶蛋白.阳性蛋白数量上,MS组高于HC组.功能聚类结果显示,自身抗体主要针对神经相关的蛋白质.结论 采用高通量蛋白质芯片技术,可以较为有效筛选出 MS血清中的自身抗体的靶抗原,为进一步验证MS相关自身抗体的功能及作用机制奠定了基础.

癌蛋白质组学技术及其应用

蛋白质组学的研究由二维电泳的引进揭开序幕,而近年来质谱技术和蛋白质芯片的广泛引入使得蛋白质组学技术得到越来越多的应用,尤其是应用在肿瘤研究中.癌蛋白质组学以整个肿瘤特异性蛋白信号网络为靶标,已应用到多种癌症的研究中,成为肿瘤研究的重要工具.本文将对癌蛋白质组学技术原理以及近年来在肿瘤研究中的应用加以综述.

蛋白质芯片筛选急性白血病血清标记蛋白质

目的 利用蛋白质芯片从初诊急性白血病患者血清中筛选标记蛋白质. 方法 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS surfaced enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectroscopy)和弱阳离子交换(WCX2)蛋白质芯片对80例初诊急性白血病患者(44例儿童急性淋巴细胞白血病、36例成人急性粒细胞白血病)血清和78例正常人(35例为儿童)血清的蛋白质图谱进行检测,使用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据. 结果 急性淋巴细胞白血病初诊患儿与正常儿童血清蛋白质谱相比有显著差异蛋白质7个,用标记分子建立儿童急性淋巴细胞白血病诊断的分类树模型,检测灵敏度为88.6%(39/44)、特异性为82.9%(29/35);成人急性粒细胞白血病患者与正常成人血清蛋白质谱相比有显著差异蛋白质8个,用其中的7个标记分子建立成人急性粒细胞白血病诊断的分类树模型,检测灵敏度为86.1%(31/36)、特异性为95.3%(41/43). 结论 蛋白质芯片技术对于发现和筛选急性白血病血清中的标记蛋白质是一种有效、快速的工具.

体外培养的不同亚型肝癌细胞差异蛋白的初步筛查

目的分析体外培养的不同亚型肝癌细胞株蛋白质表达差异,筛选肝癌的标志蛋白.方法采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肝癌细胞株(肝细胞癌,SMMC-7721和肝内胆管细胞癌,IHCCC-9810)以及正常肝细胞(L102)的蛋白质谱.选用阴离子交换柱处理上述细胞总蛋白,用6种不同pH的洗脱液洗脱柱床,通过改变洗脱液的pH值将总蛋白分成不同pI范围的6组.每个组分用WCX2和IMAC3两种芯片检测.采用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的数据采用Ciphergen公司的Proteinchip Software3.0.2软件分析.结果与L02细胞相比,有12个蛋白质在两种肝癌细胞株中均出现明显的变化,其中4个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,8个差异蛋白在肝癌细胞中低表达.在对两种肝癌细胞株的蛋白质谱比较时发现,不同亚型的肝癌细胞有其各自的标志蛋白,其中11个蛋白分子在SMMC-7721细胞中高表达;在IHCCC-9810细胞中7个蛋白分子高表达,10个蛋白分子低表达.结论不同亚型肝癌细胞与正常肝细胞蛋白质谱比较时有共同的差异蛋白,同时不同亚型肝癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别.

体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系差异蛋白的分析

目的分析体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系蛋白质表达差异,筛选卵巢癌的肿瘤标志物.方法提取体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系(OVCAR-3、SKOV-3、3AO和TOV-112D)与原代培养的正常卵巢生发上皮细胞(OGE)的总蛋白,采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术的H4和SAX2两种蛋白芯片检测其蛋白质谱,后利用蛋白芯片阅读机(PBS-Ⅱ型)读取数据,获得的数据采用Ciphergen Proteinchip 3.0.2版本的软件分析.结果4种亚型的上皮性卵巢癌细胞系与正常卵巢生发上皮细胞比较,有16个蛋白发生明显改变,其中7个蛋白表达降低,9个蛋白表达升高.此外,不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间也有很多差异蛋白,尤其是OVCAR-3、SKOV-3和3AO三者与TOV-112D之间有18个蛋白仅在前3种癌细胞中表达,16个蛋白仅在后者表达.结论不同亚型上皮性卵巢癌细胞与正常卵巢生发上皮细胞的蛋白质谱相比较有共同的差异蛋白,同时不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别.

应用蛋白质芯片对汉防己甲素单用及与屈洛昔芬伍用逆转白血病细胞耐药机理的研究

本研究的目的是应用蛋白质芯片检测汉防已甲素(Tet)单独及与屈洛昔芬(Drol)伍用对作用的白血病细胞表面的耐药蛋白,包括P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MBP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)表达的作用,为逆转剂的临床应用提供理论依据.选择位于膜表面P-gp、MRP1、BCRP耐药蛋白及其相应的抗体为研究体系,制备蛋白芯片,直接对逆转剂作用12、24和48小时的K562/A02细胞进行检测.结果表明:Tet和Drol联合作用24小时时检测到P-gp表达下调(Tet+Drol组:85.27±3.095,对照组:93.67±2.748,P＜0.05).经逆转剂单独及联合作用K562/A02细胞48小时时均检测到P-gp表达下调,且联合应用两药对P-gp表达下调作用明显(Tet+Drol:82.62±3.227,Tet:86.44±2.906,Drol:87.23±2.049,对照组:93.67±2.748,P＜O.05).检测结果与流式细胞仪检测结果一致.结论:逆转剂Tet和Drol对K562/A02细胞的P-gp下调呈时间依赖性.联合作用24小时时出现下调P-gp表达,单独作用48小时均下调P-gp表达,联合用药时下调作用明显.不同检测时间均未见下调MBP1和BCRP的表达.

蛋白质芯片技术检测异基因造血干细胞移植患者血浆IL-4和IL-6含量变化及其与aGVHD关系探讨

本研究旨在通过动态观察异基因造血千细胞移植患者血浆中IL-4和IL-6含量的变化,探讨其变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生的关系.采用蛋白芯片方法时32例行异基因外周血造血干细胞移植的住院患者的外周血细胞因子IL-4和IL-6的含量进行10周的动态观察.结果发现:IL-4含量在aGVHD组患者移植后第1周迅速增加,显著高于无aGVHD组(p<0.05);而在无aGVHD组,在移植后的第7周,血浆IL-4含量大幅增加,显著高于aGVHD组(p<0.01).IL-6含量在移植前两组患者即存在显著差异(P<0.05).在移植后的第1周,aGVHD组患者血浆IL-6上升达到高水平,显著高于无aGVHD组(p<0.01),而在无aGVHD组,在移植后的第4周IL-6含量非常显著高于aGVHD组(p<0.01),在移植后的第5周,IL-6显著高于aGVHD组(p<0.05).结论:IL-4和IL-6在异基因造血干细胞移植后含量突然升高提示即将发生aGVHD;移植前高水平的IL-6可能是移植后aGVHD高发的危险因素;无aGVHD的患者,如果血浆IL-4含量增高,提示可能有相对延迟的aGVHD出现.通过对IL-4和IL-6含量的动态观察以预测aGVHD发生,这一技术可能是一个颇具前景的研究方向.