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染料木素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及微球体形成
目的 采用CCK-8及微球体形成实验研究不同浓度的染料木素对MDA-MB-231细胞及微球体增殖的影响.方法 将不同浓度的染料木素加入到MDA-MB-231乳腺癌细胞培养基内,CCK-8检测染料木素对细胞增殖作用.将MDA-MB-231乳腺癌细胞进行微球体培养,研究不同浓度染料木素对微球体形成的影响.结果 CCK-8结果显示,高浓度(＞2 μm)的染料木素抑制了MDA-MB-231细胞增殖(P＜0.05),将MDA-MB-231细胞应用无血清培养法成功培养出微球体细胞,2μm和40 nm浓度的染料木素均抑制微球体形成(P＜0.01).结论 高浓度的染料木素可抑制MDA-MB-231细胞增殖,2μm和40 nm浓度的染料木素均可抑制乳腺癌微球体形成.
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乌梅中黄酮成分的分离与鉴定
乌梅是蔷薇科植物梅Prunus.mume(sieb.)Sieb.etZucc.的成熟或近成熟的果实经熏制或烘制加工而成.在传统医学上有敛肺、涩肠、生津等功效,在现代医学上还用于治疗病毒性肝炎、结核、白癜疯、偏头痛、肿瘤和妇科病等[1].
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HPLC法同时测定金鸡虎补丸中的去氢二异丁香酚、五味子甲素、染料木素和芒柄花素
目的 建立HPLC法同时测定金鸡虎补丸中去氢二异丁香酚、五味子甲素、染料木素和芒柄花素4种成分.方法 金鸡虎补丸70％乙醇提取液的分析采用G18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为乙腈-甲醇(3∶2),流动相B为0.1％ H3PO4溶液,梯度洗脱;体积流量为0.9 mL/min;去氢二异丁香酚检测波长为270 nm,五味子甲素、染料木素和芒柄花素均为254 nm;柱温为35℃;进样量20 μL.结果 被测定的4组成分色谱峰均有良好的分离度,方法精密度、重复性的RSD均小于2.0％;在室温条件下24 h内稳定;各组分线性范围较宽,线性关系良好(r≥0.999 4);平均加样回收率为96.8％ ～98.1％,RSD (n=6)≤1.4％.结论 金鸡虎补丸的提取方法和流动相保证了分析方法的简单易行、重复性好、准确可靠.
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RP-HPLC测定槐角丸中槲皮素和染料木素的含量
目的:建立测定槐角丸(槐角、地榆、黄芩等)中游离和结合态槲皮素和染料木素的反相高效液相色谱法.方法:采用高效液相色谱仪,以Diamonsil ODS-C18(4.6 mm×150 mm,5.0 μm)为色谱柱;MeOH-H2O-HAc(2:3:0.25)为流动相;检测波长为254 nm;柱温30℃.结果:槲皮素在0.2048～1.229μg,染料木素在0.532 5～3.192 μg范围内线性关系良好,r值分别为0.999 1,0.999 8,2组分平均回收率在98.0%～99.1%之间,RSD分别为1.02%,0.40%(n=5).结论:该方法一次完成2种有效成分测定,方便、准确、灵敏度高,重现性好,可适用于槐角制剂的质检和生产企业的质控.
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效应面法优化染料木素磷脂复合物制备工艺
目的 优化染料木素磷脂复合物的制备工艺,并对其理化性质进行研究.方法 以二氯甲烷挥发法制备染料木素磷脂复合物,以复合率为指标,进行单因素考察,再用星点设计—效应面法优化制备工艺,并对终制备的磷脂复合物进行理化性质研究.结果 星点设计-效应面法优选出的较佳工艺条件为:染料木素与磷脂的投料比(m/m)为2∶3,反应温度为40 ℃,反应质量浓度为25 mg/mL,反应时间为2.15 h.结果 按优化条件的复合率的实验值为(97.57-1.03)％,较二项式拟合方程预测值偏差小于1％.且染料木素磷脂复合物在水中和四氢呋喃中的溶解度均有明显提高,其油水分配系数的提高没有显著性差异.结论 应用星点设计-效应面优化法能够快速方便而精确地设计出染料木素磷脂复合物的制备工艺,且优化出来的工艺条件稳定可行.
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黄豆苷元、染料木素对葛根素小肠吸收影响
目的 通过黄豆苷元、染料木素对葛根素小肠吸收影响,研究中药葛根成分间的相互作用.方法 利用雄性SD大鼠小肠作为透析膜,采用扩散池法研究观察葛根素小肠吸收行为以及表观渗透系数.以及黄豆苷元和染料木素存在时对吸收的影响.结果 黄豆苷元、染料木素均能促进葛根素吸收、抑制外排,随着黄豆苷元、染料木素浓度增加效果增强.结论 黄豆苷元、染料木素能够影响葛根素小肠吸收.
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微波法提取红车轴草中染料木素和刺芒柄花素工艺的研究
目的:优化微波辐照法从红车轴草中提取、纯化染料木素和刺芒柄花素的工艺条件.方法:以红车轴草为原料,甲醇为溶剂,利用微波辐射,回流、水解提取染料木素和刺芒柄花素.结果:在微波功率25～30 W的条件下,红车轴草粉末(60目),液料比V/W(5:1),回流提取时间(30 min×2),目标组分收率0.41%,含量分别为14.3%、53.6%.结论:微波辐照法提取染料木素、刺芒柄花素,方法简便、快速、高效.
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HPLC测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量
目的:建立测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A含量的高效液相色谱方法.方法:Kro-masil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%H3PO4(40:60),流速:1.0 mL·min-1,检测波长:254nm,柱温:25℃.结果:大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的线性范围分别为0.0662～0.6620 μg,0.0978～0.9780μg,0.0866～0.8660μg和0.0992～0.9920μg.该方法回收率大豆苷元为98.9%(RSD=0.46%),染料木素为98.8%(RSD=1.21%),芒柄花素为98.8%(RSD=0.71%),鹰嘴豆芽素A为97.5%(RSD=1.33%).结论:该法简便、快速、准确.
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槐角苷及染料木素对成骨细胞生物学特性的影响
目的:比较槐角苷及染料木素对成骨细胞生物学特性的影响.方法:成骨细胞由新生24 h SD大鼠头盖骨分离得到.通过细胞增殖率测定、碱性磷酸酶活性测定、茜素红染色矿化结节形态计量方法,对比槐角苷和染料木素在体外对成骨细胞骨形成功能的影响.利用基因克隆和报告基因方法,检测槐角苷和染料木素对人骨保护素(osteoprotegerin,OPG)启动子活性的作用,观察两者对骨保护素基因转录活性的调节.结果:体外培养的成骨细胞在1和0.1μmol/L槐角苷的干预下,均显示增殖刺激作用(与对照组比较P<0.05).l0 μmol/L染料木素使细胞增殖受抑制,但0.1 μmol/L染料木素则显示增殖刺激作用(与对照组比较P<0.05).槐角苷在实验的各种浓度中均能提高ALP活性.而染料木素只在0.1μmol/L浓度才能提高ALP活性.槐角苷在10、1和0.1 μmol/L浓度对成骨细胞的矿化总面积较对照组分别提高了73%、138.6%和114.3%,而染料木素各个浓度下成骨细胞矿化总面积均减少.10、1和0.1μmol/L浓度槐角苷干预后检测报告β-半乳糖苷酶基因(LacZ)活性均增加,但染料木素仅在0.1 μmol/L浓度对LacZ活性有增强作用(与对照组比较P<0.05).结论:槐角苷能够促进成骨细胞的增殖、分化和矿化功能,与染料木素比较,不出现对成骨细胞成骨功能的抑制作用.而对于成骨细胞产生的破骨细胞抑制因子骨保护素,较染料木素有更强的上调作用.
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异黄酮类植物雌激素通过雌激素受体对靶基因的转录调节作用
目的:观察异黄酮类植物雌激素染料木素和大豆苷元通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)对靶基因的转录调节作用.方法:采用磷酸钙瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体表达质粒的Hela细胞,观察染料木素和大豆苷元对雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)报告基因的转录激活作用;此外还观察ER拮抗剂ICI182780对这两种植物雌激素转录激活作用的影响.结果:染料木素和大豆苷元均可通过ER的两种亚型ERα和ERβ激活ERE报告基因的转录,且这种转录激活作用能被ICI 182780所阻断.结论:染料木素和大豆苷元均能产生类雌激素样作用,通过ERα和ERβ激活ER靶基因的转录.
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染料木素对噪声性聋的保护作用
目的 探讨植物雌激素染料木素是否具有预防噪声性聋的作用.方法 将30只健康豚鼠随机分为3组,每组10只.单纯噪声组每日腹腔注射生理盐水1 mL/kg,染料木素保护组每日腹腔注射染料木素10 mg/kg,正常对照组每日腹腔注射生理盐水1 mL/kg,3组动物均持续给药10 d.除正常对照组以外的2组动物于给药的第4天开始给予噪声刺激,连续7d.噪声模式采用4 kHz纯音,强度为115 dB SPL,噪声持续时间为4 h/d.每组动物在给药前、后均行听性脑干反应(ABR)检测.末次检测完毕后,在麻醉状态下将豚鼠断头取耳蜗,采用耳蜗基底膜铺片技术观察耳蜗毛细胞的形态学改变,同时计算外毛细胞损伤率;观察外毛细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的改变;采用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡.结果 噪声刺激前,3组动物ABR阈值无明显差异(P＞0.05);接触噪声后,单纯噪声组ABR阈值明显升高(P＜0.01),染料木素保护组ABR阈值较单纯噪声组显著降低(P＜0.01).耳蜗铺片及SDH染色结果显示:单纯噪声组动物耳蜗毛细胞排列紊乱并伴有大量缺失,SDH染色明显变浅;给予染料木素后,毛细胞缺失明显减少(P＜0.01),排列较规则,SDH染色明显好于单纯噪声组.TUNEL结果显示:动物接触噪声后,螺旋神经节细胞大量凋亡,染料木素能减轻细胞损伤.结论 染料木素对噪声性聋有一定的防治作用,该作用可能与其营养神经、保护耳蜗毛细胞SDH的活性及线粒体功能有关.
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槐角丸中4种有效成分的高效毛细管电泳法测定
建立了高效毛细管电泳法分离测定槐角丸中的4种有效成分--染料木素、芸香苷、黄芩苷、没食子酸.采未涂层石英毛细管柱,以15mmol/L硼砂缓冲液(pH 9.0)-5mmol/L磷酸二氢钠溶液为运行缓冲液,检测波长214nm.以槲皮素为内标,槐角丸中4种有效成分在12min内分离良好,分别在4.96～29.76、12.80～76.80、17.20～103.20和10.44～62.64 μg/ml浓度范围内线性关系良好.
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染料木素固体分散体的制备及体外评价
以聚乙烯吡咯烷酮(PVP K30)为载体,利用喷雾干燥法制备染料木素(1)的固体分散体.采用X射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热分析(DSC)和激光粒度分析(LD-PSD)对制品进行表征.结果表明,1在固体分散体中均以无定形或分子状态存在.所制备的1-PVP K30(1∶5,w/w)固体分散体平均粒径为(8.9±1.1)μm,在pH 6.8缓冲液中不但可显著提高1的溶解度至8.37 mg/ml,而且可使1在2h内完全溶出;此外,在25℃/相对湿度60％条件下放置2个月,物理和化学稳定性较好.
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染料木素和槲皮素对成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制作用
目的:研究染料木素(genistein, GE)和槲皮素(quercetin, QU)对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法:用结晶紫染色法测定光密度值检测NIH3T3成纤维细胞增殖,用3H-脯氨酸掺入法测定3H-脯氨酸掺入NIH3T3细胞的Bq值表示胶原合成作用.结果:GE和QU都能浓度依赖性抑制血清、血小板源生长因子(PDGF)或转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的NIH3T3细胞增殖和胶原合成.结论:GE和QU具有体外抑制成纤维细胞增殖和胶原合成的作用.
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植物雌激素的筛选及抗皮肤老化的体外研究
目的 筛选植物雌激素,并进一步研究植物雌激素对成纤维细胞合成胶原蛋白的影响.方法 采用细胞增殖实验( MTT法)观察64种植物提取物或有效部位对雌激素受体(ER)阳性细胞系MCF-7增殖的影响,筛选具有雌激素样作用的植物提取物或有效部位；并用ER阴性的MDA-MB-231细胞和ER拮抗剂ICI 182780,考察促进MCF-7细胞的增殖作用是否由ER介导.采用圆点印迹法评估植物雌激素对成纤维细胞合成1型原胶原蛋白( PC-1)的影响.结果 在筛选的64种植物提取物或有效部位中,葛根、决明子、啤酒花、桑叶、甘草植物提取物及大豆异黄酮可有效诱导MCF-7细胞增殖,但对MDA-MB-231细胞无诱导增殖作用；ICI 182780抑制其诱导MCF-7细胞增殖的作用.葛根素和染料木素显著促进人成纤维细胞合成PC-1 (P ＜0.01),其中葛根素的作用较强；黄豆苷元则显著抑制PC-1合成(P＜0.01).结论 葛根提取物和大豆异黄酮具有较强的雌激素样活性,主要的活性成分葛根索和染料木素可显著促进人成纤维细胞合成胶原蛋白,提示具有潜在的祛皱、抗皮肤老化的功效.
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槐苷在大鼠肝匀浆中的代谢
目的为阐明槐苷在大鼠肝中的代谢产物及其代谢过程,对槐苷进行体外代谢研究.方法应用HPLC测定槐苷在大鼠肝匀浆中主要代谢产物的含量,并测定其动力学参数.结果槐苷在大鼠肝匀浆中孵育4h后总回收率大于78%(槐苷+苷元),主要代谢产物为其苷元.Km为(334.27±15.28)μmol/L.结论槐苷在大鼠肝匀浆中主要通过水解得到活性代谢产物苷元,对其充分发挥活性作用具有意义.
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染料木素与大豆甙元对子宫内膜癌细胞株ERRα的影响
,24 h以低浓度抑制较为明显,48 h组各浓度之间增值率的差异不明显.结论 大豆甙元和染料木素在低浓度时均可上调ERRα mRNA并抑制Ishkawa细胞增殖,在高浓度时却对Ishkawa细胞ERRα mRNA的上调作用不明显,染料木素高浓度时促进Ishkawa细胞增殖,大豆甙元高浓度时抑制Ishkawa细胞增殖作用较低浓度为差.
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自噬在染料木素抑制结肠癌HCT116细胞增殖中的作用
目的:观察染料木素(genistein)对结肠癌HCT116细胞的自噬诱导作用并探讨其在抗肿瘤增殖中的作用.方法:不同浓度(0、5、10、20、40、60、80 mg/L)染料木素及80 mg/L染料木素联合2mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别作用于HCT116细胞24、48、72 h后,CCK8法检测细胞增殖活力.通过双荧光素酶慢病毒载体构建LC3及突变LC3(LC3 Mu)基因过表达的HCT116细胞,经100 mg/L的染料木素处理24h后,荧光显微镜观测荧光在细胞内聚集情况.不同浓度(0、10、50、100 mg/L)染料木素处理HCT116细胞24h后,Western blot检测细胞内LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例.结果:CCK8法细胞增殖实验的结果表明,染料木素对HCT116细胞具有显著的增殖抑制作用,染料木素对HCT116细胞的增殖抑制呈时间-剂量依赖性(P＜0.01).染料木素对HCT116细胞的24h、48 h、72 h半数抑制浓度IC50分别为85.70 mg/L、34.44 mg/L、20.56 mg/L,而3-MA可以降低染料木素对HCT116细胞的抗增殖作用(P＜0.01).荧光显微镜观测结果表明,染料木素可以诱导HCT116细胞中LC3荧光蛋白的聚集(P＜0.01),从而参与自噬小体的形成;Western blot结果显示,随着染料木素浓度的增加,LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例逐渐升高(P＜0.01).结论:染料木素可能通过上调LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例诱导细胞内自噬体的产生,从而抑制结肠癌细胞的增殖.
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大豆异黄酮对大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响
本实验研究了大豆异黄酮对SHZ-88大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响.实验设3组:空白对照组、50μg/ml大豆黄酮及15 μg/ml染料木素组.采用放射免疫测定法(RIA)检测了胞内cAMP的浓度、腺苷酸环化酶(adenylatecyclase,AC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)的活性,用(γ-32P)ATP掺入法测定cAMP依赖性PKA的活性,半定量RT-PCR法分析cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)mRNA表达的变化.结果表明:在处理后5 min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的cAMP浓度分别比对照组升高了9.5%和11.0%(P＜0.05);10 min时,分别比对照组升高31.0%和40.3%(P＜0.01).3组细胞的AC活性在处理时间内没有明显变化.但在处理后5 min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的PDE活性分别降至对照组的71.8%和71.6%(P＜0.05).处理后20 min,大豆黄酮组和染料木素组细胞PKA活性分别上升到对照组的125.8%和122.3%(P＜0.05);到40 min时仍维持在高水平.大豆黄酮组和染料木素组细胞CREBmRNA的表达量在处理后3 h分别比对照组增加31.6%和51.1%(P＜0.05);6 h后开始下降.这些结果提示,大豆异黄酮能够激活大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径;而且是通过抑制磷酸二酯酶的活性,导致胞内cAMP浓度升高而实现的.
关键词： 大豆黄酮 染料木素 大鼠乳腺癌细胞 cAMP/PKA信号途径 -
植物雌激素对体外培养的大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的作用
目的:研究植物雌激素(大豆苷元、染料木素)对睾丸间质细胞分泌睾酮的刺激作用,并初步研究其可能的分子作用机制.方法:采用Percoll不连续密度梯度离心,分离获得3月龄Sprague-Dawley(SD)大鼠的睾丸间质细胞.以人绒毛膜促性腺激素(hCG)为阳性对照药物,测定不同浓度(0、0.02、0.1、0.5、1、5μmol/L)大豆苷元、染料木素对睾丸间质细胞分泌睾酮的影响.RT-PCR检测睾酮生物合成过程中胆固醇侧链裂解酶细胞色素P450(P450scc)的表达. 结果:0.1μmol/L的染料木素能显著刺激原代大鼠睾丸间质细胞的睾酮分泌,RT-PCR结果显示染料木素能显著上调睾酮合成过程中P450scc mRNA的表达.在较高浓度下(5 μmol/L),大豆苷元和染料木素均能抑制睾丸间质细胞分泌睾酮. 结论:染料木素在低浓度下(0.1μmol/L)显著促进睾丸间质细胞分泌睾酮,但随着浓度的增加(5μmol/L),大豆苷元和染料木素均显著抑制Leydig细胞的睾酮分泌.
关键词： Leydig细胞 睾酮 大豆苷元 染料木素 胆固醇侧链裂解酶细胞色素P450
