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五味子甲素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性作用的影响
目的 初步探讨不同浓度的五味子甲素(SchA)对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性的影响.方法 体外培养多巴胺能神经细胞SH-SY5Y,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的MPP+对SH-SY5Y细胞增殖的影响后,检测不同浓度的SchA对SH-SY5Y细胞的影响,筛选其无毒剂量后形态学及MTT法进一步观察一定浓度的SchA对MPP+引起的SH-SY5Y细胞毒性作用是否具有保护作用.结果 与对照组相比,0.1～1.5 mmol/L MPP+染毒48 h均可引起SH-SY5Y细胞生长增殖抑制；0.5 ～5 μmoL/L SchA对SH-SY5Y细胞没有毒性作用,其中2～5μmol/L SchA均可明显抑制MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用.结论 MPP+对SH-SY5Y细胞增殖有明显的抑制作用,而一定浓度的SchA能有效抑制MPP+的细胞毒性.
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五味子甲素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响
目的 初步研究不同浓度的五味子甲素(Schisandra A,SchA)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP+)引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,1 mmol/L MPP+染毒同时分别给予1、3和5μmol/L SchA处理48 h,MuseTM细胞分析仪检测凋亡细胞数的变化;hoechst 33342染色后激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞形态的改变;Western-blot检测各组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化.结果 与对照组相比,1 mmol/L MPP+染毒48 h可引起SH-SY5Y细胞凋亡细胞数明显增多;1、3和5 μmol/L SehA干预可明显抑制1mmol/L MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,且随着SchA浓度的升高,凋亡细胞数明显减少.Western-blot实验结果显示,MPP+组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,而SchA于预组cleaved caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 1 mmol/L MPP+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,而一定浓度的SchA能有效抑制MPP+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,且该作用可能是通过抑制caspase-3蛋白活化实现的.
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五味子甲素对铅染毒大鼠睾丸多药耐药蛋白1表达的影响
目的 探讨五味子甲素对铅染毒大鼠睾丸多药耐药蛋白1表达的影响.方法 18只SPF级SD雄性健康大鼠随机分作3组,每组6只,即:对照组、醋酸铅组及醋酸铅与五味子甲素组.灌胃处理10周,实验期末行HE染色及观察,检测各组大鼠睾丸铅含量,并作免疫组织化学染色及多药耐药蛋白1表达量检测.结果 HE染色结果显示空白对照组大鼠睾丸组织结构正常,两处理组睾丸则呈现出一定的病理学改变.与空白对照组比,两处理组大鼠睾丸铅含量与多药耐药蛋白1蛋白表达量均有显著性增加(P＜0.05),与单纯醋酸铅组比较,醋酸铅与五味子甲素组多药耐药蛋白1蛋白相对表达量下降,差异有统计学意义.结论 五味子甲素可能对铅染毒大鼠睾丸多药耐药蛋白1表达有一定的抑制作用.
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五味子甲素对大鼠及小鼠肠平滑肌功能的抑制作用
目的:考察五味子甲素对大鼠及小鼠小肠平滑肌功能的调节作用,为揭示五味子"收敛固涩"功效的机制及物质基础提供药理学依据.方法:取昆明种小鼠50只,按均衡随机分组法分为5组,分别为正常组,五味子甲素高、中、低剂量组(20,40,80 mg·kg-1),莨菪阳性组(20 mg·kg-1);另取昆明种小鼠60只,按均衡随机分组法分为6组,分别为正常组,模型组(ip,新斯的明),五味子甲素高、中、低剂量组(80,40,20 mg·kg-1),莨菪阳性组(20 mg·kg-1),ig给予相应药物,正常组及模型组给予等体积蒸馏水,每日1次,连续5d,分别用炭末推进法分别观察五味子甲素对正常小鼠和新斯的明肠功能亢进模型小鼠肠推进的影响.以孵育在克氏液中大鼠离体小肠为模型,观察五味子甲素对大鼠离体肠平滑肌收缩性的影响.取SD大鼠30只,随机分为正常组,五味了甲素高、中、低剂量组(80,40,20 mg·kg-1),除正常组外,其余各组用番泻叶制备大鼠腹泻模型,造模成功后ig给予相应药物,每日1次,连续7d,观察五味子甲素对腹泻模型大鼠肠平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响.结果:与正常组和新斯的明模型组比较,五味子甲素高、中剂量组均能显著降低正常小鼠和新斯的明肠功能亢进小鼠的小肠炭末推进率(P ＜0.05,P＜0.01).五味子甲素在10～80 μmol·L-1可显著抑制大鼠离体小肠平滑肌的收缩;与番泻叶模型组比较,五味子甲素高、中、低剂量组均能显著抑制腹泻模型大鼠小肠MLCK蛋白的表达(P＜0.01).结论:五味子甲素可显著抑制小鼠在体和大鼠离体小肠运动,该作用可能与其抑制小肠收缩运动相关的肠平滑肌肌球蛋白轻链激酶表达相关.
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HPLC同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量
目的:建立HPLC同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量.方法:采用Phenomenex Kinetex C18柱,以乙腈-水梯度洗脱,流速1 mL· min-1,柱温30℃,检测波长250 nm.结果:五味子醇甲在21.56～215.6mg·L-1(r=0.999 9),五味子酯甲在6.500～65.00 mg·L -1(r=1),五味子甲素在3.460～34.60 mg·L-1(r=0.999 9),五味子乙素在6.920～69.20 mg·L-1(r=0.999 9),丹参酮ⅡA在2.400～24.00 mg·L-1(r =0.999 9)呈良好的线性关系,平均回收率五味子醇甲为97.92％,RSD 2.34％(n=6)；五味子酯甲为100.28％,RSD 2.57％(n=6)；五味子甲素为98.34％,RSD 2.73％ (n =6)；五昧子乙素为98.06％,RSD 1.61％ (n =6)；丹参酮ⅡA为99.13％,RSD 1.42％ (n =6)；结论:本法简便、灵敏度高、重复性好,可用于益心舒片的质量控制.
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HPLC同时测定五子衍宗丸中5种活性成分的含量
目的:建立五子衍宗丸中5种成分金丝桃苷、山柰素、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法.方法:Angilent Extend C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-甲醇(10∶1)和0.4％磷酸,梯度洗脱柱温30℃,流速1.0 mL· min-,检测波长250 nm(五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素),360 nm(金丝桃苷、山柰素).结果:在该色谱条件下,金丝桃苷、山柰素、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分离良好,分别在4.824 ～ 482.4,4.358 ～87.16,1.854 ～ 185.4,5.610 ～112.2,3.850～77.00 ng呈良好的线性关系,加样回收率(n=9)依次为101.2％,98.9％,101.6％,101.3％,97.6％.结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于五子衍宗丸的质量控制.
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HPLC-Q-TOF-MS鉴定注射用益气复脉冻干粉中皂苷类成分
目的:采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-Q-TOF-MS)鉴定注射用益气复脉冻干粉中皂苷类成分,为后续该制剂皂苷类成分的定量研究及其药效物质基础研究提供参考.方法:分析人参皂苷Rg1,Re,Rb1的质谱裂解规律,结合HPLC-Q-TOF-MS鉴定注射用益气复脉冻干粉中皂苷类成分.结果:人参皂苷Rg1,Re,Rb1的质谱裂解主要有2条途径,分别为①依次丢失所有的配糖基直到形成稳定的去质子化母核;②配糖基的碎裂形成特征性碎片离子.在此质谱裂解规律的基础上,鉴定了注射用益气复脉冻干粉中21个皂苷类化合物,除了人参皂苷Rg1,Rb1,Re,Rc,Rd,Rf,Rg3及三七皂苷R1外,其他13个皂苷类化合物首次在益气复脉冻干粉中报道,同时通过文献对比初步鉴定了五味子甲素.结论:利用HPLC-Q-TOF-MS鉴定了益气复脉冻干粉中大部分含量较高的皂苷类成分,为后续该制剂的深入研究奠定了物质基础.
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北五味子高压蜜制工艺分析
目的:优选北五味子的高压蜜制工艺,为该饮片的质量标准研究提供参考.方法:以五味子甲素含量为评价指标,通过正交试验考察闷润时间、蜂蜜用量、蒸制压力和蒸制时间对北五味子高压蜜蒸工艺的影响.采用HPLC测定五味子甲素的含量,流动相甲醇-水(78:22),检测波长235 nm.结果:北五味子佳高压蜜制工艺为取北五味子适量,加入25％蜂蜜,拌匀闷润1h,在蒸制压力0.15 MPa下蒸制1.0h.五味子甲素提取量1.553 mg·g-1.结论:优选的北五味子高压蜜制工艺简易、可控,可替代北五味子的传统蜜制工艺.
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宝乐静颗粒剂质量标准的研究
宝乐静颗粒剂由人参、五味子、枸杞子等中药组方制备而成,临床用于小儿多动症疗效满意.为控制该制剂的质量,本文对其质量标准进行了初步的研究.
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基于血液微透析技术探究五味子甲素的体内代谢过程
目的：建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中五味子甲素的方法，探讨五味子甲素在大鼠血中的代谢过程。方法采用血液微透析技术，将探针由右侧颈静脉植入大鼠右心房膨大处，透析取样。透析液检测的色谱条件为：以甲醇-乙腈-水（40∶35∶25）为流动相，流速1.0 mL/min，柱温30℃，UV检测波长254 nm。经体内测定探针的回收率校正后，绘制药时曲线，采用DAS2.0软件计算五味子甲素灌胃给药后在大鼠血液中的药动学参数。结果五味子甲素在2～500μg/mL浓度范围内线性关系良好（r＝0.9995），日内精密度和日间精密度均RSD＜3%，五味子甲素的含药透析液室温放置12 h内稳定性良好。药动学参数ke为（0.364±0.047）/h，t1/2为（1.637±0.302）h，Tmax为（0.612±0.194）h，Cmax为（165.92±28.830）μg/mL，AUC0-t为（240.793±25.540）μg?h/mL，AUC0-∞为（282.710±30.727）μg?h/mL。结论本方法操作便捷、液相保留时间短，能满足透析液中五味子甲素含量测定的需要，可用于五味子甲素在大鼠血液中代谢过程的研究。
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枣地安神丸质量标准研究
目的建立枣地安神丸的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中酸枣仁、制何首乌进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素进行含量测定,用Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长254 nm。结果酸枣仁、制何首乌薄层色谱斑点清晰,分离效果较好,且阴性无干扰。五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分别在338～1690 ng(r2＝0.9991)、128～640 ng(r2＝0.9993)、236～1180 ng(r2＝0.9994)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.2%、99.0%、98.9%。结论本方法准确可靠、专属性强、重复性好,可作为枣地安神丸的质量控制标准。
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高效液相色谱法测定五柴颗粒中五味子甲素的含量
目的:研究五柴颗粒中五味子甲素含量的测定方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱C18(4.6mnm250mm,5um);流动相为甲醇;流速1.0ml.min-1;柱温40℃:检测波长250 nm.结果:五味子甲素线性范围是0.043-0.431,r=0.9999,平均回收率99.5%.RsD=0.67%(n=6).结论:该法可用于测定五柴颗粒中五味子甲素的含量.
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高效液相色谱法测定五味子甲素含量
目的:建立五味子果实中五味子甲素含量的高效液相色谱测定方法.方法:样品用超声提取,过滤,取续滤液,采用高效液相色谱法直接测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,甲醇-四氢呋喃-水(70:4:26)为流动相,进样量10μL,流速为1mL/min,检测波长为254nm进行检测.结果:五味子甲素的线性范围为0.125～1.25μg,R2为0.9992,平均加样回收率为99.2%,RSD为1.1%(n=6).结论:此方法准确度较高,可用于测定五味子中五味子甲素的含量,为五味子生药及成品药中五味子甲素含量测定提供了一种切实可行的方法.
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HPLC法测定肝得宁丸中的五味子酯甲和五味子甲素的含量
目的 建立HPLC法同时测定肝得宁丸中五味子酯甲和五味子甲素含量的方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Epic C18 5μ120A(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(55:45:1),流速:1.0 ml ·min-1,检测波长:220am,柱温:25℃.结果 五味子酯甲和五味子甲素含量分别在0.2419～2.4192 μg(r=0.9999)、0.2406 ～2.4064 μg(r=0.9999)范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为98.86％、99.75％,RSD分别为1.36％(n=6)、0.87％(n=6).结论 所建方法准确,灵敏度高,重复性好,适用于肝得宁丸质量控制.
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肝得宁丸质量标准的研究
目的 建立肝得宁丸的质量标准.方法 采用TLC法对南五味子、连翘药材进行定性鉴别；采用HPLC法测定肝得宁丸中五味子甲素的含量.结果 薄层色谱斑点清晰,专属性强；五味子甲素含量在0.2624～0.5248μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.91％,RSD为0.84％(n=6).结论 本质量标准方法简单、操作简便、结果准确、重复性好,可用于肝得宁丸的质量控制.
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肝复康丸中五味子甲素和五味子乙素含量测定方法研究
目的:建立肝复康丸中五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法.方法:样品用己烷超声提取,提取液过滤,蒸干.残渣用甲醇溶解后,注入高效液相色谱仪分离测定.色谱条件包括:LUNA-C18分析色谱柱,柱温30℃.乙腈-水(68∶32)混合液(含0.2%磷酸,用三乙胺调pH5)作为流动相.检测波长为254nm.结果:肝复康丸中五味子甲素和五味子乙素与其它成份分离良好.五味子甲素峰和五味子乙素峰保留时间分别约为16min和21min.五味子甲素和五味子乙素峰与其相邻峰的分离度大于1.5.以五味子甲素峰计算理论板数是6 070.以五味子乙素峰计算理论板数是7 015.五味子甲素对照品线性浓度范围35.00～140.0μg.ml-1,r=0.999 9,平均回收率为100.5%,RSD为1.5%(n=5).五味子乙素对照品的线性浓度范围25.00～100.0μg.ml-1,r=0.999 9,平均回收率为102.4%,RSD为1.7%(n=5).结论:本法灵敏度高、操作简便、结果准确,可用于肝复康丸中五味子甲素和五味子乙素的含量测定.
