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长链非编码RNA H19对人乳腺癌细胞BT-474赫赛汀抵抗影响机制探讨
目的 约20％人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)阳性乳腺癌患者可针对性的采用其靶向药物赫赛汀(trastuzumab,TZB)治疗,但耐药性的产生严重影响了TZB的疗效,本研究探讨长链非编码RNA H19(H19)对人乳腺癌细胞BT-474 TZB抵抗的影响及可能的相关机制.方法收集德州市第二人民医院2016-04-01-2017-03-31收治的乳腺癌患者肿瘤组织及相应癌旁组织(距癌组织>5 cm)各37例,荧光定量PCR(qPCR)技术检测组织H19及mRNA表达水平,并分析肿瘤组织H19及HER2表达的相关性.间歇浓度梯度诱导法构建BT-474 TZB抵抗细胞系(BT-474 TR),并利用慢病毒转染介导的H19小干扰RNA(siRNA)载体在BT-474 TR细胞中构建稳定干扰H19表达的细胞系及相应的空白对照细胞系(BT-474 TR-siH19及BT-474 TR-对照组),CCK-8法检测各组细胞TZB半抑制浓度(IC50)值,qPCR检测细胞H19及HER2 mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测细胞HER2及上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子蛋白表达水平.结果乳腺癌组织中H19表达量为0.192±0.014,显著高于癌旁组织0.082±0.009,t=40.202,P<0.001;乳腺癌组织中HER2表达量为0.156±0.013,显著高于癌旁组织0.058±0.009,P<0.001,且H19与HER2的表达存呈正相关,r=0.483,P<0.05.BT-474 TR细胞、BT-474亲本细胞、BT-474 TR-siH19细胞和TZB BT-474 TR-对照细胞4组的TZB IC50测定值分别为(142.3±23.5)、(152.9±25.2)、(27.7±3.6)和(73.2±12.9)μg/mL,差异有统计学意义,F=18.15,P=0.0006;BT-474 TR与BT-474、BT-474 TR-siH19与BT-474 TR-对照组间差异有统计学意义,均P<0.05.BT-474 TR细胞H19表达水平为0.239±0.031,显著高于BT-474亲本细胞表达水平0.106±0.009,t=7.136,P<0.001;BT-474 TR细胞HER2 mRNA表达水平为0.127±0.031,显著低于BT-474亲本细胞表达水平0.309±0.035,t=6.742,P<0.001.BT-474 TR-siH19细胞H19表达水平为0.073±0.007,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.226±0.025,t=10.207,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞HER2 mRNA表达水平为0.104±0.017,也显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.162±0.028,t=3.069,P<0.05.BT-474 TR细胞HER2蛋白表达水平为0.263±0.037,显著低于BT-474细胞0.681±0.059,t=10.395,P<0.001;BT-474 TR细胞E-cadherin蛋白表达水平为0.162±0.025,显著低于BT-474细胞0.633±0.074,t=10.447,P<0.001;BT-474 TR细胞Snail蛋白表达水平为0.207±0.083,显著高于BT-474细胞0.064±0.011,t=2.958,P=0.021;BT-474 TR细胞Vimentin蛋白表达水平为0.168±0.020,显著高于BT-474细胞0.114±0.012,t=4.011,P=0.008.BT-474 TR-siH19细胞HER2蛋白表达水平为0.082±0.007,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.404±0.028,t=19.324,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞Snail蛋白表达水平为0.078±0.003,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.258±0.021,t=14.697,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞Vimentin蛋白表达水平为0.085±0.010,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.141±0.025,t=3.602,P=0.011;而BT-474 TR-siH19细胞E-cadherin蛋白表达水平为0.525±0.039,显著高于BT-474 TR-对照组细胞0.194±0.034,t=11.081,P<0.001.结论H19在乳腺癌组织中高表达,且与HER2表达呈正相关,体外干扰H19可下调乳腺癌细胞HER2的表达,并可通过抑制EMT进程部分逆转乳腺癌细胞的TZB抵抗.
关键词： 乳腺癌 长链非编码RNAH19 赫赛汀 药物抵抗 上皮间充质转化 -
长链非编码RNA H19与高级别脑胶质瘤替莫唑胺抵抗的关系及其相关机制研究
目的 探究长链非编码RNA H19 (LNC H19)与胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)抵抗的关系.方法 收集正常脑组织(正常组)、初发(初发实验组)及复发高级别脑胶质瘤的组织样本(复发实验组).以1,2,4,81μg· mL-1TMZ分别诱导U251细胞并维持正常生长1周,构建抵抗U251 TMZ抵抗细胞系(U251-TR),U251细胞以等体积的0.9％ NaCl处理,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测组织及细胞中LNC H19的表达以及细胞中06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT) mRNA的表达.慢病毒转染构建稳定干扰LNC H19的U251-TR细胞系(U251-TRsiLNC H19),以MTT法验证U251-TR细胞并观察细胞TMZ半抑制浓度(IC50值)的变化;以免疫印迹技术检测细胞中MGMT蛋白的表达.结果 复发实验组、初发实验组和正常组的LNC H19表达量分别为0.26±0.02,0.19±0.01,0.12±0.02,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).U251-TR及U251细胞IC50值分别为(10.2±1.3),(2.8±0.2)μg· mL-1,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).U251-TR siLNC H19细胞和U251-TR细胞TMZ的IC50值分别为(6.1 ±0.6),(10.7±1.5)μg·mL-1,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).U251-TR和U251细胞LNC H19表达分别为0.08±0.01,0.03 ±0.01,U251-TR和U251细胞MGMT mRNA表达分别为0.57 ±0.11,0.31±0.07,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).U251-TR和U251细胞MGMT蛋白表达水平分别为(0.85 ±0.16),(0.27±0.07)DPI,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 LNC H19是促进TMZ抵抗的关键因子.
关键词： 长链非编码RNAH19 高级别脑胶质瘤 替莫唑胺 化疗抵抗 -
长链非编码RNA H19对骨肉瘤顺铂化疗敏感性的影响及机制
目的 探究长链非编码RNA H19(LncRNA H19,简称H19)对骨肉瘤顺铂化疗敏感性的影响及相关机制.方法 体外利用间歇浓度梯度递增法在人骨肉瘤细胞系U2OS中构建顺铂抵抗细胞系U2OS-CR,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测H19表达水平变化.转染过表达及干扰H19的质粒,构建U2OS过表达H19(U2OS oeH19)细胞系、U2OS干扰H19(U2OS shH19)细胞系及 U2OS-CR干扰 H19(U2OS-CR shH19)细胞系,MTT检测细胞系顺铂半抑制浓度(IC50值)的变化,Western印迹及RT-PCR技术检测U2OS oeH19及U2OS shH19中上皮间充质转化(EMT)相关分子表达的变化.结果 U2OS-CR细胞系IC50值显著高于亲本细胞U2OS(P<0.05),U2OS-CR细胞系H19表达水平也显著上调(P<0.05).U2OS oeH19细胞系顺铂IC50值相比对照细胞出现显著增高(P<0.05),U2OS shH19及 U2OS-CR shH19细胞系顺铂 IC50值相比对照细胞显著降低(P<0.05).U2OS oeH19细胞相比对照细胞E-cadherin表达下调,N-cadherin、Vimentin表达上调,U2OS shH19细胞E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vim-entin表达下调.结论 H19可通过促进骨肉瘤细胞EMT进程诱导其顺铂耐药,针对H19的靶向治疗可能提高骨肉瘤的化疗疗效.
关键词： 长链非编码RNAH19 骨肉瘤 顺铂 化疗敏感性 -
长链非编码RNA H19对成骨分化及骨性疾病影响的研究进展
越来越多的研究表明长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)广泛参与干细胞成骨分化进程,调节多种干细胞及成骨细胞的增殖与凋亡,在维持骨代谢平衡中发挥重要的作用.近年来有研究报道,lncRNA H19的异常表达与骨质疏松、骨性关节炎、骨质增生、骨肉瘤及多发性骨髓瘤等疾病都有密切关系.LncRNA H19可通过直接吸附微小RNA (micro-RNA,miRNA)或作为上游基因调控miRNA表达,然后通过Wnt/β-catenin、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)及Notch等信号转导通路改变成骨分化相关基因RUNX2、OCN等的表达,后调控骨形成进程.本文对国内外关于lncRNA H19对骨性疾病的影响的研究进展作一综述,探讨lncRNA H19调节骨性疾病的发生和发展的作用和机制,以期为骨代谢相关疾病治疗和预防提供更加可靠的理论依据.
关键词： 长链非编码RNAH19 成骨分化 骨性疾病 -
血清lncRNA H19在非小细胞肺癌筛查及预后评估中的价值
目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清lncRNA H19表达水平及其筛查和预后价值.方法 实时荧光定量PCR检测70例NSCLC患者和60例体检健康者血清lncRNA H19表达水平,并分析血清H19水平与NSCLC患者临床病理参数的关系;利用ROC曲线分析H19对NSCLC的筛查效能;Kaplan-Meier法绘制不同H19水平的NSCLC患者生存曲线,Cox多因素回归模型分析NSCLC预后的独立危险因素.结果 NSCLC组血清H19表达水平(1.72±0.27)明显高于健康人对照组(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=19.911,P<0.01).ROC曲线结果表明,血清H19筛查NSCLC的AUCROC为0.864,特异性为81.7％,敏感性为74.3％.血清H19表达与TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移有关(P均<0.05),但与年龄、性别、吸烟史、分化程度、病理分型等无关(P>0.05).H19高表达组中位生存时间为35个月,而H19低表达组中位生存时间为49个月,差异有统计学意义(Log-rankχ2=4.874,P=0.027).TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移、血清H19表达水平是影响NSCLC患者预后的独立风险因素(P均<0.05).结论 NSCLC患者血清LncRNAH19明显升高,并且与NSCLC不良预后密切相关,有望成为NSCLC筛查和预后评估的分子标志物.
关键词： 非小细胞肺癌 长链非编码RNAH19 筛查 预后 -
长链非编码RNA H19对胃癌细胞侵袭、迁移的影响及其机制
目的 探讨长链非编码RNA H19对胃癌细胞侵袭和迁移的影响,并初步探讨其作用机制.方法 将处于对数生长期的 MKN28细胞分为 MKN28/H19组、MKN28/H19mut 组和空白对照1组,MKN28/H19组、MKN28/H19mut组采用脂质体法转染全长H19 cDNA和突变H19 cDNA(不含第一个内含子),空白对照1组不转染.将对数生长期的BGC-823细胞分为BGC-823/siH19组、BGC-823/NC组和空白对照2组,BGC-823/siH19组、BGC-823/NC组同法分别转染H19 siRNA、H19 siRNA无关序列,空白对照2组不转染.各组均转染12 h.采用实时荧光定量PCR法检测各组H19相对表达量;采用Tranwell细胞侵袭试验观察各组细胞侵袭能力(以下室OD570值表示);采用Tranwell细胞迁移试验观察各组细胞迁移能力(以下室OD570值表示);采用Western blotting法检测各组H19共结合蛋白CPT1C相对表达量.结果 转染12 h后MKN28/H19组H19相对表达量、侵袭能力、迁移能力、CPT1C相对表达量均高于MKN28/H19mut组、空白对照1组(P均<0.05),MKN28/H19mut组上述指标与空白对照1组相比,P均>0.05.转染12 h后BGC-823/siH19组H19相对表达量、侵袭能力、迁移能力、CPT1C相对表达量均低于BGC-823/NC组、空白对照2组(P均<0.05),BGC-823/NC组上述指标与空白对照2组相比,P均>0.05.结论 上调胃癌细胞H19表达可以提高胃癌细胞侵袭和迁移能力,下调胃癌细胞H19表达可以抑制胃癌细胞侵袭和迁移能力.H19可能是通过调节CPT1C蛋白表达调节胃癌细胞侵袭和迁移能力.
关键词： 胃癌 长链非编码RNAH19 细胞侵袭 细胞迁移 CPT1C蛋白 -
长链非编码RNA H19与消化系统恶性肿瘤患者预后关系的Meta分析
目的 探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)H19与消化系统恶性肿瘤患者预后之间的关系.方法 检索PubMed、Embase、Web of Science、the Cochrane Library、万方、维普及CNKI数据库,收集2001年1月-2016年9月发表的所有研究lncRNA H19表达与消化系统恶性肿瘤患者预后相关性的中英文文献.采用Stata 12.0软件进行数据分析,通过合并纳入研究的风险比(HR)及其95%CI评价H19表达与消化系统恶性肿瘤患者预后的关系.结果 共8篇文献符合纳入标准,总计801例患者.研究结果表明,H19高表达与预后不良相关,患者总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的HR值和95%CI分别为1.23(95%CI: 1.05~1.45)和1.31(95%CI: 1.05~1.64)(P<0.05).结论 lncRNA H19高表达是消化系统恶性肿瘤患者预后不良的危险因素.
关键词： 消化系统恶性肿瘤 预后 长链非编码RNAH19 Meta分析 -
长链非编码RNA H19通过抑制CCND2促进膀胱癌细胞增殖的分子机制
目的 探讨长链非编码 RNA(lncRNA)H19促进膀胱癌细胞增殖的分子机制. 方法 ①应用实时定量逆转录PCR(RT-qPCR)分别检测膀胱癌组织中 lncRNA H19和 miRNA-29 c-3p的表达并分析其相关性.②应用 RNA 干扰和细胞转染技术抑制膀胱癌细胞系 T24及5637中H19基因的表达,其后通过细胞增殖实验检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;RT-qPCR检测细胞中 H19的表达变化.③在膀胱癌细胞系T24和5637中共表达miR-29c-3p和 H19,运用荧光素酶报告系统验证 miR-29 c-3 p 对 H19及细胞周期蛋白 D2(CCND2)的靶向作用,应用Western blot检测膀胱癌细胞系 T24与5637中抑制 H19表达后 CCND2的表达变化. 结果 H19在膀胱癌中高表达,miR-29c-3p在膀胱癌中低表达,H19和 miR-29c-3p 的表达为负相关,H19与CCND2的表达为正相关.MiR-29 c-3 p 可同时靶向 H19及 CCND2.在膀胱癌细胞系中过表达miR-29c-3p可以抑制 H19的表达,miR-29c-3p在膀胱癌中起肿瘤抑制作用,而 H19具有促进癌细胞增殖和改变细胞周期的能力,表现为癌基因样作用,抑制膀胱癌细胞系 T24和5637中 H19的表达可以在翻译水平减少CCND2的表达. 结论 lncRNA H19通过与CCND2竞争结合 miR-29 c-3 p,降低 miR-29 c-3 p对CCND2的表达抑制,从而在膀胱癌中发挥肿瘤促进作用.
