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宫颈癌Siha细胞miR21基因表达与顺铂敏感相关性研究
目的 探讨miR21基因表达改变对宫颈癌Siha细胞顺铂敏感性的影响.方法 采用脂质体介导法分别以mi-crOFFTM miR21 inhibitor、micrONTM miR21 mimic、miR21阴性对照试剂转染Siha细胞,实验分为miR21下调组、miR21上调组、阴性对照组及空白对照组.实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR21基因的表达水平;CCK-8比色法检测各组细胞对顺铂的半抑制率浓度(50％ inhibitory concentration,IC50值);Annexin V/PI法检测顺铂处理后各组细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法,分别从mRNA和蛋白水平检测顺铂对各组细胞中PTEN、PDCD4基因表达的影响.结果 实时荧光定量PCR检测miR21基因的表达结果显示,miR21下调组的表达明显低于阴性对照组,miR21上调组的表达明显高于阴性对照组,F=255.525,P＜0.001.CCK-8比色法检测结果显示,顺铂对miR21下调组的IC50值为(2.44±0.69) μg/mL,阴性对照组为(3.96±0.07) μg/mL;miR21上调组为(6.93±0.07) μg/mL,空白对照组为(4.05±0.03) μg/mL,F=870.118,P＜0.001.Annexin V/PI检测结果显示,5μg/mL顺铂诱导miR21下调组的凋亡率为(64.36±2.47)％,阴性对照组为(4.2±0.17)％;miR21上调组为(0.06±0.03)％,空白对照组为(4.14±0.25)％,x2=10.385,P=0.016.实时荧光定量PCR检测PTEN和PDCD4结果显示,miR21下调组PTEN的mRNA表达相较于阴性对照组显著增加,miR21上调组PTEN的mRNA表达相较于阴性对照组降低,F=174.057,P＜0.001;miR21下调组PDCD4的mRNA表达相较于阴性对照组显著增加,miR21上调组PDCD4的mRNA表达相较于阴性对照组降低,F=491.283,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果显示,miR21下调组PTEN蛋白表达量为8.845±0.062,阴性对照组7.695±0.056;miR21上调组为6.908±0.058,空白对照组为1,F=16.036,P＜0.01.miR21下调组PDCD4蛋白表达量为9.936±0.036,阴性对照组为8.728±0.019;miR21上调组为7.838±0.066,空白对照组为1,F=55.323,P＜0.001.结论 下调miR21基因可能增加宫颈癌Siha细胞对顺铂的敏感性,上调miR21基因后可能减弱宫颈癌Siha细胞对顺铂的敏感性.
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基于miR21的宫颈癌细胞顺铂敏感性机制研究
目的 探讨miR21影响宫颈癌细胞株Hela及顺铂耐药细胞株Hela/DDP顺铂敏感性的分子机制.方法 利用riboFECTTM CP转染试剂分别将成熟miR21 mimic及其阴性对照试剂NC转染至Hela细胞,miR21 inhibitor及其阴性对照试剂NC转染至Hela/DDP细胞,并将细胞分为mimic组、inhibitor组、相应NC组及Blank组.Real-time PCR检测PTEN mRNA的表达水平;流式细胞仪检测细胞周期(PI法)及经顺铂处理后的凋亡率(Annexin V/PI法).结果 Real-time PCR法检测PTEN mRNA在Hela/DDP中低表达,为Hela的(0.410±0.046)倍(P＜0.01);转染mimic后,Hela中PTEN mRNA表达明显低于NC组及Blank组(P＜0.01),NC组与Blank组比较差异无统计学意义(P＞0.05);转染inhibitor后,Hela/DDP中miR21表达明显高于NC组及Blank组(P＜0.01),NC组与Blank组比较差异无统计学意义(P＞0.05).Annexin V/PI检测结果显示,mimic组凋亡率与NC组、Blank组比较明显减少(P＜0.05),inhibitor组凋亡率与NC组、Blank组比较显著提高(P＜0.05).PI法检测结果显示,mimic组S期所占比例与NC组、Blank组比较明显增加(P＜0.05),NC组与Blank组比较差异无统计学意义(P＞0.05);in-hibitor组S期所占比例与NC组、Blank组比较明显减少(P＜0.05),NC组与Blank组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PTEN mRNA在Hela/DDP中低表达,在Hela中高表达.上调miR21在Hela中的表达能明显降低PTEN mRNA的表达,减少凋亡,增加细胞周期中S期所占比例,导致细胞耐药;下调miR21在Hela/DDP中的表达能明显增加PTEN mRNA的表达,增加凋亡率,降低细胞周期中S期所占比例,从而达到增加化疗敏感性的效果.
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miR21对宫颈癌Hela细胞及顺铂耐药Hela/DDP细胞顺铂敏感性的影响
目的 探讨miR21基因表达水平对宫颈癌Hela细胞及其顺铂耐药Hela/DDP细胞顺铂敏感性的影响.方法 利用riboFECTTM CP转染试剂分别将成熟miR21 mimic、inhibitor及其阴性对照试剂NC转染至Hela与Hela/DDP细胞,并将Hela细胞分为mimic组、阴性对照(NC)组和空白对照(Blank)组,将Hela/DDP细胞分为inhibitor 组、阴性对照NC组和空白对照(Blank)组.Real-time PCR检测各组细胞中miR21的表达水平:MTr检测各组细胞对顺铂的半数抑制率浓度(IC50值).结果 ①Real-time PCR检测miR21在Hela/DDP中高表达,是Hela的(5.452±0.074)倍(P＜0.01);转染mimic后,Hela中miR21表达高于明显NC组及Blank组(P＜0.01),NC组与Blank组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);转染inhibitor后,Hela/DDP中miR21表达明显低于NC组及Blank组(P＜0.01),NC组与Blank组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).②MTr结果显示,转染mimic后Hela细胞对顺铂敏感性下降,与NC组及Blank组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),NC组与Blank组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);转染inhibitor后Hela/DDP细胞对顺铂敏感性增加,与NC组及Blank组相比,差异有统计学意义(P＜ 0.05),NC组与Blank组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ①miR21在Hela/DDP中高表达,在Hela中低表达.②上调miR21在Hela中的表达能明显降低其对顺铂的敏感性,下调miR21在Hela/DDP中的表达能明显增加其对顺铂的敏感性.
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晚期胃癌患者血清miR-21和let-7i水平变化与奥沙利铂化疗疗效的关系
目的 探讨晚期胃癌患者血清miR21、let7i的水平变化与奥沙利铂化疗疗效的关系.方法 选取本院肿瘤科收治的79例晚期胃癌患者作为病例组,同期60例健康体检者作为对照组.测定2组外周血血清中miR21、let7i的水平,病例组采用奥沙利铂方案(奥沙利铂+卡培他滨或者5氟尿嘧啶+亚叶酸钙+奥沙利铂)进行化疗,分析miR21、let7i与患者临床病理特征、化疗效果的关系.结果 化疗前,病例组患者的血清miR21测定值显著高于对照组(P＜0.05);化疗前,ECOG(0～1)级、高+中分化程度晚期胃癌患者的血清miR21测定值显著低于ECOG 2级、低分化患者(P＜0.05);化疗后,CR+PR组患者的血清miR21水平显著低于SD+ PD组患者(P＜0.05).CR+ PR组(低水平miR21)患者的中位生存时间显著长于SD+ PD组(高水平miR21)(P＜0.05).结论 晚期胃癌患者血清miR21的水平与ECOG分级、组织分化程度、疗效及预后有关.
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miR21在不同分期直肠癌中的表达及意义
目的 检测miR21在不同分期直肠癌中的表达量并讨论其临床意义.方法 通过Taq Man探针实时荧光定量检测2012年8～10月期间在我院胃肠外科中心经病理检查新确诊的40例直肠癌患者的癌组织及相应癌旁正常组织中miR21的表达量.结果 40例直肠癌组织中miR21表达量明显高于相对应癌旁正常组织(4.122±1.973比1.825±0.661,P=0.000).N1～N2期直肠癌组织中miR21表达量明显高于N0期(4.852±2.344比3.391±1.171,P=0.019),Dukes C～D期直肠癌组织中miR21表达量明显高于A～B期(4.787±2.304比3.386±1.203,P=0.021).miR21在N0、N1、N2分期中的表达量呈递增关系,且N2分期中的表达明显高于N0分期,差异有统计学意义(5.556±1.500比3.391±1.171,P=0.010).ROC曲线分析显示,miR21在预测淋巴结转移时(即N1～N2期),其AUC值为0.698 (95％ CI为0.530～0.865),敏感度为50.0％,特异性为90.0％;在预测中晚期肿瘤时(即Dukes C～D期),其AUC值为0.689 (95％CI为0.524～0.855),敏感度为42.9％,特异性为94.7％.结论 miR21的高表达与直肠癌N分期和Dukes分期有潜在联系,提示miR21可能是潜在的术前预测直肠癌N分期和Dukes分期的指标.
