首页 > 文献资料
-
随机引物扩增技术对变形菌DNA多态性分型研究
目的建立变形菌随机扩增DNA多态性分型技术,应用于临床菌株流行病学调查. 方法优化随机扩增DNA多态性指纹技术(RAPD)的实验条件,利用RAPD技术成功地检测21株变形菌DNA指纹图谱. 结果 21株变形菌分为18型别,其中16株奇异变形菌分为13个型,5株普通变形菌分为5个型. 结论 RAPD分型技术可简便、快速为变形菌提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法.
-
新生儿感染光滑假丝酵母菌随机扩增DNA多态性分析
目的：探讨采用随机扩增DNA多态性（RAPD）技术对临床新生儿血培养标本中分离的光滑假丝酵母菌进行基因分型；分析新生儿感染菌株的同源性，追踪其感染源与传播途径，从而为新生儿假丝酵母菌感染防治提供依据。方法15例新生儿血培养标本中分离的菌株均经过法国科马嘉假丝酵母菌显色鉴定培养基和法国生物梅里埃API20 CAUX酵母菌鉴定试剂盒进行鉴定、纯化，其后采用RAPD多态性分析，获得菌株的RAPD指纹图，应用NTSYS软件计算出相似系（SAB），并进行聚类分析，比较菌株间的同源性。结果15株菌株中14株被鉴定为光滑假丝酵母菌，1株为白色假丝酵母菌，且鉴定分离的2～14号的光滑假丝酵母菌相似系数均≥0．8，表明菌株之间基因型相似度较高，具有基因同源性，而第一株菌株与其他13株之间的相似系数均＜0．6，不具有基因同源性。结论本研究发现新生儿感染的13株光滑假丝酵母菌具有基因同源性，初步证实了试验分离的光滑假丝酵母菌在住院患儿间进行水平传播，提示了光滑假丝酵母菌易引起新生儿院内交叉感染，预防宜采取综合措施，切断传播途径。
-
一氧化氮与糖尿病肾病研究进展
NO是一种脂溶性、具有高反应活性的自由基气体和生物信使分子,具有广泛的生物活性.NO可由几种不同的一氧化氮合酶(NOS)催化合成,目前研究比较清楚的有3种NOS:神经细胞固有型NOS(ncNOS,NOS1);诱生型NOS(iNOS,NOS2);内皮细胞固有型NOS(ecNOS,NOS3)[1].生物医学研究领域对一氧化氮(NO)的广泛关注已经持续了近10a.NO与糖尿病肾病(DN)的关系是近年来NO研究中的重要成果之一,笔者对此进行综述.
关键词： 一氧化氮 糖尿病肾病 内皮细胞固有型一氧化氮合酶 DNA多态性 -
DNA多态性分析凝胶干胶保存法及其法医学应用价值
目的:探讨凝胶干胶保存法及其在法医学中的应用价值.方法:采用饱和酚/氯仿抽提法提取血样DNA,STR-PCR进行扩增,6%变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳,聚丙烯酰胺凝胶经银染显色后,采用玻璃纸处理制成干胶.结果:将银染后的聚丙烯酰胺凝胶及时进行拍照同时将其制成干胶,用Marker做对照通过测量DNA带的位置发现所得干胶同原始胶及拍照获取胶的结果一致.结论:通过玻璃纸干胶保存法可使原始资料永久而真实的保存,此方法对法医物证的保存具有极其重要的意义.
关键词： DNA多态性 干胶保存法 短串联重复聚合酶链反应 法医学 -
Aγ-珠蛋白基因DNA多态性研究
目的研究Aγ-珠蛋白基因的多态性.方法采用PCR-RFLP技术对35例日本人Aγ-珠蛋白基因领域DNA多态性进行了检测.结果 Aγ-Gg*1纯合子表型频率为0.114 3,Aγ-Gg*2纯合子表型频率是0.285 7,Aγ-Gg*1/Aγ-Gg*2杂合子表型频率是0.60,Aγ-Gg*1基因频率0.414 3,Aγ-Gg*2基因频率0.585 7,而所有基因座经检验均符合Hardy-Weinberg平衡.结论该扩增体系在日本人群等位基因分布较好.
-
海南汉、黎族人群血管紧张素原基因T174M、M235T的多态性分布
目的 了解海南地区汉族、黎族正常人群血管紧张素原(AGT)基因T174M和M235T的多态性分布情况.方法 应用等位基因特异性PCR技术,对193例海南地区汉族正常人与162例黎族正常人进行AGT基因T174M、M235T多态位点的检测,统计各组基因型频率及各组等位基因频率.结果 M235T基因多态性在海南地区汉黎族正常人间有显著性差异(x~2=10.258,P＜0.01);而T174M基因多态性及其等位基因型频率、M235T等位基因型频率均无显著性差异(x~2=4.062,P>0.1;x~2=1.764,P>0.05;x~2=1.759,P>0.05).结论 海南地区汉族、黎族正常人群M235T基因多态性存在差异,而T174M基因多态性及其等位基因型频率及M235T等位基因型频率的分布相接近.
-
血管紧张素原基因两个多态位点与海南地区汉族脑梗死的关系
目的 了解血管紧张素原(AGT)基因T174M和M235T的多态性与海南地区汉族脑梗死的关系.方法 应用等位基因特异性PCR技术,对334例海南地区汉族脑梗死患者和193例海南地区汉族正常对照组中AGT基因T174M、M235T多态位点进行检测,统计各组基因型频率及各组等位基因频率.结果 T174M基因多态性和M235T基因的T等位基因频率增高在脑梗死组与正常对照组间有显著性差异(χ2=6.608,P＜0.05;χ2=4.314,P＜0.05);而M235T基因多态性和T174M基因的T等位基因频率在两组间无显著性差异(χ2=44.080,P>0.1;χ2=3.873,P>0.05).结论 AGT基因T174M多态性及M235T基因的T等位基因频率增高与海南汉族脑梗死发病相关,而M235T基因多态性及T174M基因的T等位基因频率与脑梗死无关.
-
乌鲁木齐地区维汉两民族中糖蛋白Ⅲa基因多态性与冠心病危险性的关系
目的探讨乌鲁木齐地区维汉两民族冠心病患者糖蛋白(GP)Ⅲa基因多态性与冠心病的关系.方法用酚氯仿抽提核酸法从凝血块中分离DNA,用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对乌鲁木齐地区维汉两民族105例冠心病患者和56例对照组人群进行GPⅢa基因多态性(由P1A1和P1A2决定的P1A1/A2、PlA/A2和P1A2/A2)Mspl酶切研究.结果(1)GpⅢa之PlA1和PlA2等位基因频率在冠心病组分别为1.00和0.00,与对照组(0.9910和0.0090)比较,无显著差别(P＞0.05).(2)PlA1/A2与冠心病其它危险因子一起作Logistic回归分析,PlA1/A2(危险比OR＝0.0051,P＞0.05)不作为冠心病的危险因子.结论乌鲁木齐地区维汉两民族人群中CAD患者GPⅢa PlA2等位基因频率为0,对照组P1A2等位基因频率为0.0090;仅在一正常对照维族女性患者出现PlA1/A2;PlA2等位基因频率在中国乌鲁木齐地区汉族人群中缺如,在维族中罕见;PlA2等位基因频率与冠心病无相关性.
-
新疆维汉两民族冠心病患者载脂蛋白E基因多态性研究
目的探讨新疆乌鲁木齐地区维汉两民族冠心病患者载脂蛋白E(Apo E)基因多态性与冠心病的关系.方法用酚氯仿抽提核酸法从凝血块中分离DNA,用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对新疆乌鲁木齐地区维汉两民族103例冠心病患者和54例对照组人群进行Apo E基因多态性(由ε2、ε3和ε4决定的E2/2、E3/3、E4/4、E4/2、E4/3和E3/2)HhaI酶切研究.结果(1)维族中Apo E之ε2,ε3和ε4等位基因频率分别为0.221±0.373,0.647±0.380和0.132±0.224,与汉族(0.081±0.196,0.772±0.315和0.146±0.237)比较,ε2明显增高(P＜0.05),ε3和ε4虽有减低但无显著差别(P＞0.05).(2)Apo E之ε2,ε3和ε4等位基因频率在冠心病组分别为0.073±0.215,0.777±0.311和0.151±0.241,与对照组(0.185±0.296,0.685±0.367和0.130±0.221)比较,ε2明显减低(P＜0.05),维族中更明显(0.105±0.315对0.367±0.296,P＜0.05),ε3和ε4虽有升高但无显著差别(P＞0.05).(3)由ε2到ε4低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、总胆固醇(TC)和甘油三酯逐渐升高.ε2缺失与冠心病其它危险因子一起作Logistic回归分析,ε2缺失(危险比RR=3.45,P＜0.05)为冠心病的危险因子之一.结论新疆乌鲁木齐地区维汉两民族人群中(1)维族和汉族人群中Apo E基因型分布有非常显著性差异(P＜0.01);维族人群中ε2等位基因频率明显高于汉族.(2)CAD患者Apo E基因之ε2等位基因频率明显降低,其中维族更明显,ε3和ε4有所升高;从ε2到ε4,LDL、TG和TC有升高趋势.(3)Apo E基因多态性(ε2等位基因缺失)为冠心病的危险因子之一,亦即ε2与冠心病负相关.
-
金钗石斛及其相似种RAPD优化和DNA多态性分析
目的:以金钗石斛为材料,建立石斛的RAPD优化条件,应用于石斛相似种的DNA多态性分析.方法:分别设置模板DNA,Mg2+,Taq DNA聚合酶,dNTPs,引物的浓度梯度,优化RAPD反应体系.结果:在25 μl总反应体系中,以上反应物的用量分别为100 ng,3.0 mmol/L,1.0 U,0.2 mmol/L,0.4 μmol/L时所获得的石斛属DNA指纹图谱谱带型清晰、重复性好.其中用S48 扩增的DNA指纹图谱具有更大的相似性,适合于石斛真伪鉴别;而S90 扩增的片段具有明显的多态性,适合于石斛遗传分化研究.结论:优化后的RAPD方法可作为研究石斛属植物的遗传多样性及真伪鉴别的有效方法.
-
DNA多态性分析在造血干细胞移植后的应用
造血干细胞(骨髓)移植是根治白血病等疾病的有效方法.通过对受者骨髓移植前后的DNA多态性检测,能准确判断骨髓移植后存活状态及疾病是否复发.笔者选择一个VNTR基因座(D1S80)和5个微卫星(STR)基因座(HumFGA、HumTH01、vWF3、D5S818及TPOX)对受者骨髓移植前后基因型进行了分析[1-4].
-
口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究
目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性检材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性.方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测.结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型.结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值.
-
野生及家养动物胰吸虫病原DNA多态性的比较研究
目的对引起家畜及野生动物胰吸虫病的阔盘属吸虫:腔阔盘吸虫,胰阔盘吸虫及分别来自牛、羊和野生动物山麂的枝睾阔盘吸虫基因组DNA多态性进行比较分析.方法分别提取这五类胰吸虫的基因组DNA,利用10碱基随机引物进行RAPD-PCR扩增反应,选取重复性好、谱带清晰并呈多态性的引物,根据这些引物扩增的谱带利用UPGMA方法进行聚类分析.结果从60个随机引物中筛选出重复性好、谱带清晰并呈多态性的引物22个,共扩增出199条DNA带,其中多态性位点114个,占57.3%,羊枝睾阔盘吸虫和麂枝睾阔盘吸虫的遗传距离近,腔阔盘吸虫和麂枝睾阔盘吸虫的遗传距离远.结论寄生在野生动物山麂的枝睾阔盘吸虫与寄生在家养动物的几种胰吸虫具有很高的DNA多态性
-
布鲁氏菌AP-PCR优反应体系的建立
目的建立布鲁氏菌的随机扩增DNA多态性的优化反应体系,用于布鲁氏菌分子流行病学研究.方法利用几种随机引物及其组合(P1、P2、P3、P4、P5、OPLO4、P3/5、P4/5)进行随机引物PCR的反应(AP-PCR,又称RAPD), 及重复片断引物ERIC1R/ERIC2的随机扩增多态性;另外针对优选引物P5和OPLO4,分别对Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA浓度、引物的浓度及扩增过程中的退火温度等影响反应结果的因素,进行了一系列优化组合方案的试验及系统分析.结果引物P5、OPLO4和引物组合P4/5可以得到布鲁氏菌的高分辨率的分型带谱,并建立相应的优化反应体系.结论在严格的优化反应条件下,建立简单、快捷、灵敏度高的RAPD方法,用于布鲁氏菌的DNA多态性研究,为布鲁氏菌分子流行病学的深入研究提供资料.
-
解耦连蛋白在2型糖尿病及其并发症中作用
解耦连蛋白2是线粒体内膜上一种阴离子载体蛋白,在体内分布广泛,有抑制氧应激、负调节β细胞分泌胰岛素、促进脂肪酸代谢的作用.解耦连蛋白2-866G/A基因多态性影响胰岛β细胞分泌功能,与2型糖尿病发病相关.本文对解耦连蛋白2在2型糖尿病及其并发症中的作用作一综述.
-
用RAPD技术分析甲型溶血性链球菌DNA
[目的]应用RAPD技术分析甲型溶血性链球菌DNA多态性并对其分型.[方法]随机设计17bp和10bp两条引物,采用近年来建立起来的RAPD技术对30株甲型溶血性链球菌DNA进行扩增,扩增产物经凝胶电泳后得到指纹图.[结果]共出现12个DNA条带,根据指纹图的异同将其分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型别.[结论] 甲型溶血性链球菌DNA用RAPD技术分析,把该菌进一步分型且方法操作简便,结果准确、稳定.
-
DNA多态性分析技术检测异基因造血干细胞移植后植活的证据
目的探讨DNA多态性分析技术检测患者移植后植入状态的可行性及在患者移植的预后和疾病复发的预警作用.方法应用DNA多态性分析技术对66例异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)术中患者移植前、后及供者的基因分型进行检测,并对25例进行追踪监测和动态分析.结果 48例Allo-HSCT术后,患者基因分型表现为供者源型,13例表现为受者源型,5例表现为嵌合状态型;通过对25例追踪监测和动态分析,发现2例供者源型转为受/供者嵌合状态型,4例嵌合状态型转为供者源型,其他未见变化.结论 DNA多态性分析技术可快速、准确地检测患者移植物的植入状态,为临床移植提供准确、可靠的实验指标,为进一步制定治疗方案提供依据.
-
分子标记的发展及应用
随着分子生物学的迅速发展,DNA分子标记越来越受重视.本文简要介绍了DNA分子标记的发展,以及分子标记在基因组作图、基因克隆、物种亲缘关系分析及疾病诊断等方面的应用.
-
胆固醇酯转运蛋白基因6个多态位点与冠心病的关系
目的:了解胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因TaqIB等6种突变的多态性与海南汉族冠心病(CHD)的关系.方法:应用针对CETP基因TaqIB、I405V、D442G、R451Q、A373P和I14A多态位点设计的等位基因特异性PCR技术,对301例海南汉族正常对照组、334例海南汉族CHD患者中CETP基因多态位点进行了检测,统计各基因型频率,计算各等位基因频率.结果:①正常对照组和CHD组中,TaqIB多态位点均可检测出B_1B_1、B_1B_2、B_2B_2 3种基因型.正常对照组B_1B_1、B_1B_2、B_2B_2 3种基因型的频率分布为45.18%、39.87%、14.95%,B_1和B_2的等位基因频率分布为65.12%、34.88%;CHD组B_1B_1、B_1B_2、B_2B_2 3种基因型的频率分布为51.50%、31.74%、16.77%,B_1和B_2的等位基因频率分布为67.37%、32.63%.②I405V突变位点可检测出Ⅱ、Ⅳ、VV 3种基因型.正常对照组Ⅱ、Ⅳ、VV 3种基因型的频率分布为15.95%、48.50%、35.55%,Ⅰ和Ⅴ的等位基因频率分布为40.20%、59.80%; CHD组Ⅱ、Ⅳ、VV 3种基因型的频率分布为15.27%、35.33%、49.40%,Ⅰ和Ⅴ的等位基因频率分布为32.93%、67.07%.③D442G突变位点可检测出DD、DG 2种基因型.正常对照组DD、DG 2种基因型的频率分布为95.35%、4.65%,D和G的等位基因频率分布为97.67%、2.33%;CHD组DD、DG 2种基因型的频率分布为63.47%、36.53%,D和G的等位基因频率分布为81.74%、18.26%.④正常对照组和CHD组中均未检测到R451Q、A373P和I14A 3种突变类型.⑤正常对照组与CHD组I405V和D442G 2个多态位点的基因型分布和等位基因频率的比较差异有统计学意义,其余多态位点在正常对照组与CHD组之间差异均无统计学意义.结论:I405V和D442G的多态性与海南汉族CHD显著相关.I405V多态位点V等位基因、D442G多态位点G等位基因是海南汉族CHD的易感基因,而I405V多态位点I等位基因对其有保护作用.D442G多态位点DG基因型可使海南汉族人群CHD的发病危险性显著增加.
关键词： 冠状动脉疾病 胆固醇酯转运蛋白基因 DNA多态性 汉族 -
新疆维汉两民族冠心病患者载脂蛋白E基因的多态性
目的探讨新疆乌鲁木齐地区维汉两民族冠心病患者载脂蛋白E基因多态性与冠心病的关系.方法用酚氯仿抽提核酸法从凝血块中分离DNA, 用聚合酶链反应-限制片长多态性方法对新疆乌鲁木齐地区维汉两民族124例冠心病患者和70例对照组人群进行载脂蛋白E基因多态性(由ε2、ε3和ε4决定的E2/2、E3/3、E4/4、E4/2、E4/3 和 E3/2)HhaI酶切研究.结果 (1)维吾尔族中载脂蛋白E ε2、ε3 和ε4等位基因频率分别为0.155±0.300、 0.648±0.342 和 0.197±0.246, 与汉族(0.081±0.196、 0.772±0.315 和 0.146±0.237)比较,ε2明显增高(P<0.05), ε3 和ε4虽有减低但无显著差别(P>0.05).(2)载脂蛋白E ε2、ε3和ε4等位基因频率在冠心病组的分布分别为0.060±0.198、 0.758±0.302 和 0.182±0.250, 与对照组(0.193±0.286、0.671±0.370 和 0.136±0.224)比较,ε2明显减低(P<0.01),维吾尔族中更明显(0.050±0.221对0.290±0.336,P<0.05), ε3 和ε4虽有升高但无显著差别(P>0.05).(3)由ε2到ε4 低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇和甘油三酯逐渐升高.将等位基因与冠心病其它危险因子一起作Logistic回归分析发现,ε2缺失(危险比RR=4.38,P<0.05)为冠心病的危险因子之一.结论新疆乌鲁木齐地区维汉两民族人群中(1)维族和汉族人群中载脂蛋白E基因型分布有非常显著性差异(P<0.01);维族人群中ε2 等位基因频率明显高于汉族.(2)冠心病患者载脂蛋白E ε2等位基因频率明显降低,其中维族更明显, ε3 和ε4 有所升高;从ε2到ε4,LDL、TG 和TC有升高趋势.(3)载脂蛋白E基因多态性(ε2等位基因缺失)为冠心病的危险因子之一,亦即ε2与冠心病呈负相关.
