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微小RNA-141对肝癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响
目的 探讨上调微小RNA-141模拟物(miR-141 mimics)表达对肝癌细胞(HepG2)增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常肝上皮细胞(L02)和肝癌细胞(HepG2)中miR-141的差异表达.以合成的miR-141模拟物转染HepG2细胞作为实验组(miR-141组),以空白对照(CON组)和阴性对照(miR-NC组)作为对照组.采用qPCR检测各组细胞中miR-141表达情况,CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果 qPCR结果显示,HepG2中miR-141相对表达(0.64 ±0.13)明显低于L02(1.00±0.18),差异有统计学意义(P＜0.05).转染后,miR-141组细胞中miR-141相对表达(3.33±0.66)明显高于CON组(1.00 ±0.17,P ＜0.05)和miR-NC组(1.08±0.14,P＜0.05).CCK8结果显示,miR-141组在转染后48、72、96 h相对吸光度值分别为(0.67 ±0.07)、(1.17±0.05)、(1.36±0.03),均明显低于CON组[(0.81±0.02)、(1.42±0.03)、(1.73±0.05)]和miR-NC组[(0.78±0.01)、(1.38±0.02)、(1.69±0.01),均P＜0.05].细胞凋亡检测结果显示,miR-141组细胞凋亡率[(11.81±0.23)％]明显高于CON组[(4.18±0.18)％]和miR-NC组[(4.04±0.08)％],差异有统计学意义(P＜0.05).细胞周期检测结果显示,miR-141组S期细胞[(19.89±2.78)％]明显少于CON组[(31.87±1.00)％]和miR-NC组[(30.49±1.73)％],差异均有统计学意义(均P＜0.05);而miR-141组G0/G1期细胞[(74.74±2.03)％]明显多于CON组[(60.85±1.69)％]和miR-NC组[(60.93±1.95)％],差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 HepG2细胞中miR-141低表达.上调miR-141表达能明显抑制HepG2细胞增殖,促进细胞凋亡及改变细胞周期的分布.
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卵巢上皮组织miR-141表达及其生物信息学分析
目的 既往微小RNA(microRNA,miRNA))芯片结果显示miR-141在卵巢癌中呈高表达.本研究探讨上皮性卵巢癌组织中miR-141的表达情况及其与卵巢癌临床病理参数之间的关系,通过各种生物信息学工具预测miR-141靶基因及进行相关功能分析,为进一步研究miR-141为靶点的基因治疗提供理论依据.方法 选取2009-01-01-2013-12-31中国医科大学附属盛京医院行手术治疗的82例卵巢组织标本.其中上皮性卵巢癌组织标本47例、卵巢良性肿瘤标本25例和正常卵巢组织标本10例.采用定时定量荧光PCR(real-time PCR)法检测miR-141表达水平,并分析其表达情况与临床病理参数的相关性.应用miRbase、miRanda和targetscan 3个数据库预测miR-141靶基因,对获得的靶基因分别进行基因本体论(gene ontology,GO)注释描述、GO富集分析和Pathway分析.结果 与良性卵巢肿瘤(4.533±2.617)或正常卵巢组织(3.046±1.431)相比,上皮性卵巢癌组织(62.052±32.196)中的miR-141表达升高明显,差异有统计学意义,P＜0.001;良性肿瘤与正常卵巢组织相比,差异无统计学意义,P=0.113.miR-141的表达水平与卵巢癌的分期有关,Ⅲ、Ⅳ期癌组织中miR-141的相对表达量(75.099±22.208)明显高于Ⅰ和Ⅱ期(13.779±6.012),两者比较差异有统计学意义,F=9.226,P＜0.05;与年龄、组织学类型、组织分化和淋巴结转移无关.同时采用miRbase、miRanda和targetscan 3个数据库重叠部分的miR-141预测靶基因117个,其靶基因集合功能富集于肌细胞分化调节、转录因子连接及DNA连接等分子生物学过程,P＜0.05;信号转导通路显著富集于Wnt信号通路和昼夜节律信号通路,P＜0.05.结论 miR-141在上皮性卵巢癌组织中呈高表达,与临床分期相关,提示其可能参与卵巢癌的发生发展过程.
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MicroRNA-141在上皮性卵巢癌患者组织和血清中的表达及临床意义的探讨
目的:探讨微小RNA-141(miR-141)在卵巢癌患者组织和血清中的表达情况并初步探讨其作为肿瘤标记物早期诊断上皮性卵巢癌的可行性.方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测16例上皮性卵巢癌患者和4例正常人卵巢组织及血清标本中miR-141的表达;检测4例良性卵巢肿瘤血清中miR-141的表达.结果:miR-141在卵巢癌患者组织中相对表达量分别为(72.846±76.671)显著高于正常人(2.869±3.201)(P＜0.05);miR-141在卵巢癌患者血清中相对表达量(31.581±52.885)显著高于良性卵巢肿瘤患者(0.668±1.196)和正常人(1.690±1.697)(P＜0.05),后两组间表达无差异(P＞0.05);miR-141表达随卵巢癌临床分期的进展呈上升趋势(P＜0.01),在无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组(P＜0.05),与组织分级和CA125的升高无关(P＞0.05).在组织中miR-141表达水平与上皮性卵巢癌临床病理特征均未见明显差异(P＞0.05).结论:miR-141可能在上皮性卵巢癌的发生发展中发挥癌基因的作用;miR-141用于检测上皮性卵巢癌敏感性和特异度较高,有望成为上皮性卵巢癌早期诊断的新指标.
关键词： 微小RNA 微小RNA-141 肿瘤 上皮性卵巢癌 实时定量RT-PCR -
血清microRNA-141在结肠癌中的表达和临床意义
目的 探讨microRNA-141(miR-141)在结肠癌患者血清中的表达及意义.方法 用荧光定量PCR(SYBR Green法)检测60例结肠癌患者和60例健康对照组血清中miR-141的表达.结果 miR-141在结肠癌患者血清中的相对表达量为3.29±0.52,与健康对照组的1.02±0.23相比,显著升高(t=11.34,P＜0.05);随着结肠癌分化程度的降低,血清miR-141的表达增高;血清miR-141在淋巴结转移组的相对表达量为4.45±0.32,在无淋巴结转移组为2.39±0.23,差异有统计学意义(t=2.34,P＜0.05);结肠癌术后血清miR-141表达明显下降(t=8.53,P＜0.01).结论 miR-141在结肠癌血清中高表达,且与结肠癌分化程度和淋巴结有无转移有关.有望作为一种新的生物标志物用于结肠癌辅助诊断.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响
目的 观察D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)模型小鼠在组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215的作用下,炎症相关指标降钙素原(procalcitonin,PCT)、高迁移率族蛋白B1 (high mobility group box 1,HMGBl)、微小RNA-141(microRNA-141,miR-141)的表达情况.方法 将18只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)、ALF模型组(n=6)、ACY1215干预组(n=6),ALF模型组和ACY1215干预组采用D-GalN/LPS联合诱导ALF小鼠模型,其中ACY1215干预组在造模前2h腹腔注射ACY1215.24 h后检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝组织结构变化并检测肝组织PCT、HMGB1、miR-141的表达情况.结果 与ALF模型组相比,ACY1215干预组小鼠肝组织结构破坏程度明显减轻,炎性细胞浸润明显减少;血清AST、ALT、TBIL水平显著下降,肝组织HMGB1及PCT表达显著降低,miR-141表达显著升高.结论 ACY1215对ALF小鼠肝组织具有保护作用,可能与其能减轻肝组织炎症反应有关.
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微小RNA-141对小鼠肝癌细胞合成高迁移率族蛋白B1的调控作用
目的:探讨微小RNA-141(miR-141)对小鼠肝癌细胞株hepal-6高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)表达的调控作用.方法:将小鼠肝癌细胞株hepal-6分为miR-141拟似物转染组、miR-141拟似物转染对照组、miR-141抑制剂转染组、miR-141抑制剂转染对照组.分别用脂质体lipofectamine 2000将miR-141转染hepal-6细胞.用实时定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-141和HMGB1 mRNA表达,然后用Western印迹检测HMGB1蛋白表达.采用双荧光素酶报告基因检测miR-141对靶基因HMGB1的调控作用.结果:与相应对照组比较,miR-141拟似物转染组中miR-141表达水平上调,而miR-141抑制剂转染组中miR-141表达水平下调.同时,与相应对照组比较,miR-141拟似物转染组中HMGB1 mRNA和蛋白表达明显下调,而miR-141抑制剂转染组中HMGB1 mRNA和蛋白表达均明显上调.双荧光素酶报告基因分析表明miR-141能够作用于HMGB1基因的3'-UTR.结论:miR-141可以作用于HMGB1基因的3'-UTR,在转录后水平可上调HMGB1蛋白的表达,HMGB1可能是miR-141直接调控的靶基因.
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黄芩苷通过影响miR-141上调Sirt1表达而抑制高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡
目的:探讨黄芩苷在高糖环境下对小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,并从微小RNA-141(miR-141)/沉默信息调节因子1(Sirt1)通路深入阐释黄芩苷对糖尿病肾病的治疗机制.方法:高糖(25 mmol/L葡萄糖)培养小鼠肾小球系膜细胞系SV40-MES-13模拟构建糖尿病肾病细胞模型,并分为正常对照组、高糖组、黄芩苷组和高糖+黄芩苷组.qPCR检测miR-141的表达水平,Western blot检测Sirt1的表达水平.双萤光素酶实验检测Sirt1与miR-141的调控关系.流式细胞术检测细胞凋亡.结果:与正常对照组相比,高糖条件下培养的系膜细胞内miR-141表达水平明显上调,Sirt1蛋白表达水平明显下调,细胞凋亡水平显著增加(P<0.01);与高糖组比,高糖+黄芩苷组的细胞凋亡和miR-141表达水平明显降低,Sirt1蛋白表达水平明显升高(P<0.01).敲减Sirt1表达可以逆转下调miR-141对系膜细胞细胞凋亡和细胞内Sirt1蛋白水平的作用.过表达miR-141可以逆转黄芩苷抑制高糖对Sirt1蛋白水平和细胞凋亡的作用;过表达miR-141对系膜细胞的作用可以进一步被Sirt1的过表达所逆转.结论:黄芩苷可以通过抑制miR-141过表达,促进Sirt1表达水平上升,终缓解高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡,达到治疗糖尿病肾病的作用.
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MicroRNA-141靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47 D细胞活力的影响
目的:探讨微小RNA-141(miRNA-141)靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响.方法:乳腺癌T47D细胞分别转染miRNA-141模拟物(mimic)和阴性对照序列(NC),作为miRNA-141组和NC组,并设立未转染空白对照组,采用real-time PCR法检测细胞中miRNA-141的含量;MTT法与荧光探针2',7'-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法分别检测细胞活力和活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测胞质接头蛋白Keap1、核因子E2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化酶1(GPx1)的表达;双萤光素酶实验检测miRNA-141与Keap1的关系.结果:转染miRNA-141 mimic后,miRNA-141组的miRNA-141表达量明显增高,细胞活力、ROS水平和Keap1蛋白表达均下降,而细胞核Nrf2蛋白SOD2和GPx1表达升高(P<0.05);双萤光素酶实验结果显示Keap1为miRNA-141的靶基因.结论:miRNA-141可能通过靶向负调控Keap1激活Nrf2/ARE信号通路,诱导抗氧化酶的表达,以降低细胞氧化应激水平,从而抑制乳腺癌细胞的活力.
关键词： 微小RNA-141 Nrf2/ARE信号通路 乳腺癌 细胞活力 -
m iR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响
目的：研究微小RNA-141（ miR-141）在人肝癌细胞和正常胎肝细胞中的表达，同时分析miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响。方法：分别提取人肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702的总RNA，采用实时荧光定量PCR法检测miR-141的表达。采用脂质体介导的转染方法分别将miR-141 mimic转染SMMC-7721细胞，将miR-141 inhibitor转染HL-7702细胞；MTS试剂盒和BrdU-ELISA检测细胞增殖能力，流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡率的变化。 Transwell实验检测miR-141表达变化对细胞体外迁移能力的影响。结果：miR-141在SMMC-7721细胞中的表达较HL-7702细胞明显下降。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比，转染25 nmol／L miR-141 mimic的SMMC-7721细胞中，细胞增殖速度减慢，S期细胞比例降低，凋亡细胞比例上升，细胞体外迁移能力下降；转染50 nmol／L miR-141 inhibitor的HL-7702细胞中，细胞增殖速度加快，S期细胞比例上升，凋亡细胞比例下降，细胞体外迁移能力增强。结论：miR-141在人肝癌细胞中表达下降，上调miR-141表达可抑制肝癌细胞体外增殖活性和迁移能力，影响细胞周期和凋亡。在肝癌发病进程中，miR-141可能扮演抑癌基因的角色。
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microRN A-141在结肠癌中的表达分析研究
目的：分析microRNA141（miR‐141）在结肠癌组织中的表达及意义。方法采用荧光定量 PCR（SYBR Green）法检测48例结肠癌组织和对应癌旁正常组织中miR‐141的表达。结果 miR‐141在结肠癌组织中的相对表达量为5．19±0．52，与对应癌旁正常组织1．01±0．13比较差异有统计学意义（P＜0．05）；随着结肠癌分化程度的降低结肠癌组织中miR‐141的表达增高；miR‐141在淋巴结转移组的相对表达量为6．05±0．14，在淋巴结无转移组中为4．30±0．23，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论 miR‐141高表达可能与结肠癌的分化程度和淋巴结有无转移有关。miR‐141的出现为结肠癌的研究提供了新的切入点。
