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SX-1液对肝脏保存效果的实验研究
目的 应用改良后的Kamada二袖套法大鼠原位肝移植模型,检验SX-1液、HC-A液和UW液对肝脏保存的效果.方法 在无菌条件下配制肝脏保存液.建立大鼠原位肝移植模型.使用SX-1液、UW液和HC-A液保存大鼠肝脏2、8、24 h后行大鼠原位肝移植,于移植后6 h比较各项肝脏功能.结果 对于ALT、AST,SX-1液组(2、8、24 h)与UW液组同步升高,分析无统计学意义(P＞0.05),与HC-A液组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).对于LDH,SX-1液组(2 h、8 h、24 h)与HC-A液组同步升高,差异无统计学意义(P＞0.05),与UW液组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).对于分泌胆汁的肝脏个数,各组别与分泌胆汁的肝脏个数无差别(P＞0.05).本组内各时间点分泌胆汁个数有差别(P＜0.05).随肝脏保存时间增长,分泌胆汁的肝脏个数减少.结论 经大鼠原位肝移植模型证实,SX-1液在肝脏酶学方面与UW液作用相当,超过HC-A液水平.肝移植后6 h肝脏分泌胆汁的个数方面,SX-1液与HC-A液、UW液间无明显差别.
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锌-热休克蛋白诱导剂对鼠肝低温保存作用的实验研究
目的探讨腹腔注射ZnSO4是否可诱导热休克蛋白(heat shock protein,HSP)合成及对大鼠肝脏低温保存的作用.方法采用低温保存模型,利用免疫印记、生化分析及光镜方法,观察锌处理组(腹腔注射ZnSO4,Zn2+ 5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg /kg)、热休克组及对照组肝脏组织中HSP含量、肝功能指标及组织形态学变化.结果经锌预处理和热休克预处理24小时后,大鼠肝脏合成大量HSP70;Zn-1组(Zn2+5 mg/kg)、Zn-2组(Zn2+10 mg/kg)和H组(热休克组)保存6、12、24小时后灌出液中AST、LDH值均明显低于C组(对照组)(P<0.05),而各组之间无明显差异(P>0.05).Zn-3组(Zn2+15mg/kg)灌出液中AST、LDH值均明显高于C组(对照组)(P<0.05).肝脏组织形态学显示Zn-1组、Zn-2组和H组大鼠肝脏损害较轻,而Zn-3组肝脏损害较重.结论 Zn2+是HSP70的有效诱导剂,可保护移植物.Zn2+诱导剂量为5-10 mg/kg;15 mg/kg易致肝脏损伤,不宜作为预处理条件.
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灌注流量在低温机器灌注保存供体肝的研究
目的 通过对比大鼠肝脏在低温机器灌注保存法以及低温缺血保存再灌注保存法下的保存效果,从而证明低温机器灌注保存法的有效性的同时寻找出佳的灌注流量.方法 将大鼠供受体肝脏置于对照组和5个实验组当中分别保存6 h和24 h,实验组设定灌注流量为0.1～0.5 ml·min-1·g-1,其他实验条件保持一致,以丙氨酸转氨酶(ALT)活性,肿瘤坏死因子(TNF-α)含量和透明质酸(HA)摄取量的变化作为评定标准,并分别用光镜和电镜观察肝细胞及肝窦内皮细胞的形态学改变.结果 通过与对照组对比发现实验组1,5保存6 h和24 h后,各时间点ALT含量,TNF-α含量和HA摄取量比较差异无统计学意义(P>0.05);而实验组2、3、4保存6 h和24 h后明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).且对照组,实验组1和5保存24 h后肝细胞出现明显肿胀、空泡变性及点状坏死现象,同时肝窦内皮细胞肿胀、变性,肝窦结构破坏严重.实验组2、3、4肝细胞和肝窦内皮细胞较对照组,实验组1和5有较轻的病理改变.结论 通过与对照组进行对比说明本文方法的有效性,不同实验组间之间的对比说明佳的灌注流量范围是0.2～0.4 ml·min-1·g-1.
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他克莫司在大鼠肝脏保存中的作用
目的 了解他克莫司对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 在供肝保存期间向保存液中加入他克莫司,检测保存12 h后的肝脏能量物质负荷、肝移植术后受体大鼠血清中的肝酶浓度以及胆汁分泌情况.结果 保存液中加入他克莫司后,肝组织在保存期间的能量物质消耗明显小于对照组,移植术后受体大鼠血清中ALT和LDH含量明显较对照组为低,胆汁分泌量则明显高于对照组,差异均具有显著性(P<0.05).结论 他克莫司用于肝脏保存能够有效地减轻缺血再灌注损伤,提高肝细胞能荷,改善移植术后的肝脏功能.
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中药保存肝脏的研究近况
对于终末期肝病,肝移植是有效的治疗手段,目前全世界正以每年8000例的速度开展此项手术,而且累计例数逐年增加.但肝移植术后肝原发性无功能(primary nonfunction,PNF)等早期并发症的发生率达5%～15%[1],是肝移植术失败和死亡的重要原因.同时还有10%～25%的患者,移植后出现移植肝原发性功能紊乱,致术后恢复的延迟和困难.
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双层法氧合冷保存心跳停搏大鼠肝细胞移植研究
目的 观察双层法(TLM)氧合冷保存较UW保存能否改善心跳停搏供体(NHBD)肝细胞存活率和功能.方法 SD大鼠为供体,建立NHBD模型,NAPs大鼠为受体.根据热缺血时间(WIT)15 m/n和30 m/n分成2组;按TLM、UW分别保存3、12 h和未保存再各分5个亚组(n=5).检测NHBD肝细胞存活率和ATP水平,观察肝细胞移植(HTx)后肝细胞形态和功能.结果 TLM3、12 h组肝细胞存活率分别显著高于UW 3、12 h组[(69.7±4.1)%和(69.1±2.0)%比(55.1±2.3)%和(53.3±2.0)%;P<0.01];TLM 3、12 h组AlP水平分别显著高于UW 3、12 h组(3.25±0.79和3.06±0.67比2.25±0.53和1.63±0.40;P<0.05或P<0.01).HTx后几乎所有时间点TLM组血清白蛋白(ALB)水平都显著高于UW组(P<0.05或P<0.01).在HTx 14d后,形态学显示TLM组肝细胞保持强活力,糖原和ALB染色呈强阳性.结论 TLM氧合冷保存可显著改善和逆转NHBD肝细胞存活率和功能,减少NHBD肝细胞缺血性损伤.
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铁离子螯合剂对肝细胞冷缺血再灌注损伤的保护机制研究
目的 研究铁螯合剂去铁胺(DFO)对模拟冷缺血再灌注后肝细胞内铁离子浓度及细胞凋亡的影响.方法 培养肝细胞株HL-7702,随机分为对照组和DFO干预组.对照组未予DFO处理,DFO干预组按100、50和25μmol/L分为高、中、低3个浓度组,每组各8个样本,建立模拟冷缺血再灌注模型,分别检测各组细胞内Fe”离子浓度,MDA含量,细胞凋亡水平,以及各组上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平.结果 肝细胞经冷缺血8h,DFO干预高、中、低浓度组Fe3+浓度分别为(1.36±0.14)、(1.92±0.24)和(2.09±0.28)mmol/L,均显著低于对照组(2.58±0.27)mmol/L,(P＜0.05);DFO高、中、低浓度组肝细胞凋亡率分别为(6.37±1.28)％、(14.07±2.61)％和(16.07±1.71)％,均低于对照组(20.53±1.58)％,(均P＜0.01).DFO高、中、低浓度组肝细胞内MDA含量分别为(1.83±0.63)、(2.60±0.26)和(2.74±0.32)nmol/mL,均显著低于对照组(3.57±0.45)nmol/mL(P ＜0.01).而再灌注8h时,DFO高、中、低浓度组肝细胞内MDA含量分别为(2.48±0.36)、(3.07±0.35)和(3.56±0.25)nmol/mL,均显著低于对照组(4.16±0.24)nmol/mL(P ＜0.05);在LDH水平测定中,DFO高、中、低浓度组上清液LDH水平分别为(216.67±22.22)、(263.68±7.16)和(297.57±21.06)u/L,均低于对照组(354.51±31.02)u/L(P ＜0.05).结论 铁螯合剂去铁胺可以通过降低冷保存时Fe3+浓度,从而减少肝细胞凋亡发生以达到减轻肝细胞冷缺血损害的目的.
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机械灌注在肝移植中的应用
自20世纪60年代以来，单纯冷保存一直是临床肝脏保存的主要模式。但供肝短缺，扩大标准供肝应用增加，对供肝保存也提出了更高的要求。近年来，肝脏机械灌注相关研究日益成熟，相关设备开发也越加完善，有望成为供肝保存与修复的有效手段。目前研究较多的机械灌注主要包括低温机械灌注、低温氧合机械灌注和常温机械灌注。经动物实验证明，机械灌注可以有效地挽救部分边缘供肝，减轻缺血-再灌注损伤，促进移植肝功能恢复，且灌注液中生化指标、胆汁量等均可为供肝质量评估提供客观指标。近两三年，在欧美地区也开展了临床应用，结果令人振奋，机械灌注对“不理想”的边缘供肝的确有修复作用。目前临床应用的病例还较少，欧洲数个移植中心已经拟开展相关的多中心研究。尽管机械灌注的前景乐观，但仍存在一些问题，包括应用指征、灌注参数设置、灌注液的选择等仍未达成统一，尚需大量的临床实践进行探索，其效果也需长期观察进一步验证。机械灌注不仅是一种理想的保存和修复手段，同时为药物治疗、基因干预等手段提供了平台。理想的机械灌注可以实现“个体化”保存，大程度地保存、修复供肝。期待这一技术尽早成熟，真正服务于临床。
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两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏保护作用的比较
目的 探讨两种不同的肝脏灌注方法对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的差异,为后期离体大鼠肝脏保存实验提供简单而有效的方法.方法 制备两种不同的单纯冷保存的离体大鼠肝脏灌注模型,分为实验组(经门静脉和腹主动脉灌注法,10只);对照组(经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,10只),灌注后取出肝脏置于4 ℃威斯康星大学保存液保存,12 h后切取肝组织.行苏木素-伊红(HE)染色,观察肝组织病理损伤情况,并且用免疫组织化学染色法检测核因子(NF)-κB(SABC法)的表达情况.结果 经12 h冷保存后,两组大鼠肝脏组织病理示:肝脏小叶结构紊乱,肝细胞变性、肿胀及空泡形成,肝血窦和中央静脉有不同程度的淤血,部分肝窦内皮细胞坏死并脱落,但两组之间无明显差别.两组之间NF-κB阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经门静脉和腹主动脉灌注法与经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,对离体大鼠肝脏的保护作用无差异,但前者操作相对简单,更容易在今后研究大鼠离体肝脏的实验中应用.
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肝移植中肝脏保存损伤及保护策略研究进展
肝脏保存是肝移植中至关重要的一个环节,冷保存是当前临床肝脏移植标准的器官保存方法.移植物功能不全发生于肝移植术后的早期并且影响了每个移植肝脏,通常称为"保存损伤",但影响因素远远超出了"保存损伤"的字面含义.本文旨在用述肝脏保存损伤的机制以及减轻保存损伤的保护策略的研究进展.
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自制KYL液和UW液保存大鼠肝脏效果的比较
目的比较自制的KYL液和UW液对大鼠肝脏的保存效果.方法采用大鼠肝脏非循环离体灌注模型(noncirculated isolated perfusion of rat liver),随机以KYL液和UW液对大鼠肝脏保存0、4、8、16、24和48 h,记录胆汁流出量,测定灌注流出液天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)和氧自由基代谢产物丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,检测肝细胞内钙离子浓度,观察肝脏组织形态学变化.同时设生理盐水保存阴性对照组,了解器官保存液对大鼠肝脏有无保护作用.结果 KYL液保存的大鼠肝脏在保存16 h以内各时相胆汁流出量均较UW液保存者高(P＜0.01),灌注流出液AST、ALT和LDH含量与UW液保存者相近,肝细胞内钙离子浓度较UW液保存者低(P＜0.01);KYL组保存24及48 h时,MDA含量低于UW组,SOD含量高于UW组(P＜0.01);光、电镜观察两者形态学变化基本一致.两组所有指标均较生理盐水保存组好,提示KYL保存与UW液一样对大鼠肝脏具有保护作用.结论自制的KYL液对大鼠肝脏的保存效果总体上与UW液相当,在再灌注后肝细胞胆汁分泌方面和钙拮抗方面略优于UW液,而在防止细胞水肿方面较UW液稍差.
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生脉散对大鼠离体肝脏保护作用的实验研究
目的:研究生脉散对大鼠离体肝脏的保存效果.方法:采用大鼠肝脏非循环离体灌注模型(noncirculated isolatedperfusion of rat liver),以生理盐水、生脉散、UW液(Universiev of Wisconsin)、生脉散联合UW液对大鼠离体肝脏保存.测定其8、16、24和48h灌注流出液中天冬氨酸转氨酶(AST)、氧自由基代谢产物丙二醛(MDA)的含量,以及保存8小时组织病理切片.通过生脉散组与生理盐水组比较和生脉散联合UW液与UW液相比较,从而了解生脉散对大鼠肝脏有无保护作用.结果:生脉散纽各时相流出液内天冬氨酸转氨酶(AST)比生理盐水组明显低,有显著差异(P<0.05),MDA含量低于生理盐水组,有显著差异(P<0.05).生脉散联合UW液灌注流出液各时相AST含量与UW液保存者相近,无显著差异(P0.05),生脉散联合UW液灌注流出液MDA含量低于UW液组,有显著差异(P<0.05).光镜下现察形态学,生脉散组优于生理盐水组.生脉散加UW液组与UW液组变化基本一致.结论:生脉散液对大鼠肝脏保存效果在MDA、AST都好于生理盐水组,与UW液联合运用MDA方面优UW液,在AST方面无明显差异.
