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银杏酮酯对心肌细胞Toll样受体4/核转录因子кB及血管紧张素原、血管紧张素Ⅱ1型受体的抑制作用
目的 观察银杏酮酯50(GBE50)对脂多糖激活的心肌细胞Toll样受体4(TLR4)/核转录因子кB(NF-кB)信号及血管紧张素原(ATG)、血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)表达的影响,探讨GBE50防治左室重构的作用机制.方法 体外培养新生大鼠心肌细胞(NRVM),分4组:1)对照组:DMEM培养基中不加任何干预因素;2)脂多糖组:DMEM培养基中加入脂多糖1 mg/L;3)脂多糖+GBE50组:预先加入GBE50 80 mg/L,1 h后加入脂多糖1 mg/L;4)脂多糖+咖啡酸苯乙酯组:预先加入咖啡酸苯乙酯20 mg/L 30 min后加入脂多糖1 mg/L.干预24 h后免疫细胞化学方法 观察NF-кB p65核易位情况;RT-PCR检测TLR4、ATG及AT1R、心肌肌球蛋白重链β-MHC mRNA的表达情况,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量.结果 LPS刺激下NRVM TLR4 mRNA明显升高(P<0.01),NF-кB p65核易位增多(P<0.01),ATG和AT1R、心肌肌球蛋白重链β-MHC mRNA表达以及细胞蛋白含量明显增高(P<0.01).GBE50与咖啡酸苯乙酯能明显抑制NF-кB p65核易位,同时抑制LPS诱导的TLR4、ATG和AT1Rβ-MHCmRNA表达上调以及细胞蛋白含量的增加(P<0.05).结论 GBE50可能通过抑制NF-кB活化,进而减弱TLR4/NF-KB信号从而抑制心肌RAS的激活,干预TLR4/NF-кB信号通路可能是银杏叶提取物防治心肌肥大的机制之一.
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羟乙基淀粉对内毒素感染大鼠血浆细胞因子表达和单个核细胞NF-кB活性的影响
目的研究羟乙基淀粉溶液(HES 200/0.5)对内毒素腹腔感染大鼠炎症反应的影响,并探讨分子机制.方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素组(LPS 6 mg/kg)、LPS+HES组(HES 3.75、7.5、15、30 mL/kg)及HES对照组(30 mL/kg).分别于LPS注入后4 h检测血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)和细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子(CINC)浓度,2 h检测循环血单个核细胞核转录因子kappaB(NF-кB)水平.结果大鼠内毒素感染时血浆TNF-α和CINC浓度及单个核细胞NF-кB活性明显上升(P＜0.05).3.75和7.5 mL/kg HES能明显降低TNF-α和NF-кB水平(P＜0.05);3.75、7.5和15 mL/kg HES能明显降低CINC水平(P＜0.05).结论较低剂量HES具有抑制内毒素腹腔感染大鼠炎症反应的作用,这种作用的产生与其对NF-кB的抑制有关.HES对感染状态有保护作用.
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咪唑克生对脂多糖诱导的皮质星形胶质细胞相关炎症细胞因子的影响
目的:了解咪唑克生(Ida)对炎症状态下的星形胶质细胞相关的炎症细胞因子的调节作用.方法:将纯度＞95%星形胶质细胞随机分为空白对照组、脂多糖刺激组和Lda炎症干预组,每组7瓶细胞.Ida 100 μmol·L-1,脂多糖10 μg·mL-1.Ida预处理6 h、药物共处理12 h、脂多糖处理12和24 h时留上清液检测细胞因子,细胞提取RNA检测胶质酸性纤维蛋白和核转录因子KB(NF-кB)水平.结果:Ida能抑制促炎细胞因子(P＜0.01)和NF-кB的表达(P＜0.05).结论:Ida具有抗炎作用.
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小檗碱对老龄大鼠葡聚糖硫酸钠所致结肠炎黏膜组织结构及相关炎症因子表达的影响
目的 探讨小檗碱(Ber)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎老年大鼠的疗效及其可能的机制. 方法 以DSS饮水法复制18月大鼠实验性结肠炎30只, 随机平均分为3组:正常对照组、结肠炎模型(DSS)组和Ber治疗(DSS+Ber)组.观察Ber对疾病活动指数(DAI)和结肠黏膜结构及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核转录因子кB (NF-кB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响. 结果 给予DSS后老龄大鼠出现典型的结肠炎的变化.Ber治疗可显著降低结肠炎老龄大鼠的DAI评分[(1.862±0.623)分比(2.317±0.729)分,P ＜0.05]和组织学病理评分[(1.347±0.548)分比(1.945±0.853)分,P＜0.05].Ber治疗显著降低肠组织TNF-α[(832.5±178.8 ) pg/g比(1438.2±312.5) pg/g,P＜0.05],并降低黏膜组织NF-κB[(0.154±0.623)比(0.213±0.058),P＜0.05], ICAM-1[(0.124±0.076)比(0.156±0.101),P＜0.05]和iNOS(0.098±0.048比0.125±0.053,P＜0.05). 结论 Ber可治疗老龄大鼠的DSS结肠炎, 其降低肠组织TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达可能是其疗效机制之一.
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疏肝祛瘀通络降浊法对大鼠非酒精性脂肪性肝炎作用的研究
[目的]观察疏肝祛瘀通络降浊法对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织髓样分化蛋白-2(MD-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响,以探讨二者在NASH发病中的作用.[方法]雄性SD大鼠分为模型组,疏肝祛瘀通络降浊法低剂量(低剂量)组、中剂量组、高剂量组,阳性对照组,预防组和正常组,除正常组外,其余各组大鼠以高脂饮食喂养4周后用不同剂量的中药和阳性对照药灌胃治疗,12周后全部处死.同期设正常饮食组作为对照.免疫组织化学方法观察肝组织核转录因子-кB(NF-кB)表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察肝组织MD-2和iNOSmRNA的表达.[结果]12周时,中剂量组大鼠肝组织NF-кB表达较模型组下调;肝组织MD-2mRNA(0.132±0.058)和iNOS mRNA(0.164±0.061)表达较模型组(0.795±0.294和1.029±0.388)减弱(均P<0.01).[结论]大鼠NASH形成后,肝组织MD-2和iNOS mRNA的表达上调,可能与二者参与了NASH大鼠内毒素性肝损伤有关.疏肝祛瘀通络降浊法可以通过减轻内毒素性肝损伤下调NASH大鼠肝组织MD-2和iNOSmRNA的表达.
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大鼠舌癌变过程中NF-κB和cyclinD1蛋白的表达
目的:探讨大鼠口腔癌变过程中核转录因子κBp65(NF-κBp65)、cyclinD1蛋白的表达及其生物学意义.方法:0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水喂养Wistar大鼠9～32周建立大鼠舌癌变模型,用免疫组化SP法检测38例大鼠舌癌变过程不同病理阶段组织中NF-κBP65、cyclinD1蛋白的表达.结果:正常黏膜、轻度异常增生、中度异常增生、重度异常增生、原位癌、鳞癌组织中,NF-κB的阳性率分别是20%、20%、50%、62.5%、50%和83.33%,(鳞癌与正常黏膜组织中NF-κBP65的表达有显著性差异(P＜0.05);cyclinD1阳性率分别是20%、60%、62.5%、87.5%、100%和83.33%,重度异常增生、原位癌、鳞癌组织中cyclinD1表达显著高于正常黏膜(P＜0.05或P＜0.01).两者的表达均与组织的病理学分级相关(P＜0.01),两者的表达在鳞癌阶段具有相关性(P＜0.05).结论:NF-κBp65、cyclinD1蛋白表达与口腔癌发生发展相关,NF-κB通路在口腔黏膜癌变过程起重要作用,NF-κB、cyclinD1可能成为口腔癌变病变生物标志物之一.
关键词： 口腔癌变 核转录因子кB 细胞周期蛋白D1 4-硝基喹啉-1-氧化物 -
核转录因子κB在TNF-α诱导人气道上皮细胞hBD-2表达中的作用
目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及核转录因子κB(NF-κB)在hBD-2表达中的作用.方法用TNF-α和或NF-κB抑制剂PDTC处理体外培养人气道原代上皮细胞,RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot检测细胞质IκB-α蛋白活性变化,凝胶迁移试验(EMSA)检测不同时相NF-κB活性的变化.结果TNF-α刺激0.5 h后可见人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,并呈时间依赖性;PDTC可抑制hBD-2mRNA表达;NF-κB在TNF-α刺激1 h后明显活化,抗体超迁移率实验结果显示p65-p50异型二聚体NF-κB参与了NF-κB的活化.结论一定剂量的TNF-α可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,NF-κB在TNF-α诱导气道上皮细胞hBD-2mRNA起重要的调控作用.
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心脏不停跳手术中心肌NF-кB转录活性、ICAM-1的表达及其临床意义
目的 探讨心脏不停跳与心脏停搏手术对心肌核转录因子κB(NF-кB)转录活性、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达水平的影响及其临床意义.方法 将40例先天性心脏病患者随机分为两组,每组20例.组Ⅰ:行心脏不停跳心内直视手术;组Ⅱ:行常规体外循环手术(灌注冷晶体心脏停搏液).两组患者均于心内操作前、后取右心房壁心肌组织检测NF-кB转录活性、ICAM-1表达水平,用透射电子显微镜观察心肌超微结构;分别于术前、主动脉开放或心内操作完成后1、24、48和72h测定两组心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB),并对其结果进行比较.结果 术后组ⅠNF-кB转录活性、ICAM-1表达水平较术前无显著变化,组ⅡNF-кB转录活性较术前升高(P＜0.01);术后NF-кB转录活性组Ⅱ显著高于组Ⅰ(P＜0.01).术后两组血清cTnI、CK-MB水平较术前均有不同程度升高(P＜0.01),主动脉开放后/心内操作完成后各时点,组Ⅱ均显著高于组Ⅰ(P＜0.01).透射电子显微镜观察,组Ⅰ术后心肌超微结构无明显变化,组Ⅱ心肌损伤变化显著.结论 心脏不停跳下心内直视手术术后短期内心肌NF-кB转录活性、ICAM-1表达水平无明显变化,减轻了心肌缺血-再灌注损伤及由NF-кB激活而引起的心肌炎性反应,有较好的心肌保护效果.
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HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究
目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)的调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939HCV C+),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及P50、P65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果① EMSA结果显示QBC939HCV C+细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C+细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκB mRNA在QBC939HCV C+细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939HCV C+细胞株的胞核中的P50、P65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的P50、P65蛋白.在QBC939HCV C+细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论 HCV C蛋白通过增加IкB降解激活的NF-кB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.
关键词： 丙型肝炎病毒核心蛋白 肝门部胆管癌细胞 核转录因子кB -
乙酰肝素酶和核转录因子кB在涎腺肿瘤中的表达及其临床意义
目的:检测涎腺肿瘤中乙酰肝素酶(HPA)和核转录因子кB(NF- κB)的表达,探讨两者之间的关系及其临床意义.方法:采用免疫组化SP法检测42例涎腺良性肿瘤、44 例涎腺恶性肿瘤中HPA和NF- κB表达.结果:HPA和NF- κB在涎腺恶性肿瘤组中阳性表达率分别为61.4 %和65.9%,显著高于涎腺良性肿瘤组(P<0.05).HPA和NF- κB在涎腺恶性肿瘤中的表达与肿瘤的局部侵袭性、有无区域淋巴结或远处转移相关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤发生部位、临床分期无关(P>0.05).HPA 的表达与NF- κB 的表达呈正相关(r=0.7602, P<0.05).结论: NF- κB在体内可能参与了HPA的表达调控,并与HPA协同作用促进涎腺恶性肿瘤的侵袭和转移.
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山莨菪碱对海水淹溺兔外周血单核细胞NF-кB表达的干预作用
目的:探讨山莨菪碱对海水淹溺后兔外周血中单核细胞核转录因子кB(NF-кB)的表达以及海水淹溺性肺水肿(PE-SVCD)治疗作用.方法:家兔气管切开后模拟海水淹溺造成急性肺损伤,于淹溺前(T1),淹溺后15、30、60、120、240、480min(T2～17)7个时间点采集外周血进行血气分析,并测定外周血炎症介质含量和单核细胞中NF-кB的淹溺前后表达变化,并采集肺组织.结果:海水淹溺致兔急性肺损伤各时间点肺组织中性粒细胞大量浸润,淹溺后外周血单核细胞NF-кB的表达开始增高,90 min后达到高峰,而山莨菪碱可降低NF-кB以及炎症因子表达(P<0.01).结论:海水淹溺急性肺损伤可能与NF-кB高表达有关.山莨菪碱可降低NF-кB表达,减轻肺损伤程度.
