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基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱法检测高危型人乳头瘤病毒基因型及临床应用
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应用蛋白质组学技术筛选胰腺癌生物标志物的研究进展
胰腺癌是一种十分凶险的恶性肿瘤.胰腺癌早期症状不明显,临床确诊的患者多已处于中晚期,大多失去手术治疗机会.蛋白质组技术的快速发展为研究胰腺癌发病机制、发现早期诊断和预后的生物标志物提供了可能.本文就蛋白质组学技术在胰腺癌细胞系、组织、血清和胰液等方面的应用作一综述.
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晚期胃癌危重患者预警蛋白质指纹不同表达时伴随指纹的分析
目的 分析晚期胃癌危重患者预警蛋白质(LGT)指纹不同表达及演变状态下,其伴随指纹的分布特点,构建其指纹库.方法 采用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术、CMl0蛋白质芯片技术对入院接受手术的81例晚期胃癌患者,术前及术后1年各检测1次LCT指纹表达,根据两次检测情况分组,A组:IGT指纹由阴性向阳性演变组(25例);B组:LGT指纹由阳性向阴性演变组(15例);C组:LGT指纹持续阴性组(29例);D组:LGT指纹持续阳性组(12例).另选择12例肿瘤患者血清样本,间隔1周各检测1次,再选择5例肿瘤患者取前后2 d血清各榆测1次,以此作为影响凶素对照组.采用Biomarker Wizard 3.1软件比较LGT不同表达及演变状态下差异蛋白质组指纹的差异.结果 去除对照组中影响指纹后,A组:质荷比(M/Z)11473、11821、11664、11409、11552和11947上调.无下调的指纹.B组:M/Z878、861、874、917和3264 上调,M/Z6523、11509、11669、11413、11351和6483下调.C组和D组无有统计学意义的差异蛋白质指纹.结论 SELDI-TOF-MS技术榆测晚期胃癌患者血清捕获的M/Z 11473、11821、11664、11409、11552和11947蛋白质指纹上调,可视为晚期胃癌患者LGT指纹由阴性向阳性演变时LGT蛋白质指纹亚型;M/Z 11509、11669、11413、11351蛋白质指纹下调可视为胃癌患者LGT指纹由阳性向阴性演变时LGT蛋白质指纹亚型;M/Z 878、861、874、917和3264蛋白质指纹上调,M/Z 6523和6483蛋白质指纹下调,可视为胃癌患者LGT指纹由阳性向阴性演变时伴随的相关蛋白质组指纹;而当晚期胃癌患者LGT指纹持续阴性或者持续阳性时无相关的差异蛋白质指纹.
关键词： 胃肿瘤 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 蛋白质指纹 -
蛋白质芯片技术应用于肝癌诊断的初步研究
目的 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱( SELDI-TOF-MS)技术和蛋白质芯片从肝癌患者血清中筛选可用于肝癌诊断的标志蛋白质.方法 运用SELDI-TOF-MS技术及CM10蛋白质芯片检测46例原发性肝癌患者和64名健康人血清,获得蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件选出肝癌患者与健康人血清中的表达差异蛋白质,评价其灵敏度、特异度和诊断效能,确定佳标志蛋白质.结果 肝癌组与健康对照组血清中有16个蛋白质的表达差异在2倍以上,并且差异有统计学意义(P＜0.05).其中质荷比为6845.70的蛋白诊断效能高,其灵敏度为89.1％(41/46),特异度87.5％(56/64),且该蛋白质与肿瘤大小有相关性(r=-0.363,P＜0.05).经数据库搜索该蛋白质很可能是免疫球蛋白重链可变区片段.结论 应用SELDI-TOF-MS技术诊断肝癌,具有灵敏度高,特异性好,快速简便的优点,质荷比为6845.70的蛋白质可能是肝癌患者血清中的特异性标志物.
关键词： 肝肿瘤 诊断 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 -
表面增强激光解析电离技术筛选吉非替尼治疗非小细胞肺癌优势患者的验证报告
目的 进行吉非替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)优势患者血清蛋白质指纹验证.方法 选取服用吉非替尼治疗1个月以上并已知疗效的NSCLC患者27例,按实体瘤疗效评价标准分为完全缓解+部分缓解(CR+PR)、稳定(SD)、进展(PD)三种疗效患者.所有患者在服用吉非替尼前均行表面增强激光解析电离(SELDI)检查,以M/Z:8693±50H+为筛选依据,根据其丰度分成优势患者组(丰度≤10%)10例,劣势患者组(丰度≥30%)7例,疑似组A(丰度:11%～15%)5例,疑似组B(丰度:16%～29%)5例.分析四组中,每组CR+PR、sD及PD患者的比例.结果 优势患者组中,CR+PR患者占9/10,SD患者占1/10,PD患者为0;劣势患者组中.CR+PR患者占1/7,SD患者占1/7,PD患者占5/7;疑似组A中,CR+PR患者占3/5,sD、PD患者各占1/5;疑似组B中,CR+PR患者占3/5,SD、PD患者各占1/5.结论 经SELDI检测,蛋白质指纹图谱符合M/Z:8693±50H+丰度≤10%可以作为吉非替尼治疗NSCLC优势患者的筛选指标.
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蛋白质飞行质谱技术在原发性肝癌诊断中的应用
目的 研究原发性肝癌患者与健康人血清蛋白质表达的差异性,寻找对原发性肝癌更有效的肿瘤诊断标志物.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术榆测50例原发性肝癌患者、50名健康对照者血清中的蛋白质谱,寻找有意义的蛋白质谱.同时采用双抗体夹心法检测血清甲胎蛋白(AFP).结果 原发性肝癌患者血清4个蛋白质峰与健康对照组比较差异有统计学意义.分别为:3354.71,8825.80(高表达),4345.08,13 715.01(低表达).从中筛选出质荷比(M/Z)分别为3354.71、8825.80差别显著的蛋白质峰,使用这两个蛋白质峰作为原发性肝癌的诊断模式,其灵敏度、特异度分别为90%(45/50),94%(47/50).100例患者中,AFP阳性27例,灵敏度为54%(27/50),特异度为100%(30/30).结论 SELDI-TOF-MS蛋门质芯片技术在原发性肝癌的诊断及肿瘤特异性蛋白质生物标志的筛选中具有一定的价值,灵敏度和特异度较高,操作简单,正确诊断指数(r=83)优于AFP(r=53).
关键词： 肝肿瘤 蛋白质组学 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 -
脑创伤早期血清差异蛋白筛选与诊断
目的 应用表面加强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorptionionization time-of-fight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术筛选重型颅脑创伤(severe traumatic brain injury,sTBI)患者早期血清差异表达蛋白,初步建立sTBI患者早期血清蛋白诊断指纹图谱.方法 获取临床收住院早期未接受药物干预治疗的重型颅脑创伤患者(GCS 3～8分)与健康体检者血清样本,根据从创伤到入住院时间间隔将病人血清分为≤1h、1-3 h和＞3-8 h组,分别混合各组血清样本取消个体差异,利用弱阳离子芯片CM10经质谱分析血清中差异表达蛋白,根据检测结果初步分析建立sTBI病人早期血清蛋白诊断指纹图谱.结果 样品血清中共获得71个有效蛋白质峰,有7个峰与对照组比较有差异,其中m/z 4210、m/z 7116和m/z 7320在3组病人中均显著升高(P＜0.05);m/z 4977和m/z 8719在3组中均显著降低(P＜0.05);m/z 4679的升高出现在1-3 h和＞3-8 h组;m/z 9431的升高只出现＞3-8h 组.结论 应用SELDI-TOF-MS技术可寻找到多种血清差异蛋白表达,这些蛋白可能参与sTBI患者早期分子病理事件,它们的发现将会为临床药物筛选和(或)新药物开发提供重要参考.
关键词： 颅脑损伤 蛋白质组 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 -
高发区食管癌及癌前病变的血清蛋白质谱分析
目的 检测高发区食管癌及癌前病变患者血清蛋白质谱,建立蛋白指纹图谱模型并探究其筛查价值.方法 收集38名健康对照者、63例食管鳞状上皮不典型增生患者(I级26例,Ⅱ级26例,Ⅲ级11例)和36例进展期食管癌患者的内镜活检和血清标本,用CM10蛋白芯片及表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测标本的蛋白表达谱.支持向量机算法分别建立食管癌及癌前病变诊断模型,并经留一法交叉验证.结果 ①区分进展期食管癌和健康对照的诊断模型特异性为89.47%,敏感性为83.33%.②区分进展期食管癌和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级不典型增生的诊断模型的特异性分别为92.31%、80.77%、90.91%,敏感性分别为80.56%、83.33%、94.44%.③在上述诊断模型中,质荷比(m/z)峰值在相对分子质量4291、5644、5664、8775处重复出现.结论 SELDI-TOF-MS技术和支持向量机算法的应用,为高发区高危人群中食管癌及癌前病变的早期筛查和诊断提供了一条新途径.4291、5644、5664、8775 4个质荷比峰对食管各级病变有相似的分类作用,可能是与食管癌变过程中相关的生物学标志物.
关键词： 食管肿瘤 蛋白质组学 质谱 基质辅助激光解析电离 -
人胰腺癌胰液蛋白质谱差异表达初步分析
目的 应用蛋白质组学方法 分析胰腺癌胰液与慢性胰腺炎、胆总管结石患者胰液问差异蛋白质的表达,初步探索胰液中可能的胰腺癌标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据.方法 内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)放置鼻胰引流管收集患者胰液,双向凝胶电泳(2-DE)分离5例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和3例胆总管结石患者等量混合胰液的蛋白质,运用图像分析软件进行比较和分析,识别差异表达蛋白质.应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定部分差异蛋白质点.结果 收集到胰液总量35～200 ml,Bradford法测定蛋白质浓度为0.8～4.6 μg/μl.胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者等量混合胰液凝胶的蛋白质点数分别为196±12、209±15和199±10,三组间两两对比后的平均匹配率均在75%以上.部分差异蛋白质点经MALDI-TOF-MS鉴定显示:相比胆总管结石和慢性胰腺炎,转甲状腺素蛋白(TTR)二聚体支链A在胰腺癌患者胰液中表达增高;载脂蛋白A1(ApoA-1)支链A、胰石蛋白支链、Reg1β再生蛋白前体表达降低.结论 人胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者胰液的蛋白质谱存在一定的差异,TTR、ApoA-1、胰石蛋白和Reglβ再生蛋白可能成为胰腺癌胰液中的肿瘤标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据.
关键词： 胰腺肿瘤 胰液 蛋白质组学 质谱 基质辅助激光解析电离 -
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪在侵袭性真菌感染病原真菌鉴定中的应用
目的：评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF MS）对侵袭性真菌感染病原真菌鉴定的应用价值。方法：选取2013年1月至2014年3月南方医科大学珠江医院住院部35例静脉血或脑脊液培养真菌阳性标本，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术进行鉴定，同时进行Vitek2全自动微生物鉴定系统鉴定，将两种方法的鉴定结果进行比对，两者鉴定结果不符合的采用核糖体RNA内转录间隔区2（ITS 2）序列分析后确证结果，从而评价质谱法的准确性、实用性。结果：MALDI-TOF MS正确鉴定出其中的30例（85．7％），错误5例（14．3％）；Vitek2全自动微生物鉴定系统正确鉴定出35例（100．0％）。结论：MALDI-TOF MS相对于传统的生化鉴定具有操作简便、快速、成本低、重复性好的优点，但本次研究的准确率不如传统生化鉴定，也比之前国内外报道的准确率低，可能跟标本的前处理难以统一规范以及蛋白提取程序不一致有关。相信随着MALDI-TOF MS技术的统一规范和图谱数据库不断的完善，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪将成为日常临床微生物鉴定的理想工具。
关键词： 基质辅助激光解析电离 质谱 真菌 快速鉴定 -
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法与PCR产物测序法检测乙型肝炎病毒耐药变异的比较
目的 比较基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)和PCR产物直接测序法检测HBV耐药基因位点的敏感性.方法共收集100例慢性乙型肝炎(CHB)患者血清,其中90例服用拉米夫定(LAM)等核苷(酸)类似物治疗1年以上、HBV DNA>500拷贝/ml,10例肝功能正常、HBV DNA>1×105拷贝/ml,未进行抗病毒治疗.对所有血清均采用MALDI-TOF MS法及PCR产物直接测序法(简称直接测序法)检测HBV P基因已知9个变异位点的变异情况,通过软件分析得出变异位点序列.根据样本量用相应的Pearson x2检验与Yates x2检验.结果 在服用LAM等核苷(酸)类似物的90份患者血清中,MALDI-TOF MS法测得53份阳性,检出率58.89%,共发现86个变异位点;PCR直接测序法仅检测到19份阳性,检出率21.11%,仅发现28个变异位点,两者间检出率差异有统计学意义(P<0.05).10例从未接受过口服抗病毒药物治疗的患者血清用两种检测方法均没有检测出变异位点.检测90例接受核苷(酸)类似物治疗的患者血清,HBV DNA水平在500～1000拷贝/ml、102～104拷贝/ml、104～105拷贝/ml时,质谱法阳性检出率分别为50.00%、52.08%和77.27%,而PCR直接测序法分别为0、8.33%和45.45%.在相同中、低滴度HBV DNA载量下,质谱法阳性检出率均高于测序法,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 MALDI-TOF MS法检测已知耐药位点的敏感性高于PCR直接测序法.
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肝癌及癌旁肝组织的高尔基体差异蛋白质分析
目的 筛选并鉴定肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组中差异表达的蛋白质,从高尔基体层面解释肝癌的发生和发展机制,为早期诊断和抗癌药物的研发提供线索.方法 应用亚细胞比较蛋白质组学研究方法,比较分析肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组.收集肝癌患者手术切除的癌组织和癌旁肝组织标本,蔗糖密度梯度离心法分离高尔基体.建立并优化两种组织高尔基体的双向电泳方法,用PD-Quest软件分析差异表达的蛋白质点,然后用质谱仪获取相应蛋白点的肽质指纹图谱,联网到Swiss-Prot蛋白质组数据库鉴定获得的差异蛋白质点,后用Western blot验证双向电泳结果.蛋白质相对表达量的比较采用配对t检验.结果 获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱.与癌旁肝组织相比,肝癌高尔基体蛋白质组有包括膜联蛋白5在内的27个蛋白质位点表达上调,包括染色体修饰蛋白2b在内的20个蛋白质位点表达下调,初步鉴定出了其中17个蛋白质,并用Western blot从蛋白质水平上验证了双向凝胶电泳结果.结论 肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组具有不同的蛋白质位点,这些差异表达的蛋白质涉及到细胞的能量代谢、肿瘤的侵袭和转移,细胞周期调控等方面,为进一步阐释高尔基体在肿瘤的发生和发展中所起的作用提供了有价值的信息.
