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JAK2/STAT3信号转导通路参与调节IL-6介导的肺腺癌细胞株中MMP-10的表达
目的 研究Janus激酶2(JAK2)及信号转导和转录激活子3(STAT3)途径对IL-6介导的肺腺癌细胞(A549)中基质金属蛋白酶10(MMP-10)表达调节的作用,探讨MMP-10的调节机制.方法 待生长状况良好的A549细胞融合生长至50%～70%时,分别用0,12.5,25,50 ng/ml IL-6及AG490(JAK2特异性抑制剂)+25 ng/ml IL-6处理A549细胞24 h后,采用实时RT-PCR技术检测JAK2、STAT3和MMP-10 mRNA的表达水平;应用Western blot检测MMP-10蛋白的表达水平.结果 25 ng/ml IL-6组STAT3 mRNA表达水平较0 ng/ml组高43.87%(P<0.05),AG490+25 ng/ml IL-6组较25 ng/ml IL-6组低36.73%(P<0.01);AG490+25 ng/ml IL-6组MMP-10 mRNA表达水平较 25 ng/ml IL-6组高43.21%(P<0.01);12.5,25,50 ng/ml IL-6组的MMP-10蛋白水平显著高于0 ng/ml 组(P<0.05),且峰值出现在25 ng/ml组;与25 ng/ml IL-6组相比,MMP-10蛋白水平在AG490+25 ng/ml IL-6组明显降低(P<0.05).结论 JAK2/STAT3信号转导途径可能参与调节IL-6介导的肺癌细胞株A549中MMP-10的表达.
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JAK2/STAT3通路在大鼠创伤性脑损伤中作用的研究
目的 研究JAK2/SAT3在大鼠创伤性脑损伤过程中的作用.方法 健康雄性SD大鼠72只,采用随机数字表法分为对照组、创伤组、AG490组;各组依次分为6h、12h、24h、72h四个亚组;创伤组于规定时间点采用液压冲击法致伤动物,对照组不予致伤;运用Western blot、免疫组化分析各组脑组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达情况;运用Real-time PCR分析各组脑组织TNF-αmRNA、IL-6 mRNA表达情况.结果 大鼠创伤性脑损伤后p-JAK2、p-STAT3蛋白在6h开始升高,72 h时仍处于较高水平,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),给予AG490干预后,其表达显著降低,差异具有统计学意义;脑损伤后6h可见TNF-α mRNA、IL-6 mRNA少量表达,12h其表达水平开始增强,72 h仍有少量表达;给予JAK2选择性拮抗剂AG490干预后其表达显著降低,两组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 JAK2/STAT3信号通路可能参与了创伤性脑损伤的发展过程,阻断该通路可减轻创伤性脑损伤炎症细胞因子的表达.
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荧光PCR结合熔解曲线法检测JAK2 V617F突变方法的建立及其方法学验证
目的 参考美国病理学家协会(CAP)相关要求,验证本实验室自建的JAK2 V617F突变检测项目的各项性能参数.方法 方法学建立.收集2010年4月至12月复旦大学附属华山医院已确诊的57例BCR/ABL融合基因阴性骨髓增殖性肿瘤患者的外周血和骨髓液标本.采用荧光PCR结合熔解曲线法建立JAK2 V617F突变方法检测标本.在准确度、重复性、分析灵敏度、干扰物质的影响等各方面对检测方法的性能进行评估.准确性使用Kappa检验评估,重复性使用符合率,分析灵敏度使用配对t检验进行统计分析.结果 荧光PCR结合熔解曲线方法(试验方法)与参考方法(测序法)相比有非常好的一致性(Kappa=0.89)；重复性符合率为100％；血脂(＜24 mmol/L)和黄疸(＜450 μmol/L)对本试验无明显干扰；低检测突变率为5％.结论 基于荧光PCR结合熔解温度反应方法检测JAK2 V617F突变可应用于临床检测.
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采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法单管同时检测JAK2V617F突变和JAK2外显子12突变
目的 建立能单管同时检测JAK2 V617F突变和外显子12突变的方法.方法 以PC-3细胞株DNA为野生型对照,分别以HEL细胞株DNA和含有JAK2外显子12突变的质粒作为JAK2V617F突变和外显子12突变的阳性对照,采用多重PCR扩增不同DNA片段,并结合高分辨熔解曲线法建立检测JAK2V617F和外显子12突变的联合检测体系.同时选取42例真性红细胞增多症患者,分别采用上述方法和常规方法在外周血中检测JAK2的2种突变.结果 采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法成功建立了JAK2突变联合检测体系,能够同时检测JAK2V617F突变和外显子12突变,2种突变的检测灵敏度皆可达5％,2种扩增片段的溶解温度(Tm)的批间及批内变异系数都小于0.01％.42例真性红细胞增多症患者中,发现37例携有JAK2V617F突变,在5例JAK2V617F突变阴性真性红细胞增多症病例中检出2例JAK2外显子12突变.与常规方法相比,结果符合率达到100％.2例JAK2外显子12突变经克隆测序确认突变类型为H538K539delinsL和F537-I546dul10+F547L.结论 该方法可同时在外周血中检测出JAK2的2种突变,将有助于对骨髓增殖性肿瘤尤其是真性红细胞增多症的分子诊断.
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采用荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变
目的 建立荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法,评估JAK2 V617F突变在诊断骨髓增殖性疾病和白血病中的临床意义.方法 选取71例慢性粒细胞性白血病(CML)、22例原发性血小板增多症(ET)、11例原发性骨髓纤维化(PMF)、9例真性红细胞增多症(PV)、7例嗜酸粒细胞增多症患者,分别采用荧光定量PCR、突变特异性扩增系统(ARMS)对JAK2 V617F突变进行检测,并采用基因测序对结果进行验证.将具有JAK2 V617F纯合子突变的人类红白血病细胞株(HEL)DNA作为阳性对照,比较荧光定量PCR和ARMS对JAK2基因V617F突变的检测敏感度.结果 采用荧光定量PCR检测,野生型的熔解温度(Tm)峰出现于(75.0±0.2)℃处,突变型的Tm峰出现于(76.6±0.2)℃处.JAK2基因V617F突变在PV、ET、PMF等骨髓增殖性疾病中的检出率分别为8例(88.9%)、12例(54.5%)、7例(63.6%),但在71例CML中只检出1例(1.4%).荧光定量PCR与ARMS的结果符合率为100%,结果经过测序证实.使用荧光定量PER法可在每106个正常自细胞中检出低至102个HEL细胞,而使用ARMS方法时要在每106个正常白细胞中HEL细胞达到104个时,方可检测出,前者比后者方法灵敏100倍.结论 成功地建立了荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法,比ARMS更灵敏、简便,适合临床使用.JAK2基因V617F突变在骨髓增殖性疾病中有较高的检出率,可作为骨髓增殖性疾病特异性诊断指标.
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多重位点特异性PCR检测骨髓增殖性疾病五种JAK2基因突变
目的 建立一种同时检测多种JAK2基因突变的多重位点特异性PCR方法,并探讨其对骨髓增殖性疾病(MPD)的临床应用价值.方法 建立同时枪测JAK2 V617F突变和JAK2 exon12中K539L(包括2种基因突变)、N542-E543del和E543-D544del突变的多重位点特异性PCR方法.对115例MPD患者进行检测,包括61例真性红细胞增多症(PV)患者、43例原发性血小板增多症(ET)患者和11例原发性骨髓纤维化(MF)患者.结果 建立的PCR方法可以同时检测上述5种JAK2基因突变,可以检测出1%的JAK2 V617F突变型等位基因,对其他几种突变可检测出0.1%的突变型等位基因.在61例PV患者中,检测出JAK2 V617F突变56例、JAK2 exon12突变3例;在43例ET患者中,检测出JAK2 V617F突变27例,未检测到JAK2 exon12突变;在11例MF患者中,检测到JAK2 V617F突变6例,未检测到JAK2 V617F突变.3例JAK2 exon12突变的患者临床表现为血红蛋白增多,内源性红系集落生成阳性,但白细胞和血小板增多不明显,不伴脾肿大.结论 多重位点特异性PCR方法检测灵敏度高,可联合检测5种JAK2基因突变,能有效提高突变检出率.
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姜黄素对大鼠脑缺血后Janus蛋白酪氨酸激酶2信号转导和转录激活子3信号通路的影响
目的 探讨姜黄素对大鼠脑缺血损伤后Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路的影响.方法 将68只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、姜黄素组(尾静脉注射姜黄素40 mg/kg)和对照组(注射等量生理盐水),每组17只,后3组建立大鼠局灶性脑缺血模型,观察各组大鼠神经行为学变化,ELISA检测大鼠脑组织TNF α、白细胞介素(IL)-1β、IL6表达,Western blot检测大鼠脑组织JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达.结果 与脑缺血组比较,姜黄素组大鼠神经行为学评分减低[(1.53±0.62)分vs (2.94±0.87)分,P＜0.05];与脑缺血组比较,对照组TNF-α、IL-1β和IL-6无明显变化(P＞0.05),姜黄素组大鼠TNF-α[(57.63±10.27)ng/L vs (99.35±8.97) ng/L]、IL-1β[(33.67±9.10)ng/L vs (58.43±7.22)ng/L]和IL-6[(31.97±6.91)ng/L vs(49.23±6.28)ng/L]表达降低(P＜0.01),p-JAK2/JAK2、p STAT3/STAT3相对含量及HMGB1表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 姜黄素可保护大鼠缺血后脑损伤,其机制可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路,减少HMGB1表达,减轻炎性反应.
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JAK2／STAT3通路介导热休克蛋白70对脑出血的神经保护作用
目的：观察蛋白酪氨酸激酶2／信号转导和转录激活因子3（janus kinase 2‐signal transducer and ac‐tivator of transcription 3，JAK2／STAT3）信号通路特异性拮抗剂α‐氰基‐（3，4‐羟基）N‐苄苯乙烯胺〔alpha cyano‐（3‐hydroxy） N‐styrene benzyl amine ，AG‐490〕对脑出血大鼠脑组织热休克蛋白70（heat shock protein 70， HSP70）、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2（phosphorylated janus kinase 2，P‐JAK2）、磷酸化信号转导和转录激活因子3（phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3，P‐STAT3）表达的影响，并分析 HSP70与 P‐JAK2、P‐STAT3的相关性，探讨JAK2／STAT3信号通路是否介导 HSP70对大鼠脑出血后的神经保护作用。方法将健康雄性Sprague‐Dawley（SD）大鼠100只随机分为正常组、假手术组、脑出血和AG‐490组；采用大鼠自体血注入法建立脑出血模型；各组按造模成功后时间分为6h、24h、48h、72h、7d共5个亚组，对各组大鼠进行神经功能缺损评分（neurological severity scores ，NSS ）；免疫组化染色检测血肿周围 HSP70表达，采用Western blot检测大鼠血肿周围脑组织 P‐JAK2、P‐STAT3的表达。结果脑出血组和 AG‐490组 HSP70、P‐JAK2、P‐STAT表达均高于假手术组和正常组（P＜0.05），并于造模后48 h达高峰（P＜0.05）；AG‐490组 HSP70、P‐JAK2、P‐STAT表达较脑出血组低（P＜0.05）；脑出血组 HSP70表达与NSS评分呈负相关（r＝－0.511，P＜0.05），HSP70表达与 P‐JAK2、P‐STAT3的表达呈正相关（r＝0.790，P＜0.05；r＝0.447， P＜0.05）。结论JAK2／STAT3信号通路可能通过上调 HSP70的表达进而对大鼠脑出血后起神经保护作用。
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Janus激酶2在实验性重症急性胰腺炎肝损伤中的作用
目的 观察Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)信号通路的核心分子Janus激酶2(JAK2)在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤中的表达变化.方法 以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型.32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组(NC组)和SAP 6h、12h、18h组,每组8只.动态测定各组血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;光镜下观察肝脏组织病理变化;免疫组化及Westem blotting法检测JAK2在肝组织中的蛋白表达水平变化.结果 与NC组比较,SAP各组AMY、ALT、AST水平均明显升高(P<0.05),光镜下肝脏组织损伤随病情进展而逐渐加重,SAP后6h有少量JAK2蛋白表达,12～18h达高峰(P<0.05),且JAK2表达与肝损伤的严重程度相一致.结论 JAK2蛋白在SAP发生时高表达,参与SAP形成的病理过程,JAK/STAT通路活化可能促进SAP肝损伤.
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清热化湿祛瘀法对慢性肾衰竭湿热证患者瘦素介导的JAK/STAT信号通路的影响
目的 观察清热化湿祛瘀中药清肾颗粒对慢性肾衰竭(CRF)湿热证患者血清瘦素(Leptin)、Janus激酶/信号转导与转录活化因子(JAK/STAT)信号通路中Janus激酶2(JAK2)蛋白及信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达的影响,探讨清肾颗粒治疗CRF患者的作用机制.方法 68例CRF湿热证患者,随机数字表法分为治疗组和对照组,每组34例,实际完成60例,治疗组29例,对照组31例.治疗组及对照组给予西医基础治疗,治疗组加用清肾颗粒,每日3次,每次1袋,疗程均为12周.观察2组患者临床疗效、治疗前后血肌酐(Scr)、肾小球滤过率估算值(eGFR)以及血清Leptin、JAK2蛋白、STAT3蛋白变化情况.结果 治疗组临床疗效和中医证候疗效总有效率为86.21％ (25/29)和82.76％(24/29),优于对照组的58.06％(18/31)和54.84％(17/31),差异有统计学意义(P＜0.05).与本组治疗前比较,治疗后治疗组Scr水平明显下降(P＜0.01),eG-FR水平明显升高(P＜0.01),且优于对照组同期(P＜0.05).与本组治疗前比较,治疗后治疗组Leptin、JAK2、STAT3水平均明显降低(P＜0.01),且均优于对照组同期(P＜0.05或P＜0.01).结论 清肾颗粒可降低CRF湿热证患者血清Leptin、JAK2蛋白及STAT3蛋白水平,抑制瘦素介导的JAK/STAT信号通路的活化,进而改善CRF湿热证患者临床症状和肾功能.
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VEGF、JAK2/STAT3信号通路与妇科疾病的关系
信号传导与转录激活因子3（STAT3）作为STATS家族成员之一，在很多组织中发挥重要功能，是细胞生长过程中的主要调节者。Janus激酶2（JAK2）为胞内蛋白酪氨酸激酶，参与造血和免疫等系统的信号转导，在多种细胞因子的信号传导中起重要作用。血管内皮生长因子（VEGF）是一种糖蛋白，是内皮细胞的特异性丝裂原，可特异性地作用于血管内皮细胞，增加新生血管形成，使血管通透性增加。STAT3作为JAK2重要的底物，在细胞因子的信号转导中起着关键性的作用，JAK2/STAT3信号转导途径的调控在维持人体正常免疫中起着重要作用。VEGF、JAK2/STAT3信号通路在妇科肿瘤、子宫内膜异位症等疾病中调控靶基因的表达，促进新生血管的形成，直接参与疾病的发生发展过程。综述VEGF、JAK2/STAT3信号通路在妇科疾病的研究进展。
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JAK2/STAT3信号转导通路在子宫内膜异位症发病过程中的作用
目的 研究JAK2/STAT3信号转导通路在子宫内膜异位症(EMS)发展过程中的作用.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、JAK2/STAT3通路抑制剂组(AG组),每组20只.模型组、AG组大鼠通过自身子宫内膜移植建立EMS模型.AG组造模前给予AG4901 mg/kg,手术后给予AG4904 mg/kg,每周2次,连续4周;模型组给予生理盐水.处理结束后记录各组大鼠异位内膜体积,计算异位内膜生长抑制率,HE染色观察病理改变;蛋白质印迹法(Western blot)检测内膜组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平.结果 治疗后AG组异位内膜组织生长发育不良,异位内膜体积明显小于模型组,异位内膜生长的抑制率为65.66％.Western blot结果显示,EMS模型大鼠异位内膜病灶中JAK2、STAT3总蛋白及其磷酸化水平(p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3)明显高于假手术组;而AG组大鼠异位内膜病灶中JAK2、STAT3总蛋白及其磷酸化水平明显低于模型组.结论 JAK2/STAT3通路在EMS发病过程中可能发挥了重要作用,而抑制JAK2/STAT3信号通路则能够对EMS的治疗产生积极作用.
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JAK2/STAT3信号通路在川芎嗪减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价Janus激酶2/信号转导与转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在川芎嗪减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠64只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n＝ 16):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、川芎嗪组(T组)和JAK2特异性抑制剂AG490组(AG组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.S组开胸暴露心脏,左冠状动脉前降支仅穿线；T组于阻断左冠状动脉前降支前20 min静脉注射川芎嗪20 mg/kg; AG组于阻断左冠状动脉前降支前20min静脉注射川芎嗪20 mg/kg,再灌注前5min静脉注射AG490 3 μg/g.再灌注l20 nin时,取下腔静脉血样,测定血清肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)的活性；观察心肌超微结构,计算心肌梗死体积百分比.结果 与S组比较,I/R组、T组和AG组血清CK和LDH的活性升高(P<0.01)；与I/R组比较,T组血清CK、LDH活性和心肌梗死体积百分比降低,AG组血清CK、LDH活性降低(P<0.01)；与T组比较,AG组血清CK、LDH活性和心肌梗死体积百分比升高(P<0.05).T组心肌病理学损伤较I/R组和AG组减轻.结论 JAK2/STAT3信号通路参与了川芎嗪减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用.
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JAK2-STAT3通路在舒芬太尼后处理减轻犬心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价Janus激酶2-信号转导与转录激活子(JAK2- STAT3)通路在舒芬太尼后处理减轻犬心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康杂种家犬24只,雌雄不拘,体重10～15 kg,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):假手术组(S组)；心肌缺血再灌注损伤组(I/R组),结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min；舒芬太尼后处理组(PO组),再灌注前5min时经5 min静脉输注舒芬太尼0.6 μg/kg；舒芬太尼后处理+AG490组(AG组),再灌注前5min时静脉注射JAK2抑制剂AG490 1 mg/kg后经5 min静脉输注舒芬太尼0.6 μg/kg.于再灌注120 min时取缺血部位心肌标本,光镜下观察病理学结果,采用免疫组化法测定心肌细胞caspase-3和磷酸化STAT3(p- STAT3)的表达,采用TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数.结果 与S组比较,I/R组、PO组和AG组心肌细胞凋亡指数、caspase-3及p-STAT3的表达均升高(P＜0.05)；与I/R组比较,PO组和AG组心肌细胞凋亡指数和caspase-3表达降低,PO组p-STAT3表达升高,AG组p-STAT3表达降低(P＜0.05)；与PO组比较,AG组心肌细胞凋亡指数和caspase-3表达升高,p-STAT3表达降低(P＜0.05).PO组心肌病理学损伤较I/R组和AG组减轻.结论 JAK2-STAT3通路参与了舒芬太尼后处理减轻犬心肌缺血再灌注损伤.
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α7nAChR在电针减轻大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用:与JAK2/STAT3信号通路的关系
目的 评价α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)在电针减轻大鼠内毒索性急性肺损伤(ALI)中的作用及其与Janus激酶2信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系.方法 清洁级健康雄性SD大鼠60只,体重200～220 g,8周龄,采用随机数字表法分为6组(n=10):对照组(C组)、ALI组、电针+ALI组(EA组)、α7nAChR拮抗剂α-银环蛇毒素(α-BGT)+ALI组(BA组)、电针+α-BGT+ ALI组(EBA组)和非经非穴+ALI组(SEA组).采用静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg的方法制备大鼠内毒素性ALI模型.EA组和EAB组于模型制备前1～4d(刺激时间9:00至10:00,30 min/次,1次/d)及模型制备过程中电针刺激双侧足三里及内关穴(刺激强度以大鼠肢体出现微颤为宜,疏密波频率2/15 Hz,波宽0.2～0.5 ms,电流强度1～2 mA.SEA组以相同电针参数刺激足三里穴及内关穴旁开0.5 cm非经非穴处.于模型制备前30 min BA组和EBA组腹腔注射α-BGT 1 μg/kg.给予LPS后6h时处死大鼠取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,确定肺湿/干重(W/D)比值,采用ELISA法确定肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量,Western blot法检测α7nAChR、磷酸化JAK2(p-JAK2)及磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平.结果 与C组比较,余5组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-o、IL-1β、IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调(P＜0.05);与ALI组比较,EA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量降低,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调,BA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(p＜0.05),SEA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与EA组比较,EBA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(P＜0.05).结论 α7nAChR表达上调激活JAK2/STAT3信号通路参与了电针减轻大鼠内毒素性ALI的过程.
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JAK2-STAT3信号通路在七氟醚后处理抑制大鼠心肌缺血再灌注时mPTP开放中的作用
目的 评价Janu激酶信号转导子-转录激活子(JAK2-STAT3)信号通路在七氟醚后处理抑制大鼠心肌缺血再灌注时线粒体膜通透性转运孔(mPTP)开放中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠60只,体重250～ 300 g,采用随机数字表法分为4组(n=15):缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚后处理组(SP组)、AG-490组(AG组)和七氟醚后处理+AG-490组(SP+AG组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min、再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.SP组再灌注前2min吸入2.8％七氟醚,持续15 min;AG组再灌注前10 min静脉注射JAK2抑制剂AG-490 3 mg/kg;SP+AG组再灌注前10 min静脉注射AG-490 3 mg/kg,再灌注前2 min吸入2.8％七氟醚,持续15 min.再灌注开始15 min时,处死5只大鼠,取心肌组织,Western blot法测定心肌组织JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平.计算p-JAK2与JAK2表达水平的比值(p-JAK2/JAK2)和p-STAT3与STAT3表达水平的比值(p-STAT3/STAT3).再灌注开始120 min时,处死5只大鼠,测定心肌梗死体积.另取5只大鼠,处死取心肌组织,采用钴淬灭技术测定mPTP开放程度.结果 与I/R组比较,SP组心肌梗死体积减小,mPTP开放程度降低,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3升高(P＜0.05),SP+AG组和AG组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与SP组比较,SP+AG组和AG组心肌梗死体积增大,mPTP开放程度加重,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3降低(P＜0.05).结论 七氟醚后处理抑制大鼠心肌缺血再灌注时mPTP开放的机制与激活JAK2-STAT3通路有关.
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异丙酚对肝移植术大鼠海马JAK2/STAT3信号通路的影响
目的 评价异丙酚对肝移植术大鼠海马Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠24只,体重220～ 250 g,8～10周龄,采用随机数字表法分为3组(n=8):假手术组(S组)、肝移植术组(0组)和异丙酚组(P组).0组和P组制备大鼠肝移植术模型.P组于再灌注即刻经右侧股静脉输注异丙酚20 mg·kg-1·h-1 30 min.于再灌注6h时取肝下下腔静脉血后处死大鼠,断头取海马组织,测定海马丙二醛(MDA)、一氧化氮(N0)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用ELISA法检测血清S100β蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的浓度;RT-PCR法检测海马JAK2、STAT3、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达水平;光镜下观察海马组织病理学结果及细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数.结果 与S组比较,其余2组血清S100β蛋白和NSE的浓度、海马MDA和NO的含量升高,SOD活性降低,JAK2、STAT3、iNOS的mRNA表达水平和细胞凋亡指数升高(P＜0.05),海马组织病理学损伤加重;与O组比较,P组血清S100β蛋白和NSE的浓度、海马MDA和NO的含量降低,SOD活性升高,JAK2、STAT3、iNOS的mRNA表达水平和细胞凋亡指数降低(P＜0.05),海马组织病理学损伤减轻.结论 异丙酚通过阻断JAK2/STAT3信号通路减轻肝移植术大鼠海马损伤.
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灯盏花素抑制缺氧/复氧大鼠心肌细胞JAK2的表达
目的 观察灯盏花素对缺氧/复氧大鼠心肌细胞凋亡相关基因Janus激酶(JA K2) mRNA及其蛋白表达的影响,试图在细胞水平上为临床应用灯盏花素减轻心肌缺血再灌注损伤提供理论依据.方法 取原代培养的乳鼠心肌细胞,随机分为4组:正常对照组,模型组,灯盏花素2个剂量组(25 mg/L,50 mg/L),其中模型组和灯盏花素2个剂量组进行缺氧2h,再复氧,并于复氧4h后,分别采用RT-PCR和Western blot检测大鼠心肌细胞JAK2基因mRNA及其蛋白的表达.结果 模型组大鼠心肌细胞JAK2基因mRNA和蛋白条带平均光密度值均较正常对照组增加(P＜0.01)；与模型组相比,灯盏花素2个剂量组大鼠心肌细胞JAK2基因的mRNA和蛋白条带平均光密度值均降低(P ＜0.05,0.01).结论 灯盏花素可抑制缺氧/复氧大鼠心肌细胞凋亡相关基因JAK2 mRNA,进而抑制了JAK2蛋白表达,从而抑制缺氧/复氧引起的大鼠心肌细胞凋亡的作用.
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葛根素对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏瘦素受体mRNA和磷酸化Janus激酶2/磷酸化信号转导与转录激活因子3的影响
目的:观察葛根素对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠血清瘦素、肝组织瘦素受体mRNA和磷酸化Janus激酶2(phosphorylated Janus kinase 2,P-JAK2)/4酸化信号转导与转录激活因子3(phosphorylated signal transducers and activators of transcription factor 3,P-STAT3)蛋白表达的影响.方法:高脂饲料制备SD雄性大鼠NAFLD模型,随机分为空白组和造模组.待造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、辛伐他汀组和葛根素组.治疗4周后行肝组织生化和病理学检测,并同时应用酶联免疫吸附检测试剂盒检测血清瘦素,实时逆转录聚合酶链反应法检测肝组织瘦素受体mRNA表达,应用Western免疫印迹法检测肝组织P-JAK2/P-STAT3蛋白的表达.结果:葛根素能明显降低NAFLD大鼠甘油三酯和总胆固醇水平,改善脂肪变性,降低肝脏炎症反应,并能明显降低血清瘦素高水平状态,同时增加瘦素受体mRNA的表达,增加肝组织P-JAK2/P-STAT3蛋白的含量.结论:葛根素可通过改善瘦素抵抗,增加肝脏瘦素受体mRNA表达及P-JAK2/P-STAT3蛋白含量而实现对NAFLD大鼠肝脏脂质和炎症的治疗作用.
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大鼠Kupffer细胞分泌的促炎因子在实验性急性胰腺炎肝损伤中的作用
背景:促炎因子在急性胰腺炎(AP)胰腺局部损伤以及全身炎症反应过程中起重要促进作用.目的:探讨大鼠Kupffer细胞分泌的促炎因子在实验性AP肝损伤中的作用.方法:提取24只Sprague-Dawley大鼠肝脏Kupffer细胞,并分为正常对照组、脂多糖(LPS)组、LPS+胰弹性蛋白酶(PE)组和AG490预处理组.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测Kupffer细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-18含量;以细胞免疫荧光双重染色法观察细胞形态和JAK2荧光表达;以蛋白质印迹法检测JAK2蛋白表达.结果:与正常对照组相比,LPS组TNF-α、IL-6和IL广18含量以及JAK2表达均显著增高(P<0.01);LPS+PE组TNF-α、IL-6和IL-18含量以及JAK2表达显著高于LPS组(P<0.01);AG490预处理组TNF-α、IL-6和IL-18含量以及JAK2表达显著低于LPS+PE组(P<0.01),但与LPS组相比无明显差异.Kupffer细胞形态改变与JAK2表达一致,Kupffer细胞胞质中JAK2荧光量、荧光强度以及蛋白表达的动态变化与TNF-α、IL-6和IL-18含量基本一致.结论:Kupffer细胞过度活化在炎症放大和AP时胰外器官损伤中起重要作用,抑制Kupffer细胞内JAK2活化可减少促炎因子的分泌,从而有效减轻AP合并的肝损伤.
