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硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶对肝细胞再生的影响
目的：观察硫化氢（H2S）/胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）对肝细胞再生的影响。方法以43例慢性乙型肝炎患者为肝炎组，21例肝损害治疗后正常者的非肝炎患者作为对照组。采用肝穿刺获得两组肝组织，用免疫组化SP法检测肝组织中CSE表达。用胶原酶消化法分离两组肝细胞，分别给予促肝细胞生长素（HGF）50μg/L、CSE抑制剂炔丙基甘氨酸（PPG）2 mmol/L＋HGF 50μg/L、H2S供体NaHS 1 mmol/L＋HGF 50μg/L刺激24 h，用MTT法观察两组细胞增殖变化。结果肝炎组肝组织CSE平均光密度值为0.5019±0.103，对照组为1.691±0.513，肝炎组CSE平均光密度值较对照组低（P＜0.05）。HGF刺激后，肝炎组肝细胞吸光度值高于对照组（P＜0.05）；加CSE抑制剂PPG后，吸光度值增加更明显（P＜0.05）；加NaHS后，两组细胞吸光度均减弱（P＜0.05）。结论 H2S/CSE具有抑制肝细胞增殖作用，减少内源性H2S将有利于肝再生。
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内源性硫化氢及其合成酶在膀胱癌恶性进展中的表达
目的：探讨内源性硫化氢（H2S）及其合成酶胱硫醚-β-合成酶（CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）和3-巯基丙酮酸硫转移酶（MPST）在正常膀胱组织以及膀胱癌中的表达。方法选取因膀胱癌而行膀胱肿瘤电切术或膀胱癌根治术的肿瘤组织标本76例，同时收集15例正常膀胱组织作对照组。通过免疫组化和Western blot研究CBS、CSE和MPST在正常膀胱组织以及不同病理分期/分级膀胱癌组织中的表达情况；通过敏感硫电极法检测H2S在正常膀胱组织和膀胱癌中的含量。分别比较H2S及其合成酶在各组之间的差异，初步探讨H2S及其合成酶与膀胱癌恶性进展之间的关系。结果免疫组化结果显示CBS（79.1%）、CSE（81.3%）和MPST（84.6%）在膀胱癌黏膜和肌层组织中均有表达。CBS（P＝0.021和P＜0.001）和MPST（P＝0.015和P＝0.045）的表达在膀胱癌不同分期和分级之间有统计学差异。在所有检测的标本中，肌层浸润性膀胱癌中的H2S含量高[（52.6±2.91）nmol·mg-1·min-1]，各组之间有统计学差异。结论内源性H2S及其合成酶CBS、CSE和MPST在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织，且其表达在膀胱癌不同分期和分级之间有统计学差异。
关键词： 膀胱肿瘤 硫化氢 胱硫醚γ裂合酶 酶胱硫醚-β-合成酶 3-巯基丙酮酸硫转移酶 -
硫化氢对烧伤大鼠创面巨噬细胞硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响
目的 应用外源性硫化氢(H2S)干预烧伤大鼠,探讨H2S对其创面巨噬细胞硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)体系的作用.方法 取78只健康SD大鼠,随机选取6只大鼠作为正常对照组,其余大鼠(烧伤组)按照随机数字表法又分为4组,0.9％氯化钠溶液组,硫氢化钠(NaHS,体外H2S供体)组,炔丙基甘氨酸(PPG,H2S合成酶抑制剂)组,NaHS+ PPG组,每组18只.正常对照组不做任何干预,烧伤组大鼠均制成5％ TBSA深Ⅱ度烧伤创面,0.9％氯化钠溶液组、NaHS组、PPG组及PPG+NaHS组分别给予每天1次定时腹腔注射0.9％氯化钠溶液0.002 mL/g、NaHS56 μmol/kg、PPG 45 mg/kg及NaHS 56 μmol/kg+ PPG 45 mg/kg,分别在干预后3、7、14 d处死大鼠,分离、提取并培养创面巨噬细胞(每个时相点随机选取6只大鼠);正常对照组大鼠直接处死,取正常皮肤巨噬细胞培养.用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定对烧伤组大鼠创面巨噬细胞(正常对照取组大鼠正常皮肤巨噬细胞)培养上清液中炎H2S的浓度;采用实时定量PCR检测其巨噬细胞中胱硫醚-γ-裂解酶mRNA (CSEmRNA),多组间数据比较采用单因素方差分析,相同时相点各组间两两比较采用SNK-q检验.结果 在干预后3、7、14 d,细胞培养上清液中H2S的浓度,0.9％氯化钠溶液组、NaHS组、PPG组、NaHS+ PPG组组间比较,差异有统计学意义(F=34.657、23.532、15.985,P值均小于0.05);干预后3、7、14 d,NaHS+PPG组[(60.74±1.21)、(54.27±1.15)、(54.27±1.16) μmol/L]与NaHS组[(98.29±1.43)、(91.82±1.26)、(87.93±1.30) μmol/L]比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.05),与PPG组[(52.98±1.20)、(54.27±1.02)、(52.98±1.14) μmol/L]比较,差异均无统计学意义(P值均大于0.05).巨噬细胞中CSEmRNA变化情况,0.9％氯化钠溶液组、NaHS组、PPG组、NaHS+ PPG组组间比较,差异有统计学意义(F=8.547、7.162、6.565,P值均小于0.05);在干预后3、7、14 d,NaHS+ PPG组(0.195 ±0.002、0.265±0.004、0.325 ±0.003)与NaHS组(0.334±0.007、0.329±0.005、0.456±0.002)比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.05),与PPG组(0.145±0.001、0.202±0.004、0.245±0.003)比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.05).结论 烧伤后大鼠创面巨噬细胞H2S/CSE体系功能降低.微量的外源性H2S对巨噬细胞H2S/CSE体系具有促进作用.PPG能够抑制巨噬细胞内源性H2S的生成,但不能抑制CSE-mRNA的表达.
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肺癌组织CSE表达及其与临床病理因素相关性的探讨
目的:探讨胱硫醚-γ-裂 解酶(cystathi onine γ-lyase,CSE)在肺癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测40例肺癌组织中CSE和以CD34为标记的微血管密度(MVD)的表达情况.采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理,用x2检验对计数资料进行统计学分析,对于计量资料实验结果用(x)±s表示,以两组之间采用非匹配t检验.结果:肺癌组织标本中CSE的表达阳性率(75％)明显高于正常肺组织阳性率(2S％),并与肿瘤大小(x2=9.404,P=0.020)及分化程度(x2=6.078,P=0.048)相关；MVD在肺癌组织的表达为43.60±7.57,明显高于正常组织(30.25±7.61),两者经统计学分析t=7.314,P=0.00,差异有统计学意义.MVD与肿瘤大小、分化程度及TNM分期相关.P＜0.05.CSE与MVD两者呈正相关.t=3.65.P=0.010.结论:CSE参与了肿瘤的血管新生过程,可能对促进肺癌的发生和发展具有重大意义.
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高肺血流量对肺血管结构及胱硫醚-γ-裂解酶基因表达的影响
目的:探讨高肺血流量所致肺动脉高压大鼠肺血管结构和内源性硫化氢体系的变化.方法: SD大鼠共16只,随机分为分流组及对照组.对分流组大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术.11周后以右心导管法测定肺动脉平均压(pulmonary artery mean pressure,mPAP).检测右心室/体重(right ventricle/body weight,RV/BW) 和右心室/左心室+室间隔(right ventricle / left ventricle plus septum,RV/LV+S)比值.并且以光学显微镜和电子显微镜观测肺血管结构的变化.以分光光度法测定血浆硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)含量.化学法测定肺组织硫化氢产出率,以原位杂交的方法检测肺动脉胱硫醚-γ-裂解酶(cystuthionine-γ-lyase, CSE)mRNA表达.结果:分流组大鼠mPAP、RV/BW及RV/(LV+S)比值明显高于对照组,光镜下肺小血管肌化程度明显增强,肺中、小肌型动脉相对中膜厚度明显增加.电镜下, 肺中、小肌型动脉内皮细胞增生、肥厚、肿胀,平滑肌细胞增生、肥厚,并由收缩表型向合成表型转化.分流组大鼠的血浆H2S含量及肺组织CSE活性(肺组织H2S产出率)明显低于对照组,肺动脉mRNA表达明显降低.结论:肺血管结构重建是高肺血流量所致肺动脉高压的重要病理基础,内源性H2S体系--mRNA表达、CSE活性及血浆H2S含量下降可能在其形成中起重要的作用.
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H2S对尿源性脓毒血症肾损伤的影响
目的：探讨H2S对尿源性脓毒血症肾损伤的影响及其机制。方法将30只大白兔随机均分为Control组、Sham组、Sepsis组、NaHS 2.8μmol/kg组和NaHS 8.4μmol/kg组。建立上尿路急性梗阻并感染脓毒血症动物模型。于术前、术后24 h、48 h、72 h采血行外周血检测白细胞计数(WBC)、血肌酐（Cr）、尿素氮(BUN）。术后72 h光学显微镜及透射电子显微镜观察肾组织形态结构变化；应用免疫组织化学法检测肾组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-10和核因子（NF）-κB蛋白表达；去蛋白法测定血浆H2S浓度，亚甲基蓝分光光度计法测肾组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的活性。结果术后24 h、48 h、72 h，Sepsis组WBC、Cr、BUN均高于其他4组，NaHS 8.4μmol/kg组WBC、BUN低于NaHS 2.8μmol/kg组；血Cr术后24 h、48 h NaHS 8.4μmol/kg组与NaHS 2.8μmol/kg组差异无统计学意义，术后72 h低于NaHS 2.8μmol/kg组。静脉注射NaHS后肾病理形态损害减轻。NaHS 2.8μmol/kg组和NaHS 8.4μmol/kg组TNF-α、NF-κB蛋白表达均低于Sepsis组，IL-10蛋白表达高于Sepsis组。NaHS 8.4μmol/kg组TNF-α、NF-κB蛋白表达低于NaHS 2.8μmol/kg组，IL-10蛋白表达高于NaHS 2.8μmol/kg组。Sepsis组较Control组和Sham组H2S浓度降低，肾组织CSE表达减弱。经静脉注射NaHS后H2S浓度升高，CSE活性无明显变化。结论内源性H2S通过抑制NF-κB的表达，下调TNF-α，上调IL-10，减轻尿源性脓毒血症肾损伤。
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胱硫醚β-合酶/胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢体系小干扰RNA对大鼠正常肝细胞株BRL凋亡的影响
目的：探讨内源性胱硫醚β-合酶（CBS）/胱硫醚γ-裂解酶（CSE）-硫化氢（H2S）体系在生理状态肝细胞凋亡中的作用及其机制。方法培养大鼠正常肝细胞株BRL。小干扰RNA（siRNA）序列筛选：设阴性siRNA序列转染组（对照组）、CBS siRNA序列转染组（CBS 1~3序列组）和CSE siRNA序列转染组（CSE 1~3序列组），转染24、48 h；siRNA转染后检测细胞凋亡：设阴性对照组、溶剂对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、（CBS+CSE）siRNA组，作用时间为转染后0、4、8、12、24 h；凋亡机制探讨：设阴性对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、（CBS+CSE）siRNA组，作用时间为转染后4、8、12、24 h；每组均4个平行样。RT-PCR、Western blot检测BRL细胞中CBS、CSE mRNA和蛋白的表达，siRNA基因静默CBS、CSE，去蛋白法检测H2S生成，Hoechst荧光染色、流式细胞术检测BRL细胞凋亡，荧光染色检测线粒体膜电位（MMP）变化，Western blot 检测胞浆内细胞色素 C（Cyt C）和激活型 caspase 3（cleaved-caspase 3）蛋白表达变化。结果 BRL细胞株存在CBS、CSE表达。CBS/CSE siRNA转染后，细胞内源性H2S生成降低，凋亡细胞数量和细胞凋亡率随时间延长而逐渐增加，BRL细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）活性均未见明显变化，MMP下降，胞浆内Cyt C蛋白表达上调，cleaved-caspase3蛋白表达上调。结论抑制内源性H2S体系可引起生理状态肝细胞凋亡，机制可能部分涉及凋亡线粒体途径。
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硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤中的作用
目的 探讨硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)体系在脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用.方法 健康雄性sD大鼠48只,随机分为4组:空白对照组(Ⅰ组,n=16)、LPS诱导ALI组(Ⅱ组,n=16)、LPS+CSE抑制剂炔丙基甘氨酸(PIG)组(Ⅲ组,n=8)和LPS+NaHS组(Ⅳ组,n=8).分别于给药后(生理盐水或LPs)3 h和6 h,Ⅰ组和Ⅱ组各处死8只大鼠;于LPS给药后3 h,m组腹腔注射PPG 30 mg/kg(2 ml/kg),Ⅳ组腹腔注射NaHS 28 umol/kg,观察3 h后处死.观察肺组织病理学结果,计算肺系数、肺湿/干重比(W/D),测定血浆H2S浓度、肺组织CSE活性、血清IL-1β浓度、肺组织IL-1βmRNA表达和NF-kB p65活性.结果 Ⅰ组肺泡结构完整,Ⅱ组出现病理损伤,Ⅲ组病理损伤程度加重,Ⅳ组病理损伤程度较Ⅱ组减轻.与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组H2S浓度和CSE活性降低,IL-1β浓度、IL-1β mRNA表达和NF-kB p65活性升高;Ⅳ组IL-1β mRNA表达和NF-kB p65活性升高,CSE活性降低;Ⅱ组-Ⅳ组肺系数和肺W/D升高.与Ⅱ组比较,Ⅲ组肺系数、肺W/D、IL-1β浓度、IL-1β mRNA表达和NF-KB 065活性升高,H2S浓度和CSE活性降低;Ⅳ组肺系数、肺W/D降低、H2S浓度和CSE活性升高,IL-1β浓度、IL-1βmRNA表达和NF-KB p65活性降低(P＜0.05或0.01).结论 内源性H2S/CSE体系功能下调可能参与了LPS诱导Au的病理生理过程,外源性NaHS治疗后可在一定程度上减轻大鼠ALI.
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硫化氢与消化道动力的研究进展
消化道可产生硫化氢(H2S),胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)是内源性H2S合成的关键酶.H2S可调节消化道动力,主要表现为抑制肠道动力,对胃动力具有双重调节作用,其机制可能与肠Cajal间质细胞、平滑肌、肠神经细胞相关.本文就H2S与消化道动力的研究进展作一综述.
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硫化氢对肝硬化大鼠门静脉压力及肝细胞增殖的影响
目的 探讨硫化氢(H2S)调节肝硬化大鼠门静脉压力及肝组织细胞增殖的作用及机制.方法 将48只雌性SD大鼠随机分为六组.肝硬化对照组、肝硬化H2S减少组、肝硬化H2S增加组采用四氯化碳复合因素法制作肝硬化模型；正常H2S增加组和肝硬化H2S增加组腹腔注射H2S供体硫氢化钠(NaHS)以增加体内H2S；正常硫化氢减少组和肝硬化H2S增加组腹腔注射H2S代谢酶抑制剂PPG,以减少体内H2S;正常对照组和肝硬化对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水.干预7d后门静脉插管法测定各组门静脉压力,取肝脏组织,免疫组化、PCR法观察肝脏组织内细胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)及增殖细胞核抗原(PCNA)表达.结果 肝硬化对照组门静脉压力较正常对照组增高,CSE表达降低,PCNA表达增加(P均＜0.01)；肝硬化H2S减少组门静脉压力较肝硬化对照组进一步增高,CSE表达降低,PCNA表达增加(P均＜0.01)；肝硬化H2S增加组门静脉压力较肝硬化对照组降低,CSE表达增高,PCNA表达降低(P均＜0.01).结论 H2S可调节肝硬化大鼠门静脉压力；其机制可能与其调节细胞增殖有关.
