细胞内氯离子通道蛋白1在肝癌高、低淋巴道转移细胞株中的定位及表达差异

目的 研究细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移细胞株中的定位及表达差异.方法 以小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株Hca-F和低淋巴道转移细胞株Hca-P为研究对象,采用双向凝胶电泳和质谱鉴定、细胞免疫荧光、细胞免疫化学染色方法和Western blot方法检测CLIC1在高、低淋巴道转移细胞株中的定位及蛋白表达情况.结果 双向凝胶电泳和质谱鉴定CLIC1在Hca-F细胞中高表达,是Hca-P细胞的1.6倍;细胞免疫荧光和免疫化学结果显示CLIC1定位于Hca-F和Hca-P细胞的细胞质和细胞膜,功能形式的细胞膜定位更多存在于Hca-F细胞中,并且在Hca-F细胞中的表达强于Hca-P细胞.Western blot结果显示CLIC1在Hca-F细胞中的表达是Hca-P细胞的1.6倍.结论 CLIC1在Hca-F和Hca-P细胞中定位于细胞质和细胞膜,在Hca-F细胞中高表达,且在Hca-F中更多定位于细胞膜,可能在肝癌淋巴道转移过程中发挥作用.

膜蛋白LRRC8A在小鼠心肌细胞的表达及电生理特性

目的 探讨容积敏感性氯通道蛋白主要成分LRRC8A在小鼠心肌细胞的表达及电生理特性.方法 采用原代培养的小鼠乳鼠心肌细胞,上海吉玛公司合成4个不同LRRC8A的小干扰RNA(siRNA),片段依次为A组、B组、C组和D组,另将1个不包含siRNA的片段作为NC组.将含LRRC8A siRNA片段的腺病毒感染心肌细胞,用等渗、低渗、低渗加DCPIB、低渗加siRNA外液灌流.RT-PCR法和Western Blot法检测各组LRRC8A在心肌细胞的表达;应用膜片钳检测各种状态下LRRC8A电生理特性(ICLvol)的变化.结果 心肌细胞能正常表达LRRC8A,腺病毒成功感染细胞后,与NC组比较,A、B、C和D组LRRC8A mRNA及蛋白表达量均降低(P＜0.05).与等渗外液比较,低渗外液ICLvol明显升高,与低渗外液比较,低渗加DCPIB外液的ICLvol降低,抑制率达到(96.48±2.63)％(P＜0.01),与低渗外液比较,低渗加siRNA外液的电流密度值下降达(83.04±8.41)％(P＜0.01).结论 LRRC8A是小鼠心肌细胞膜重要的组成成分,是容积敏感性氯通道的重要构成蛋白.

氯离子通道阻滞剂DIDS和NPPB对缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡保护作用的研究

目的 探讨氯离子通道阻滞剂DIDS和NPPB时缺血再灌注(I/R)诱导心肌细胞凋亡过程中的保护作用及可能机制.方法 在原代培养鼠心肌细胞I/R诱导心肌细胞凋亡模型中,将实验分为对照组、I/R组、DIDS组和NPPB组,每组20孔.观察心肌细胞的存活率、caspase-3活性及细胞膜完整性.结果 I/R组心肌细胞存活率52.1%,DIDS组和NPPB组分别是84.5%和74.7%,均有统计学差异(P<0.01);细胞凋亡DNA电泳片断显示,DIDS组和NPPB组均能显著的抑制DNA的降解.再灌注24 h后,I/R组细胞内caspase-3活性水平482.3%,DIDS组和NPPB组分别是171.7%和211.8%,均有统计学差异(P<0.01).备组乳酸脱氢酶水平均<5%.结论 在I/R诱导的凋亡性心肌细胞损伤中,氯离子通道阻断滞剂能通过有效的抑制Caspase-3活性,起到保护心肌细胞的作用.

氯通道阻滞剂在β25-35淀粉样多肽诱导PCl2细胞凋亡的保护作用

目的 探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PCl2细胞凋亡的影响.方法 PCl2细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Ap25-35 40 μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40,μmol/L+DIDS 50μmol/L).MTT法测细胞存活率,Hoeehst 33 258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率.结果 Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PCI2细胞的存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50 μmol/L能显著丁调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论 DIDS时Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用.

降压一号对自发性高血压大鼠脑皮质组织的保护

目的 以自发性高血压大鼠为研究对象,观察降压一号对高血压大鼠脑皮质组织的保护作用. 方法 将60只雌雄各半自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和12只雌雄各半的健康Wistar大鼠,体质量(200±20)g,数字抽签随机分为6组,分别为对照组(健康大鼠)12只;模型组(SHR大鼠)12只;卡托普利组12只5 mg·kg-1·d-1;降压一号低剂量(0.25 g·kg-1·d-1)组12只;降压一号中剂量(0.5 g· kg-1·d-1)组12只;降压一号高剂量(1 g· kg-1·d-1)组12只.在连续服用药物4周后,分别检测各组大鼠颈动脉血压,并将各组大鼠猝死剪取脑组织标本,通过反转录聚合酶链(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)对比观察给予降压一号后SHR脑皮质中Bcl-2、Bax、核转录因子(NF) κB P65、氯离子通道(CLC)-2及CLC-3 mRNA的表达.结果 SHR服用降压一号4周后,对各组SHR颈动脉血压测量值分别为低剂量组(182.8±7.3)mmHg(1 mmHg=0.133 kpa),中剂量组(170.3±9.4) mmHg,高剂量组(163.9±10.6)mmHg,模型组(205.4±11.3)mmHg,降压一号可降低SHR血压,且具有量效关系(P＜0.05).降压一号可引起SHR脑皮质细胞促凋亡基因Bax表达下降,而抗凋亡基因Bcl-2的表达水平上升;可增加SHR脑皮质细胞NF-κB P65蛋白的表达.当大鼠发生高血压时,脑组织中的CLC-2和CLC-3的表达水平上升;而给予降压一号后,CLC-2和CLC-3的表达水平下降. 结论 降压一号可能通过改变由于高血压所导致的细胞的代谢性的容积回缩的增强,从而对高血压引起的细胞的损伤起到一定的保护作用.

钙离子激活性氯通道在犬心力衰竭心肌功能重塑的观察

目的 观察Ito第2个成分Ito2即钙离子激活性氯通道(CLCA)是否参与心力衰竭(心衰)心脏的功能重塑.方法 快速起搏犬右心室,诱发心衰,酶学法分离心肌细胞,以经典膜片钳全细胞记录法评价心衰时Ito2电流密度的变化、Ito2与L-型钙通道电流(ICa-L)的关系和在恒定的细胞内钙浓度条件下Ito2与膜电压的关系.用氯通道阻断剂4,4'diisothiocyanostilbene-2,2'-disulfonic acid (DIDS)200 μmol筛选出Ito2.结果 Ito2电压-电流关系呈倒钟型,与ICa-L的曲线成镜影关系但右移10 mV.ICa-L密度在心衰和对照组之间差异无统计学意义.在膜电压0～40 mV之间,Ito2密度在心衰组明显减小.例如膜电压为20mV时,对照组与心衰组Ito2分别为(3.02±0.55)pA/pF(n=7)和(1.31±0.25)pA/pF(n=8),P＜0.05.Ito2电流的衰退时间常数在两组间差异无统计学意义.当细胞内钙浓度锁定在100 μmol时,Ito2密度在心衰组反而比对照组增大,提示CLCA功能上调.结论 心衰时Ito2密度下降,这可能与心衰细胞兴奋释放钙浓度下降有关.Ito2密度下降可能参与心衰时的动作电位时程延长和晚期后除极的发生,可能是心衰时心律失常的发生机制之一.

骨关节炎兔软骨细胞传代后膜电位的变化

目的：观察骨关节炎（ OA）与正常兔软骨细胞传代后静息膜电位（ RMP）的变化。方法采用经典Hulth法，制作兔双腿OA模型。手术后12周，体外酶解分离膝关节软骨细胞，并传代培养。采用qRT-PCR技术，观察对照组和OA组5代软骨细胞（P1～P5）的Ⅱ型胶原（COL2A1）、聚集蛋白聚糖（ACAN）和Ⅰ型胶原（COL1A1）mRNA表达的改变；同时采用膜片钳技术，测定5代细胞的RMP，并初步分析RMP变化机制。方差齐的OA组与对照组之间均数的比较采用两独立样本t检验；方差齐的多组均数比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Bonferroni法。结果对照组和OA组的P1～P3代细胞相似，呈卵圆形或多角形，P4～P5代细胞以成纤维细胞样的梭形为主。与对照组P1代细胞相比，OA组P1代细胞COL2A1和ACAN的mRNA表达减少（t＝5.90，P＜0.01；t＝3.46，P＜0.05）；两组间软骨细胞RMP的差异有统计学意义（t＝－8.0，P＜0.01）；电压依赖性氯通道ClC-3（CLCN3）的mRNA表达增加（t＝－17.7，P＜0.01），两组之间的差异具有统计学意义。分别与同组的P1代细胞相比，两组动物的P2～P5代软骨细胞的COL2A1和ACAN的mRNA表达逐渐减少，而COL1A1表达逐渐增多，对照组P1～P3代细胞RMP数值相似，P4代和P5代细胞数值减少（ F ＝47.75，P＜0.01）；而OA组前三代细胞RMP数值相似， P4代和P5代细胞数值增加（ F ＝15.41，P＜0.01）。结论 OA时软骨细胞RMP降低，可能与氯通道CLCN3的表达升高有关。正常和OA软骨细胞传代后均会发生去分化现象，RMP可以作为描述去分化的指标；正常和OA软骨细胞培养前3代可以保持各自的生物学特性，适合软骨组织再生修复及OA疾病研究使用。

囊性纤维化跨膜转导调节因子在子宫内膜中表达的变化及其意义

目的探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)在人月经周期子宫内膜中表达的变化及其意义.方法采用免疫组化、免疫印迹、原位杂交方法检测人月经周期子宫内膜中CFTR的蛋白及mRNA的分布与含量变化.结果 (1)CFTR仅在子宫内膜腺上皮细胞中表达,增生期晚期、分泌期、月经期内膜腺上皮细胞中均富含CFTR,与增生期早期相比,差异有显著性(P<0.05);免疫印迹法证实,增生期晚期、分泌期内膜存在特异性的、相对分子质量为170 000的CFTR条带;(2)CFTR mRNA在增生期晚期和分泌期早期子宫内膜中含量高,与增生期早期、分泌期晚期相比,差异有显著性(P<0.05).结论人月经周期子宫内膜腺上皮细胞中存在CFTR mRNA和蛋白的表达,含量均随月经周期而变化;增生期晚期CFTR表达的增强.分泌期CFTR的表达及局部调节可能参与人类胚泡着床的调控.

云南基诺族及汉族特发性全面强直-阵挛性癫(癎)与CLCN2基因的相关性

目的 研究氯离子通道CLC-2基因是否与中国云南地区基诺族及汉族特发性全面强直-阵挛性癫(癎)(IGTCS)相关.方法 以14例云南西双版纳傣族自治州景洪市基诺乡基诺族IGTCS患者及其16名未发病亲属、67例云南籍汉族IGTCS患者及57名云南籍汉族健康体检者为对照,对常染色体3q26上CLCN2基因的内含子2及外显子5、19(内含子18)进行研究,采用PCR及直接基因测序技术,应用病例-对照研究法对CLCN2基因与云南基诺族及汉族IGTCS进行相关性分析.结果 CLCN2基因的内含子2及外显子5、19在病例组和对照组中均没有发现已报道的易患突变,但我们在对外显子19的序列测定过程中发现了其上游内含子18的146位上存在1个单核苷酸多态性位点:146T→C.该位点的3种基因型(TT、TC、CC)在汉族病例组(9、3、29例)和汉族对照组(22、9、26例)之间的分布差异有统计学意义(x2=16.079,P＜0.05);在基诺族组(基诺族病例组+基诺族亲属组,6、12、12例)与汉族对照组(22、9、26例)之间分布差异亦有统计学意义(x2=7.027,P＜0.05).汉族病例组与汉族对照组间TT型与非TT型基因型(分别为9、32例和22、35例)、TC型与非TC型基因型(分别为3、38例和9、48例)比较差异有统计学意义(x2=10.694,OR=4.121,P＜0.05;x2=11.592,OR=0.238,P＜0.05).结论 CLCN2基因内含子18的多态性位点146T→C可能是中国云南地区基诺族与汉族IGTCS患者的1个相关性位点,且在本组有限的样本数量研究中,此SNP位点在两个民族IGTCS患者之间的分布无民族差异.基因型TT为IGTCS的1个保护性因素,基因型TC则增加了患者的易患性.

阻断氯通道对人喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙氨基)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic acid,NPPB]对人喉表皮样癌细胞(Hep-2)细胞增殖及凋亡的影响,探讨氯通道在喉癌中的意义.方法 以Hep-2细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度NPPB对Hep-2细胞增殖的影响;用流式细胞术检测NPPB阻断氯通道前后Hep-2细胞凋亡率及细胞周期变化.结果 NPPB浓度依赖性地抑制Hep-2细胞增殖,NPPB阻断氯通道前后Hep-2细胞凋亡率及细胞周期存在显著性差异.结论 氯通道与Hep-2细胞增殖及凋亡密切相关,阻断氯通道可抑制Hep-2细胞增殖、诱导Hep-2细胞凋亡.

阻断氯通道对人喉癌裸鼠移植瘤ERK1/2和AKT1的影响

目的 研究氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙氨基)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoicacid,NPPB]对人喉癌细胞系Hep-2细胞裸鼠移植瘤细胞外调节激酶(extracellulat regulated kinase,ERK) ERK1/2和AKT1蛋白磷酸化的影响,探讨阻断氯通道对喉癌移植瘤抑制作用的可能机制.方法 以人喉癌Hep-2细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,应用不同浓度的NPPB分组进行治疗实验,研究移植瘤生长变化,Western blot法检测移植瘤ERK1/2和AKT1蛋白磷酸化水平的变化.结果 与对照组比较,各治疗组移植瘤ERK1/2和AKT1总蛋白水平无显著性差异,50、100、150 μmol NPPB组ERK1/2和AKT1蛋白磷酸化水平明显降低,差异均有显著性,NPPB浓度依赖性地抑制ERK1/2和AKT1蛋白磷酸化.结论 体内阻断氯通道可以抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制移植瘤细胞ERK1/2和AKT1蛋白磷酸化有关.

086 电压依赖型氯化物通道CIC-3在人鼻组织的表达

去甲肾上腺素抑制大鼠耳蜗螺旋神经元γ氨基丁酸门控氯通道电流

目的 研究去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)对培养大鼠耳蜗螺旋神经元γ氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)诱发电流的作用.方法分离培养大鼠耳蜗螺旋神经元,采用制霉菌素穿孔膜片钳全细胞记录技术,记录NA对GABA诱发电流的作用.结果 大鼠螺旋神经元GABA诱发反应的反转电位为(-0.78±0.05)mV(n=8),与Cl-平衡电位一致.GABA在钳制电位为-50 mV时,可引起内向电流,EC50为(5.2±0.5)μmol/L,Hill系数为1.03(n=26),该电流可被GABA-A受体拮抗剂荷包牡丹碱抑制,NA对该电流具有抑制作用.结论 NA可以抑制螺旋神经元GABA-A受体介导的门控氯通道电流,该作用可能与交感神经系统对听觉的调控有关.

糖皮质激素对变应性鼻炎大鼠模型钙激活氯通道的影响

目的 研究变应性鼻炎大鼠模型鼻黏膜钙激活氯通道CLCA3和黏蛋白Muc5ac的表达及糖皮质激素对其的影响.方法 30只SD大鼠随机分成变应性鼻炎组、地塞米松干预组和对照组,用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法分别检测大鼠鼻黏膜CLCA3 mRNA和Muc5ac蛋白的表达.结果 变应性鼻炎组大鼠鼻黏膜CLCA3mRNA和Muc5ac蛋白表达分别为0.344±0.127、1.401±0.574,均较对照组(分别为0.000±0.000、0.391±0.177)明显增加(t=8.565、5.317,P值均<0.01),且变应性鼻炎组中CLCA3 mRNA表达与Muc5ac蛋白的表达呈直线正相关(r=0.813,P<0.05);地塞米松组中CLCA3 mRNA和MucSac蛋白的表达较变应性鼻炎组均明显减少(t=3.102、2.226,P值均<0.05).结论 变应性鼻炎大鼠鼻黏膜CLCA3基因表达上调与黏液高分泌同时存在,CLCA3可能在变应性鼻炎鼻黏膜黏液高分泌中起重要作用;糖皮质激素可显著抑制CLCA3及黏蛋白的合成.

变应性鼻炎患者鼻黏膜中氯通道蛋白的表达

目的探讨氯离子通道蛋白(chloride channel-3,ClC-3)在常年性变应性鼻炎发病中的意义.方法采用免疫组化链霉卵白素-生物素复合体(strep avidin-biotin complex, SABC)和反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)分别从蛋白和基因水平检测了19例常年性变应性鼻炎患者鼻黏膜中ClC-3的表达.结果 19例变应性鼻炎鼻黏膜组织17例ClC-3染色呈阳性,阳性率为89.5%,主要表达在黏膜下腺体及上皮表层.所有鼻黏膜组织PCR均获得预期结果,PCR反应后变应性鼻炎患者鼻黏膜中ClC-3相对密度为0.685±0.114,正常鼻黏膜中ClC-3相对密度为0.140±0.075.结论氯离子通道蛋白ClC-3在变应性鼻炎的过度分泌过程中具有重要的意义.

氯通道阻断剂对bFGF作用下人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 观察氯通道阻断剂5-硝基-2(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)和二异硫氰基芪-2,2'-二磺酸(DIDS)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人永生系晶状体上皮细胞(HLE) B-3增殖的影响.方法 实验研究.取对数生长期的HLE B-3细胞为研究对象,用10 μg/L bFGF作用的细胞作为bFGF组,常规培养的细胞作为空白对照组,NPPB(50、100、150 μmol/L)及DIDS(10、50、100 μmol/L)分别加入含bFGF的HLE B-3细胞的培养液中共同作用24 h、48 h及72 h,采用CCK-8法、免疫细胞化学法及PI单染流式细胞术检测细胞增殖率、细胞增殖核抗原Ki-67蛋白的表达率及细胞周期的变化,进而观察氯通道阻断剂对其影响.不同浓度的NPPB和DIDS在三个时间段作用后A值差异比较采用双因素方差分析,组内各因素的多重比较采用LSD-t检验.各组细胞Ki-67表达情况及细胞周期构成比均采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD-t检验,空白对照组与bFGF处理组的两样本比较采用t检验.结果 CCK-8检测表明10 μg/L bFGF对HLE B-3细胞具有促增殖作用,24 h、48 h及72 h的增殖率分别为(18.77±6.53)％、(92.15±8.38)％和(37.09 ±2.89)％.不同浓度NPPB和DIDS在3个时间段内作用细胞后A值的变化表现出剂量及时间依赖性(bFGF+NPPB组:F时间=305.28,F浓度=18.76,P=0.000; bFGF+ DIDS组:F时间=94.43,F浓度=24.41,P=0.000),其中在作用48 h及72 h后,与bFGF处理组比较,各浓度的NPPB和DIDS均使得细胞A值有着明显的下降(P＜0.05).不同浓度的NPPB和DIDS作用于细胞48 h后,细胞内Ki-67蛋白表达细胞数有不同程度下降,差异存在统计学意义(bFGF+ NPPB组:F=580.32,P=0.000;bFGF+ DIDS组:F =507.43,P=0.000),其中150 μmol/L NPPB组和100 μmol/L DIDS组Ki-67的阳性细胞率分别下降至(18.32±1.23)％和(11.21±1.02)％,与bFGF处理组相比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01).药物作用48 h后PI染色流式细胞周期检测结果,bFGF组G0/G1期及S期细胞比例分别为(45.35±1.00)％和(31.51±1.04)％,150 μmol/L NPPB组G0/G1期细胞比例升高至(66.53±1.28)％,S期减少至(15.49±1.31)％,100 μmol/L DIDS组G0/G1期细胞比例分别升高至(67.37±0.63)％,S期减少至(13.88±0.53)％,与bFGF组相比差异均存在统计学意义(F=390.75,P=0.000;F=166.24,P=0.000).结论 NPPB和DIDS能够抑制bFGF诱导的HLE B-3细胞增殖,并在G1/S期限制点抑制其进入S期.

囊性纤维化跨膜调节因子氯离子通道在人肺泡上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨人肺泡上皮细胞囊性纤维化跨膜通道调节因子(CFTR)氯离子(Cl~-)通道对肺泡上皮细胞损伤的保护作用.方法采用全细胞膜片钳法,在OmV钳制电压下,对正常A549细胞或H_2O_2处理(氧化损伤)的A549细胞分别按照不同方式给予4-氯苯[F]异喹啉(CBIQ)、二苯胺-2-羧酸(DPC)及钙通道阻断剂尼卡地平,观察细胞从-90mV至50mV经步阶电压(20mV)刺激后CFTR Cl~-电流随时间变化的曲线,并绘制电流-电压(I-V)曲线.结果 正常及H_2O_2损伤后的细胞中均记录到典型的CFTR Cl~-电流,均可被相对特异性的CFTR Cl~-通道阻断剂DPC抑制.H_2O_2损伤细胞的CFTR Cl~-电流较正常细胞明显减小.CBIQ对H_2O_2损伤细胞的CFTR Cl~-电流以及被DPC+尼卡地平阻断后的正常细胞中的CFTR Cl~-电流均有激动作用.结论 氧化应激可导致CFTR Cl~-通道功能异常,CBIQ可以抑制这种作用.CFTRCl~-通道激活剂CBIQ可能通过调节CFTR Cl~-通道和Ca~(2+)通道发挥保护受损细胞的作用.

氯离子通道及其阻滞剂对家兔心肌缺血再灌注心律失常的影响

目的 探索氯离子通道及其阻滞剂DIDS、SITS和NPPB对心肌缺血再灌注所致心律失常的影响.方法 40只家兔分为对照组、缺血再灌注组、DIDS低剂量组、DIDS高剂量组、SITS低剂量组、SITS高剂量组、NPPB低剂量组和NPPB高剂量组,每组各5只,通过结扎后松扎冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型,实验过程中持续监测家兔标准肢体Ⅱ导联心电图,比较各组间家兔心率、心电图P波、R波、T波、ST段变化和心律失常评分.结果 缺血30 min时,与对照组比较,各组家兔均出现心率减慢[(199.8±4.0) ～ (253.6 ±2.1)比(267.0±3.4),均P＜0.01],心电图出现P波[(0.216 ±0.019) ～ (0.356 ±0.024)比(0.186 ±0.019),均P＜0.01]、R波[(0.564±0.017) ～(1.138±0.048)比(0.506 ±0.018),均P＜0.01]和T波[(0.542 ±0.013)～(0.856 ±0.045)比(0.278±0.015),均P＜0.01]增高及ST段[(0.326±0.027) ～ (0.668±0.054)比(0.024±0.023),均P＜0.01]抬高,各组心律失常评分[(1.4±0.5) ～(4.6±0.5)比(0.4±0.5),均P＜0.01]均显著增高；与缺血再灌注组比较,各干预组上述指标均显著改善[心率(214.8±3.4) ～ (246.8±4.0)比(199.8 ±4.0),均P＜0.01；P波(0.216 ±0.019)～(0.316 ±0.011)比(0.356 ±0.024),均P＜0.01；R波(0.564±0.017)～(0.980±0.035)比(1.138 ±0.048),均P＜0.01；T波(0.542±0.013) ～(0.792±0.026)比(0.856 ±0.045),均P＜0.01；ST段(0.326±0.027)～(0.596±0.018)比(0.668 ±0.054),均P＜0.01；心律失常评分(1.4±0.5)～(3.8±0.4)比(4.6±0.5),均P＜0.01],以DIDS组优,其次为SITS组,再次为NPPB组,且高剂量亚组效果均优于低剂量亚组.再灌注60 min时,各组家兔心率均显著回升,心电图增高的P波、R波和T波及抬高的ST段逐渐回落,以DIDS组变化幅度大,其次为SITS组,再次为NPPB组,且高剂量亚组效果均优于低剂量亚组,再灌注期心律失常评分比较亦有同样的趋势.结论 氯离子通道参与了心肌缺血再灌注心律失常的发生,在心肌缺血再灌注早期静脉予以氯离子通道阻滞剂DIDS、SITS和NPPB能够改善家兔心肌缺血及再灌注时的心电图表现并能够减轻再灌注心律失常的程度,其中以DIDS效果好,其次为SITS,NPPB效果略差,且均以高剂量的效果较好.

异种同源钙激活Cl-通道DNA疫苗抑制哮喘小鼠气道黏液高分泌的研究

目的钙激活Cl-通道(CLCA)家族中小鼠mCLCA3与人hCLCA1是异种同源蛋白,两者表达于气道上皮杯状细胞.拟探讨hCLCA1 DNA疫苗对哮喘小鼠气道黏液高分泌状况的影响.方法构建重组真核表达质粒pSecTag2B/hCLCA1,将其作为疫苗肌注法接种给BALB/c小鼠(隔2周1次,共4次).当酶联免疫吸附法(ELISA)证实血清中有能结合mCLCA3胞外肽段(ED)的抗体产生时,卵蛋白致敏法制备接种小鼠的哮喘模型.引喘5 d后,PAS特染黏蛋白法观察气道杯状细胞数量及分泌功能,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测黏蛋白MUC5AC mRNA水平的变化.设接种pSecTag2B/mCLCA3、空载体pSecTag2B和生理盐水为对照组.结果 ELISA证实疫苗接种3次后的小鼠血清抗体,能有效结合mCLCA3的3个ED.其中抗体与N-端和C-端ED的结合滴度大于与中间ED的结合滴度.与同样被诱发哮喘的对照组相比,疫苗接种组小鼠气道的杯状细胞数量和黏液分泌量明显减少,MUC5AC mRNA转录水平下降. 结论 hCLCA1 DNA疫苗能诱导小鼠产生结合自身mCLCA3胞外肽段的抗体,并因此有效减轻了哮喘气道黏液高分泌.

氯通道在鼻咽癌细胞凋亡性细胞容积减小和细胞凋亡中的作用

目的:探讨氯通道在5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡性细胞容积减小(AVD)和细胞凋亡中的作用.方法:培养CNE-2Z细胞后,分别用100μmol/L 5-Fu(5-Fu组)、100μmol/L 5-Fu+100μmol/L 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(5-Fu+NPPB组)处理细胞,采用活细胞影像系统实时拍摄细胞图像,检测细胞容积变化,Hochest 33258荧光染色技术检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率.结果:5-Fu处理使细胞皱缩,体积变小;5-Fu+NPPB处理后细胞体积变化不明显.在5个不同时间点,细胞受到5-Fu刺激后,标准化细胞容积(Vst)均小于对照组,5-Fu+NPPB组对细胞Vst的影响均小于5-Fu组,差异均有统计学意义.对照组细胞凋亡率(1.8+0.5)%,5-Fu处理使细胞凋亡率增加至(49.2±2.6)%,5-Fu+NPPB处理使细胞凋亡率降至(12.5±2.9)%.结论:抑制氯通道可显著拮抗5-Fu诱导的凋亡性细胞容积减小和细胞凋亡.