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p16、GATA3表达及人乳头状瘤病毒分型检测在宫颈癌累犯膀胱病理诊断中的价值
目的 探讨p16、GATA3的表达及人乳头状瘤病毒(HPV)分型检测在宫颈癌累犯膀胱病理诊断中的价值.方法 收集2008年12月至2016年3月16例宫颈癌累犯膀胱标本,对其进行组织学观察,采用免疫组织化学检测p16、GATA3的表达水平,采用PCR-反向点杂交法检测HPV基因分型.结果 患者发病年龄25~76岁,中位年龄52岁.宫颈癌累犯膀胱病例中,14例(14/16)肿瘤细胞在膀胱固有层或肌层内巢状浸润.免疫组织化学示15例(15/16)膀胱病灶弥漫强表达p16,1例10%细胞表达;7例(7/7)宫颈原发灶均弥漫强阳性.13例(13/16)膀胱病灶GATA3染色阴性,3例局部弱-中等阳性(≤30%);3例(3/7)宫颈原发灶弱-中等阳性(≤20%).15例(15/16)高危型HPV阳性,其中8例HPV16型,1例HPV31型,5例为HPV16+HPV18双重基因型,1例HPV18+HPV45双重基因型. 结论 单独使用p16或GATA3鉴别诊断价值有限.结合病史p16、GATA3免疫组织化学和HPV分型检测可有助于宫颈癌累犯膀胱病例的诊断与鉴别诊断.
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巨细胞病毒感染新生小鼠辅助性T细胞1/2类细胞因子及其转录因子表达变化及胸腺五肽的干预作用
目的 观察巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染新生小鼠辅助性T细胞(help T cell,Th)1/2类细胞因子及其转录因子表达水平变化,并探讨胸腺五肽对其产生的干预作用. 方法 120只新生BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组和胸腺五肽组(每组40只).对照组仅腹腔注射等容积生理盐水;模型组和胸腺五肽组于生后4～6 h内腹腔注射组织半数细胞感染量(tissue culture infections dose,TCID50)为10 4.31U/0.1 ml的鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)病毒悬液20μl,建立全身播散性感染MCMV模型.胸腺五肽组腹腔注射胸腺五肽0.3 mg/kg,每天1次.生后第3、5、7、10和14天无菌分离脾组织,酶联免疫吸附试验法检测脾淋巴细胞培养上清液中的干扰素(interferon,IFN)-γ和白细胞介素(interleukin,IL)-10表达;逆转录-聚合酶链反应技术检测脾组织转录因子T-bet(T-box expressed in T cells,T-bet)mRNA和转录因子Gata3(Gata-binding protein-3,GATA-3)mRNA表达.采用单因素方差分析(包括LSD法和Dunnett T3法)进行统计学分析. 结果 (1)IFN-γ表达:模型组和胸腺五肽组于第3天达高峰,均明显高于对照组[分别为(280.73±14.88)、(286.03±15.44)和(149.42±5.43) pg/ml,F=183.532,P=0.000].胸腺五肽组第3天后迅速降低,第7天起回升,至第14天高于对照组和模型组[分别为(252.33±8.33)、(149.07±7.05)和(148.57±4.53)pg/ml,F=385.487,P=0.000].(2)IL-10表达:模型组感染MCMV后IL-10表达水平逐渐升高,第14天明显高于对照组和胸腺五肽组[分别为(71.19±1.50)、(36.67±2.55)和(40.01±1.28) pg/ml,F=523.670,P=0.000];胸腺血肽组IL-10表达水平先升高,第7天后下降,至第14天明显低于模型组,但仍高于对照组.(3) T-bet mRNA表达:模型组和胸腺五肽组感染后T-bet mRNA表达迅速增强,第3天达高峰,均明显高于对照组(相对吸光度值分别为0.74±0.02、0.71±0.04和0.30±0.01,F=741.630,P=0.000).胸腺五肽组第3天后表达水平迅速降低,第5天起逐渐回升,至第14天高于对照组和模型组(分别为0.45±0.01、0.30±0.01和0.30±0.01,F=257.571,P=0.000).(4)GATA 3mRNA表达:模型组和胸腺五肽组第3天GATA-3 mRNA表达强度均增强,且均强于对照组(相对吸光度值分别为0.48±0.02、0.53±0.01和0.33±0.01,F=345.167,P=0.000).第14天时模型组表达强于胸腺五肽组,胸腺五肽组又强于对照组(分别为0.99±0.02、0.55±0.02和0.34±0.01,F=1 767.505,P=0.000). 结论 MCMV感染可诱导新生鼠出现Th1/Th2漂移,表现为Th2细胞的优势应答状态,胸腺五肽可改善这一免疫失衡现象.
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鼻腔吸入γ干扰素对大鼠变应性鼻炎的治疗作用
目的 探讨鼻腔吸入γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)对大鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的治疗作用及可能机制.方法 采用卵白蛋白、氢氧化铝建立大鼠AR模型,分为阳性对照组(B组)、IFN-γ组(c组)和丙酸倍氯米松组(D组),每组8只大鼠,分别于模型建立后第31～38天,每只每日每侧鼻腔滴入磷酸盐缓冲液50μl、IFN-γ1 μg和丙酸倍氯米松3.5 μg,另设阴性对照组(A组)大鼠8只.第39天取鼻腔灌洗液测定细胞成分、白细胞介素4和白细胞介素5浓度;取血测定血浆IgE水平;黏膜切片观察鼻腔组织病理学改变及GATA-3的表达.结果 C组鼻腔灌洗液中的嗜酸粒细胞数量(-x±s,下同)为(O.005±0.003)×104/ml,明显低于B组(0.225±0.060)x104/ml(P<0.01);C组鼻腔灌洗液中的白细胞介素4为(7.8±3.5)pg/ml,白细胞介素5为(12.5±4.3)pg/ml,均低于B组(P值均<0.01);C组血浆中总IgE为(38.5±9.6)μg/ml,卵白蛋白特异性IgE为(19.8±5.4)IU/ml,均低于B组(P值均<0.01).B组大鼠鼻腔黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有嗜酸细胞为主的炎性细胞浸润,而c组大鼠上述炎性症状改变减轻.免疫组化显示B组鼻腔组织中GATA-3表达增加,而C组的表达减少.结论 鼻腔吸入IFN-γ可以抑制AR大鼠白细胞介素4和白细胞介素5的合成,抑制嗜酸粒细胞在鼻腔内的炎性浸润,降低血浆中总IgE和卵白蛋白特异性IgE水平,其机制可能与阻断GATA-3表达,从而继发抑制Th2型反应有关.
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转录因子GATA3单核苷酸多态性与变应性鼻炎的关系
目的 研究转录因子GATA3的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与变应性鼻炎之间的关系.方法 利用多聚酶链式反应和限制性片段长度多态性分析检测109例变应性鼻炎患者和112例健康人群外周血白细胞GATA3基因启动子区rs1269486位点和终止子下游m2229360位点的SNP,分析患者组和对照组不同基因型和单体型频率的差异,同时分析上述两个位点不同基因型之间血清总IgE和屋尘螨、粉尘螨特异性IgE的差异.结果 变应性鼻炎组和对照组的rs1269486位点和rs2229360位点均有多态性.rs1269486位点的基因型分别是纯合野生型GG,杂合型GA及纯合多态型AA;rs2229360位点的基因型分别是纯合野生型CC,杂合型CT及纯合多态型TT.变应性鼻炎组rs1269486位点的纯合野生型GG的频率以及等位基因G的频率高于对照组(X2=13.75,P＜0.01;X2=12.91,P＜0.01),对照组杂合型GA的频率以及等位基因A的频率高于变应性鼻炎组(X2=11.90,P＜0.01;X2=12.91,P＜0.01).rs2229360位点的基因型频率和等位基因频率在变应性鼻炎组和对照组之间差异无统计学意义(P值均＞0.05).变应性鼻炎组单体型GC频率高于对照组(X2=114.59,P＜0.01),对照组单体型AC频率高于变应性鼻炎组(X2=87.52,P＜0.01).变应性鼻炎患者rs1269486位点和rs2229360位点不同基因型之间血清总IgE、屋尘螨和粉尘螨特异性IgE差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 GATA3基因启动子区rs1269486位点SNP与变应件鼻炎之间存在关联性.
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RNAi阻断GATA-3表达治疗小鼠过敏性鼻炎的实验研究
目的 探讨以GATA-3为基因治疗靶标,在体内实验阶段评估RNAi技术抑制Th2极化反应,阻止过敏性鼻炎发展的潜在治疗作用.方法 采用脂质体鼻腔给药系统,将在体外实验中获得的针对GATA-3基因抑制效果明显的特异性siRNA重组质粒载体Si338应用于小鼠过敏性鼻炎模型上,借助RT-PCR、ELISA、流式细胞术和HE染色分别检测鼻腔黏膜GATA-3的mRNA水平和相关炎症因子变化,以及Th1/Th2细胞亚群漂移和炎症细胞浸润的改变.结果 ① HE染色后,显微镜下观察到过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜水肿,上皮脱落,炎症细胞浸润增加和嗜酸性粒细胞数均高于正常对照组,经RNAi治疗后,鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数明显下降.② RT-PCR显示,siRNA质粒载体有效下调Th2极化条件下的GATA-3 mRNA含量.③流式细胞术检测显示,过敏性鼻炎小鼠脾脏中,Th1/Th2细胞亚群出现漂移,Th1细胞的相对数量明显减少,Th2细胞相对数量明显增加,RNAi治疗后,Th1/Th2比率出现逆转.④ ELISA显示过敏性鼻炎小鼠外周血中,IL-4与IL-5含量增高,Si338组IL-4含量明显降低.结论 在获得高效、特异性干涉序列基础上,针对疾病上游基因,诸如GATA-3,给予RNAi技术的靶向治疗能够显著缓解过敏性鼻炎动物模型中鼻黏膜的Ⅰ型变态反应.本研究为今后前瞻性地探索siRNA基因治疗过敏性鼻炎提供了具有潜力的研究思路和可行的实验方法.
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MCMV感染对小鼠脾细胞调节性T细胞比率和Th1/Th2转录因子T-bet/GATA-3表达的影响
目的 在整体水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)急慢性感染对小鼠脾细胞中调节性T细胞(Treg)比率和Th1/Th2特异性转录因子T-bet/GATA-3蛋白表达的影响.方法 建立MCMV播散型感染模型,60只模型鼠分别于接种病毒后第1、3、7、14、28.45、60、75、90和120天各处死6只,分离脾细胞;另设60只正常小鼠作为模拟感染对照.流式细胞术检测Treg比率,Western印迹法检测T-bet/GATA-3蛋白表达水平.结果 Treg比率在急性感染末期(28 d)明显低于模拟感染对照组[(1.46±0.27)%vs(2.78±0.29)%,P<0.05];在感染慢性期持续表达上调,60 d时显著高于模拟感染对照组[(4.51±0.24)%vs (2.69±0.12)%,P<0.05].T-bet和GATA-3蛋白表达在感染后3 d分别增至(0.618±0.053)和(0.836±0.061),均显著高于模拟感染对照组水平[(0.205±0.026)和(0.398±0.022)];但是进入感染慢性期后均持续表达下调,在75、90和120 d时均明显低于模拟感染对照组水平.结论 感染急性期McMV上调T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期McMV诱导Treg增殖活化,抑制Th1和Th2分化扩增,CMV诱导Treg扩增可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因.
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GATA-3和T-bet与吗啡抑制成人辅助性T淋巴细胞分化的关系
目的 评价核蛋白转录因子GATA-3和T-bet与吗啡抑制成人辅助性T淋巴细胞(Th细胞)分化的关系.方法 健康志愿者10名,年龄20 ～ 50岁,体重50 ～ 70 kg,清晨空腹采集外周静脉血样20 ml,分离外周血单个核细胞(PBMCs).采用随机配伍设计,将每份血样分离出的PBMCs随机分为5组(n=10):常规培养组(C组)、刺激剂刺激分化组(P组)、吗啡50 μg/ml组(M组)、吗啡50μg/ml+纳洛酮50 μg/ml组(MN组)、纳洛酮50μg/ml组(N组).刺激剂孵育4h后分别收集细胞和上清液.应用流式细胞术检测Th1、Th2细胞亚群比例,计算二者比值(Th1/Th2);用酶联免疫吸附法检测上清液中干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4的浓度;使用凝胶电迁移技术检测淋巴细胞核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的活性.结果 与P组比较,M组Th1、Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ和IL-4的浓度、GATA-3和T-bet活性降低,MN组Th1细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ浓度降低(P ＜0.05或0.01);与M组比较,MN组Th1、Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ和IL-4的浓度、GATA-3和T-bet活性升高(P＜0.05或0.01);N组与C组上述各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吗啡通过激活阿片受体抑制Th细胞分化,而这种抑制作用与抑制核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的活性有关.
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维生素D3对三硝基苯磺酸诱导的大鼠结肠炎的作用
背景:维生素D(VitD)对炎症性肠病(IBD)的免疫调节作用日渐受到关注.目的:探讨VitD3对TNBS诱导的大鼠结肠炎的疗效及其机制.方法:66只雄性大鼠随机分为11组:空白对照组、TNBS组、5-ASA组、不同剂量VitD3组及其联合5-ASA组、活性VitD3组及其联合5-ASA组.除空白对照组外,其余10组以TNBS灌肠诱导结肠炎模型.造模后24h,各组以不同药物灌胃进行干预.造模第10 d处死大鼠,评估疾病活动指数(DAI)、大体损伤、组织病理学评分,测定髓过氧化物酶(MPO)活性,以RT-PCR法检测T-bet、GATA-3 mRNA表达.测定血钙和血肌酐水平以监测不良反应.结果:与TNBS组相比,单次和连续大剂量VitD3联合5-ASA组大体损伤评分和组织病理学评分均明显下降(P＜0.05)；各药物干预组MPO活性均明显下降(P ＜0.001),T-bet mRNA表达无明显差异；5-ASA组、连续大剂量VitD3组GATA-3 mRNA表达明显升高(P＜0.05).连续大剂量VitD3组及其联合5-ASA组大鼠出现高钙血症,且连续大剂量VitD3组血肌酐水平明显高于其余各组(P＜0.05).结论:VitD3可通过调节T细胞免疫减轻TNBS诱导的实验性结肠炎.
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GATA3在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 检测转录因子GATA3在乳腺癌组织中的表达情况,分析其在不同乳腺癌分子亚型中的意义.方法 应用免疫组化Maxvision法检测2015年1月至2017年3月安庆市立医院手术切除的60例原发性乳腺癌、15例乳腺腺病和9例转移性或浸润性乳腺癌病理标本中GATA3的表达水平,分析其与乳腺癌分子分型、临床病理特征以及预后的关系.结果 GATA3在乳腺腺病的腺腔中100％ (15/15)表达,在原发性乳腺癌组织中的阳性率为76.67％ (40/60),在Luminal A型、Luminal B型、Her-2过表达型和三阴型4个分子亚型中,三阴型乳腺癌的表达率仅为0.071％ (1/14),低于其他3种分子亚型,差异有统计学意义(P＜0.05).在原发性乳腺癌中,GATA3表达与乳腺癌患者的年龄、淋巴结转移、肿瘤的大小无关(P＞0.05),与乳腺癌分子分型有关(P＜0.05).结论 GATA3在乳腺癌中高表达,但在三阴型乳腺癌中低表达.
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转录因子GATA3对变应性鼻炎大鼠白细胞介素4和白细胞介素5的调控作用
目的 探讨转录因子GATA3对变应性鼻炎大鼠白细胞介素4和白细胞介素5的调控作用.方法 取Wistar大鼠32只,随机平均分为A组(对照组)和B组(实验组),B组采用卵清蛋白、氢氧化铝建立大鼠AB模型.通过免疫组化和酶联免疫吸附试验,第30天取鼻腔灌洗液测定白细胞介素4和白细胞介素5浓度;黏膜切片观察鼻腔组织病理学改变及转录因子GATA3的表达.结果 B组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5水平分别为(90.5±18.8)pg/mL和(59.6±11.4)pg/mL,明显高于A组(3.8±1.5)pg/mL、(10.8±2.0)pg/mL,差异具有统计学意义(P值均<0.01).B组大鼠鼻腔黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有嗜酸细胞为主的炎性细胞浸润.免疫组织化学显示,B组鼻腔黏膜中GATA3表迭增加,且与细胞因子IL-4、IL-5水平之间存在相关性.结论 变应性鼻炎大鼠鼻黏膜GATA3表达增高与IL-4、IL-5上调有关.
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FoxP3、T-bet 及 GATA-3在重症肌无力发病中的作用
目的：探讨转录因子翼状螺旋转录因子P3（FoxP3）、表达于T细胞的T盒转录因子（T-bet）和可与DNA序列A／T（GATA）A／G结合的Ⅳ型锌指蛋白3（GATA-3）在自身免疫性重症肌无力（EAMG）发病机制中的作用。方法将30只Lewis大鼠随机分为对照组13只和EAMG组17只。 EAMG组采用Rα97-116肽段三次免疫方法建立EAMG模型12只。 ELISA法测定两组血浆TGF-β、IFN-γ、IL-4表达水平， RT-PCR 法检测外周血单个核细胞中（PBMC）FoxP3、T-bet、GATA-3 mRNA表达强度。结果与对照组比较，EAMG组T-bet mRNA、GATA-3mRNA、IFN-γ、IL-4表达水平升高（P＜0．05）；FoxP3 mRNA、TGF-β表达下降（P＜0．05）。结论 EAMG大鼠PBMC中T-bet、GATA-3高表达、FoxP3低表达可能是EAMG细胞和体液免疫异常的重要原因之一。
关键词： 重症肌无力 转录因子 翼状螺旋转录因子P3 GATA3转录因子 -
Runx3对银屑病患者Th1/Th2细胞平衡的影响及其作用机制
目的 检测Runx3在银屑病患者和健康人外周血CD4+T细胞中转录水平的表达,分析其对Th1/Th2细胞平衡的影响及在银屑病发病中可能的作用机制.方法 选取40例银屑病患者(银屑病组)和35例健康人(健康对照组),应用密度梯度离心法分离其外周血CD4+T细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Runx3转录水平的表达.将体外培养的银屑病患者的CD4+T细胞随机分为空白对照组(未经任何处理组)、阴性对照组(对照siRNA转染组)和Runx3 siRNA组(Runx3 siRNA转染组).采用Western blot检测沉默效果,流式细胞仪分析Th1、Th2细胞数目,酶联免疫吸附试验检测Th1和Th2细胞相关特异性分泌因子的表达水平,同时采用qRT-PCR和Westernblot检测Runx3对Th1/Th2细胞转录因子表达的影响.结果 银屑病组患者CD4+T细胞Runx3 mRNA的表达水平显著高于健康对照组(P＜0.01).与阴性对照组比较,Runx3 siRNA组银屑病患者CD4+T细胞中Runx3蛋白表达水平下降(P＜0.01),同时Th1细胞数目下降(P＜0.05),而Th2细胞数目上调(P＜0.05),且Th1/Th2细胞比值显著降低(P＜0.05);白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平显著下降(P＜0.01),IL-4、IL-10表达水平显著升高(P＜0.05);Th1型特异性转录因子T-bet的表达显著降低(0.73 ±0.06 vs 0.96 ±0.17)(P＜0.01),同时Th2型特异性转录因子GATA3的表达显著升高(1.27 ±0.11 vs 1.01 ±0.14)(P＜0.05).结论 Runx3在银屑病患者外周血CD4+T细胞中表达上调,并且可能通过调控Th1/Th2细胞相关特异性转录因子的表达引发Th细胞失衡,从而参与银屑病的病理发病进程.
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转录因子T-bet、GATA-3及炎性因子在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及意义
[目的]探讨转录因子T-bet和GATA-3及炎性因子在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)筛窦黏膜组织中的表达及意义.[方法]选取2015年1月至2016年6月在本院治疗的CRSwNP患者52例(观察组),同时选取上颌窦或蝶窦囊肿患者50例作为对照组,采用免疫组织化学和RT-PCR检测黏膜组织中T-bet和GATA-3表达,采用ABC-ELISA法检测黏膜组织中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的水平.[结果]观察组筛窦黏膜组织IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ分别为(7.01±1.52)pg/mg、(3.60±0.87)pg/mg、(7.51±1.34)pg/mg和(8.70±1.67)pg/mg,明显高于对照组(P<0.05);观察组筛窦黏膜组织T-bet和GATA-3表达的阳性细胞数分别为(25.40±5.11)个和(17.52±4.08)个,明显高于对照组(P<0.05);观察组筛窦黏膜组织T-bet和GATA-3 mRNA相对表达量分别为(3.012±0.816)和(2.841±0.973),明显高于对照组(P<0.05).[结论]CRSwNP患者T-bet、GATA-3表达明显升高,同时Th1和Th2细胞因子表达明显升高,提示可能存在Th1和Th2型免疫反应.
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川崎病患儿细胞免疫功能状况及转录因子T-bet 和 GATA3的调控作用
目的：研究川崎病患儿细胞免疫功能状况及转录因子T-bet和GATA3的调控作用。方法：选取41例川崎病患儿为研究对象，同时选取年龄和性别相匹配的因急性上呼吸道感染发热儿童40例为对照组，分别采用三色荧光流式细胞术和半定量逆转录-聚合酶链反应检测2组患儿外周血Th1、Th2细胞数量及单个核细胞中T-bet和GATA3 mRNA水平。结果：川崎病患儿外周血Th1、Th2细胞比率及单个核细胞转录因子T-bet mRNA、GA-TA3 mRNA转录水平分别为（10．36±3．69）％、（6．46±2．28）％、0．51±0．16和0．38±0．13，均显著低于对照组[（25．26±5．22）％、（16．87±4．35）％、0．62±0．21和0．46±0．12，P＜0．05]。 Spearman相关分析显示Th1和Th2细胞比率分别与T-bet mRNA和GATA3 mRNA水平呈正相关。结论：川崎病患儿急性期T细胞并非活化而是处于抑制状态，T-bet和GATA3分别对Th1和Th2细胞增殖具有调控作用。
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烧伤脓毒症小鼠早期外周血T淋巴细胞中三种标志物的表达变化及免疫调控机制
目的 观察烧伤脓毒症小鼠伤后早期外周血T淋巴细胞中膜联蛋白A1(ANXA1)、GATA-3、T-bet的表达情况,分析3种标志物的免疫调控机制. 方法 将780只清洁级雄性小鼠按随机数字表法分为假伤组60只、烧伤组240只、脓毒症组240只及烧伤脓毒症组240只.假伤组小鼠背部于37 ℃温水中浸浴10s模拟致伤;烧伤组小鼠背部于100 ℃沸水中浸浴10 s造成20％ TBSA深Ⅱ度烧伤;脓毒症组小鼠腹腔注射LPS(6 mg/kg);烧伤脓毒症组小鼠同烧伤组处理后,立即同脓毒症组腹腔注射等剂量LPS.(1)伤后即刻,假伤组按照随机数字表法选取6只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.其余3组按照随机数字表法,于伤后12、24、48及72 h各选取6只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.每管细胞悬液等分为2份,一份加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的人抗小鼠CD4单克隆抗体、藻红蛋白(PE)标记的人抗小鼠γ干扰素单克隆抗体,以标记Th1;另一份加入FITC标记的人抗小鼠CD4单克隆抗体、PE标记的人抗小鼠IL-4单克隆抗体,以标记Th2.采用流式细胞仪检测Th1、Th2百分比,并计算Th 1/Th2比值.(2)伤后即刻,假伤组按照随机数字表法取18只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.其余3组按照随机数字表法,于伤后12、24、48及72 h各选取18只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.采用实时荧光定量RT-PCR法检测淋巴细胞中ANXA1、GATA-3、T-bet mRNA的表达量.(3)伤后即刻,假伤组按照随机数字表法取36只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液,分成6次进行实验.一次取6管细胞悬液分别加入6种抗体组合:标记Th1和Th2的抗体分别与PE-花青素7标记的人抗小鼠ANXA1单克隆抗体、PE-花青素7标记的人抗小鼠GATA-3单克隆抗体、PE-花青素7标记的人抗小鼠T-bet单克隆抗体联用,以分别标记Th1、Th2的3种标志物.其余3组按照随机数字表法,于伤后12、24、48及72 h各取36只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液,各时相点分成6次进行实验.一次取6管细胞悬液分别加入上述6种抗体组合进行标记.采用流式细胞仪检测Th1、Th2中ANXA1、GATA-3、T-bet 3种标志物的阳性细胞百分比.对数据行单因素方差分析、析因设计方差分析、SNK检验.对淋巴细胞中的ANXA1 mRNA与GATA-3 mRNA表达量及Th1、Th2中ANXA1阳性细胞百分比与GATA-3阳性细胞百分比均行直线相关分析. 结果 (1)与假伤组伤后即刻比较,烧伤组小鼠淋巴细胞中Th1、Th2百分比及Th1/Th2比值从伤后24 h起明显降低(P值均小于0.05),脓毒症组及烧伤脓毒症组小鼠淋巴细胞中Th1、Th2百分比及Th 1/Th2比值从伤后12 h起明显降低(P值均小于0.05).(2)与假伤组伤后即刻比较,烧伤组小鼠淋巴细胞中ANXA1和GATA-3 mRNA表达量从伤后24 h起明显下降(P值均小于0.05);T-bet mRNA表达量于伤后24 h明显下降,但伤后48、72 h明显升高,P值均小于0.05.与假伤组伤后即刻比较,脓毒症组小鼠淋巴细胞中ANXA1和GATA-3 mRNA表达量从伤后12h起明显降低,T-bet mRNA表达量从伤后12 h起明显增加,P值均小于0.05;烧伤脓毒症组小鼠淋巴细胞中ANXA1、GATA-3、T-bet mRNA表达量从伤后12 h起明显降低(P值均小于0.05),于伤后72 h达低值(分别为0.50 ±0.04、0.45±0.03、0.21 ±0.05).(3)淋巴细胞中ANXA1 mRNA表达量与GATA-3 mRNA表达量呈明显正相关(r=0.862,P＜0.05).(4)与假伤组伤后即刻比较,烧伤组小鼠Th1、Th2中ANXA1、GATA-3阳性细胞百分比从伤后24 h起均明显降低,T-bet阳性细胞百分比于伤后24 h明显降低,但从伤后48 h起明显升高,P值均小于0.05.脓毒症组小鼠Th1和Th2中ANXA1、GATA-3阳性细胞百分比从伤后12 h起持续下调,大部分时相点显著低于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05);T-bet阳性细胞百分比从伤后12h起明显高于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05).烧伤脓毒症组小鼠Th1和Th2中ANXA1、GATA-3、T-bet 3种标志物的阳性细胞百分比从伤后12 h起持续下调,大部分时相点显著低于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05).(5)在Th1、Th2中,GATA-3阳性细胞百分比与ANXA1阳性细胞百分比均呈明显正相关(r值分别为0.747、0.787,P值均小于0.05). 结论 在烧伤脓毒症小鼠中,ANXA1、GATA-3及T-bet表达持续下调,在Th1/Th2平衡向Th2方向漂移及免疫抑制过程中发挥重要作用.
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人胃癌组织中GATA3的表达及意义
目的:探讨胃癌组织中转录因子GATA3的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化法检测60例胃癌组织中GATA3的表达水平,分析其与临床病理指标的关系,探讨其在预测胃癌预后中的意义.结果:GATA3的低表达与肿瘤高组织学分级、淋巴结转移等表示预后较差的指标相关(P＜0.05),但与肿瘤大小、年龄无关(P＞0.05);GATA3在高分化癌中的表达率为33.7％,低分化癌中的表达率为7.5％,且差异有统计学意义(P＜0.05);GATA3在淋巴结未转移的胃癌中表达率为28.7％,淋巴结转移的胃癌中表达率为10％,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在胃癌组织中GATA3的表达水平与组织的分化水平及肿瘤的生物学特性相关,对指导临床治疗及评估患者的预后研究具有一定的意义.
