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二烯丙基二硫下调MCL-1诱导K562细胞G2/M阻滞及其机制
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)下调MCL-1诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其机制.方法:采用CCK-8检测DADS对K562细胞增殖的作用;流式细胞术观察DADS与沉默MCL-1对K562细胞周期的影响;Western blot检测MCL-1、PCNA和CDK1表达;免疫共沉淀方法分析MCL-1与PCNA及CDK1结合作用.结果:15、30、60、120、240 μmol/L DADS对K562细胞增殖抑制率分别为32.48％、59.34％、66.42％、77.06％和81.05％ (P ＜0.05).60和120 μmol/L DADS分别作用K562细胞24和48 h后,GJM期细胞分别增加到18.6％与34.4％和17.5％与28.5％(P＜0.05).沉默MCL-1可阻滞K562细胞于G2/M,沉默MCL-1加DADS(60 μmol/L)较单独DADS和沉默MCL-1明显增强(P＜0.05).DADS可明显下调MCL-1、PCNA与CDK1表达(P＜0.05).DADS处理K562细胞8h,MCL-1与结合的PCNA和CDK1较对照组显著下调(P＜0.05).结论:DADS可通过下调MCL1继而降低PCNA与CDK1表达,抑制K562细胞增殖,细胞阻滞于G2/M期,沉默MCL-1可增强DADS的作用.
关键词： 二烯丙基二硫 人白血病K562细胞 Mcl-1 G2/M期阻滞 siRNA -
茶多酚对K562细胞体外增殖影响的研究
目的验证茶多酚对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其作用机制.方法用MTr比色法观察茶多酚对K562细胞的生长增殖的影响;用流式细胞术观察茶多酚诱导K562细胞凋亡;用荧光分光光度计测定茶多酚处理后的K562细胞内Ca2+浓度的变化.结果与对照组相比,茶多酚处理后的K562细胞体外生长增殖受到抑制并诱发凋亡情况,并可使细胞内Ca2+浓度增高.结论茶多酚具有抑制K562细胞增殖,促进其凋亡的作用.
关键词： 茶多酚 细胞凋亡 人白血病K562细胞 -
青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562凋亡的实验研究
目的观察青蒿琥酯对人白血病细胞株K562抑制增殖和凋亡作用.方法通过MTT显色法观察不同浓度青蒿琥酯对K562的生长抑制作用,通过Annexin V/PI双标记法检测青蒿琥酯对K562细胞的凋亡诱导作用.结果青蒿琥酯在1～8μg/ml浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性;在2～8μg/ml浓度范围内青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系;4μg/ml浓度组的青蒿琥酯在0～72h内,诱导K562凋亡具有明显的时效关系.结论青蒿琥酯在体外能抑制K562细胞的增殖,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用.
关键词： 青蒿琥酯 人白血病K562细胞 凋亡 -
构建稳定表达RFP及嘌呤霉素抗性的K562细胞株
目的 构建稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和嘌呤霉素(puromycin)抗性的K562-PM-RFP细胞株,便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选.方法 采用PCR法获得RFP片段,将其插入到慢病毒pGC-FU-3FLAG-IRES-Puromycin 载体中获得pGC-PM-RFP重组质粒,经脂质体转染到293T 细胞中获得慢病毒LV-PM-RFP,有限稀释法检测慢病毒在293T细胞中的转染效率,用包装获得的慢病毒感染K562细胞,经嘌呤霉素筛选获得RFP阳性的K562-PM-RFP细胞株.结果 PCR及测序结果证实目的 基因RFP正确克隆至慢病毒质粒中,经慢病毒LV-PM-RFP感染的K562细胞能在嘌呤霉素抗性培养基中存活,并稳定表达RFP.结论 成功构建了慢病毒重组质粒pGC-PM-RFP,并获得了携带RFP及嘌呤霉素抗性基因的K562-PM-RFP细胞株.
关键词： 红色荧光蛋白 慢病毒重组质粒 嘌呤霉素 人白血病K562细胞 -
青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响
目的:了解青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响,在基因水平探讨青龙衣醇提物抑制K562细胞增殖的作用机制.方法:制备青龙衣醇提物,在37℃恒温、5％ CO2培养K562细胞.采用浓度为0.1、0.5、2.5、12.5、62.5 mg/mL的青龙衣醇提物分别处理K562细胞;采用倒置显微镜与荧光显微镜观察处理后K562细胞的形态改变,并采用流式细胞仪检测K562细胞周期.提取细胞的总RNA,生成cDNA,构建基因芯片,并检测基因表达的结果.结果:经过12.5 mg/mL青龙衣醇提物处理后,通过流式细胞仪测定细胞周期:G1期细胞占23.8％,S期占59.9％,G2期占16.3％;而对照组的细胞周期:G1期占22.9％,S期占72.4％,G2期占4.7％;经青龙衣醇提物处理的细胞中,G2期的细胞比例上升,S期细胞比例下降.管家基因为β-actin,构建的基因芯片的特异性、均一性与重复性均良好.表达上调的基因有chk1;下调的基因有cyclinB1、cyclinE1、cyclinD1、cdk4、cdk2、E2F1、PCNA、VEGF、DNA-Topo Ⅰ、DNA-PK、jnk和mcl-1.结论:青龙衣醇提物通过调控与细胞周期、血管生成、细胞凋亡有关的基因表达,抑制K562细胞的细胞周期进程,从而表现出抗肿瘤作用.
关键词： 青龙衣醇提物 人白血病K562细胞 基因芯片 细胞周期 -
JNK/MAPK信号通路在咖啡酸诱导人白血病K562细胞凋亡中的作用
目的:探讨c-Jun氨基末端激酶/促分裂原活化蛋白激酶(JNK/MAPK)信号通路在咖啡酸(caffeic acid)诱导人白血病K562细胞凋亡中的作用.方法:体外培养人白血病K562细胞,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞的存活率:采用荧光显微镜观察和PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot方法检测磷酸化JNK/MAPK蛋白、JNK/MAPK蛋白的表达.结果:咖啡酸能明显抑制K562细胞的生长,且可诱导K562细胞凋亡.JNK/MAPK磷酸化的激活.在予以SP600125(JNK/MAPK特异性抑制剂)预处理后,咖啡酸抑制K562细胞生长的作用明显减弱,凋亡细胞减少,细胞凋亡率下降,JNK/MAPK活性显著下降.结论:咖啡酸可诱导K562细胞凋亡,其作用机制可能通过激活JNK/MAPK.
关键词： 白血病 咖啡酸 人白血病K562细胞 细胞凋亡 JNK/MAPK -
Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其作用机制.方法 通过脂质体将化学合成针对Bmi-1基因的siRNA转染K562细胞,采用MTT法观察Bmi-1 siRNA对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测Bmi-1 siRNA对K562细胞中Bmi-1和P16蛋白表达的影响.结果 Bmi-1 siRNA能明显延长K562细胞的倍增时间、G1期比例增加;下调Bmi-1表达的同时上调P16蛋白表达.结论 体外化学合成的Bmi-1siRNA对K562细胞的体外增殖具有明显的抑制作用,下调Bmi-1蛋白表达的同时上调P16蛋白表达.
关键词： Bmi-1基因 小分子干扰RNA 人白血病K562细胞 p16蛋白 -
八棱丝瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的研究
用MTT法观察了八棱丝瓜核糖体失活蛋白体外抑制K562细胞生长及用AO/EB荧光法、DNA凝胶电泳、流式细胞术、电镜等方法观察其诱导K562细胞凋亡.结果发现:八棱丝瓜核糖体失活蛋白在抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡等方面有显著功效.并与时间及剂量依赖呈正相关.
关键词： 八棱丝瓜蛋白 核糖体失活蛋白 细胞凋亡 流式细胞术 人白血病K562细胞
