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2012年东台市肠出血性大肠埃希菌O157∶H7监测分析
目的 了解肠出血性大肠埃希菌O157∶H7在东台市动物宿主和腹泻患者中带菌及毒力基因携带与耐药情况. 方法 于流行季节采集动物宿主、腹泻患者粪便及生熟食品和苍蝇标本,mEC肉汤增菌后,用特异性免疫磁珠集菌、科玛嘉显色平板分离,纯化的菌株经生化鉴定,血清分型,以KB纸片法进行药敏试验,采用PCR方法检测uida基因和stx1、stx2、eaeA、hly等4种毒力基因. 结果 683份标本共检出O157∶H7菌株35株,检出率为5.12％,其中动物粪便检出率为10.59％(34/321),检出率高的为牛粪(26.92％),其次为山羊粪(7.50％)和猪粪(7.32％),腹泻患者的检出率为0.39％(1/256).35株菌株均检出eaeA和hly毒力基因,而牛粪中stx2、eaeA和hly等3种毒力基因组合型检出率达12.82％. 35株菌株对氨苄西林敏感率为14.3％,对其余17种抗生素敏感率均＞90％. 结论 东台市动物宿主和腹泻患者均不同程度携带肠出血性大肠埃希菌O157∶H7,且存在流行的潜在危险.
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江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌O157:H7监测分析
目的 了解建湖地区腹泻患者肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染情况,家禽、家畜O157∶H7带菌情况,水源水中O157∶H7污染情况. 方法 在2008年5月-9月采集腹泻患者和家禽、家畜的粪便以及水源水、肉制品、苍蝇等标本计836份,应用免疫磁珠浓集、山梨醇麦康凯琼脂(SMAC)分离、生化和血清学反应进行鉴定.结果 共检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7 阳性标本17份,其中腹泻患者阳性率为1.15%,4种动物粪便、肉制品均检出阳性标本,但水、苍蝇标本中均未检出阳性.菌株对青霉素耐药性高,达100%,对其他受试抗生素均敏感.结论 该地区腹泻患者和家禽、家畜中存在肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染,且具潜在的流行性危险.
关键词： 大肠杆菌O157∶H7 免疫磁珠分离法 监测 分析 -
应用免疫磁珠分离法及荧光定量 PCR技术快速检测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7
目的 建立免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)联合荧光定量PCR(real-time PCR)技术快速检测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的方法.方法 根据肠出血性大肠埃希菌O157∶H7抗原特异性基因rfbEO157设计引物和荧光探针,建立real-time PCR 检测体系,并检测其特异性及敏感性;用O157免疫磁珠特异性捕获标本菌液中的O157∶H7大肠埃希菌,结合real-time PCR对磁珠捕获菌细胞的DNA进行检测分析.结果 Real-time PCR检测结果显示,O157∶H7大肠埃希菌可产生荧光信号,而其他常见致病菌均未见明显荧光信号;采用IMS-real-time PCR方法检测标本,菌液含菌量为3.3×102 CFU/mL时即可被检出,检测全过程需时约4h.结论 IMS-real-time PCR检测方法具有特异性强、敏感度高、快速易操作等特点,该检测方法能提高O157∶H7大肠埃希菌的检出率和准确性,可用于标本的快速诊断、疾病监测和暴发疫情的病原学调查.
关键词： 免疫磁珠分离法 荧光定量PCR 大肠埃希菌O157∶H7 -
外周血CD34+细胞移植 (2)
6 异基因外周血CD34+细胞移植的临床应用6.1 MLA相合同胞移植 比较异基因骨髓移植而言，G-CSF动员的外周血白细胞分离产物中含的T淋巴细胞约多1个对数级。
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肠溶血素实验与产志贺氏毒素大肠菌其他检测方法的对比研究
目前应用的免疫磁珠分离法(IMS)、科玛嘉O157色选择琼脂和山梨醇麦康凯琼脂,均为O157特异性选择性试剂和方法.肠溶血素为已知产志贺氏毒素大肠菌(STEC)相关毒性因子之一[1] ,检测菌株肠溶血素的洗绵羊血琼脂平板,可筛查O157 STEC,也可筛查非O157血清型STEC大肠菌,如O26、O103、O111、O145[2],且不需特殊实验条件,适合一般实验室使用.为证实该法在河南省的使用价值,于2000年应用该方法检测了河南省在O157大肠菌疫区分离到的疑似O157大肠菌株142株.
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HLA-B27水平检测与强直性脊柱炎的相关性
目的 探讨HLA-B27检测在强直性脊柱炎临床诊断中的应用价值.方法 采用免疫磁珠分离技术和荧光显色技术相结合的单克隆干板法,对疑诊为强直性脊柱炎(AS)及有相似症状的854例患者进行HLA-B27检测.结果 确诊为AS的患者中HLA-B27阳性率为90.9%(20/22)且集中在中青年男性.结论 HLA-B27与AS的相关性是迄今为止所知的HLA与疾病相关性中强的,HLA-B27抗原检测可作为AS确诊的重要辅助指标.
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人骨髓来源的多能成体祖细胞分离纯化的实验研究
目的建立获取高纯度人骨髓来源的多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,对单个核细胞行贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、Gly-A免疫微磁珠负分选,流式细胞仪鉴定分选后提高细胞纯度.结果(1)通过MAPCs分选,平均每1×106/mL骨髓贴壁细胞可分选出约(5.1±2.8)×104/mL数量级的MAPCs,分选前后细胞活力分别为96.7%±1.7%和96.0%±2.4%,无明显差异;(2)流式细胞仪分析获取的CD45、Gly-A细胞纯度大于98%.结论CD45、Gly-A免疫微磁珠负分选可从骨髓单个核细胞中中分选出高纯度的MAPCs.
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双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞
目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式细胞术鉴定分选后细胞纯度;对传代到不同阶段的细胞进行CD45、GlyA流式细胞分析,初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性.结果通过miniMACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5～10)×104/ml的MAPCs,分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;自制的培养基培养分选后的MAPCs生长良好,长传代到第16代;流式细胞仪分析获取的CD45、G1yA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪分析传代第4、8、12代MAPCs,CD45-、G1yA-细胞纯度大于98%.结论CD45、GlyA miniMACS负分选可从骨髓中分离高纯度的MAPCs;MAPCs在本室自制的人MAPCs培养基中体外有较强的增殖能力,且能保持较长时间的稳定状态.
关键词： 人骨髓来源多能成体祖细胞 免疫磁珠分离法 分离纯化 细胞培养 流式细胞术 -
两种细胞因子诱导人骨髓多能成体祖细胞向肝样细胞分化的作用
本实验用免疫磁性分离(MACS)方法分选骨髓间充质干细胞(MSCs)亚群MAPCs[1],用成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)及肝细胞生长因子(HGF)诱导其向肝细胞方向分化,并采用不同方法鉴定了细胞分化能力.
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免疫磁珠分离法分选提纯骨髓造血干细胞CD117
目的: 探讨用免疫磁珠分离法(magnetic activated cell sorting,MACS)从小鼠股骨、胫骨分离纯化骨髓造血干细胞CD117的方法.方法: 收集小鼠骨髓细胞, 台盼蓝染色观察其活力,用免疫磁珠分离法分选CD117细胞,流式细胞仪检测荧光标记CD117表达阳性率.结果; 未分选前CD117细胞纯度为(41.56±18.77)%,MACS分选CD117细胞纯度(88.68±4.74)%,纯化前后有明显差异(P<0.05).结论: MACS阳性选择法分选系统能有效分选骨髓造血干细胞CD117.
