首页 > 文献资料
-
缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞损伤的动态观察
目的 探讨缺氧缺糖/复氧复糖不同时间点小鼠海马神经元细胞系HT22细胞损伤情况.方法 取对数生长期的HT22细胞,随机分为6组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)0 h组(OGD/R 0 h)、缺氧缺糖/复氧复糖12h组(OGD/R 12 h)、缺氧缺糖/复氧复糖24h组(OGD/R 24 h)、缺氧缺糖/复氧复糖48 h组(OGD/R48 h)、缺氧缺糖/复氧复糖72 h组(OGD/R 72 h).除正常对照组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6h后进行复氧复糖.倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,Bax、Bcl-2免疫荧光染色检测细胞凋亡情况.结果 正常组HT22细胞呈两极或多极,突起明显,突起之间相互交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性强,OGD/R各组细胞胞体轴突减少,细胞皱缩,胞质凝聚.与正常组比较,OGD/R各组细胞存活率均显著降低(P＜0.05),OGD/R 12 h至OGD/R 24 h达到低(P＜0.05);OGD/R 12 h及OGD/R 24 h组LDH显著升高(P＜0.05),OGD/R 0 h、48 h、72 h组均有升高趋势.除OGD/R0h组和OGD/R 72 h组外,OGD/R各组Bax/Bcl-2比值均较正常组显著升高(P＜0.05),峰值出现于OGD/R 24 h.结论 缺氧缺糖/复氧复糖细胞损伤是一个复杂的动态过程,随着复氧复糖时间的延长,细胞损伤不断加重,24 h达到顶峰,随后细胞损伤情况逐渐缓解.
-
天麻多糖对谷氨酸损伤HT22细胞的保护作用
目的 研究天麻多糖对谷氨酸损伤HT22细胞的保护作用.方法 HT22细胞经50 μg ·ml-1谷氨酸孵育6h损伤造模后,分别与12.5、25、50、100、200μg ·ml-天麻多糖共孵育24 h或与100 μg ·ml-1天麻多糖孵育3、6、12、24和48 h后,MTT法检测细胞活力,同时检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和活性氧簇(ROS)清除力.qRT-PCR检测兔抗鼠血红素加氧酶(HO-1)的mRNA水平,Western blot检测HO-1蛋白表达水平.结果 谷氨酸可明显降低HT22细胞活性、SOD活性、ROS清除能力和HO-1的mRNA和蛋白水平.与谷氨酸孵育模型组比较,不同浓度天麻多糖可显著提高谷氨酸损伤HT22细胞活性(P ＜0.05,P＜0.001).天麻多糖可同时明显恢复SOD活性和ROS清除能力(P＜0.05或P＜0.01),且具量效和时效关系.谷氨酸诱导下调的HO-1 mRNA水平和蛋白表达水平明显回升.结论 天麻多糖可减弱谷氨酸对HT22神经细胞的伤害,其机制可能与上调HO-1表达,改善细胞抗氧化能力有关.
-
枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧再灌注损伤的影响
目的:观察枸杞多糖对HT22细胞缺糖缺氧再灌注损伤的影响.方法:构建HT22细胞缺糖缺氧再灌注损伤模型,设正常组、模型组、枸杞多糖100,50和25 mg·L-1组,检测细胞存活率;并通过HE染色观察形态学改变;检测细胞内SOD,GSH-PX,MDA,T-AOC;利用流式细胞术检测线粒体膜电位.结果:构杞多糖100和50 mg·L-1组能明显提高细胞存活率,显著改善缺氧缺糖再灌注损伤引起的形态改变;可显著提高细胞内SOD,GSH-PX及T-AOC,减少MDA的产生;改善线粒体膜电位下降.结论:枸杞多糖能够显著减轻缺糖缺氧再灌注损伤引起的HT22细胞过氧化损伤.
-
β-淀粉样蛋白诱导HT22细胞建立阿尔茨海默病细胞模型
目的 探讨β-淀粉样蛋白(Aβ25 ～35)诱导HT22细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型.方法 将HT22细胞分为未分化组和分化组,未分化组加入完全培养基培养48 h,分化组为完全培养基贴壁生长24 h后加入分化液(Neurobasal培养基和N2添加剂)培养24 h,Western印迹检测两组细胞ATF6、PERK、IRE1蛋白表达量的变化.不同浓度的Aβ 25 ～ 35分别作用于两组HT22细胞24 h,用MTT测定细胞活力变化.结果 ATF6、PERK、IRE1蛋白在未分化组的表达量明显高于分化组.Aβ25 ～ 35对未分化组细胞虽有损伤作用,但各组间无明显差异,且无剂量依赖关系.Aβ25 ～35可以诱导分化组HT22细胞发生损伤,且呈剂量依赖关系,Aβ25 ～35(20 μmol/L、40 μmol/L)作用于分化组HT22细胞24h,细胞存活率分别为66％、60％,AD模型佳.结论 Aβ25 ～35(20 μmol/L)诱导分化型HT22细胞可建立佳AD细胞模型.
关键词： β-淀粉样蛋白 HT22细胞 阿尔茨海默病细胞模型 -
鹿茸多肽对冈田酸致大鼠海马神经元损伤时Tau、Bcl-2和Caspase-3表达的影响
目的:观察冈田酸诱导大鼠海马神经元(HT22细胞)损伤时神经元微管相关蛋白(Tau蛋白)和凋亡相关因子的变化,探讨鹿茸多肽对神经细胞损伤的保护作用,阐明其相关作用机制.方法:大鼠HT22细胞体外传代培养,冈田酸诱导HT22细胞损伤.HT22细胞分为正常对照组、DMSO对照组、冈田酸损伤模型组和不同浓度鹿茸多肽组(终浓度分别为50、500及1 000 mg·L-1),37℃、5％CO2孵育24 h.采用免疫细胞化学染色法、Western blotting法和RT-PCR法检测各组细胞中Tau蛋白磷酸化水平及凋亡相关因子Bcl-2和Caspase-3的表达.结果:免疫细胞化学染色法染色,磷酸化Tau蛋白的表达呈棕黄色颗粒,与正常对照组比较,冈田酸损伤模型组细胞中棕黄色颗粒明显增多;与冈田酸损伤模型组比较,500和1 000mg·L-1鹿茸多肽组细胞中棕黄色颗粒明显减少.Western blotting法检测,与冈田酸损伤模型组比较,各浓度鹿茸多肽组细胞中Tau蛋白表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01),1 000 mg·L-1鹿茸多肽组细胞中Bcl-2表达水平明显升高(P＜0.05),各浓度鹿茸多肽组细胞中Caspase-3表达水平均无明显变化(P＞0.05).RT-PCR法检测,与冈田酸损伤模型组比较,各浓度鹿茸多肽组细胞中Tau mRNA表达水平明显降低、Bcl-2 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05或P＜0.01),500和1 000 mg·L-1鹿茸多肽组细胞中Caspase-3 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:鹿茸多肽可能通过抑制Tau过度磷酸化及抑制细胞凋亡调控机制,对冈田酸诱导的神经细胞损伤起到保护作用.
-
阿司匹林可抑制吗啡引起的HT22细胞Wnt通路的激活
目的:研究阿司匹林对吗啡引起的Wnt通路的上调的影响.方法:在大鼠海马神经元元细胞系HT22细胞上建立了慢性吗啡成瘾模型,然后运用免疫荧光技术和Western blot技术检测wnt通路中β-catenin蛋白的表达变化变化,同时应用报告基因技术检测Wnt通路下游转录因子的活性.结果:在慢性吗啡成瘾模型组,β-catenin蛋白的表达显著增加,而在接受了6h的阿司匹林预处理的慢性吗啡成瘾模型组,β-catenin蛋白的表达受到了显著的抑制.结论:阿司匹林可抑制吗啡引起的Wnt/β-catenin通路水平的过表达.
-
白藜芦醇减轻神经元氧化应激损伤的作用机制研究
目的:观察白藜芦醇(RSV)对过氧化氢(H2O2)所致的海马神经元HT22细胞损伤的保护作用,并探讨超氧化物歧化酶2(Mn-SOD)在其中的作用.方法:采用体外培养HT22小鼠海马神经元细胞系,H2O2作为损伤因素模拟氧化应激损伤.将细胞分为5组,分别为正常培养组(Control)、150 μM H2O2损伤组(H2O2)、25μM白藜芦醇保护组(RSV+H2O2)、SOD2-siRNA干扰组(SOD2-siRNA+RSV+H2O2)和乱序RNA组(SC-siRNA+RSV+H2O2),药物暴露24 h后,应用MTT法检测HT22细胞活力、比色法检测乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)释放量、相差显微镜观测细胞形态.结果:与对照组相比,H2O2组的活力显著下降(P＜0.05),LDH释放量明显增加(P＜0.05),细胞形态明显破坏;25 μM的RSV显著恢复了HT22细胞的活力、减少了LDH释放、改善了细胞形态,而SOD2-siRNA显著逆转了RSV引起的上述保护作用,乱序RNA(SC-siRNA)未对上述保护作用产生明显影响.结论:白藜芦醇可能通过上调SOD2减轻H2O2对HT22细胞的氧化应激损伤.
-
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞DNA甲基转移酶表达和细胞周期的影响
目的:探究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞增殖及其对DNA甲基化转移酶(DNMT)表达的影响.方法:5-Aza-CdR处理HT22细胞,采用Real-time PCR和免疫印迹检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA及蛋白的表达;甲基转移酶活性试剂盒检测DNMTs活性;流式细胞仪对其细胞周期及凋亡进行检测.结果:5-Aza-CdR处理HT22细胞24 h后,不同浓度5-Aza-CdR均显著抑制HT22细胞增殖,且使胞质空泡化.5-Aza-CdR降低了HT22细胞早期凋亡,但促进晚期凋亡,并诱导细胞周期发生S期阻滞.DNMT1和DNMT3A的mRNA和蛋白表达下降,但DNMT3B表达未发生明显变化.DNMT1和DNMT3B活性降低.结论:5-Aza-CdR可降低DNMT1和DNMT3A mRNA和蛋白表达以及DNMT1和DNMT3B活性,影响HT22细胞周期及凋亡.
-
红景天苷对硝普钠损伤HT22细胞LC3和Beclin-1表达的影响
目的：观察红景天苷对硝普钠损伤小鼠海马细胞系神经细胞株HT22细胞LC3和Beclin-1表达的影响。方法：HT22细胞与1 mmol/L 硝普钠共同孵育不同时间，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide, MTT]法检测细胞活力；Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达水平。 HT22细胞与不同浓度红景天苷(60、120和240μmol/L)预孵育24 h后，加入1 mmol/L硝普钠损伤24 h。MTT法检测细胞活力；显微镜下观察各组细胞形态；免疫荧光染色检测LC3荧光强度；Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达水平。结果：1 mmol/L硝普钠可降低细胞活力，增加自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达，呈时间依赖性。红景天苷预处理可显著改善硝普钠损伤后的细胞生长状态和活力；抑制硝普钠损伤导致的LC3荧光强度的增加；拮抗硝普钠损伤后自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达的增加。结论：红景天苷可显著拮抗硝普钠诱导的HT22细胞损伤，其机制可能与抑制自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达有关。
-
FoxO3腺病毒载体的构建及对脑缺血损伤中自噬相关蛋白的影响
目的：构建转录因子FoxO3的过表达腺病毒载体AV-FoxO3，包装产生高滴度腺病毒；观察其感染氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation, OGD)损伤小鼠海马细胞系HT22细胞自噬相关蛋白表达的影响。方法：在GenBank中查询FoxO3基因及其上下游的序列，设计合成引物并在引物中引入HA序列，逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)体外扩增目的基因，用限制性内切酶NheⅠ-HF和Af1Ⅱ双酶切表达载体pAdeno-EF1-BGH-MCMV-EGFP-3FLAG，使用无缝克隆试剂盒将目的基因构建进表达载体中，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取转化子进行菌落PCR鉴定获得阳性克隆(FoxO3重组质粒)并测序；利用AdMax系统在 HEK293A 细胞中分别包装FoxO3重组质粒与对照质粒，得到AV-FoxO3和CMV-GFP-A.D.并测定病毒滴度；用AV-FoxO3和CMV-GFP-A.D.感染HT22细胞，荧光显微镜观察感染是否成功，Western Blot检测HT22细胞中HA蛋白(重组FoxO3序列中所含的标签蛋白)的表达；Western Blot检测OGD损伤HT22细胞中自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。结果：菌落PCR和测序结果均表明FoxO3重组质粒构建成功；与辅助质粒共包装感染细胞获得腺病毒颗粒，测定滴度分别为6.32×1010 Ifu/mL和4×1011 Ifu/mL；荧光观察及Western Blot检测均说明AV-FoxO3成功地感染了HT22细胞；FoxO3过表达促进自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。结论：AV-FoxO3构建成功并可用于HT22细胞的感染，增加细胞内FoxO3表达；FoxO3参与调控自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。
-
血清饥饿对HT22细胞FOXO1蛋白磷酸化的影响
目的:观察血清饥饿对HT22 细胞叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FOXO1)蛋白表达的影响,探讨FOXO1 蛋白在脑缺血损伤中的意义.方法:建立去血清饥饿损伤细胞模型,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞损伤,四甲基偶氮盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力;Western Blot 检测血清饥饿对HT22 细胞FOXO1 蛋白磷酸化的影响.结果:LDH 和MTT 结果显示随着血清饥饿时间的延长,细胞损伤增加,细胞活力逐渐下降,呈时间依赖性.去血清饥饿6 h 后,FOXO1 的Ser 319 位点磷酸化降低,Ser256 和Thr24 位点的磷酸化水平增加.结论:血清饥饿诱导的神经元损伤可以导致FOXO1 蛋白的磷酸化水平发生变化.
-
黄芪甲苷调控自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡
目的 探讨黄芪甲苷通过调控自噬,对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡的影响.方法 将HT22细胞随机分为正常组(Control)、模型组(Model)、溶剂对照组(DMSO)、黄芪甲苷组(AS-IV)、黄芪甲苷组加正常细胞组(AS-IV+N)、黄芪甲苷加自噬抑制剂组(AS-IV+3-MA)、自噬抑制剂组(3-MA)、自噬激活剂组(Rapa).除正常组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后复氧复糖.镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞存活率,LDH法检测细胞损伤,免疫荧光染色检测细胞凋亡.结果 与正常组比较,模型组细胞胞体突触减少,细胞皱缩,细胞间连接减少;细胞存活率明显降低,LDH漏出率、Bax/Bcl-2明显升高(P<0.01).与模型组比较,AS-IV组、Rapa组细胞存活率明显升高,LDH漏出率、Bax/Bcl-2明显降低(P<0.01);3-MA组细胞存活率明显降低,Bax/Bcl-2明显升高(P<0.01);AS-IV+3-MA组无明显差异.结论 黄芪甲苷可通过激活自噬,抑制缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡.
-
坏死性凋亡介导化学性缺氧引起的HT22海马神经元损伤和炎症
目的 探讨坏死性凋亡(necroptosis)是否参与化学性缺氧诱导的小鼠HT22海马细胞损伤和炎症.方法 采用化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)作用HT22细胞建立化学性缺氧损伤的细胞模型.蛋白质免疫印迹法测定受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)的水平;应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)测定海马细胞的存活率;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞培养液中的LDH活性;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平;ELISA法检测细胞培养液中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.结果 600 μmol·L-1 CoCl2作用HT22细胞36 h可产生明显的细胞毒性作用,使细胞存活率降至(52.0±2.65)%,成功建立化学性缺氧损伤的海马细胞模型;此外,CoCl2可引起HT22细胞的多种损伤和炎症,表现为培养液中LDH活性升高,ROS过度生成,MMP丢失以及炎症因子(IL-1β和TNF-α)分泌均增多.40~100 μmol·L-1坏死性凋亡抑制剂necrostatin-1(Nec-1)共处理可抑制CoCl2引起的HT22细胞存活率降低,其中80 μmol·L-1时对细胞毒性的抑制作用明显.同时,80 μmol·L-1 Nec-1可对抗CoCl2可引起HT22细胞的上述多种损伤和炎症.此外,CoCl2处理HT22细胞6~48 h可促进RIP3的表达水平,Nec-1可明显抑制CoCl2对RIP3表达的上调作用.结论 坏死性凋亡介导化学性缺氧诱导的HT22海马神经元损伤和炎症.
-
柿叶黄酮提取物对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的HT22细胞氧化应激的保护作用
目的 探讨柿叶黄酮提取物(FLDK)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的HT22细胞氧化应激的影响及其可能机制.方法 将HT22细胞随机分为正常对照组(Control组)、OGD/R组、OGD/R+FLDK治疗组(OGD/R+FLDK组)、OGD/R+FLDK+转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)基因沉默组(OGD/R+FLDK+si-Nrf2组).对HT22细胞氧糖剥夺3h并复糖复氧24h建立OGD/R模型;FLDK为自氧糖剥夺开始即加入,一直持续到复糖复氧结束;利用si-Nrf2阻断Nrf2通路.采用CCK-8法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率,试剂盒法测定丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测Nrf2及血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达.结果 与Control组相比,OGD/R组细胞活性下降(P＜0.001),细胞损伤率升高(P＜0.001),氧化产物ROS及MDA含量增加(P＜0.001),抗氧化酶SOD及GSH-Px活性下降(P＜0.001),全细胞HO-1蛋白表达升高(P=0.009)及胞核Nrf2蛋白表达升高(P=0.016);与OGD/R组相比,FLDK治疗可使细胞活性升高(P＜0.001),细胞损伤率降低(P＜0.001),氧化产物ROS及MDA含量下降(P＜0.001),抗氧化酶SOD及GSH-Px活性升高(P＜0.001),全细胞HO-1蛋白表达升高(P＜0.001)及核内Nrf2蛋白表达升高(P=0.005);与OGD/R+FLDK组相比,进行Nrf2基因沉默预处理后,HO-1蛋白表达下降(P＜0.001)及胞核Nrf2蛋白表达下降(P＜ 0.001),ROS含量增加(P＜0.001),细胞活性下降(P＜0.001).结论 柿叶黄酮提取物对OGD/R损伤的HT22细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关.
-
XIAP蛋白表达改变在铅诱导小鼠海马神经元细胞损伤中的作用
目的 探讨重金属铅暴露诱导小鼠海马神经元HT22细胞X连锁凋亡抑制蛋白(X1AP)表达的变化及其与小鼠海马神经元细胞损伤程度的关系. 方法 建立小鼠海马神经元细胞铅暴露模型,采用噻唑蓝法(MTT)筛选HT22细胞的佳生长密度,并检测醋酸铅0～100 μM暴露24 h和48 h后细胞活力的变化.Western blot方法检测HT22细胞铅暴露后XIAP蛋白表达水平的变化,免疫细胞荧光染色方法检测HT22细胞铅暴露后XIAP蛋白的表达水平及分布变化.结果 MTT法检测结果显示HT22细胞在5和10 μM醋酸铅处理48 h后,细胞增殖活力均明显低于对照组(5μM,P＜0.05;10 μM,P＜0.01).Western blot表明5和10 μM醋酸铅处理24和48 h组HT22细胞的XIAP蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学染色显示醋酸铅处理48 h后,HT22细胞中的XIAP蛋白也明显低于对照组. 结论 XIAP蛋白可能参与了铅暴露导致小鼠海马神经元细胞损伤.
关键词： 铅 HT22细胞 损伤 X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP) -
蛇床子素通过激活PI3K/Akt通路减轻谷氨酸诱导的海马神经元损伤
目的:研究蛇床子素(osthole,OST)减轻谷氨酸诱导的HT22细胞损伤的机制.方法:建立谷氨酸诱导的HT22细胞损伤模型;HT22损伤细胞经OST处理,MTS法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验检测HT22细胞LDH漏出率;caspase-3活性检测试剂盒测定各组caspase-3活性;Western印迹法测定细胞内磷脂酰肌醇(-3)激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K),蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt),磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化Akt(p-Ak)蛋白表达情况.结果:OST在0～ 10 mmol/L范围内呈剂量依赖性提高谷氨酸诱导的HT22细胞活力,降低LDH漏出率,改善HT22细胞损伤.此外,OST显著上调谷氨酸损伤细胞p-PI3K和p-Akt蛋白表达,而PI3K抑制剂LY294002明显抑制OST谷氨酸损伤细胞p-Akt蛋白表达的上调作用.结论:OST对谷氨酸损伤的HT22细胞具有保护作用,其保护作用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的.
-
人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响
目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.
-
三七总皂苷对过氧化氢诱导HT22细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究三七总皂苷(PNS)对氧化氢H2O2损伤后海马神经元HT22细胞的保护作用.方法 采用CCK-8法检测作用PNSHT22细胞后细胞生长活性的变化,并通H2O2刺激HT22细胞,观察PNS对HT22细胞活性的影响及形态变化.采用乳酸脱氢酶检测细胞损伤情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡比例.结果 PNS在有效浓度范围内对HT22细胞无毒性,且能增加细胞活性,减轻H2O2对其损伤程度.结论 PNS能通过增强细胞内抗氧化活性,提高HT22细胞的存活率,从而保护细胞抗氧化损伤.
-
银杏内酯A对L-谷氨酸致HT22细胞损伤作用的研究
目的 研究银杏内酯A对L-谷氨酸诱导HT22细胞损伤的影响.方法 ①体外培养HT22细胞,L-谷氨酸诱导细胞损伤,MTT法检测细胞存活率,确立L-谷氨酸对细胞损伤的浓度和时间依赖效应.②确立银杏内酯A对H T22细胞无毒范围,M TT法测定银杏内酯A对L-谷氨酸致HT22细胞存活率下降作用,蛋白质印迹检测银杏内酯A对凋亡相关因子表达和tau蛋白磷酸化水平的影响.结果 ①10 mmol/LL-谷氨酸与HT22细胞共孵育24 h是损伤模型的实验条件,银杏内酯A实验浓度范围内HT22细胞存活率无明显下降.②加入银杏内酯A共孵育后,细胞存活率出现明显上升,具有显性的差异,蛋白质印迹显示模型组Bax水平明显上升,Bcl-2水平明显下降,ptau (Ser202)水平明显上升,银杏内酯A干预组Bax水平明显下降,Bcl-2水平明显上升,ptau (Ser202)水平明显下降.结论 高浓度的L-谷氨酸对HT22细胞有明显的损伤作用,且损伤呈时间和剂量依赖性,而银杏内酯A对损伤具有逆转作用,可以明显提高细胞的存活率.银杏内酯A对HT22细胞的保护作用可能与其降低Bax的表达,增加Bcl-2的表达,并降低磷酸化微管相关蛋白ptau (S202)的表达有关.
-
同型半胱氨酸对海马神经元细胞HT22的毒性作用及其机制的探讨
目的 探讨同型半胱氨酸对海马神经元细胞系HT22细胞的毒性作用及其可能的相关机制. 方法 使用不同浓度的同型半胱氨酸(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmo/L)作用于分化培养后的HT22细胞,采用MTS分析检测细胞活力的变化.并同时使用N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK801和美金刚进行干预处理,进一步检测其对细胞活力的影响;使用Hoechst 33342和PI染色观察细胞死亡的形态学变化. 结果 同型半胱氨酸对分化培养后的HT22细胞具有剂量反应关系的毒性作用.半数有效浓度约在1.25 mmol/L.Hoechst33342和PI染色结果 显示低浓度同型半胱氨酸(1.0 mmol/L)主要引起细胞凋亡,而随着同型半胱氨酸浓度的增加(2.0 mmol/L),细胞则主要以坏死的形式存在.NMDA受体拮抗剂MK801和美金刚可有效的抑制同型半胱氨酸的神经细胞毒性.分别在10 μmol/L浓度时显示为明显的抑制作用,同单纯同型半胱氨酸作用组相比差异具有统计学意义(P<0.05). 结论 同型半胱氨酸对海马神经元细胞系HT22细胞具有明显的毒性作用,主要导致细胞的凋亡和坏死;其产生的神经毒性在很大程度上是通过激活NMDA受体起作用的.对于同型半胱氨酸-NMDA受体之间的作用的进一步研究将会提供神经元坏死的一个重要的研究方向.
关键词： 同型半胱氨酸 HT22细胞 细胞凋亡 N-甲基-D-天冬氨酸受体
