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蟾蜍灵抑制TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞-间充质细胞系转换
目的 探讨蟾蜍灵对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质细胞转换的影响.方法 将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:1)对照组;2)TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5 μg/L);3)蟾蜍灵+TGF-β1组:在细胞培养基中分别加入蟾蜍灵和TGF-β1(浓度为5μg/L),按蟾蜍灵的浓度分为A、B、C3个亚组:分别为1×10-9、1×10-8和1×10-7 mol/L.72 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态;用实时定量PCR、蛋白印迹法和免疫荧光检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.结果 TGF-β1组HK-2细胞从原有典型的铺路石样上皮细胞转变为长梭形肌成纤维细胞;胞质内大量表达cα-SMA,同时E-cadherin的表达明显减少(P＜0.叭);蟾蜍灵处理后TGF-β1诱导的细胞形态学改变减轻,胞质内α-SMA的表达减少(P＜0.05),同时E-cadherin的表达明显恢复,且呈剂量依赖性.结论 蟾蜍灵能有效抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转换,对肾脏病治疗具有潜在应用前景.
关键词： 蟾蜍灵 转化生长因子-β1 上皮细胞-间充质细胞转换 -
Twist2在神经胶质瘤中的表达及其意义
目的 探讨Twist2在神经胶质瘤中的表达意义及其是否通过上皮间质转化参与胶质瘤的恶性转化.方法 采用免疫组织化学法检测60例脑胶质瘤(包括WHO Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级各20例)及20例非肿瘤脑组织中Twist2蛋白的表达水平;采用即时荧光定量PCR法和Western blot分别检测61例胶质瘤(WHO Ⅱ级16例、Ⅲ级21例、Ⅳ级24例)和12例瘤旁新鲜组织中Twist2 mRNA和蛋白的表达水平,同时应用Western blot分别检测各组新鲜组织标本中E-cadherin、N-cadherin、波形蛋白表达水平.结果 免疫组织化学法结果显示:Twist2在胶质瘤中的表达阳性率为90%(54/60),在非肿瘤脑组织中为30%(6/20),两者差异有统计学意义(P<0.01);在胶质瘤WHO Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级中的表达阳性率分别为75%(15/20)、95%(19/20)、100%(20/20).WHO Ⅳ级、Ⅲ级显著高于Ⅱ级(P<0.01),WHOⅣ级与Ⅲ级的表达,差异无统计学意义(P>0.05).即时荧光定量PCR法和Western blot结果显示:Twist2在胶质瘤中的表达水平明显高于瘤旁组织(P<0.01);且WHOⅣ级、Ⅲ级中的表达均明显高于Ⅱ级,差异有统计学意义(P<0.01);胶质瘤WHOⅣ级和Ⅲ级比较,差异无统计学意义(P>0.05);Western blot检测上皮间质转化中关键蛋白表达水平结果:新鲜胶质瘤组织中E-cadherin蛋白表达水平与Twist2呈负相关(r=-0.972,P<0.01);N-cadherin、波形蛋白表达水平与Twist2均呈正相关(r=0.971,P<0.01;r=0.968,P<0.01).结论 Twist2在人神经胶质细胞瘤中存在表达,且与胶质瘤恶性等级呈正相关,其可能通过上皮间质转化参与胶质瘤的恶性进程.
关键词： 神经胶质瘤 Twist转录因子 上皮细胞-间充质细胞转换 -
Twist 及 YB-1基因表达上调与子宫颈癌上皮间质转化的相关性
目的：探讨Twist及YB-1基因在子宫颈癌组织中表达的临床病理意义及其与上皮间质转化标志物上皮细胞钙黏蛋白（ E-cadherin ）表达的相关性。方法选取2008年1月至2013年12月202例子宫颈组织标本，包括正常子宫颈组织50例、子宫颈上皮内瘤变（CIN）100例及宫颈鳞状细胞癌（SCC）52例，采用MaxVision法检测Twist、YB-1蛋白和E-cadherin，并对各组病例的表达差异进行卡方检验、相关性分析及回归模型分析。结果 Twist蛋白胞核高表达、YB-1蛋白胞质高表达与子宫颈上皮恶性转化、子宫颈癌的组织级别进展及转移能力提高相关。 Twist、YB-1蛋白高表达与E-cadherin低表达相关。回归分析提示Twist 蛋白的胞核表达是子宫颈癌进展的独立预测因子。结论 Twist和YB-1基因在子宫颈癌中过表达与CIN癌变、子宫颈癌侵袭及转移明显相关，其机制可能是通过（YB-1）-Twist-（E-cadherin）调节关系轴来实现上皮间质转化。 Twist和YB-1蛋白过表达可以预测子宫颈癌的恶性转化和转移。
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转化生长因子β1/Smads通路在百草枯中毒所致上皮-间充质转变和肺纤维化中的作用研究
目的 本研究通过观察百草枯诱导大鼠肺纤维化中转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路的上皮-间充质转变(EMT)现象及相关蛋白的表达.方法 将60只雄性大鼠分为对照组及百草枯组,每组各30只.百草枯组腹腔注射80 mg/kg百草枯建立中毒模型,对照组注射3 mL等渗NaCl溶液.分别在建模后1、3、7、14、21、28 d分批处死大鼠,比较两组大鼠肺组织湿干比重及羟脯氨酸水平,取左肺下叶予苏木素-伊红(HE)染色及Masson染色.评估肺组织病理学和肺纤维化程度,采用Western-blotting检测百草枯中毒后1、3、7、14、21、28 d肺组织中EMT相关指标和TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达.结果 两组各时间点肺湿干比重及羟脯氨酸水平的比较,差异有统计学意义(F=9.772、22.541,P均<0.001),且百草枯组湿干比重的比值在3、7、14、21、28 d均显著高于对照组(P均<0.05),而羟脯氨酸表达水平仅在14、21、28 d明显高于对照组(P均<0.05).病理结果显示百草枯组大鼠中毒后1~7 d,炎症细胞浸润,肺泡间质增厚水肿,中毒后21 d和28 d可见肺泡壁明显增厚及胶原纤维明显增生,而对照组大鼠肺组织无明显改变.对照组与百草枯组各时间点 TGF-β1、Smad2 / 3、p-Smad2 / 3、Smad4、p-Smad4、Smad7、p-Smad7、E-cad、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Vimentin和成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)表达水平的比较,差异均有统计学意义(F=10.685、7.381、7.878、10.743、14.575、17.791、33.200、14.453、10.849、25.415、26.263,P均<0.001),且百草枯组TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、p-Smad4、α-SMA、Vimentin及FSP-1表达水平逐渐升高,中毒后21 d达高峰(P均<0.05).而Smad7、p-Smad7及E-cad表达水平逐渐降低,Smad7、p-Smad7水平在中毒后7 d达到谷底;E-cad表达水平在中毒后21 d达到谷底(P均<0.05).结论 TGF-β1/Smads信号通路可能通过调节EMT过程影响百草枯诱导的肺纤维化发生.
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KLF4对胰腺癌上皮间质转化和侵袭能力的影响
目的 探讨Krǜppel样因子4(KLF4)对胰腺癌上皮间质转化(EMT)和侵袭能力的影响.方法 采用免疫组织化学染色法检测KLF4在70例胰腺癌和10例胰腺正常组织中的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性.构建针对KLF4的小发卡RNA(shKLF4)和阴性对照shRNA,分别转染胰腺癌PANC1细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测KLF4、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin) mRNA及蛋白的表达;采用划痕实验、Transwell小室检测细胞的侵袭和转移能力.结果 KLF4在胰腺癌组织中的阳性表达率(47.1％)显著低于胰腺正常组织(80.0％),且KLF4表达与胰腺癌肿瘤分级、分期和远处转移呈负相关.降低PANC1细胞中KLF4的表达后,E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均明显下调(F=25.71,P=0.0011),vimentin的mRNA和蛋白表达水平均明显上调(F =24.95,P=0.0012),细胞形态由上皮表型向间质表型转化,细胞划痕愈合能力(F=47.82,P＜0.001)、细胞迁移(F=53.68,P=0.0001)和侵袭(F=27.65,P=0.0009)能力均显著增强.结论 抑制KLF4表达可促进胰腺癌细胞EMT,并增强侵袭能力.
关键词： 胰腺肿瘤 上皮细胞-间充质细胞转换 转录因子 Krüppel样因子4 肿瘤转移 -
Id-1在肝细胞癌中表达及其在肿瘤转移中作用机制探讨
目的 探讨分化抑制因子-1(Id-1)在肝细胞癌(肝癌)组织中的表达及其在肿瘤转移中的作用机制.方法 标本来源于2014年1月至2016年12月在南昌大学第一附属医院接受肝切除的56例肝癌患者组织标本.患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定.其中男41例,女15例;年龄26～79岁,中位年龄55岁.45例癌旁肝组织和21例正常肝组织为对照.采用免疫组化法检测Id-1、E-cadherin、Vimentin和MMP-9表达.两组阳性率比较采用 χ2检验,并进行Spearman等级相关分析.结果 肝癌组织Id-1、E-cadherin、Vimentin、MMP-9表达阳性率分别为86％(48/56)、75％(42/56)、39％(22/56)、84％(47/56),明显高于对照组的62％(41/66)、33％(22/66)、15％(10/66)、47％(31/66)(χ2=8.57,13.62,10.73,11.08;P<0.05).肿瘤直径>5 cm患者Id-1阳性率为100％(24/24),明显高于直径≤5 cm患者的75％(24/32);转移患者Id-1阳性率97％(34/35),亦明显高于无转移患者的66％(14/21)(χ2=9.25,10.24;P<0.05).Id-1表达强度与肝癌分化程度呈负相关(rs=-0.295,P<0.05).Id-1表达与E-cadherin、MMP-9表达呈负相关(rs=-0.432,-0.326;P<0.05),而与Vimentin表达呈正相关(rs=0.713,P<0.05).结论 Id-1在肝癌中高表达,其可能机制为通过诱导上皮-间质转化和降解细胞外基质而促进肝癌侵袭转移.
关键词： 癌 肝细胞 肿瘤侵润 肿瘤转移 上皮细胞-间充质细胞转换 -
Kindlin-2诱导胆囊癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移的实验研究
目的 探讨黏着斑蛋白Kindlin-2对胆囊癌细胞生物学行为的影响及相关分子机制.方法 收集2012年9月至2013年5月在郑州大学第一附属医院肝胆胰外科接受手术切除的30例胆囊癌组织和癌旁组织标本.使用real-time PCR和免疫组化方法检测胆囊癌组织和癌旁组织标本中Kindlin-2表达水平;通过构建质粒和转染使胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996过表达Kindlin-2,应用细胞黏附实验观察胆囊癌细胞与胞外基质的黏附能力,通过Transwell侵袭实验及细胞划痕实验观察胆囊癌细胞的侵袭迁移能力改变;采用免疫印迹法检测过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞上皮间质转化相关标记蛋白的变化.分别使用t检验和 χ2检验对计量资料和计数资料进行统计学分析.结果real-time PCR和免疫组化检测结果显示,Kindlin-2在人胆囊癌组织中表达水平高于癌旁组织(t=4.372,P=0.001;t=7.477,P=0.000),肿瘤组织Kindlin-2表达水平与Nevin分期密切相关(χ2=5.932,P=0.035);细胞黏附实验结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996与细胞外基质分子纤连蛋白Fibronectin的黏附能力较对照组增强(1.66±0.03比1.07±0.22,t=2.710,P=0.041;2.66±0.24比1.03±0.02,t=6.610,P=0.020);Transwell侵袭实验结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996穿过Transwell小室基质的细胞数较对照组明显增多(116.1±13.9比54.7±8.4,t=3.781,P=0.0194;136.3±7.5比64.3±6.4,t=7.302,P=0.002);细胞划痕实验结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD 12 h和24 h划痕修复率高于对照组[(42.9±2.2)％比(29.7±1.7)％,t=4.690,P=0.009;(65.0±2.4)％比(40.4±2.0)％,t=7.945,P=0.001],过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株SGC-99612 h和24 h划痕修复率高于对照组[(32.9±1.3)％ 比(24.1±1.5)％,t=4.518,P=0.011;(51.3±1.1)％ 比(39.2±1.1)％,t=8.001,P=0.001];免疫印迹法检测结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞间质化表型神经钙黏素、波形蛋白表达上调而上皮化表型上皮钙黏素表达降低.结论 Kindlin-2在胆囊癌组织中表达水平升高,且可通过诱导上皮细胞间质转化促进胆囊癌细胞与胞外基质黏附、侵袭迁移等恶性行为.
关键词： 胆囊肿瘤 上皮细胞-间充质细胞转换 Kindlin-2 -
转录因子Brachyury在肿瘤细胞EMT过程中作用的研究进展
上皮间充质转化(EMT)指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程.EMT在胚胎发育、慢性炎性反应、组织重建和癌症转移中发挥重要作用.EMT过程被一组转录因子调控,其中包括T-box家族成员Brachyury.Brachyury因子促进EMT及肿瘤细胞的迁徙和播散.Brachyury因子与EMT过程相关的信号通路主要有TGF-β信号通路、FGF/FGFR信号通路和Wnt/β-连环蛋白信号通路等.Brachyury因子是一个很有潜力的T细胞介导肿瘤免疫治疗的候选靶标.本文对转录因子Brachyury在肿瘤细胞EMT过程中的作用进行综述.
关键词： 转录因子 Brachyury 上皮细胞-间充质细胞转换 -
Yes相关蛋白1和胶原三股螺旋重复蛋白1在三阴性乳腺癌中的表达及其与E-钙黏蛋白表达的相关性
目的 探讨Yes相关蛋白1(YAP1)和胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在三阴性乳腺癌(TNBC)中表达的临床意义及与E-钙黏蛋白表达的相关性.方法 采用免疫组织化学SABC法检测2006年1月至2017年12月丹东市第一医院73例TNBC患者肿瘤组织和相应癌旁组织中YAP1、CTHRC1的表达,采用χ2检验和Spearman法分别分析其与患者临床病理特征的关系及其与E-钙黏蛋白表达的相关性.结果 YAP1和CTHRC1在TNBC中的表达率分别为71.23％(52/73)、79.45％(58/73),在癌旁组织中的表达率分别为13.70％(10/73)、27.40％(20/73),二者在两组间差异均有统计学意义(χ2值分别为49.452、39.748,均P<0.01).YAP1、CTHRC1的表达均与肿瘤分级、临床分期及淋巴结转移相关(YAP1:χ2值分别为10.244、8.754、6.914,均P<0.05;CTHRC1:χ2值分别为12.582、13.172、6.400,均P<0.05),与患者年龄、 肿瘤直径及绝经状况无关(均P>0.05).TNBC中YAP1、CTHRC1和E-钙黏蛋白表达均呈负相关(r=-0.371,P=0.001;r=-0.323,P=0.005).结论 YAP1、CTHRC1与TNBC的发生、发展密切相关,可能是通过上皮-间质转化过程参与了TNBC的侵袭.
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尼日菌素对人上皮性卵巢癌细胞的抑制作用及其机制研究
目的 探讨尼日菌素对人上皮性卵巢癌(EOC)A2780和SKOV3细胞的抑制作用,以及尼日菌素抑制细胞迁移和侵袭可能的分子机制.方法 用不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L)尼日菌素分别作用于A2780和SKOV3细胞,二甲基亚砜(DMSO)处理细胞作为对照组,通过CCK-8法检测不同浓度的尼日菌素对EOC细胞增殖的影响.将A2780和SKOV3细胞分别分为3组:尼日菌素5、10、20 μmol/L处理组,同时以DMSO处理作为对照组,通过Transwell实验分析尼日菌素对EOC细胞迁移及侵袭能力的影响.采用蛋白质印迹法检测经不同浓度尼日菌素处理后上皮细胞-间充质细胞转化(EMT)过程中上皮细胞标志物 E-cadherin、间叶细胞标志物Vimentin以及相关转录因子Slug、Snail 和Twist 的表达,并分析Wnt-β-catenin 信号通路相关蛋白Gsk-3β、p-Gsk-3β和β-catenin的表达变化情况.结果 CCK-8实验结果发现,尼日菌素对A2780细胞[半抑制浓度(IC50)(16.19± 0.26)μmol/L]和SKOV3细胞[IC50(11.87±0.21)μmol/L]具有细胞毒性作用(P＜0.05).Transwell迁移实验结果显示,随着尼日菌素作用浓度(5、10、20 μmol/L)的增加,穿膜的A2780和SKOV3细胞数较对照组减少[(121±9)、(92±7)、(59±5)个/高倍视野和(120.4±2.6)、(91.8±5.5)、(80.0± 4.0)个/高倍视野,均P＜0.05];Transwell侵袭实验显示,A2780和SKOV3细胞的侵袭能力同样随着尼日菌素作用浓度的增加而受到抑制,并呈浓度依赖性下降[(61.2±3.7)、(43.2±4.3)、(23.6± 2.1)个/高倍视野和(85.2±7.0)、(65.2±4.6)、(45.6±4.4)个/高倍视野,均P＜0.05].E-cadherin的表达随着尼日菌素作用浓度(5、10、20 μmol/L)的增加而升高,而Vimentin、Slug、Snail、Twist、p-Gsk3β、β-catenin的表达呈浓度依赖性减少(P＜0.05).结论 尼日菌素可能通过激活Wnt-β-catenin 信号通路诱导EOC细胞发生EMT,从而促进EOC细胞的迁移和侵袭.
关键词： 卵巢肿瘤 尼日菌素 上皮细胞-间充质细胞转换 细胞迁移 细胞侵袭 -
上皮间质转化与喉癌研究进展
研究表明上皮间质转化在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用,其中涉及的分子机制十分复杂.喉癌作为常见的恶性肿瘤之一,发病率高,上皮间质转化参与喉癌的侵袭转移过程.本文就喉癌中上皮间质转化研究进展做一综述.
关键词： 喉肿瘤 上皮细胞-间充质细胞转换 肿瘤转移 -
乙醇诱导舌鳞状细胞癌上皮细胞间质转化
目的：探讨乙醇对舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞上皮间质转化的影响。方法乙醇诱导TSCC细胞株SCC9和SCC15，倒置显微镜下观察处理前后细胞形态及排列情况；Wound healing和Transwell实验检测乙醇处理前后细胞迁移和侵袭能力；Western blot和免疫荧光检测E?cadherin和Vimentin表达情况。数据分析采用SPSS 19.0统计软件，计数资料之间比较采用卡方检验，E?cadherin和Vimentin蛋白表达变化采用单因素方差分析。结果倒置显微镜下可见乙醇诱导后的SCC9和SCC15细胞由上皮细胞形态向间质细胞形态转化，细胞失去极性和紧密连接，由多边形、铺路石样转变为类似成纤维细胞样形态，细胞呈梭形，部分伸出伪足，细胞间隙增宽甚至丧失，排列较为杂乱、松散；Wound healing实验中，乙醇处理后的SCC9和SCC15细胞划痕愈合更快，迁移能力明显增强（χ2SCC9，24 h=15.668，PSCC9，24 h=0.001；χ2SCC15，24 h=4.703，PSCC15，24 h=0.028；χ2SCC9，48 h=3.391，PSCC9，48 h=0.042；χ2SCC15，48 h=2.386，PSCC15，48 h=0.136）；Transwell实验则证实乙醇处理后的SCC9和SCC15细胞的侵袭能力明显增强，SCC9相对侵袭率为384.24%（χ2=26.917，P＜0.001），SCC15相对侵袭率为428.49%（χ2=32.880， P＜0.001）；Western blot和免疫荧光结果显示乙醇诱导后SCC9和SCC15细胞E?cadherin表达下调（F=131.533，PSCC9＜0.001，PSCC15=0.001），Vimentin表达上调（F=355.388，PSCC9＜0.001，PSCC15＜0.001）。结论乙醇可诱导TSCC细胞发生上皮间质转化，促进其侵袭和迁移。
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微小RNA-138通过调控上皮间质转化抑制乳腺癌侵袭和迁移的机制研究
目的 探讨微小RNA(miR)-138通过调控上皮间质转化(EMT)影响乳腺癌细胞侵袭和迁移的分子机制.方法 2017年7月至2018年6月采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231转染miR阴性对照模拟物(miR-NC)和miR-138模拟物后miR-138表达量;MTT法检测乳腺癌细胞活性;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移距离和侵袭率.RT-PCR检测转染miR-138模拟物后EMT关键分子Vimentin、N-cadherin和E-cadherin mRNA表达量.结果 MCF-10A中miR-138表达水平明显高于MCF-7和MDA-MB-231(1.006±0.009比0.324±0.027和0.512±0.068),差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7和MDA-MB-231 miR-138表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).MCF-7和MDA-MB-231转染miR-138模拟物后第3和4天乳腺癌细胞活性明显低于转染miR-NC(MCF-7:0.514±0.052比0.593±0.061和0.643±0.074比0.784±0.081;MDA-MB-231:0.552±0.043比0.614±0.063和0.673±0.074比0.792±0.077),差异有统计学意义(P<0.05).MCF-7和MDA-MB-231转染miR-138模拟物后乳腺癌细胞迁移距离和侵袭率明显低于转染miR-NC(MCF-7:0.572±0.051比1.003±0.012和0.624±0.043比1.002±0.007,MDA-MB-231:0.472±0.051比1.003±0.095和0.573±0.044比1.004±0.091),差异有统计学意义(P<0.05).MCF-7和MDA-MB-231转染miR-138模拟物后Vimentin和N-cadherin mRNA表达量明显低于转染miR-NC,而E-cadherin mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-138在乳腺癌细胞中表达量降低;miR-138可以抑制乳腺癌细胞增殖,并通过调控EMT过程抑制细胞侵袭和迁移能力.
关键词： 乳腺肿瘤 RNA 上皮细胞-间充质细胞转换 肿瘤侵润 肿瘤转移 -
腺样囊性癌恶性表型与SNAI和EMT相关性的研究进展
腺样囊性癌虽早期病程缓慢，但具有明显侵袭性生长、远处转移、治疗抵抗等临床表现，预后较差。近期研究发现上皮间充质转化及以SNAI基因为核心的众多因子参与腺样囊性癌的侵袭转移过程，为我们深入了解腺样囊性癌的转移和侵袭机制打开了新的思路。
关键词： 腺样囊性癌 SNAI转录因子 上皮细胞-间充质细胞转换 -
阻断JAK2/STAT3信号通路对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织上皮细胞间充质转分化的影响
目的 探讨JAK2/STAT3信号通路是否参与了尿毒症腹膜透析(PD)大鼠腹膜间皮细胞上皮细胞-间充质转分化(EMT).方法 Sprague-Dawley雄性大鼠按照随机数字表法被分为6组:正常对照组、假手术组、尿毒症组、腹膜透析组、S3I-201对照组、S3I-201组,每组均8只.构建5/6肾切除尿毒症腹膜透析大鼠模型,腹膜透析组、S3I-201对照组、S3I-201组每天经腹透管注入4.25％葡萄糖腹膜透析液(3 ml/100 g体重),S3I-201组大鼠隔天经腹透管注入STAT3抑制剂S3I-201(2.5 mg/kg),同时S3I-201对照组经腹透管注入等量的S3I-201溶剂.透析28 d后分别检测腹膜功能、腹膜病理变化和毛细血管密度(MVD),血液和腹透液中的肌酐值和IL-6浓度,大鼠腹膜组织中p-JAK2、p-STAT3的活化状态,以及E-cadherin、α-SMA和VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,尿毒症组和腹膜透析组大鼠腹膜功能呈现超滤衰竭状态,腹膜厚度和MVD增加,透析液和血清中IL-6浓度升高,E-cadherin表达降低,α-SMA、VEGF、p-JAK2和p-STAT3的表达升高.与尿毒症组相比,腹膜透析组腹膜功能进一步恶化,腹膜厚度和MVD增加(均P＜ 0.01),透析液和血清中IL-6浓度升高(均P＜0.01),E-cadherin表达降低,α-SMA、VEGF、p-JAK2和p-STAT3的表达升高.S3I-201对照组与腹膜透析组相比较,各指标差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).与S3I-201对照组相比,S3I-201组腹膜功能得到改善,腹膜厚度和MVD减少(均P＜ 0.01),透析液和血清中IL-6浓度降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达增加(均P＜0.05),α-SMA、VEGF、p-JAK2和p-STAT3 mRNA和蛋白的表达降低(均P＜ 0.05).结论 抑制STAT3后,腹膜透析大鼠腹膜厚度、血管新生和IL-6浓度均降低,EMT也被抑制,腹膜功能得到改善.因此,JAK2/STAT3信号通路可能通过调节IL-6的表达参与尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织EMT.
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AntagomiR-103协同阿霉素对TGF-β1诱导的HepG2细胞转化及生长的影响
目的:探讨antagomiR-103协同阿霉素(ADM)对TGF-β1诱导肝癌细胞(Hep G2)发生上皮-间质细胞转化(EMT)及Hep G2细胞存活率的影响.方法:Hep G2细胞体外培养,设为control组、TGF-β1组、TGF-β1+ADM组、TGF-β1+microRNA inhibitor N.C组、TGF-β1+ADM+microRNA inhibitor N.C组、TGF-β1+an-tagomiR-103组、TGF-β1+ ADM+ antagomiR-103组及使用western-blot检测EMT标志蛋白N-Cadherin、E-Cadher-in、vimentin的表达水平;设control组、TGF-β1组、antagomiR-103组、TGF-β1+ antagomiR-103组,用不同浓度的ADM作用于各组细胞24h,使用MTT法检测细胞存活率,并计算IC50.结果:与control组相比,antagomiR-103+ ADM组E-Cadherin表达上调,N-Cadherin、Vimentin表达下调;细胞存活率随ADM浓度的增高而逐渐降低;在ADM浓度相同的条件下,不同药物预处理组之间进行比较,当ADM浓度为25 mg/L时,antagomiR-103+ ADM组的细胞存活率明显低于其他组.结论:antagomiR-103联合ADM可抑制TGF-β1诱导发生EMT的Hep G2细胞存活.
关键词： 药物疗法 联合 肝肿瘤 细胞 antagomiR-103 阿霉素 上皮细胞-间充质细胞转换 TGFβ-1
