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尼日菌素对人上皮性卵巢癌细胞的抑制作用及其机制研究
目的 探讨尼日菌素对人上皮性卵巢癌(EOC)A2780和SKOV3细胞的抑制作用,以及尼日菌素抑制细胞迁移和侵袭可能的分子机制.方法 用不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L)尼日菌素分别作用于A2780和SKOV3细胞,二甲基亚砜(DMSO)处理细胞作为对照组,通过CCK-8法检测不同浓度的尼日菌素对EOC细胞增殖的影响.将A2780和SKOV3细胞分别分为3组:尼日菌素5、10、20 μmol/L处理组,同时以DMSO处理作为对照组,通过Transwell实验分析尼日菌素对EOC细胞迁移及侵袭能力的影响.采用蛋白质印迹法检测经不同浓度尼日菌素处理后上皮细胞-间充质细胞转化(EMT)过程中上皮细胞标志物 E-cadherin、间叶细胞标志物Vimentin以及相关转录因子Slug、Snail 和Twist 的表达,并分析Wnt-β-catenin 信号通路相关蛋白Gsk-3β、p-Gsk-3β和β-catenin的表达变化情况.结果 CCK-8实验结果发现,尼日菌素对A2780细胞[半抑制浓度(IC50)(16.19± 0.26)μmol/L]和SKOV3细胞[IC50(11.87±0.21)μmol/L]具有细胞毒性作用(P＜0.05).Transwell迁移实验结果显示,随着尼日菌素作用浓度(5、10、20 μmol/L)的增加,穿膜的A2780和SKOV3细胞数较对照组减少[(121±9)、(92±7)、(59±5)个/高倍视野和(120.4±2.6)、(91.8±5.5)、(80.0± 4.0)个/高倍视野,均P＜0.05];Transwell侵袭实验显示,A2780和SKOV3细胞的侵袭能力同样随着尼日菌素作用浓度的增加而受到抑制,并呈浓度依赖性下降[(61.2±3.7)、(43.2±4.3)、(23.6± 2.1)个/高倍视野和(85.2±7.0)、(65.2±4.6)、(45.6±4.4)个/高倍视野,均P＜0.05].E-cadherin的表达随着尼日菌素作用浓度(5、10、20 μmol/L)的增加而升高,而Vimentin、Slug、Snail、Twist、p-Gsk3β、β-catenin的表达呈浓度依赖性减少(P＜0.05).结论 尼日菌素可能通过激活Wnt-β-catenin 信号通路诱导EOC细胞发生EMT,从而促进EOC细胞的迁移和侵袭.
关键词： 卵巢肿瘤 尼日菌素 上皮细胞-间充质细胞转换 细胞迁移 细胞侵袭 -
尼日菌素对前列腺癌DU145细胞Wnt/β-catenin信号传导的影响
目的 研究尼日菌素对前列腺癌DU145细胞的作用及其对Wnt/β-catenin信号传导的影响.方法 体外使用5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L的尼日菌素处理前列腺癌DU145细胞,同时以DMSO处理作为对照组.用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测尼日菌素对DU145细胞增殖活力的影响.以Transwell迁移侵袭实验检测药物对细胞的迁移侵袭能力的影响.用Western免疫印迹技术、免疫荧光及TOP/FOP-flash荧光报告试验检测尼日菌素对DU145细胞中β-catenin蛋白的表达及其下游靶基因c-myc及cyclin D1的表达以及对TCF/LEF转录因子活性的影响.结果 尼日菌素对前列腺癌DU145细胞有明显的细胞毒性作用,可以抑制其侵袭和转移;尼日菌素可以降低DU145细胞中β-catenin蛋白的表达,从而阻断Writ信号的传导,抑制下游转录因子的活性、降低靶基因的表达水平.结论 尼日菌素可显著抑制前列腺癌细胞的侵袭与转移,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号传导相关.
