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尿蛋白质组学在泌尿系统疾病生物标记物鉴定中的应用
1 正常尿液的蛋白质组学研究因为无创性优点,尿蛋白质组学研究成为人类蛋白质组学研究的重要领域.1996年, Marshall和Williams[1]用"染料沉淀法"浓缩正常成人尿液,再以双向电泳进行分析,成功建立了正常人尿液蛋白的2-DE凝胶图谱,但是未进行进一步的分析鉴定.这是应用蛋白质组学技术分析正常人尿蛋白成分的第一步.
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尿蛋白质组分析及其在病原生物学领域的应用
近年来,新发传染病不断出现,过去认为已得到有效控制的传染病死灰复燃,病原生物对人类健康的威胁日益增加.传统的病原生物学诊断方法的研发周期较长,许多疾病尚无可靠的诊断试剂和可用的预防性疫苗,病原生物学研究急需新的技术方法来解决目前所面临的严峻问题.尿蛋白质组学研究的技术方法多样,高通量、高灵敏度,能够对尿液中存在的蛋白质或多肽进行微量分析并且能够得到结构信息,具有潜在的快速准确获得患者尿液中病原生物标志物的特点,在疾病的快速诊断、病程监测以及药物靶点分析中具有重要的意义和应用前景.本文重点综述了尿蛋白质组学研究的策略、方法及其在病原生物学研究领域的应用,提出了建议和展望.
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阿霉素肾病大鼠尿蛋白质组质谱的检测及中药肾康灵的干预作用
目的:应用尿蛋白质组学筛选阿霉素肾痛(AN)大鼠尿液中差异表达的蛋白质,并检测中药肾康灵的干预作用,旨在蛋白质分子水平探索频复发性肾病(FRNS)的诊断标记物及药物治疗的作用靶点.方法:用阿霉素(ADR)5.5 mg/kg诱导大鼠复制的阿霉素肾病(AN)模型,即类似于人类微小病变型(MCD)肾病模型.实验共分为5组,分别为正常组(A组)、AN病模组(B组)、泼尼松治疗组(C组)、泼尼松+肾康灵(低浓度)治疗组(D组)、泼尼松+肾康灵(高浓度)治疗组(E组).利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术联合CM10蛋白质芯片技术检测各组大鼠尿蛋白质组质谱的表达,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机自动收集数据,使用Ciphergen Proteinchip Software 3.2.1和Biomarker Wizard分析软件筛选出各组大鼠尿液差异表达的蛋白质.并观察各组治疗前后尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)及肾脏病理形态学等变化.结果:在质荷比值(M/Z)2 000～50 000范围内(P<0.05),芯片共捕获到近40种差异蛋白质,质谱仪筛选出B组与A组比较的38种差异蛋白,其中3种差异蛋白从B组→C组→D、E组→A组呈递减趋势.这3种差异蛋白峰的M/Z值分别为9 321.0、9 393.1、9 477.5.结论:SELDI-TOF-MS能有效分析阿霉素肾病大鼠尿液蛋白质质谱,中药肾康灵干预治疗后蛋白质质谱表达差异有统计学意义,且中药肾康灵联合泼尼松治疗AN大鼠的疗效优于单用泼尼松治疗.
关键词： SELDI-TOF-MS技术 CM10芯片 肾康灵 阿霉素肾病 尿蛋白质组学 -
尿蛋白质组学在移植肾急性排斥中的研究进展
目前临床上诊断移植肾急性排斥反应(acute rejection,AR)的方法主要包括临床表现、肾功能检查(主要为血肌酐)及移植肾穿刺活检.然而临床表现缺乏特异性.血肌酐是目前移植肾发生AR初可观察到的指标,但是它缺乏特别的灵敏性和特异性[1],常需要随之的肾穿刺活检来证实;其次它不能反映早期AR,只有当AR严重到损害肾功能时血肌酐才会升高.
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应用SELDI-TOF-MS筛选激素耐药型肾病综合征患儿尿液生物标志物
目的 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术筛选激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿尿液生物标志物.方法 激素敏感型肾病综合征(SSNS)组32例,SRNS组9例,正常对照组45例,应用会芯片检测各组尿液标本.结果 SRNS有差异明显的生物标志物4个,相对分子量分别为6 703、7 212、11 820、14 356,其中7 212、11 820、14 356差异表达蛋白质在SRNS呈高表达,在SSNS呈低表达,6 703差异表达蛋白质在SSNS高表达,在SRNS低表达.4个蛋白质峰[6 703、7 212、11 820、14 356质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别SRNS和SSNS,灵敏度为88.89%,特异度93.75%.结论 SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是一种无创、快速、简便易行、用量少和高通量分析方法,能直接筛选出SRNS患儿尿液中的生物标志物,具有较好的临床应用价值.[临床儿科杂志,2010,28(2):183-1807
关键词： 表面增强激光解吸电离化飞行时间质谱 尿蛋白质组学 肾病综合征 尿 激素 -
尿蛋白质组学在肾脏疾病生物标志物鉴定中的作用
肾脏的主要功能之一是对血液的超滤作用形成原尿,经肾小管重吸收后形成终尿排出体外.正常尿液中可含有少量的蛋白成分,如白蛋白、糖蛋白和β2-微球蛋白等.在肾脏疾病中,不仅有尿蛋白量的改变而且可能存在尿蛋白成分的异常.因此,完全有可能将尿中出现的一些特殊蛋白成分作为特异性的"生物标志物"(biomarker),用于诊断肾脏疾病或监测疾病的进程."尿生物标志物"不是一个新的概念,早在1940年就发现尿"本-周蛋白"(BenceJones protein)可作为诊断多发性骨髓瘤的生物标志物[1].但是,疾病状态下常常不是单一尿蛋白成分的变化,加之长期以来缺乏高通量、敏感、特异的尿蛋白分离和鉴定技术,限制了对尿生物标志物的进一步确定和研究.
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微小病变型肾病综合征激素耐药和敏感的比较尿蛋白质组学研究
目的 研究儿童微小病变型激素耐药与激素敏感型肾病综合征的尿中差异蛋白质表达,鉴定出肾病综合征激素耐药相关蛋白.方法 应用双向电泳相关技术结合基质辅助激光/电离飞行时间质谱仪技术,比较激素敏感和激素耐药微小病变型肾病综合征尿蛋白表达图谱寻找差异蛋白,对差异蛋白质斑点酶切,质谱分析,获得肽质量指纹图,通过蛋白质数据库进行蛋白检索分析.结果 成功地得到儿童微小病变型肾病综合征激素耐药尿蛋白双向电泳图谱.肾病综合征耐药型与激素敏感型蛋白表达比较,发现有30个蛋白质斑点显著差异改变.对14个差异蛋白质斑点酶切,质谱分析结合蛋白数据库检索获得12个蛋白,分别为驱动蛋白家族成员27、磷脂酰丝氨酸转移蛋白、大疱性类天疱疮抗原1异构体、α1蛋白酶抑制剂、Zn-α2糖蛋白、α1B糖蛋白、血清白蛋白前体、结合珠蛋白前体、类驱动蛋白样动力蛋白、白介素1受体相关激酶4、胞质动力蛋白、细胞角蛋白9.与激素敏感蛋白图谱比较,在激素耐药蛋白图谱上蛋白酶抑制剂、α1B糖蛋白、IRAK4表达下调,其余9种蛋白表达上调.结论 上述蛋白的鉴定将对激素耐药治疗靶位和耐药型肾病综合征诊断的分子标志物发现可能有所裨益.
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尿蛋白质组学在IgA肾病中的研究进展
以往IgA肾病的临床诊断主要依赖于肾活检,而肾活检不仅费用高、有相对和绝对禁忌证,而且为有创操作,风险较高.近年来,随着蛋白质组学的出现,尤其是尿液蛋白质组学的发展,使得人们能够全面、动态地考察疾病发生过程中蛋白质种类及数量的改变,对IgA肾病的研究也有了长足的进步.本文就有关尿蛋白质组学在IgA肾病的相关研究进展进行综述.
