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  • 运用内标校准法提高表面增强激光解吸电离飞行时间质谱检测中的重复性

    作者:丁银环;胡琼英;梁双花;姜伟;周明术;严莉;王开正

    表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)具有高灵敏度、高通量、高效率等优点,是近年来疾病蛋白组学研究的先进技术 [1],但该技术检测结果 的重复性较差.因此,建立SELDI-TOF-MS检测流程的标准化至关重要 [2].我们将色谱分析常用的内标法 [3-4]引入SELDI-TOF-MS技术,采用合成多肽分子作为内标物,建立内标校准法以校准SELDI-TOF-MS质谱图的横坐标和纵坐标,以提高该方法 检测蛋白质分子和丰度的重复性.现报告如下.

  • 蛋白质指纹谱在胰腺癌诊断中的意义

    作者:郭静会;王文静;张顺财

    尽管胰腺癌影像学诊断水平明显提高,但是早期患者往往缺乏临床症状而没有进行影像学检查.目前常用的肿瘤标志物CA19-9在胰腺癌的筛查中敏感性和特异性不高,尤其对于早期胰腺癌诊断价值不大[1-2],所以胰腺癌的早期诊断仍然是个难题.随着分子牛物学技术迅猛发展,蛋白质组学应运而生.本文应用SELDI-TOF-MS技术探测胰腺癌患者血清蛋白质组学的变化,以期发现特异的蛋白类肿瘤标志物,从而实现胰腺癌的早期诊断.

  • 应用SELDI-TOF-MS筛检造影剂肾病尿液相关候选蛋白的研究

    作者:方艺;吉俊;崔杰峰;刘银坤;康晓楠;丁小强

    随着现代影像技术和介入治疗的不断发展,造影剂肾病(contrast-inducod nephropathy,CIN)已成为医院内获得性急性肾衰竭(AKI)的第三位常见原因[1].CIN的早期发现、早期干预,是降低危重AKI发病率、提高治疗效果的前提和关键[2].近些年来表面加强激光解吸/电离-飞行时间-质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flightmass spectroscopy,SEIDI-TOF-MS)的运用,为寻找CIN早期诊断特异性标志蛋白带来了新思路.本研究应用SELDI-TOF-MS技术对接受冠状动脉(冠脉)介入/冠脉造影手术患者术前术后晨尿进行蛋白质分析,以期筛选出CIN发病相关的尿液标志物.

  • SELDI-TOF-MS技术在胰腺癌诊断中的应用

    作者:马宁;葛春林;栾凤鸣;胡朝军;李永哲;刘永锋

    目的 应用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)从胰腺癌患者血清中筛选标志蛋白,找出佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标.方法 收集29例胰腺癌患者血清标本和57例年龄、性别相匹配的非癌人群血清标本作为对照.采用SELDI技术检测其蛋白质指纹图谱表达,所得到的结果采用Biomarker Wizard及Biomarker Patterns system软件分析,筛选终可能用于胰腺癌诊断的蛋白标志物并优化组合建立胰腺癌诊断模型.结果 发现胰腺癌患者和对照组血清蛋白质指纹图谱之间有26个差异表达特异性蛋白,分析系统筛选出一组包含4个标志蛋白(5705、4935、5318和3243 Da)建立起一个胰腺癌的诊断模型,对胰腺癌诊断的敏感性为100%,特异性97.4%.盲法验证此模型敏感性88.9%、特异性89.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感性远远高于目前所采用的某一单独标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究胰腺癌的蛋白质组学改变及其临床诊断应用可能具有重要意义.

  • SELDI-TOF-MS技术早期诊断结直肠癌的应用进展

    作者:陶堤堤;周中银;罗和生

    蛋白质是遗传信息表现的功能形式.1883年Mulder用“protein”一词来表示这类生物大分子.蛋白质组(proteome)指由一个基因组表达的全部蛋白质,1995年Wilkins提出,源于蛋白质(protein)和基因组(genome)两单词的组合.蛋白质组学(proteomics)是研究基因组编码的全部蛋白质的结构和功能的学科.蛋白质组学研究技术将是阐明癌症发生的本质及提供有效防治措施的有力手段[1].

  • 血清蛋白质质谱辅助孤立性肺结节的诊断

    作者:罗晓阳;陈海泉;孙艺华;周建华;王文静;廖萍;项翠琴

    目的 采用表面增强激光解析离子-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术建立肺腺癌患者血清蛋白质质谱,筛选出相对特异标记物,探讨其用于辅助诊断孤立性肺结节的意义.方法 肺腺癌患者71例,均经手术病理证实;正常志愿者71名,按照性别、年龄、吸烟史与71例肺腺癌患者配对.用WCX2芯片检测各血清标本,筛选肺腺癌相对特异性蛋白质峰.孤立性肺结节患者53例,其中28例接受手术治疗,根据术后病理诊断验证筛选出的肺腺癌相对特异性蛋白用于辅助诊断孤立性肺结节的意义.结果 与正常志愿者比较,肺腺癌患者有5个显著高表达的相对特异性蛋白质,其相对分子质量分别为4047.79、4203.99、4959.81、5329.30和7760.12.28例接受手术治疗的孤立性肺结节患者中,有24例术后病理为肺腺癌,证实筛选出的5种肺腺癌相对特异性蛋白质具有较高的诊断价值.结论 SELDI-TOF-MS技术是一种快速、简便易行且高通量的分析方法,能直接筛选出肺腺癌患者血清中相对特异的潜在标记物,将其用于辅助诊断孤立性肺结节可能具有较好的临床应用前景.

  • 飞行时间质谱技术筛查上皮性卵巢癌患者血清特异性蛋白的研究

    作者:王弋;胡芝;柯晓慧;蒋联萍

    目的:应用飞行时间质谱技术筛选上皮性卵巢癌患者与正常人血清中差异性蛋白,探讨蛋白质组学诊断模型用于上皮性卵巢癌的早期诊断的可行性.方法:应用弱阳离子芯片(WCX2)及表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测20例正常人(对照组)和40例上皮性卵巢癌(观察组)患者血清中的差异蛋白质,并检测差异蛋白筛选上皮性卵巢癌的特异性和敏感度.结果:对照组与观察组在1 500~20 000 Da间,质荷比为3 865 Da、4 318 Da及5 089 Da的蛋白峰差异有统计学意义(P<0.05).3个蛋白区分对照组与观察组的敏感性与特异性为80.00%(32/40)、85.00%(17/20).结论:SELDI-TOF-MS技术对上皮性卵巢癌早期诊断具有一定价值.

  • SELDI-TOF-MS技术在卵巢癌早期诊断中的应用现状

    作者:贾琳;曲迅;孔北华

    早期诊断卵巢癌是提高患者长期存活率的关键.血清CA125对于I期卵巢癌的阳性预测值较低;新兴的SELDI-TOF-MS技术具有高通量、低丰度、高灵敏性的优点,通过差异蛋白质组学的研究将新的标志物单独、联合或结合血清CA125用于诊断卵巢癌,具有较高的敏感性和特异性,但同时也面临着挑战.就该技术的作用原理和以上诸方面作一综述.

  • 阿霉素肾病大鼠尿蛋白质组质谱的检测及中药肾康灵的干预作用

    作者:艾斯;郑健;林青;吴华嵩;陈蓉艳;陈乃清;陈文列;张洪生

    目的:应用尿蛋白质组学筛选阿霉素肾痛(AN)大鼠尿液中差异表达的蛋白质,并检测中药肾康灵的干预作用,旨在蛋白质分子水平探索频复发性肾病(FRNS)的诊断标记物及药物治疗的作用靶点.方法:用阿霉素(ADR)5.5 mg/kg诱导大鼠复制的阿霉素肾病(AN)模型,即类似于人类微小病变型(MCD)肾病模型.实验共分为5组,分别为正常组(A组)、AN病模组(B组)、泼尼松治疗组(C组)、泼尼松+肾康灵(低浓度)治疗组(D组)、泼尼松+肾康灵(高浓度)治疗组(E组).利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术联合CM10蛋白质芯片技术检测各组大鼠尿蛋白质组质谱的表达,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机自动收集数据,使用Ciphergen Proteinchip Software 3.2.1和Biomarker Wizard分析软件筛选出各组大鼠尿液差异表达的蛋白质.并观察各组治疗前后尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)及肾脏病理形态学等变化.结果:在质荷比值(M/Z)2 000~50 000范围内(P<0.05),芯片共捕获到近40种差异蛋白质,质谱仪筛选出B组与A组比较的38种差异蛋白,其中3种差异蛋白从B组→C组→D、E组→A组呈递减趋势.这3种差异蛋白峰的M/Z值分别为9 321.0、9 393.1、9 477.5.结论:SELDI-TOF-MS能有效分析阿霉素肾病大鼠尿液蛋白质质谱,中药肾康灵干预治疗后蛋白质质谱表达差异有统计学意义,且中药肾康灵联合泼尼松治疗AN大鼠的疗效优于单用泼尼松治疗.

  • 表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术在临床中医证候中的研究进展

    作者:杨敏;徐桂华

    传统中医证候诊断技术缺乏客观指标的问题是阻碍中医走向现代化、国际化的原因之一.随着后基因组时代的到来,蛋白质组学的兴起及其广泛应用为证候的研究提供了新的切入点.表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)作为蛋白质组学中的一种新型技术具有其特有的优势,近年来也被国内学者应用到中医临床证候研究中.

  • SELDI-TOF-MS技术及其在妇产科疾病研究中的应用

    作者:索明莉;杨海澜

    人类基因组计划(HGP)全基因组测序的完成,并没有象预计的那样彻底解决基因和疾病的关系.相反,它提出了几个令人困惑的问题.第一,人类基因组中的功能基因数大大少于预期;第二,人类基因组和酵母基因组的差异基因数仅占人类基因组的1/5,大大少于人类基因组和小鼠基因组的差异基因数.造成这一现象的一个主要原因是蛋白质的高度分化以及蛋白质的转录后修饰.蛋白质的表达及终体现的功能在从转录到翻译后的多点受到调节,因此不能通过核酸来预测.但蛋白质能直接反映基因给予的信息,它的表达一旦出现异常就可引发疾病.因此,研究其组成及性质是揭示基因和疾病连接链条中的关键一环.现就蛋白质组学SEIJDI-FOF-MS技术及其在妇产科疾病研究中的应用作一综述.

  • 类风湿关节炎并发间质性肺疾病患者血清蛋白质指纹图谱的临床价值分析

    作者:武艳梅;彭守春;沈健;吴晶

    目的:应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱筛选出类风湿关节炎并发间质性肺疾病( RA-ILD)患者血清中的差异蛋白,并对其临床价值进行初步分析。方法:用WCX2(弱阳离子交换芯片)蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱( Surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrum ,SELDI-TOF-MS)检测19例RA-ILD患者,15例单纯RA、未合并间质性肺疾病患者,13例相对健康的对照组患者的血清样本,应用Biomarker Wizard软件、Biomarker Pattern软件以及SPSS13.0对测得的数据进行处理,初步构建分类树模型并随机选取部分病例进行验证。结果:患者血清中共检测出142个蛋白峰,经方差分析,发现了4个蛋白质峰差异有统计学意义,质荷比分别为3382.59、3453.39、11886.0、5825.48, Biomarker Pattern软件对所检测的所有数据分析后,发现以质荷比11689.4、2266.49、1020.22、4392.28、5074.38、2764.69为适合建立分类树模型,灵敏度为92.31%(12/13),特异度为91.18%(31/34)。随机选取RA-ILD、RA、相对健康的对照组患者的血清样本各10例进行模型验证,灵敏度为90%(9/10),特异度为90%(18/20)。结论:SELDI-TOF-MS技术可筛选出RA-ILD患者血清中差异性表达蛋白,作为生物标志物,其诊断敏感度高,特异度好,对其测定具有较好的临床应用前景。

  • 表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术及其在唾液检测中的研究进展

    作者:刘炜;平飞云

    蛋白质芯片表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱(surf ace enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI -TOF-MS)技术是蛋白质组学中用于筛选和鉴定某种蛋白标记物的新技术,目前已在某些肿瘤生物标记物筛选方面取得突破性进展.本文就其技术特点及其在唾液检测中的研究进展做一综述.

  • 应用SELDI-TOF-MS技术筛选结肠癌术后原位复发患者的血清诊断标志物

    作者:王志红;漆永平;谢小平;华为民

    目的 寻找结肠癌术后原位复发患者的特异性生物标志物.方法 采用SELDI-TOF-MS技术(表面增强激光解析电离飞行时间质谱)对比分析30例结肠癌术后原位复发患者和30例结肠癌术后无复发患者的血清蛋白质谱,用Biomarker Wizard软件分析获得的蛋白质谱.结果 结肠癌术后原位复发组与结肠癌术后无复发组有9个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.05),其中有2个蛋白峰(7731.3 D和8 266.5 D)差异有统计学意义(P<0.01),这2个蛋白峰在结肠癌术后原位复发患者中高表达,在结肠癌术后无复发患者中低表达.结论 这2个蛋白峰有可能成为预测结肠癌术后原位复发患者的特异性生物蛋白标志物.

  • SELDI-TOF-MS技术在消化道肿瘤诊断中的应用

    作者:卜淑蕊;钱家鸣

    蛋白质组学(proteomics)是一门以全部蛋白质性质研究为基础,从蛋白质水平进一步认识生命活动的机理和疾病发生的机制,蛋白质组研究是对生物体在蛋白质水平定量、动态、整体性的研究,是继基因组学后一个重要的研究热点[1].

  • 胃癌腹膜转移的血清蛋白质特异性生物标志物的研究

    作者:纪托;陈海莲;周中银

    [目的]筛选胃癌腹膜转移中可能存在的特异性蛋白标记物. [方法]采用CMI0蛋白质芯片和表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,对19例胃炎患者和18例不同期别胃癌患者的的血清蛋白质谱进行分析.[结果]胃癌患者与胃炎患者相比,7种蛋白质明显过表达(P<0.05,Student t检验).其中,发现3268 Da,3397 Da,3927 Da和4129 Da的四个蛋白质仅在患有腹膜转移的患者中差异表达.采用CART(分类和回归树)方法成功地将胃癌腹膜转移患者与无腹膜转移的患者分离.[结论]这4个蛋白峰有可能与胃癌腹膜转移相关,或将成为其诊断的特异性生物蛋白标志物.

  • 应用SELDI-TOF-MS技术筛选早期胃癌的血清诊断标志物

    作者:陈海莲;纪托;周中银

    [目的]筛选早期胃癌可能存在的特异性蛋白标记物.[方法]采用CM10蛋白质芯片和表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,对胃黏膜高级别上皮内瘤变(HGIEN)患者,Ⅰ/Ⅱ期胃癌患者及Ⅲ/Ⅳ期胃癌患者各24例的血清蛋白质谱进行分析.[结果]与高级别上皮内瘤变(HGIEN)患者对比,胃癌组有37种蛋白存在表达差异.这37种蛋白中有9种在Ⅰ/Ⅱ期胃癌组与Ⅲ/Ⅳ期胃癌组存在不同丰度的表达(P<0.05),其中2687.5 Da、6271.2 Da及6779.3 Da表达差异显著(P<0.01),2687.5 Da在高级别上皮内瘤变(HGIEN)组、Ⅰ/Ⅱ期胃癌组及Ⅲ/Ⅳ期胃癌组中表达上调,6271.2 Da及6779.3 Da在高级别上皮内瘤变(HGIEN)组、Ⅰ/Ⅱ期胃癌组及Ⅲ/Ⅳ期胃癌组中表达下调.以这三个蛋白质构建预测诊断模型,经盲法验证,该模型的灵敏度为77.78%,特异度为88.89%.[结论]这3个蛋白或将成为早期胃癌诊断的特异性生物蛋白标志物.

  • SELDI-TOF-MS技术在泌尿肿瘤研究中的应用

    作者:闫亮;米振国

    恶性肿瘤严重威胁着人类的健康和生命,早期发现、早期诊断、早期治疗是提高大多数恶性肿瘤患者治疗效果的关键.恶性肿瘤发现、确诊得越早,治疗成功的可能性就越大,患者的生存率也会越高.随着影像医学的发展,如PET、MR、MSCT等可以发现0.3 cm左右的肿瘤,而基因检测及蛋白芯片等的应用,更能早期发现0.2 cm以下的肿瘤,甚至早在肿瘤血管增生前将其发现[1].只有从细胞生物学角度认识恶性肿瘤,才能将肿瘤杀灭在细胞萌芽期.而表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术正是适用于识别与判断各种疾病的特异性蛋白指纹图谱.目前,SELDI-TOF-MS技术在临床肿瘤蛋白质组学研究中已经得到了普遍应用,研究的范围几乎覆盖所有的常见肿瘤,为临床肿瘤的蛋白质组学研究奠定了良好的基础.本文概要介绍SELDI-TOF-MS技术在泌尿肿瘤研究中的应用.

  • 应用SELDI-TOF-MS技术对大鼠急性脊髓损伤后脑脊液蛋白组学的研究

    作者:张建军;宋兴华;谢纪宝;加莎热特·杰力勒;陈江涛;折胜利;刘正文;侯国柱

    急性脊髓损伤(ASCI)是一种严重的神经系统创伤,目前仍缺乏有效的治疗措施[1-2].我们应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术分析大鼠ASCI后脑脊液蛋白质指纹图谱,找出明显变化的差异蛋白.

  • 高血压脑出血患者脑脊液差异蛋白组学研究

    作者:刘盛泽;陈实;张永亮;林健;林茂晖;杨庆武;陈文旭;陈爱国;蒋小玲;林海谅;兰小鹏;赵猛

    目的 筛选出与高血压脑出血密切相关的疾病特异性蛋白,探讨其在高血压脑出血发病机制中的作用. 方法 应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测69例脑脊液标本的蛋白质谱,其中健康对照者15例、高血压患者10例、高血压脑出血术前患者24例、高血压脑出血术后患者20例.比较分析高血压脑出血术前组与高血压组、高血压脑出血术前组与术后组、健康对照组与高血压组脑脊液蛋白质谱,用Biomark Wizard软件分析其差异蛋白质峰,并通过蛋白数据库检索出与高血压脑出血密切相关的疾病特异性蛋白. 结果 通过比较分析高血压脑出血术前组与高血压组、高血压脑出血术前组与术后组、健康对照组与高血压组脑脊液蛋白质谱,分别筛选出23个、16个、0个差异蛋白质峰.高血压脑出血术前组与高血压组间的23个差异蛋白质峰中有6个差异峰有重要意义,与这6个差异峰相对分子质量接近的蛋白质分别为B型脑钠肽、中性粒细胞防御素2、活性氧自由基、亚型戊烯半胱氨酸氧化酶、分泌载体相关的膜蛋白SCAMP4、白介素-31. 结论 通过分析高血压脑出血患者脑脊液蛋白质谱,可以筛选出与高血压脑出血相关的疾病特异性蛋白,其能成为预测高血压脑出血的分子标志物.

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