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土贝母苷甲在人宫颈癌HeLa细胞内对线粒体的影响
目的:探讨线粒体在土贝母苷甲(TBMS1)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用.方法:流式细胞仪测定线粒体膜电位(△ψm)、琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂片和蛋白质免疫印迹法检测细胞色素c(cyt c)的表达.结果:TBMS1引起人宫颈癌HeLa细胞凋亡,使得△ψm下降,释放入胞质的cyt c增加,并具有时间、剂量依赖性;TBMS1还可直接作用于分离的鼠肝脏线粒体,使之释放cyt c;TBMS1的这种作用部分能够被线粒体膜保护剂环孢菌素A(CsA)阻断.结论:线粒体途径是TBMS1诱导的HeLa细胞凋亡的途径之一.
关键词： 土贝母苷甲 线粒体 细胞色素C 细胞凋亡 人宫颈癌HeLa细胞 -
半枝莲黄酮类化合物对体外肿瘤血管生成的影响
目的:探讨中药半枝莲黄酮类化合物A06对体外肿瘤血管生成的影响.方法:分别采用小管形成实验、Transwell小室、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、硝酸还原酶法检测半枝莲黄酮类化合物A06对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成、迁移及人宫颈癌Hela细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)表达的影响.结果:与对照组相比,半枝莲黄酮类化合物A06(50和100 mg/L)都能有效抑制HUVEC细胞的迁移(37.7%±10.7%,13.7%±6.0% vs 68.0%±8.2%,均P＜0.01),减少小管样结构形成(9.7%±4.5%,1.8%±1.2% vs 30.2%±5.4%,均P＜0.05),以及降低24 h后Hela细胞VEGF和NO的表达(VEGF:135.6±14.6 ng/L,108.3±7.7 ng/L vs 231.1±6.4 ng/L,均P＜0.01;NO:42.3±2.3μmol/L,25.9±5.2 μmol/L vs 70.1±8.1 μmol/L,均P＜0.01).结论:半枝莲黄酮类化合物A06有抑制体外肿瘤血管生成的作用,可能与抑制肿瘤细胞血管生成相关因子的表达,抑制内皮细胞迁移、形成管样结构有关.
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基底刚度对人宫颈癌HeLa细胞生长影响的体外研究
目的 探讨基底刚度变化对宫颈癌HeLa细胞生长的影响.方法 将人宫颈癌HeLa细胞株培养于基底刚度为0.5、5.0、25.0 kPa水凝胶培养皿和基底刚度约为1.0×106kPa的普通塑料/玻璃培养皿中.采用倒置显微镜和环境扫描电子显微镜观察细胞的形态、结构,采用单光子激光共聚焦显微镜观察细胞骨架,采用CCK-8法检测细胞增殖活性并绘制生存曲线.结果 随着基底刚度的增加,细胞铺展面积增加,细胞贴壁愈加牢固,细胞形态呈多边形或梭形;不同基底刚度组的长直径/短直径、铺展面积比较,差异均有统计学意义(F=15.54、77.21,P﹤0.01);随着基底刚度的增加,细胞伪足逐渐丰富且纤长,细胞骨架应力纤维表达增多;以48 h培养为基础计算细胞倍增时间后显示,0.5、5.0、25.0、1.0×106kPa基底刚度上培养的HeLa细胞的倍增时间分别为60.40、39.43、27.79、26.34 h,细胞倍增时间随着基底刚度的增加而缩短,细胞增殖加快.结论 较大的基底刚度更利于人宫颈癌HeLa细胞铺展、细胞骨架分布和细胞增殖.
关键词： 人宫颈癌HeLa细胞 基底刚度 细胞生长 -
12C6+重离子诱导可溶性TRAIL表达增强及其抗肿瘤作用的实验研究
目的 构建可被辐射诱导激活的表达载体pEgr-sTRAIL,研究其体外瞬时转染联合不同剂量的12C6+离子辐照对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖活性的影响.方法 SOEing PCR法克隆可溶性TRAIL基因,测序正确后连入pcDNA3.1-Egr质粒,构建pEgr-sTRAIL表达载体;采用GeneCompanionTM聚阳离子转染试剂体外瞬时转染人宫颈癌HeLa细胞;接受不同剂量的12C6+照射后,RT-PCR法检测目的 基因mRNA水平的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞增殖存活.结果 成功构建了辐射诱导表达载体pEgr-sTRAIL;瞬时转染联合12C6+离子照射可在mRNA水平上诱导sTRAIL表达增强;随照射剂量的增加,转染pEgr-sTRAIL的HeLa细胞凋亡率明显增加,克隆形成率明显下降.结论 12C6+离子可诱导重组质粒pEgr-sTRAIL在被转染的HeLa细胞中表达增高,体外基因-12C6+离子联合治疗可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,具有显著的肿瘤抑制作用.
关键词： pEgr-sTRAIL 12C6+离子 细胞凋亡 克隆形成 人宫颈癌HeLa细胞 -
硒化枸杞多糖硫酸酯的制备及其抗氧化活性对人宫颈癌Hela细胞生长的体外抑制作用
目的 制备硒化枸杞多糖硫酸酯(Se-LBPS),考察其抗氧化活性和对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用.方法 以自制的枸杞多糖硫酸酯(LBPS)为原料,在乙酸催化下与亚硒酸钠反应,合成Se-LBPS.以付里叶红外光谱对产物进行表征.用分光光度法考察Se-LBPS的抗氧化活性,用MTT法考察其对人宫颈癌Hela细胞的体外抑制作用.结果 Se-LBPS对羟自由基的清除率可达60.51％,对超氧自由基的清除率可达47.9％.Se-LBPS对Hela细胞生长的抑制率优于LBPS和硒化枸杞多糖(Se-LBP),Se-LBPS对Hela细胞的抑制率与其浓度正相关,在200 μg·mL-1时抑制率可达59.67％.结论 Se-LBPS具有明显的抗氧化性,优于硒化红薯叶多糖.Se-LBPS对Hela细胞生长具有显著的抑制作用,其抑制效果优于叶酸.
关键词： 枸杞多糖硫酸酯 硒化枸杞多糖硫酸酯 抗氧化活性 人宫颈癌HeLa细胞 抑制作用 -
蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响
目的研究蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法MTT法检测蛴螬石油醚提取物对体外培养的HeLa细胞株增殖抑制作用及细胞毒活性;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测细胞凋亡;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡相关基因产物Bcl-2、Bax蛋白与凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3的表达情况.结果蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.01).蛴螬石油醚提取物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性.蛴螬石油醚提取物作用后Bcl-2蛋白表达均下降,Bax、caspase-8和caspase-3表达上升,4种蛋白表达各组间比较均差异显著(P＜0.01).结论蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞具有抑制增殖及诱导凋亡作用.蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞抑制增殖作用(50 μg/mL作用48 h之前)主要以诱导凋亡为主.蛴螬石油醚提取物诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-8和caspase-3表达有关.
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枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响
目的 观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响.方法 不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞,用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标.结果 枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长,抑制率可达96.85%,并呈剂量效应关系,细胞凋亡率可达36.8%.结论 枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用,其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现.
关键词： 枸杞多糖 人宫颈癌HeLa细胞 生长抑制率 细胞凋亡 -
骆驼蓬全草提取物的抗肿瘤作用
目的 研究骆驼蓬全草的不同体积分数的乙醇的提取物Ⅰ(alcohol extractⅠ,AEⅠ)、Ⅱ(alcohol extractⅡ,AEⅡ)和水提取物(water extract,WE)对人宫颈癌细胞Hela和人肺癌A549细胞的抑制作用.方法用体外细胞培养和MTT法检测骆驼蓬全草的不同体积分数的乙醇的提取物Ⅰ、Ⅱ和水提取物对Hela和A549细胞增殖的抑制作用.结果与结论 AEⅠ、AEⅡ和WE对Hela细胞的半数抑制质量浓度分别为187.31、195.32、118.50 mg·L-1.AEⅠ、AEⅡ和WE对A549细胞的半数抑制浓度分别为243.76、225.65、123.99 mg·L-1.AEⅠ、AEⅡ和WE对Hela细胞和A549细胞均有抑制作用,其抑制作用的强度与药物质量浓度成正比,同质量浓度下WS的抑制作用强.
关键词： 骆驼蓬全草 人宫颈癌HeLa细胞 人肺癌A549细胞 肿瘤抑制率 -
皂荚提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡及端粒酶的影响
目的 探讨皂荚提取物对人宫颈癌Hela细胞凋亡及端粒酶的影响.方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞,给予不同浓度皂荚提取物(0.1、0.5、1.0 mg/ml)对人宫颈癌Hela细胞进行作用,采用MTT法、荧光染色法、流式细胞术和免疫组化法分析其对Hela细胞增殖、凋亡、生长周期、相关基因(Bax、Bcl-2、p53)表达和端粒酶活性的影响.结果 与对照组相比,3个不同浓度皂荚提取物对人宫颈癌Hela细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),可调控Hela细胞癌基因与抑癌基因,促进凋亡,抑制端粒酶活性(P<0.05).结论 皂荚提取物能够抑制人宫颈癌Hela细胞增殖,作用机制可能与诱导Hela细胞凋亡有关.
关键词： 皂荚提取物 人宫颈癌HeLa细胞 端粒酶 -
熊果酸对人宫颈癌hela细胞体外抗肿瘤作用的形态学观察
目的:观察熊果酸对人宫颈癌hela细胞抗肿瘤作用的形态学变化,探讨熊果酸抑制人宫颈癌hela细胞生长的可能作用机制.方法:在培养基中加入不同浓度的DMSO作用24h,用hochest 33342荧光染料染色,通过细胞死亡率判断DMSO的使用浓度;人宫颈癌hela细胞传代的同时加入熊果酸,混匀,贴壁培养细胞24h,采用分别采用hochest 33342、DAPI标记细胞,观察肿瘤细胞形态;人宫颈癌hela细胞传代后,第2天换液的同时再加入熊果酸,培养24h,采用hochest 33342、DAPI标记细胞,观察肿瘤细胞形态.结果:DMSO大浓度为1.0%;与正常肿瘤细胞组比较,两种不同加药方式的熊果酸都能影响人宫颈癌hela细胞的生长状态,细胞形态小,核膜皱缩,核变形,凋亡形态细胞增多.结论:熊果酸不仅明显抑制人宫颈癌hela细胞的生长,而且人宫颈癌hela细胞传代的同时加入熊果酸的方式,对肿瘤细胞生长的影响更明显,推测熊果酸可能存在细胞毒性.
关键词： 人宫颈癌HeLa细胞 熊果酸 抗肿瘤 -
花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理研究
目的 观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理.方法 结晶紫染色法检测花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用；RT-PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达.结果 花旗松素能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,呈剂量依赖关系；花旗松素不能诱导Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达,但能使P53和P21的mRNA表达量增加.结论 花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用；花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡相关,其分子机制可能与升高P53和P21 mRNA表达有关,而与Bcl-2和Bax的蛋白转录无关.
关键词： 花旗松素 人宫颈癌HeLa细胞 抗肿瘤作用 RT-PCR -
藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米球的制备及其对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制
目的:制备新型负载藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)的羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)纳米微球(nanoparticle,NP),探讨藻蓝蛋白羧甲基壳聚糖纳米微球(C-PC/CMCNP)对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响及其分子机制.方法:采用正交分析方法,以CMC和C-PC的质量比、CMC浓度、CaCl2浓度为考察因素,通过检测C-PC/CMCNP的粒径和CMC的包封率,优选制备C-PC/CMCNP的佳条件,并制备C-PC/CMCNP.CCK-8法检测C-PC、CMC和C-PC/CMCNP对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测HeLa细胞凋亡情况,Westren blotting检测HeLa细胞中caspase-3蛋白的表达.结果:CMC与C-PC的质量比为1∶2、CMC质量浓度为1 mg/ml,CaCl2质量浓度为1 mg/ml为佳制备条件,终制备的C-PC/CMC-NP的平均粒径为(118.4±2.07)nm,并具有较高的包封率(63.2％),其缓释12 h的累积缓释率超过60％.C-PC、CMC和C-PC/CMCNP均能抑制HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并促进caspase-3蛋白的表达,但C-PC/CMCNP的作用效果为显著.结论:优化制备条件得到具有高效缓释性能的C-PC/CMCNP,其对HeLa细胞显著的抑制作用可能是通过促进caspase-3蛋白的表达进而诱导肿瘤细胞凋亡来实现的.
关键词： 藻蓝蛋白 纳米微粒 羧甲基壳聚糖 人宫颈癌HeLa细胞 增殖 -
青蒿素对人宫颈癌HeIa细胞的抑制作用
1研究背景青蒿素(Artenusinin)又名黄花蒿素、黄蒿索,是从菊科植物黄花蒿(artemisia annuaJl)中提取的有效抗疟成分,为我国传统抗疟中药.其化学成分是含内过氧化基团的倍半萜内酯化合物.
关键词： 青蒿素 抑瘤作用 人宫颈癌HeLa细胞 GM人正常成纤维细胞 -
紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞生长及其claudin-7表达的影响
目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对人宫颈癌HeLa细胞增殖及claudin-7蛋白表达水平的影响.方法 体外培养人宫颈癌 HeLa细胞,采用 MTT法观察不同浓度紫杉醇脂质体(0.01、0.1、1、10、100 μmol/L)对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测HeLa细胞claudin-7蛋白表达水平在不同浓度紫杉醇脂质体作用下的变化.结果 5个浓度的紫杉醇脂质体均能显著抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;Western blot显示HeLa细胞经不同浓度紫杉醇脂质体处理48 h后,随着紫杉醇脂质体浓度的增高,claudin-7蛋白表达逐渐减弱.结论 紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,HeLa细胞claudin-7蛋白的表达在紫杉醇脂质体影响下是下调的.
关键词： 人宫颈癌HeLa细胞 紫杉醇脂质体 claudin-7蛋白 -
白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响
目的 研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响.方法 常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白时照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化.结果 白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P<0.01).结论 本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性.
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紫草素通过ROS/p38信号通路诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡
目的 探讨紫草素(shikonin)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制.方法 以MTT法检测shikonin的细胞毒性;相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生及凋亡率;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 Shikonin时间和剂量依赖性的抑制HeLa细胞的生长;35 μmol·L-1的shikonin 作用于细胞24 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性的诱导procaspase-3的剪切.35 μmol·L-1的shikonin作用于细胞12 h和24 h均可以诱导细胞产生ROS.ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低shikonin诱导的HeLa细胞的生长抑制和凋亡率;并且5 mmol·L-1 NAC可以上调由shikonin引起的procaspase-3的表达降低,下调由shikonin引起的p38蛋白的磷酸化.结论 Shikonin可以诱导HeLa细胞发生凋亡,ROS/p38信号通路参与了其凋亡的过程.
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紫草素诱导HeLa细胞凋亡经过caspase激活的机制
目的研究紫草素诱导HeLa细胞凋亡的作用机制.方法 MTT法测定紫草素对HeLa细胞的生长抑制实验,荧光染色等观察细胞形态学变化;DNA电泳、LDH法研究细胞死亡的途径.免疫印迹实验检测相关蛋白的表达.结果紫草素具有明显的抑制HeLa细胞生长的作用,并呈明显的量效关系和时间依赖性,40μmol·L-1的紫草素在24h内可诱导细胞凋亡,凋亡途经与死亡受体信号途径相似,经历了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和-8(caspase-3和caspase-8)的激活.结论 40 μmol·L-1的紫草素可明显地诱导HeLa细胞凋亡,其信号转导途径为经典的caspase途径.
关键词： 紫草素 人宫颈癌HeLa细胞 凋亡 Caspase 抗肿瘤活性 -
hTERT基因启动子调控表达绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及在人宫颈癌Hela细胞中的表达
目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reserved transeriptase,hTERT)基因启动子调控表达增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescence protein,EGFP)的逆转录病毒载体的构建及其在人宫颈癌Hela细胞中的表达.方法 经SacI/BglⅡ双酶切phTERT-luc质粒,获得hTERT启动子的基因片段;定向连接到被Sael/BamHI双酶切的pEGFP-N2质粒上,获得phTERT-EGFP-N2,并以其为模板,利用PCR技术,克隆出hTERT启动子和EGFP基因片段;再经EcoRI/BamHI双酶切,定向插入到逆转录病毒plxsn的多克隆位点,再获得目的 重组载体plxsn-hTERT-EGFP,并进行酶切鉴定,并将重组质粒转染人宫颈癌Hela细胞36 h后观察荧光表达情况.结果 phTERT-EGFP-N2的构建与鉴定结果显示,phTERT-EGFP-N2构建成功.plxsn-hTER-T-EGFP的构建与鉴定结果显示,阳性重组质粒plxsll-hTERT-EGFP(7 023 bp)经EcoRI/BamHI双酶切,获得1 165、5 858 bp 2片段;阴性重组质粒plxsn(5 874 bp)经EcoRI/BamHI双酶切,获得16、5 858 bp 2片段;证实plxs-n-hTERT-EGFP构建成功.倒置荧光显微镜下观察结果显示,plxsn空载体及重组质粒plxsn-hTERT-EGFP转染Hela细胞,经plxsn空载体转染的Hela细胞不能观察到任何荧光;而经plxsn-hTERT-EGFP转染的Hela细胞可见到绿色荧光蛋白的表达.结论 成功构建了hTERT基因启动子调控的表达绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体并获得表达.
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蓝舌病毒HbC3株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式的研究
目的:研究蓝舌病毒湖北株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式及其作用机制.方法:原位末端标记(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡情况;激光扫描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞Caspase-3/7, Caspase-8, Caspase-9活性变化.结果:凋亡染色未见明显凋亡细胞,共聚焦检测见细胞核膜不完整,染色质分散,有的凝集在核膜周围,部分染色质外溢,内质网分散,混浊不清,细胞与细胞之间分界不清;萤光照度仪检测酶活性可见Caspase-3/7, Caspase-8, Caspase-9活性均无明显变化.结论: 蓝舌病毒湖北株诱导HeLa细胞胀亡而发挥其抑瘤作用.
关键词： 溶癌病毒 蓝舌病毒湖北株 胀亡 人宫颈癌HeLa细胞 -
改良的甲基化特异PCR法在人宫颈癌Hela细胞检测中的应用
目的介绍一种CpG岛甲基化分析方法,即甲基化特异PCR法(methylation-specific PCR,MSP)以及对该方法的改良.方法用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后,进行甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,并对MSP法进行改良.应用该法分析人宫颈癌Hela细胞中RASSF1A、p16基因5'CpG岛甲基化状态.结果发现人宫颈癌Hela细胞中有RASSF1A、p16基因的甲基化,改良后的MSP更容易获得较好的效果.结论MSP法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法,改良后该方法更加简便可行.
