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一起由肠侵袭性大肠埃希菌O136:K78引起的聚集性腹泻暴发
目的 明确聚集性食源性腹泻暴发的病原.方法 根据现场流行病学调查,对患者肛拭子标本18份,粪便标本2份,厨师粪便标本1份,进行分离培养,对分离到的可疑病原菌进行生化鉴定,采用Real-time PCR技术检测可疑病原菌的ipaH毒力基因,同时进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型分析.结果 分离到11株血清型为O136:K78的肠侵袭性大肠埃希菌,除1份肛拭子外,其余7份患者肛拭子、3份粪便标本Real-time PCR均阳性;除1株菌外,其余10株菌株的PFGE带型一致.结论 具有侵袭性相关基因ipaH的O136:K78肠侵袭大肠埃希菌是本次聚集性腹泻暴发的主要原因.
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用检测ipaH基因的PCR检测志贺菌属
目的 建立一种检测志贺菌属快速敏感的PCR方法.方法 根据志贺菌属侵袭性质粒抗原H(invasive plasmid,ipaH)编码基因序列,设计1对PCR引物特异性扩增长度为204 bp的靶基因片段,通过检测3株志贺菌属菌株和6株非志贺菌属菌株来评价该方法的特异性;对福氏志贺菌菌液做一系列10倍稀释后进行PCR分析敏感性,PCR扩增产物经电泳和测序鉴定.结果 3株志贺菌属菌株出现特定大小的目的条带,6株非志贺菌属菌株未出现目的条带;测序也证实了PCR产物的特异性;PcR检测福氏志贺菌ipaH基因的下限为10 CFU/ml.结论 本研究建立的方法快速、特异、敏感.
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福氏志贺菌4c亚型的分子生物学特征分析
目的 了解杭州地区2003-2007年从爆发和散发细菌性痢疾患者中分离之福氏志贺菌4c亚型(F4c)菌株的分子生物学特征.方法 对24株F4c菌株以生化反应和血清分型进行鉴定,利用PCR法检测侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分型分析.结果 24株菌株全部为F4c,均具有ipaH毒力基因.用PFGE分型方法将24株菌株分成17种不同的带型,Dice系数为0.71～1.00.2005年、2006年、2003年三次爆发(分别简称为爆发1、2、3)中各自分离到的菌株基因型紧密相关.三次爆发中的部分菌株可能存在一定的相关性(Dice系数>0.8).散发菌株和爆发1、3菌株间的距离较远(Dice系数<0.8),和爆发2菌株间可能存在一定的相关性(Dice系数>0.8).结论 F4c菌株具有ipaH毒力基因,PFGE提示杭州地区近年F4c三起爆发菌株可能属共同的克隆群.
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志贺菌毒力基因的多重PCR鉴定
目的:建立志贺菌肠毒素1基因(ShET-1B)、志贺菌肠毒素2基因(ShET-2)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)和侵袭相关基因(ial)的多重PCR鉴定方法,实现志贺菌多基因同时检测.方法:选择志贺菌的4种毒力基因作为靶基因,应用Touchdown PCR方法,在一个反应管中同时进行扩增,根据产物分子量定性判断结果.结果:多重PCR同时检测与单基因PCR分别检测4种毒力基因两种方法具有相同的灵敏度与特异性.624株志贺菌具有6种毒力基因型,571株福氏志贺菌(包括11个血清型)中556株ShET-1B阳性.结论:多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点,适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究.ShET-1B基因可能广泛存在于福氏志贺菌之中.
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济源市福氏志贺菌毒力基因分型与分析
目的:对河南省济源市2002～2005年分离之福氏志贺菌株进行基因分型和分析.方法:应用多重PCR方法检测志贺菌肠毒素1基因(ShET-1B)、志贺菌肠毒素2基因(ShET-2)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)和侵袭相关基因(ial),根据产物分子量定性判断结果.结果:90株福氏志贺菌具有2种毒力基因型,ShET-1阳性率达到98.9%.结论:济源市福氏志贺菌毒力基因型具有高度的一致性.
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pMDl8-T-ipaH重组质粒的构建与鉴定
目的:构建并鉴定pMDl8-T-ipaH重组质粒载体,为探索采用二聚体蝎形探针荧光更精确的定量检测志贺菌标准品的方法奠定基础.方法:以志贺菌袭性相关位的ipaH基因为模板,采用PCR进行扩增,电泳回收纯化,经酶切后克隆入载体质粒pMDl8-T中,终构建重组质粒pMDl8-T-ipaH,进行酶切和测序鉴定.结果:成功克隆出151 bp左右的ipaH基因片段,导入质粒后,经检酶切及测序鉴定质粒基因片段与目标基因序列一致.结论:成功的构建了pMDl8-T-ipaH重组质粒,为进一步检测志贺菌建立标准品奠定了前期基础.
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分子信标PCR检测志贺菌ipaH基因
目的用分子信标探针PCR快速检测志贺菌属(Shigella).方法根据GenBank上公布的福氏志贺菌M32063株ipaH基因序列,设计引物和分子信标探针,以4种细菌进行对照,进行特异性和灵敏度分析,建立Shigella的实时PCR技术快速检测,应用于食物中毒和食品检测.结果检测20个样本,Shigella呈阳性,其它呈阴性,时间约2 h.结论Shigella分子信标探针技术具有快速、灵敏度高、特异性强等特点,可用于Shigella食物中毒快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的早期、准确诊断提供新的检测手段.
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PCR检测粪便中志贺菌
目的 建立一种粪便样本中快速、特异、敏感的志贺菌检测方法 .方法 运用PCR对痢疾、福氏、鲍氏和宋内4群志贺菌进行侵袭性质粒H抗原(ipaH)基因的检测,并对该PCR方法 进行反应的灵敏度、特异性以及模拟粪便样品的低检出限测定.结果 4群志贺菌均能检出侵袭性质粒H抗原(ipaH)基因,纯菌检测灵敏度达102cfu/ml,特异性实验中志贺菌菌株PCR扩增均为阳性,阴性对照菌株未扩增出特异性条带,混合菌株PCR扩增均为阳性;接种志贺菌到粪便样品中,当粪便样本中菌量达104 cfu/ml以上时,不需要增菌,志贺菌均可立即检出.结论 PCR方法 检测志贺菌灵敏度高、快速、特异性强,可以很好地应用于粪便等临床样本中志贺菌的检测与鉴定.
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荧光定量PCR检测志贺菌方法的建立
目的：建立一种检测志贺菌属快速敏感的荧光定量PCR方法．方法：根据志贺菌属侵袭性质粒抗原H （ipaH）编码基因序列，设计1对PCR引物特异性靶基因片段，通过检测3株志贺菌属菌株和9株非志贺菌属菌株来评价该方法的特异性；对福氏志贺菌菌液做一系列10倍稀释后进行荧光定量PCR分析敏感性，PCR 扩增产物经电泳和测序鉴定．结果：3株志贺菌属菌株出现特定大小的目的条带，9株非志贺菌属菌株未出现目的条带；测序也证实了PCR产物的特异性；荧光定量PCR检测福氏志贺菌ipaH基因的下限为200拷贝/mL．结论：本研究建立的方法快速、特异、敏感．
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PCR方法检测志贺氏菌的研究
建立一种快速检测志贺氏菌PCR检测方法.根据志贺氏菌的侵袭性质粒抗原(ipaH)基因序列,设计引物,建立PCR检测方法.本方法特异性高,均能检测出志贺氏菌属的4个种,整个实验过程8～10h完成.建立的方法可用与实际检测中.
