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肠出血性大肠埃希菌感染人巨噬细胞产生白介素-1β水平的研究
目的 通过构建EHEC O157∶H7野生株和突变株等不同菌株,来感染THP-1细胞,从而比较以上不同菌株的细胞毒和IL-1β等细胞因子的产生水平,同时比较使用有无胎牛血清(FBS)培养的THP-1对产生细胞因子水平的影响.方法 将上述各菌株分别定量稀释于RPMI1640,5％ FBS的细胞培养液中,在感染后2～l0h,用cytotox96试剂盒定量检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放.同时用Luminex和酶联免疫吸附试验试剂盒定量检测多种细胞因子的水平.结果 EHEC-O157∶ H7-ehxA是THP-1细胞毒作用的主要贡献者,并可引起高水平IL-1β的产生；在OPT1-MEM无血清培养基中,野生型菌株和突变型之间IL-1β的产生差异则更加显著.结论 EHEC-O157∶ H7-ehxA可诱导高水平IL-1β的产生,FBS能刺激细胞产生一定非特异性的IL-1β,这可能会导致高的背景和隐藏细胞株之间的真正差别.
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尼古丁对人巨噬细胞胆固醇外流的影响
一般认为动脉壁中巨噬细胞转变为泡沫细胞,从而启动了动脉粥样硬化病变的发生[1].在巨噬细胞内部,肝X受体(liver x receptor,LXR)及LXR诱导的信号是介导其脂代谢的重要分子基础,也是巨噬细胞致动脉粥样硬化的重要环节[2].
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新城疫病毒诱导人巨噬细胞杀伤喉癌细胞株Hep-2的体外研究
目的 探讨新城疫病毒(NDV)和紫外线灭活的新城疫病毒(NDV-UV)在体外诱导人巨噬细胞(Mφ)对肿瘤细胞的杀伤作用.方法 用淋巴细胞分离液从外周血中分离单个核细胞,经贴壁黏附法得到Mφ细胞,用NDV和NDV-UV分别诱导Mφ细胞16h作为效应细胞,Hep-2细胞作为靶细胞,然后用MTT法测定Mφ细胞杀瘤活性,并进一步比较NDV和NDV-UV对Mφ细胞杀瘤活性的影响.结果 NDV和NDV-UV诱导的Mφ细胞对Hep-2细胞的杀伤率分别为(28.46±1.70)%、(22.65±2.76)%,均高于未诱导组的(6.31±0.96)5(P<0.01),而NDV诱导组的杀瘤率高于NDV-UV诱导组(P<0.01).结论 NDV和NDV-UV能在体外诱导人外周血Mφ细胞,使之杀瘤活性增强,NDV的诱导作用较NDV-UV强.
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人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞体外培养弓形虫速殖子
目的 比较弓形虫RH株速殖子在人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞内的增殖情况. 方法 按照弓形虫速殖子∶细胞为1∶1的比例将弓形虫RH株速殖子分别与人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞共培养0、6、12、24、48 h后,于显微镜下观察细胞内虫体增殖情况.在两种细胞培养瓶中分别接种弓形虫RH速殖子,连续传代,每隔10代取弓形虫速殖子,将其密度调整为1×107个/ml,0.3 ml/只,腹腔接种ICR健康小鼠,记录小鼠存活时间. 结果 在相同条件下弓形虫速殖子侵入人巨噬细胞的时间早于侵入人包皮成纤维细胞的时间;共培养48 h时,绝大部分弓形虫速殖子胀破细胞,游离在细胞外.在两种细胞培养瓶中分别接种3×106弓形虫RH速殖子,约72 h后均可获得大量游离的弓形虫速殖子,2～3d传1代.人巨噬细胞内连续传代约30次,每代可获得(1×107～4×107)个速殖子,约增殖3～13倍;人包皮成纤维细胞中连续传代30次,每代可获得(1×107～3×107)个速殖子,约增殖3～10倍.弓形虫速殖子传代次数为10、20和30代时,人巨噬细胞内传代的弓形虫速殖子接种小鼠的存活时间分别为(4.3±0.5)、(4.0±0.8)、(4.3±1.2)d,人包皮成纤维细胞内传代的弓形虫速殖子接种小鼠的存活时间分别为(4.0±0.0)、(3.7±0.9)、(4.3±0.5)d,各代之间差异无统计学意义(P＞0.05),弓形虫速殖子毒力未见明显改变. 结论 弓形虫RH株速殖子可在人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞内增殖并长期稳定传代.
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AIDS患者巨噬细胞对白念珠菌的吞噬和灭活功能研究
目的:明确AIDS患者巨噬细胞对白念珠菌的吞噬和杀灭活性功能.方法:提取AIDS患者和健康者的单核细胞,诱导分化为巨噬细胞.荧光显微镜和流式细胞仪测定巨噬细胞对白念珠菌的吞噬活性;CFU计数法分析巨噬细胞对白念珠菌的杀灭活性;测定巨噬细胞内亚硝酸盐含量,分析呼吸爆炸相关产物一氧化氮的生成;Western blot法测定巨噬细胞磷酸化酪氨酸激酶的表达.结果:AIDS患者的巨噬细胞对白念珠菌的吞噬、杀灭能力、一氧化氮及磷酸化Syk的蛋白均低于健康者.结论:AIDS患者巨噬细胞吞噬和杀灭白念珠菌活性降低.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 人巨噬细胞 白念珠菌 抗真菌感染免疫 -
巴西天然蜂胶对牙龈卟啉单胞菌激活的巨噬细胞极化的调控及机制探讨
目的:探讨巴西天然蜂胶对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g LPS)激活的人巨噬细胞(THP-1)极化的调控及分子机制.方法:染色分析人慢性牙周炎牙龈组织中巨噬细胞的浸润;检测P.g LPS激活的THP-1中一氧化氮合成酶(iNOS)和精氨酸合成酶(Arginase-1)mRNA的表达;检测巴西天然蜂胶对P.g LPS激活的THP1极化的调控及对NF-κB活化的抑制作用.结果:人慢性牙周炎牙龈组织中巨噬细胞大量浸润.P.g LPS诱导THP-1高表达iNOS,微量表达Arginase1.巴西天然蜂胶显著抑制P.g LPS诱导THP-1表达的iNOS和TNF-α,并抑制P.g LPS诱导的NF-κB活化.结论:证实了巴西天然蜂胶通过抑制P.g LPS激活的THP-1中NF-κB的活化,阻止了THP-1向M1极化.
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重组卡介苗rBCG-Ag85A-ESAT-6对人巨噬细胞免疫刺激活性的影响
目的 探究重组卡介苗(rBCG-Ag85A-ESAT-6,rBCG-AE)对人巨噬细胞免疫刺激活性的影响,为该疫苗的应用提供重要的理论依据和实验基础.方法 将rBCG-AE(rBCG-AE感染组)及卡介苗(BCG感染组)分别感染体外培养的受PMA诱导分化的人单核细胞系(THP-1细胞株),分别于感染后24、48及72 h,观察细胞表面分子CD80和CD86的表达及细胞培养基中干扰素(IFN)-γ及肿瘤坏死因子(TNF)-a的诱生量.结果 THP-1细胞(未受PMA诱导分化的细胞)和PMA分化的THP-1细胞培养4 h后,细菌吞噬率分别为(8.45±1.54)%、(91.26±2.13)%,后者显著高于前者(P=0.01);感染后24、48及72 h,rBCG-AE组CD86阳性细胞比率分别为 (32.84±7.13)%、(48.42±5.46)%、(39.48±5.67)%,CD80阳性细胞比率分别为(20.28±1.13)%、(23.67±1.23)%、(23.19±1.58)%,均显著高于BCG感染组的CD86[分别为(28.17±5.26)%、(40.09±7.21)%、(31.26±6.85)%]和CD80阳性细胞比率[分别为(22.15±1.82)%、(23.27±1.91)%、(22.68±0.87)%],差异均有统计学意义(均P＜0.01).感染后24、48及72 h,rBCG-AE组IFN-γ诱生量分别为(1 986±156)pg/mL、(4 687±168)pg/mL、(3 238±97)pg/mL,TNF-а诱生量分别为(1 153±48)pg/mL、(5 864±97)pg/mL、(4 129±68)pg/mL,各时间点均显著高于BCG感染组的IFN-γ[分别为(1 245±32)pg/mL、(3 067±143)pg/mL、(2 879±186)pg/mL]和 TNF-а诱生量[分别为(486±18)pg/mL、(3 237±86)pg/mL、(1 068±74)pg/mL],差异均有统计学意义(均P＜ 0.01).结论 rBCG-AE可显著增强人巨噬细胞免疫刺激活性,该疫苗可作为替代BCG的候选疫苗,具有进一步开发研究的价值.
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重组人生长激素对内毒素诱导人巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β含量的影响
目的 研究重组人生长激素(rhGH)对内毒素(LPS)诱导巨噬细胞产生炎性因子的影响.方法 培养人单核巨噬细胞株U937细胞,体外经PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)诱导成熟后,设为5组:空白对照组、LPS组(给予40μg/mL LPS)、rhGH低剂量组(给予2U/L rhGH+ 40μg/mL LPS)、rhGH中剂量组(给予4U/LrhGH+40μg/mL LPS)及rhGH高剂量组(给予8U/L rhGH+40μg/mL LPS),采用酶联免疫吸附试验(EUSA)测定各组细胞上清液中炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的含量.结果 经PMA分化成熟后的U937细胞在LPS诱导下,TNF-α、IL-1β的含量明显增加,LPS组与空白对照组比较,差异有显著性(P＜0.05);rhGH各组TNF-α、IL-1β的含量则明显下降,与LPS组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论 rhGH可抑制LPS刺激巨噬细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β,故rhGH对LPS所致疾病如脓毒血症等可能有潜在的治疗作用.
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同型半胱氨酸激活NLRP3炎症小体促进动脉粥样硬化的作用研究
目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）对NLRP3炎症小体的激活及其在动脉粥样硬化（AS）中的作用。方法：（1）Hcy处理人巨噬细胞，检测NLRP3炎症小体表达及培养上清IL－1β浓度；通过 NLRP3 siRNA 干扰，观察 Hcy 的作用是否被阻断。（2） apoE－／－雄性小鼠，随机分为对照组（CT）、高脂组（HF）、高脂高蛋氨酸组（HFHM）、高脂高蛋氨酸＋control siRNA组和高脂高蛋氨酸＋NLRP3 siRNA组。检测AS面积、NLRP3炎症小体表达以及血脂、Hcy和炎症因子水平。结果：Hcy可激活巨噬细胞NLRP3炎症小体并促进IL－1β分泌，NLRP3 siRNA干扰能阻断Hcy的作用。动物实验结果显示高脂可诱导AS形成；HFHM组AS面积进一步增加，AS斑块处NLRP3炎症小体各成分表达增强，血浆Hcy和IL－1β水平较HF组显著增高；NLRP3 siRNA 干扰能阻断HFHM的作用。结论：Hcy能通过激活NLRP3炎症小体促进AS的发生发展。
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hCD47诱导人巨噬细胞对猪内皮细胞的免疫耐受
目的 探讨人CD47(hCD47)在诱导人巨噬细胞对猪内皮细胞免疫耐受中的作用.方法 将转染了pCDH-hCD47-FLAG质粒的猪髂总动脉内皮细胞(PIEC)设为pCDH-hCD47组;将转染了pCDH-FLAG空载体质粒的PIEC为pCDH组;将转染了hCD47-dN的PIEC设为pCDH-hCD47-dN组;将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)设为阳性对照组.将细胞分别与人巨噬细胞共培养,检测信号调节蛋白α(SIRPα)的磷酸化情况以及人巨噬细胞对PIEC的杀伤作用.进一步从GT-/-及GT-/-/hCD47基因编辑猪中分离了猪主动脉血管内皮细胞(PAEC),并分析SIRPα的磷酸化情况及人巨噬细胞对PAEC的杀伤作用.结果 pCDH组细胞不能诱导SIRPα的磷酸化,而pCDH-hCD47组细胞与人巨噬细胞共培养10 min后便能够激活SIRPα的磷酸化,且随着共培养时间的延长,SIRPα的磷酸化程度也随之增强.pCDH-hCD47-dN组细胞不能激活SIRPα的磷酸化.人巨噬细胞对pCDH组细胞产生了明显的杀伤作用,pCDH-hCD47组细胞可明显抑制人巨噬细胞的杀伤作用(P<0.05),而pCDH-hCD47-dN组细胞则不能抑制人巨噬细胞的杀伤作用.GT-/--PAEC与人巨噬细胞共培养后,不能激活SIRPα的磷酸化;而GT-/-/hCD47-PAEC与人巨噬细胞共培养后则明显激活了SIRPα的磷酸化.人巨噬细胞对GT-/--PAEC产生了明显的杀伤作用,GT-/-/hCD47-PAEC可明显抑制人巨噬细胞的杀伤作用(P<0.05).结论 在猪内皮细胞中表达hCD47可以通过激活SIRPα的磷酸化抑制人巨噬细胞对内皮细胞的杀伤作用.
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Fonsecaea monophora色素对人巨噬细胞炎症细胞因子表达的影响
目的 探究Fonsecaea monophora(F.monophora)色素对THP-1来源的人巨噬细胞炎症细胞因子表达的影响.方法 将THP-1人单核细胞诱导为巨噬细胞,分别与F.monophora的标准株、色素株和白化株进行共培养,细胞免疫荧光检测细胞膜表面分子CD14和CD68的表达;定量PCR检测各组中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β 的表达.结果 THP-1人单核细胞诱导为巨噬细胞后,膜表面分子表达由CD14转变为CD68.与F.monophora共培养后,标准株上调IL-6、IL-10和TGF-β 的表达(P均<0.05),色素株上调IL-6和TGF-β 的表达(P均<0.05),白化株上调IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10的表达(P均<0.05);白化株较标准株能上调IL-1β 的表达(P<0.05),标准株较色素株和白化株能上调IL-10和TGF-β 的表达(P均<0.05).结论 F.monophora标准株能促使人巨噬细胞往抗炎状态发展,白化株能促使人巨噬细胞往促炎状态发展,色素株则使人巨噬细胞处于促炎和抗炎的平衡状态,F.monophora色素可能会导致宿主炎症状态紊乱.
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泛素对人脐静脉内皮细胞和巨噬细胞的影响
目的 对比分析泛素对正常状态下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和巨噬细胞的影响及其差别,并评价泛素是否对脂多糖(LPS)诱导的HUVECs损伤具有保护作用.方法 在显微镜下观察不同浓度泛素干预后HUVECs细胞形态学的变化.将体外培养的HUVECs和人巨噬细胞分为空白对照组和4个泛素干预组(0.01 μg/mL组、0.1μg/mL组、1tμg/mL组和10 μg/mL组),ELISA法测定干预后24 h各组细胞上清肿瘤坏死因子o(TNF-α)和血管细胞粘附分子1(VCAM-1)水平,Western blot法测定细胞核因子κB(NF-κB)蛋白水平.用0.1μg/mL泛素干预10 μg/mL LPS诱导的HUVECs,ELISA法测定8、16和24 h泛素+LPS组和LPS组细胞上清TNF-α和VCAM-1水平.结果 随着泛素干预浓度的增加,HUVECs损伤的程度逐步加重,当泛素浓度达到50 μg/mL时,细胞开始呈气球样变并大量死亡.随着泛素干预浓度的升高,HUVECs细胞上清TNF-α和VCAM-1水平呈先升高后降低的变化趋势,而人巨噬细胞的TNF-α和VCAM-1水平则是呈逐步升高的趋势;HUVECs和人巨噬细胞NF-κB蛋白水平在泛素浓度为0.1μg/mL和1μg/mL时明显增高,而在0.01 μg/mL和10 μg/mL时增高不明显,甚至有减低的趋势,其中HUVECs减低的趋势更为明显.0.1μg/mL泛素干预10μg,/mL LPS诱导的HUVECs,各时间点LPS组和泛素+LPS组的TNF-α和VCAM-1水平相似,差异无统计学意义.结论 较低浓度的泛素对HUVECs即有明显的损伤作用,而人巨噬细胞则需要较高的泛素浓度才出现损伤.泛素对体外培养的LPS诱导的HUVECs损伤不具有明显的保护作用.
