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华蟾素注射液联合放疗对食管癌细胞增殖与周期的影响
目的:观察华蟾素注射液对食管癌细胞ECA109增殖的抑制作用,分析华蟾素联合X射线照射对细胞周期的影响,探讨华蟾素注射液与放疗联合效应的机制.方法:实验分空白组、华蟾素组、放疗组、华蟾素+放疗组,作用食管癌ECA109细胞48 h后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素注射液对ECA109细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期的变化,反转录-PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组泛素连接酶(RNF2),p16和周期蛋白依赖性激酶(CDK4) mRNA和蛋白表达.结果:华蟾素可显著抑制食管癌ECA109细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性.与空白组比较,各药物组中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例明显升高(P＜0.05),S期细胞比例明显下降(P＜0.05).与空白组比较,华蟾素+放疗组中RNF2 mRNA和蛋白明显降低(P＜0.05),且各药物组均能促进p16 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),抑制CDK4 mRNA和蛋白水平(P＜0.05).结论:华蟾素注射液能有效抑制人食管癌ECA109细胞增殖,并将细胞阻滞于G0/G1期,机制可能与降低RNF2,CDK4水平,上调p16基因水平相关.
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高剂量X射线对人鼻咽鳞癌CNE1细胞株HIF-1α表达影响的研究
目的:探讨高剂量X射线照射前后低氧诱导因子1α(HIF-1α)在人鼻咽鳞癌CNE1细胞株中的表达情况.方法:体外培养人鼻咽鳞癌CNE1细胞株,待细胞进入对数生长期后行6 MVX射线照射,照射方法为2 Gy/次,隔日1次,共25次,累积剂量50 Gy,收集照射前后细胞采用免疫荧光染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测高剂量X线照射前后CNE1细胞株中HIF-1α基因及其蛋白的表达.结果:照射前后HIF-1α基因的表达的半定量值分别为0.23±0.02和0.37±0.04,t=-5.422,P=0.006；其蛋白的表达的半定量值分别为0.05±0.01和0.08±0.01,t=-3.674,P=0.021;X线照射50 Gy后HIF 1α在CNE1细胞中的表达比照前明显增高,P＜0.05；共聚焦显微镜观察到X线照射50 Gy后的CNE1细胞中绿色荧光强度高于照射前.结论:X射线照射可以引起HIF-1α在CNE1细胞中表达升高.
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X射线对血管平滑肌细胞粘着斑激酶的影响
目的探讨X射线对血管平滑肌细胞抑制作用的信号传导机制.方法建立体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)模型,给予2～20Gy(分别为2、5、10、15、20Gy)单次X射线照射,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,在mRNA水平观察X射线对VSMC粘着斑激酶(FAK)的影响.结果 2～20Gy 单次X射线照射下调FAK mRNA表达.照射后48h,2、5、10、15、20Gy各照射组FAK mRNA表达均明显低于对照组,除20Gy与15Gy剂量组之间差异无显著性意义外,各组FAK mRNA表达差异均有极显著性意义(F=364.21,P<0.01).同一剂量15Gy照射后6、24、48、72h照射组FAK mRNA表达均低于同时间点对照组,差异有显著性意义(分别为t=4.07,P=0.01;t=7.48,P=0.02;t=9.10,P=0.00;t=12.93,P=0.00),照射后45min、12h两组FAK mRNA表达差异无显著性意义(分别为t=2.18,P=0.10;t=1.46,P=0.22).结论放射可能通过在转录水平下调FAK的基因表达,使VSMC增殖受到抑制,诱导VSMC凋亡.其下调作用呈剂量相关性和时间相关性.
关键词： X射线照射 血管平滑肌细胞 粘着斑激酶 逆转录-聚合酶链反应 -
X射线对血管平滑肌细胞作用机制的实验研究
目的 研究X射线外照射对体外原代培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）生长、增殖的影响及作用机制。方法 体外培养VSMC，给予单次8?MV X射线照射，源皮距为100cm，剂量率400?cGy/min。按照射剂量分为2、5、10、15、20?Gy组，以0?Gy为对照组。分别采用细胞计数法、克隆形成实验、四唑盐（MTT）比色实验、伊红排斥实验、流式细胞术及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术，动态观察对VSMC生长、增殖、死亡率、凋亡的影响。结果 ①照射后24?h VSMC数降低，72?h后明显恢复（P<0.05）。②照射后48?h内VSMC吸光度（A570）值降低，72?h 2、5?Gy组A570值升高，而10、15、20?Gy组升高不明显（P<0.05）。③72?h内10、15、20?Gy组VSMC死亡率较高，6?d后，各剂量组死亡率下降至较低水平（P<0.05）。④克隆形成实验提示X射线照射可直接导致DNA链断裂，引起细胞死亡。⑤碘化丙啶（PI）染色流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰，TUNEL法阳性细胞核呈棕黄色，荧光镜下可见凋亡小体。结论 X射线外照射可抑制VSMC的生长和增殖，可能通过两种不同的机制即致死性和（或）亚致死性损伤及诱导凋亡导致VSMC死亡。为应用放射治疗防治血管成形术后再狭窄提供了理论依据。
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热休克蛋白70对X射线照射下wtp53蛋白的影响
目的 探讨反义热休克蛋白70 (hsc70) 在X射线照射下对野生型p53(wtp53)的影响。方法 利用脂质体方法将本室构建的反义hsc70真核表达重组质粒pXAhsc70转染wtp53的MCF-7乳腺癌细胞，PCR证实外源DNA存在。Western blot 检测hsc70蛋白下降程度。X射线照射转染细胞后，检测wtp53蛋白的表达情况及半衰期变化。结果 转染重组质粒的细胞中hsc70蛋白下降53%；不同剂量X射线照射下，反义hsc70的存在能够提高wtp53的表达；4?Gy相同剂量照射后，转染反义hsc70重组质粒的细胞中wtp53的半衰期延长。结论 反义hsc70能够上调wtp53的表达、稳定X射线照射下的wtp53蛋白并延长其半衰期；推测hsc70可能参与了wtp53的稳定和降解过程。
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pEgr-TNFα质粒的构建及基因-放射治疗小鼠黑色素瘤的实验研究
目的研究pEgr-TNFα重组质粒的构建及其联合放射治疗抑制小鼠黑色素瘤的效果和对免疫系统的影响.方法将TNFα cDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,用Egr-1的启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子,构建成pEgr-TNFα重组质粒;建立小鼠B16黑色素瘤动物模型,肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒,在不同时间测量肿瘤体积,并检测照后15 d部分免疫学指标.结果pEgr-TNFα基因-放射联合治疗后第3～15天,肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯基因治疗组和空质粒对照组.小鼠脾脏NK细胞毒活性、IL-2分泌活性、腹腔巨噬细胞TNFα和IL-1β活性均明显高于单纯放疗组.结论pEgr-TNFα基因-放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗组和单纯基因治疗组,同时可以减轻放疗对机体免疫功能的损伤.
关键词： pEgr-TNFα重组质粒 X射线照射 B16黑色素瘤 基因治疗 放射治疗 -
pEgr-ssEndostatin重组质粒瘤内辐射诱导表达及其抗肿瘤作用
目的观察pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗对移植黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其在瘤内辐射诱导表达.方法肿瘤局部注射脂质体包裹的pEgr-ssEndostatin重组质粒后42 h,接受20 Gy X射线照射,观察放疗后不同时间肿瘤大小,检测放疗后第2天瘤内Endostatin转录水平.结果pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗荷瘤小鼠能够增强放疗疗效;单纯接种pEgr-ssEndostatin质粒组和接种pEgr-ssEndostatin质粒+20 Gy照射组小鼠的肿瘤组织内有Endostatin mRNA表达,且pEgr-ssEndostatin质粒照射组的Endostatin mRNA水平高于单纯pEgr-ssEndostatin质粒组.结论pEgr-En-dostatin基因-放射治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗,肿瘤局部转染重组质粒后照射瘤内Endostatin表达增强.
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含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸1826对Lewis肺癌放疗联合作用及其剂量-效应关系
目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmethylated cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN) 1826对X射线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的联合作用及其剂量-效应关系.方法 在C57BL/6J纯系小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型.将64只荷瘤小鼠按完全随机化方法随机分为对照组、X射线照射(IR)组、低剂量CpG ODN1826组(0.15 mg)、中剂量CpG ODN1826组(0.30 rag)、高剂量CpG ODN1826组(0.45 mg)、低剂量CpG ODN826+ IR组(CPG1826 0.15 mg+ IR)、中剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.30 mg+ IR)和高剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.45 mg+ IR),每组8只.实验的第1、2、9天注射CpG ODN1826.实验的第2天开始X射线照射,1次/d,2.50 Gy/次,总剂量12.50 Gy.观察各组移植瘤生长速度和各治疗组肿瘤生长延迟时间(TGD),用DNA断裂的原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 成功建立荷瘤小鼠Lewis肺癌模型,成瘤率为100％.经治疗后,各组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小,CpG ODN1826 0.45 mg+ IR组移植瘤体积小.DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡率分别为(2.40±0.55)％、(5.50±0.76)％、(7.13±0.83)％、(11.63±1.06)％、(19.13±0.83)％、(12.88±0.83)％、(20.57±2.37)％和(28.17±3.31)％.各治疗组都明显高于对照组(t=11.15、7.91、17.82、39.48、24.73、16.61和17.05,P＜0.05),不同剂量CpG ODN1826 +IR组显著高于IR组(t=13.78、15.08和17.47,P ＜0.05)和不同剂量CpG ODN1826组(t=18.53、9.66和7.51,P ＜0.05).结论 CpG ODN1826能明显地抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,且呈剂量-效应关系.
关键词： Lewis肺癌 含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸 X射线照射 肿瘤生长延迟 凋亡 -
pcEgr\|IFNγ基因治疗联合放射治疗抗肿瘤作用的实验研究
目的探讨pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗对移植黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其免疫学机理.方法肿瘤局部注射脂质体包裹的pcEgr\|IFNγ重组质粒后36 h,接受20 Gy X射线照射,观察放疗后不同时间肿瘤大小,放疗后3 d瘤内IFN γ转录水平和15 d部分免疫学指标.结果pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗后第3～15天,肿瘤生长速率明显低于单纯照射组,照后第9～15天明显低于单纯基因治疗组和空质粒对照组;治疗后第3天,pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗组瘤内IFNγ表达水平明显高于单纯基因治疗组;脾脏NK细胞毒活性、IL-2和IFNγ分泌活性均明显高于单纯放疗组和单纯基因治疗组.结论 pcEgr\|IFNγ基因-放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗组,其机理可能与放疗诱导瘤内IFNγ基因表达增强,激活荷瘤机体抗肿瘤免疫功能有关.
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红景天对X射线照射大鼠脂质过氧化的影响
目的 探究长白山红景天有效成分对X射线照射的大鼠体内脂质过氧化反应的影响.方法 建立X射线辐射大鼠模型,照射前用长白山红景天提取物灌胃,观察各组大鼠血清羟自由基(·OH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化.结果 照射前服用红景天药物的大鼠抑制·OH能力明显升高(P＜0.05)；照射前服用红景天药物的大鼠SOD活力值相对于单纯组升高(P＜0.05)；各实验组大鼠血清丙二醛含量无明显差异(P＞0.05).结论 红景天苷对抑制X射线照射大鼠体内脂质过氧化反应作用显著.
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干扰基因BMI-1表达对食管癌细胞放射敏感性的影响
背景与目的：B细胞特异性的莫洛尼白血病毒插入位点1(B-cell-specific Moloney leukemia virus insertion site 1，BMI-1)期在放疗后DNA损伤中发挥重要作用。该研究采用siRNA干扰技术降低食管癌TE13细胞中BMI-1基因表达，探讨BMI-1的表达对X射线照射后食管癌细胞放射敏感性的影响。方法：针对BMI-1 mRNA序列，3对有效的干扰序列(siRNA1、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列由公司设计合成，瞬时转染食管癌TE13细胞，命名为BMI-1 siRNA1、BMI-1 siRNA2和BMI-1 siRNA3共3组，转染阴性对照序列组命名为NC组，未转染组命名为对照组。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测TE13各组中BMI-1在mRNA和蛋白水平的表达。采用MTT法检测BMI-1基因转染对TE13细胞增殖能力的影响。克隆形成实验检测BMI-1对TE13放射敏感性的作用。流式细胞术测定siRNA干扰BMI-1基因对细胞周期和凋亡分布的影响。RT-PCR和Western blot检测细胞内p16、CDK4基因和蛋白表达水平。结果：3对干扰序列使人BMI-1基因在mRNA和蛋白表达水平低于对照组和NC组，尤以siRNA3组效果明显。选择siRNA3作为干扰组进行MTT和流式细胞术。MTT结果表明，BMI-1 siRNA3转染后BMI-1的低表达对细胞的增殖能力无明显影响；克隆形成实验的结果显示，空白对照组、NC组、干扰组的D0分别为2.514、2.506和1.761 Gy；Dq值分别为2.694、2.664和2.122 Gy；外推数N值分别为2.920、2.895和3.336；SF2值分别为0.8268、0.8231和0.6255，可见对照组和空载组间放射敏感性差异无统计学意义(P>0.05)，而干扰组细胞的放射敏感性高于对照组和NC组；流式细胞术分析显示，6 Gy照射后，BMI-1 siRNA组G0/G1期比例明显高于对照组和空载组，G2/M期显著低于对照组和NC组，而未照射时BMI-1的低表达对细胞周期无明显影响。干扰BMI-1基因后TE13细胞p16基因和蛋白水平升高(P<0.01)，CDK4基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论：siRNA干扰技术有效地抑制了食管癌细胞TE13中BMI-1基因的表达，联合X线照射后显著消除了细胞周期在G2/M期的阻滞，增加了食管癌的放射敏感性，其诱导作用与p16和CDK4基因和蛋白表达有关。
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不同剂量X射线照射对小鼠卵巢结构和功能的影响
目的 探讨不同剂量X射线照射对小鼠卵巢结构及功能的影响.方法 6～8周龄小鼠24只按不同X射线照射剂量0、2、4、8 Gy均分A、B、C、D组,每天照射10 min.于照射当天和照射10、30和60 d,提取各组小鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养,并用HE染色观察卵泡细胞数及形态结构变化.结果 X射线照射导致6～8周龄小鼠卵巢损伤病理模型成功建立.D组照射后,2只小鼠死亡,2只小鼠致残且60 d时症状仍无好转.照射10、30和60 d闭锁卵泡数随照射剂量增加而增加(P＜0.05).照射30和60 d非闭锁卯泡数随照射剂量增加而减少(P＜0.05).D组病理变化重,表现为卵巢间质严重纤维化.结论 在小鼠卵巢损伤病理模型,X射线4 Gy照射后30 d取材是小鼠卵巢结构发生稳定病理变化的小有效剂量和合适时间.
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子宫动脉栓塞治疗子宫肌瘤患者的X射线辐射评价
目的研究子宫肌瘤患者在子宫动脉栓塞(UAE)手术中所经受的X射线照射.方法回顾性分析90例UAE辐射剂量资料,采用DSA机(Angiostar-Plus)配置的空透电离室型剂量监测系统(Diamentor K1 and Diamentor ED),在线读取面积剂量乘积DAP(cGy·cm2)和入射表面剂量ESD(mGy),采用Monte-Carlo转换因子估算有效剂量ED(mSv).结果透视时间(28.60±23.73)min,摄影(87±38)帧,DAP为(6 178±3 802)cGy·cm2,ESD为(378±245)mGy,ED为(9.89±6.08)mSv.透视对总DAP的贡献(34.1%±10.7%)小于摄影(65.9%±10.7%),透视对ESD值的贡献(61.1%±12.9%)大于摄影(39.5%±14.0%).结论 UAE治疗过程中患者受到了一次性较大剂量X射线照射.
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黄蘑多糖的辐射防护作用及其机理的初步探讨
本文研究了黄蘑多糖的辐射防护作用及其对受照小鼠肝脏组织中LPO含量及SOD、GSH-Px和CAT活性的影响.结果表明,黄蘑多糖可明显提高受致死剂量照射小鼠的30d存活率(P＜0.05),延长存活天数,保护指数可达1.32,并且,黄蘑多糖的这种辐射防护效果与有效的辐射防护药物人参多糖相似.进一步研究发现,小鼠经8.0GyX射线照射后72h,黄蘑多糖能明显降低受照小鼠肝脏中LPO含量(P＜0.01),且显著增强其SOD、GSH-Px和CAT活性(P＜0.05).提示,黄蘑多糖具有明显的辐射防护作用,且可与人参多糖相比.其作用机理与促进自由基清除,抑制或阻断自由基引发的脂质过氧化反应,提高机体抗氧化能力有关.
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X线诱导人鼻咽鳞状细胞癌CNE1细胞株MDR-1及P-gp的表达研究
目的 检测X线照射前后鼻咽鳞状细胞癌CNE1细胞株中多药耐药基因(MDR)-1及P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.方法 对CNE1细胞进行X线照射,在X线照射后、CNE1细胞培养24h后进行检测,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测X线照射前后CNE1细胞中MDR-1 mRNA的表达;Western blotting检测X线照射前后CNE1细胞中P-gp的蛋白表达;共聚焦显微镜观察照射前后CNE1细胞中P-gp的蛋白表达情况.结果 RT-PCR检测结果显示,X线照射前后CNE1细胞中MDR-1mRNA的吸光度(A)值分别为0.17 ±0.01和0.34±0.03,差异具有统计学意义(t=16.541,P＜0.001).Western blotting检测结果显示,X线照射前后CNE1细胞中P-gp蛋白的A值分别为0.02±0.01和0.04±0.01,差异具有统计学意义(t=4.612,P=0.016).共聚焦显微镜观察X线照射后CNE1细胞中P-gp的蛋白表达绿色荧光强度高于照射前.结论 X线照射可引起CNE1细胞中MDR-1及P-gp表达的升高,提示X线照射可使鼻咽鳞状细胞癌CNE1细胞产生多药耐药性.
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林蛙油复方冲剂对X射线照射大鼠外周血及骨髓嗜多染红细胞微核率的影响
目的 观察林蛙油复方冲剂对X射线照射大鼠外周血及骨髓嗜多染红细胞微核率的影响.方法 复制X射线辐射大鼠模型,用林蛙油进行干预,给药组分别按200,100,50 mg/(kg·d)林蛙油复方冲剂进行灌胃,1次/d,连续7d.空白对照组、单纯照射组给予氯化钠溶液,观察各组大鼠外周血及骨髓嗜多染红细胞微核率.结果 林蛙油复方冲剂可以显著提高外周血计数,降低大鼠骨髓嗜多染红细胞微核.结论 林蛙油复方冲剂对X射线的损伤具有一定的保护作用.
关键词： X射线照射 林蛙油 外周血 骨髓嗜多染红细胞微核 -
鼻咽癌CNE2细胞X射线照射诱导的多药耐药
目的 探讨鼻咽癌CNE2细胞X射线照射前后细胞P糖蛋白(P-gp)表达的差异及鼻咽癌CNE2细胞不同时期X射线照射时抑制率的差异,为临床鼻咽癌综合治疗的放化疗顺序的安排提供理论依据.方法 用免疫细胞学检测CNE2细胞株X射线照射前后P-gp阳性表达的差异.用四甲耦氮唑盐(MTT)法检测CNE2细胞株X射线照射前、后化疗药处理及同时X射线照射化疗药处理抑制率的差异.结果 鼻咽癌CNE2细胞X射线照射前P-gp阳性表达率为6.7%、X射线照射后阳性表达率为72.7%(P＜0.05).鼻咽癌CNE2细胞株X射线照射后化疗药处理抑制率较X射线照射前化疗药处理及X射线照射化疗药同时处理,在顺铂、紫杉醇、氟尿嘧啶均下降(P＜0.05).鼻咽癌CNE2细胞X射线照射化疗药同时处理抑制率与X射线照射前化疗药处理比较,在顺铂、氟尿嘧啶,紫杉醇均差异无显著性(P＞0.05).结论 鼻咽癌CNE2细胞X射线照射后可以诱导P-gp表达升高,降低对化疗药物的敏感性.鼻咽癌综合治疗时先化疗再放疗或同时放化疗可能效果更好.
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林蛙油复方冲剂对X射线照射大鼠血白细胞及血清羟自由基的影响
目的 探讨长白山林蛙油复方冲剂对X射线照射大鼠血白细胞(WBC)及血清羟自由基的影响.方法 复制X射线辐射大鼠模型,用林蛙油复方冲剂进行干预,观察各组大鼠WBC及血清抑制羟自由基能力.结果 ①WBC:预防组[(7.9±0.3)×109/L]显著高于单纯X射线照射组[(4.6±0.4)×109/L,P<0.05];空白对照组[(13.1±1.7)×109/L]显著高于单纯X射线照射组、预防组和治疗组[(4.6±0.4)×109/L、(7.9±0.3)×109/L、(6.3±0.2)×109/L,P<0.05];②血清抑制羟自由基能力:预防组[(482±160)U/L]显著高于空白对照组和单纯X射线照射组[(271±111)和(164±203)U/L,P<0.05],治疗组[(340±203)U/L]显著高于单纯X射线照射组[(164±203)U/L,P<0.05].结论 以林蛙油为主要成分的复方冲剂有一定的抗辐射作用.
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pEgr-TNFα基因联合放疗抑制食管癌细胞生长的实验研究
背景与目的:研究pEgr-TNFα重组质粒在稳定转染的食管癌细胞中的辐射诱导表达,及其联合放射治疗抑制食管癌细胞生长的效果.材料与方法:将脂质体包裹的pEgr-TNFα重组质粒,转染食管癌细胞系EC9706中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞;采用ELISA方法检测0.075 Gy和2 Gy剂量X射线诱导后TNFα的表达;观察该工种剂量X射线照射后,EC9706细胞的增长情况.结果:pEgr-TNFα重组质粒转染EC9706细胞,并获得稳定转染的细胞;大剂量X射线照射和低剂量X射线照射均可诱导TNFα表达增强,为对照组的6～6.3倍(P＜0.01);稳定转染的细胞经0.075 Gy和2 Gy X射线照射,8 d后细胞数明显低于未转染细胞组(P＜0.01)和稳定转染的假照射组(P＜0.01).结论:体外pEgr-TNFα基因-放射联合治疗有明显的抑制食管癌细胞生长的作用.
关键词： pEgr-TNFα质粒 X射线照射 食管癌细胞 低剂量照射 -
pcEgr-IFNγ重组质粒的构建与体外X射线诱导表达特性
目的:扩增小鼠IFNγcDNA全长并构建pcEgr-IFNγ重组质粒,研究该重组质粒在不同剂量X射线作用下在B16细胞中的表达及时程.方法:利用PCR方法扩增小鼠IFNγcDNA全长,插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,用Egr-1的启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子,构建成pcEgr-IFNγ重组质粒;通过脂质体转染法将重组质粒转染入B16细胞,利用ELISA试剂盒检测在不同剂量X射线作用下,重组质粒的表达量及表达时程.结果:IFNγcDNA的扩增产物经测序,结果基本与已知序列相符,重组质粒经酶切鉴定,得出相应的特异带.不同剂量X射线照射后,pcEgr-IFNγ在B16细胞中表达量为77.73～94.60pg / ml,明显高于对照组(P<0.05 ～ P<0.01);2GyX射线照射后6h,pcEgr-IFNγ表达量高,为90.00pg / ml,明显高于对照组(P<0.001).结论:用本实验克隆的IFNγcDNA所构建的pcEgr-IFNγ重组质粒,经X射线的诱导,在被转染的B16细胞中表达量明显增高.对重组质粒X射线诱导表达的剂量时程的检测,为将来pcEgr-IFNγ基因治疗合并放疗的体内研究奠定了基础.
