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华蟾素注射液联合放疗对食管癌细胞增殖与周期的影响
目的:观察华蟾素注射液对食管癌细胞ECA109增殖的抑制作用,分析华蟾素联合X射线照射对细胞周期的影响,探讨华蟾素注射液与放疗联合效应的机制.方法:实验分空白组、华蟾素组、放疗组、华蟾素+放疗组,作用食管癌ECA109细胞48 h后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素注射液对ECA109细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期的变化,反转录-PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组泛素连接酶(RNF2),p16和周期蛋白依赖性激酶(CDK4) mRNA和蛋白表达.结果:华蟾素可显著抑制食管癌ECA109细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性.与空白组比较,各药物组中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例明显升高(P＜0.05),S期细胞比例明显下降(P＜0.05).与空白组比较,华蟾素+放疗组中RNF2 mRNA和蛋白明显降低(P＜0.05),且各药物组均能促进p16 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),抑制CDK4 mRNA和蛋白水平(P＜0.05).结论:华蟾素注射液能有效抑制人食管癌ECA109细胞增殖,并将细胞阻滞于G0/G1期,机制可能与降低RNF2,CDK4水平,上调p16基因水平相关.
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RhoA/ROCKI信号通路在紫杉醇诱导宫颈癌细胞周期阻滞中的作用
目的 探讨RhoA/ROCKI信号通路在紫杉醇诱导宫颈癌细胞周期阻滞中的作用及其分子机制.方法 MTT法确定能引起细胞生长显著性抑制小浓度(1μmol/L)的紫杉醇.流式细胞仪检测细胞周期和RhoA 蛋白表达,Western blotting检测ROCKI、细胞周期蛋白(cyclins)及周期依赖性激酶(CDKs)的表达.结果 紫杉醇处理C33A细胞后,G2/M细胞数和RhoA/ROCKI蛋白表达显著性增加,并呈时间依赖性;而cyclin B1、A、D1和CDK1蛋白表达显著性降低.上述现象被RhoA抑制剂C3转移酶全部反转;却被ROCKI蛋白抑制剂Y-27632部分反转,但与对照相比差异仍显著.紫杉醇或RhoA/ROCKI抑制剂对CDK2的表达无显著性影响.结论 紫杉醇诱导了宫颈鳞癌C33A细胞的G2/M期阻滞,其机制与RhoA活性增强后抑制特异的cyclins和CDKs有关,而下游通路中ROCKI活性仅起到部分作用.
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CDK及Myc等对干细胞周期和多能性的调控作用
干细胞具有自我更新和分化能力,其中自我更新与在持续增殖的细胞周期保持其多能性密切相关.因此,干细胞的周期改变和调节方式均能从多方面影响其多能性,如细胞周期蛋白在干细胞多能性调节中发挥着重要作用,其中,周期蛋白依赖性激酶(CDK)等对干细胞的增殖和分化具有举足轻重的影响;S期是遗传和表观遗传学调控影响干细胞多能性的重要时期;转录因子Myc平衡着干细胞多能性和定向分化能力等.从CDK及Myc分子对干细胞周期的调节和对多能性的影响等方面进行综述和探讨,以促进细胞周期对干细胞相关调控机制的研究,为再生医学后续干细胞的深入研究提供理论依据.
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大鼠模型动脉硬化形成中多种周期蛋白和周期蛋白依赖性激酶表达
目的通过大鼠胸主动脉腹腔移植模型,进一步探讨移植物动脉硬化形成过程中平滑肌细胞增殖的机理.方法健康纯系Wistar大自鼠为供者,SD大鼠为受者,均为雄性,体重120～350g.共分为3组.A组:急性排斥组,共90只,分别于术后2,4,8周处死.每小组各30只.B组:慢性排斥组,共72只,分别于术后4,8,12周处死.每小组各24只.C组:同系对照组,供受者均为Wistar大白鼠,共72例.建立同种异体大鼠胸主动脉腹腔移植模型.采用HE染色观察血管排斥程度;Masson三色染色法判断动脉硬化程度;免疫组化染色观察α-actin表达的阳性细胞数,以及这些阳性细胞表达PCNA、cdk1/cyclinB1、cdk2/cyclinE、cdk4/cydinD1的表达程度.结果A组整个血管壁均有明显的炎性细胞浸润,外膜病变比内膜更重.外膜α-actin阳性细胞数随着时间推移、病程进展明显增多.这些α-actin阳性细胞高度表达PCNA、cdk1/cyclinB1、cdk2/cyclinE和cdk4/cyclinD1,并随病变进展其表达程度增高.B组造成外膜炎性细胞浸润也比对照组明显,纤维化程度也高,也明显表达cdk's/cyclins;内、外膜增生程度大致相当,动脉硬化的发生较急性排斥晚,进展缓慢.滋养血管在A、B两组早期表达cdk's和cyclins,而且炎性浸润愈重,其表达愈早且明显,过快地发生增生、管腔狭窄或阻塞.结论急、慢性排斥均可导致移植物动脉硬化.前者首先出现外膜大量炎性细胞浸润及VSMC的增殖、纤维化,并大量表达cdk's和cyclins,整个管壁纤维化严重且发生较早.慢性排斥导致内、外膜增生程度相当,进展期主要表现为内、外膜VSMC增生和大量表达cdk's/cyclins.
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细胞周期及其调控与肿瘤
很早以前,人们就已经知道细胞是通过分裂进行繁殖的.
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Roscovitine和Mimosine在Fas介导白血病细胞凋亡中的作用及其可能机制
目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)抑制剂roscovitine和DNA合成阻滞剂含羞草碱(mimosine)在Fas介导的白血病细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制. 方法:以急性成淋巴细胞白血病细胞Molt-4和急性T细胞白血病细胞Jurkat为靶细胞,用rhFasL、Roscovitine、Mimosine分别单独作用Molt-4细胞18 h(Jurkat细胞8 h)、24 h、24 h,或rhFasL分别与后两者联合作用靶细胞,用流式细胞术检测cyclins的表达和细胞凋亡率,Western blotting法检测CDK2和CDK1的磷酸化水平. 结果:Fas介导的细胞凋亡定位于G1期,Roscovitine和Mimosine作用后均可使Fas介导的细胞凋亡率明显增加(P<0.05).Roscovitine作用后G1期的cyclin D3和cyclin E表达升高,靶细胞被阻滞在G1期的比例明显升高,并下调CDK2 Thr-160位点的磷酸化水平;Roscovitine和rhFasL共同作用后,CDK2 Thr-160位苏氨酸磷酸化水平进一步减弱.Mimosine作用后 cyclin D3的表达下降和CDK2 Thr-160位点磷酸化水平明显下降,靶细胞被完全阻滞在G1期.Mimosine和rhFasL共同作用后cyclin D3、E、A和B1均有所下降,CDK2 Thr-160位苏氨酸和CDK1 Thr-161位苏氨酸的磷酸化水平明显减弱. 结论:Roscovitine和Mimosine均有协同rhFasL促进白血病细胞凋亡的作用,其机制与该两制剂阻滞细胞于G1期、抑制CKD2活性以及影响细胞周期蛋白表达有关.
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CDK4/6抑制剂联合内分泌治疗晚期乳腺癌研究进展
近年来,多项研究显示细胞周期蛋白依赖性激酶4和6(CDK4/6)抑制剂对于激素受体阳性晚期乳腺癌患者具有较好的疗效,甚至可改善内分泌耐药问题.相关研究表明CDK4/6抑制剂联合内分泌治疗在临床应用中极具前景.
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沉默INK4基因座中反义非编码RNA对人宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响及其机制
目的 观察沉默INK4基因座中反义非编码RNA(ANRILA)对人宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期HeLa细胞分为观察组和对照组,分别ANRIL-siRNA、对照siRNA乱序.转染24、48 h时采用CCK-8法观察两组细胞增殖情况(结果 以OD 450表示).转染48 h时采用荧光定量PCR法检测两组细胞ANRIL、p21、周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)mRNA相对表达量,采用CHIP实验观察两组细胞p21基因H3K27位点三甲基化状态.结果 转染24 h观察组、对照组OD 450分别为0.55±0.08、0.84±0.11,转染72 h观察组、对照组OD 450分别为1.21±0.12、1.82±0.14.转染24、72 h观察组OD 450均低于对照组(P<0.05).转染48 h观察组ANRIL及CDK6、CDK2 mRNA相对表达量低于对照组(P均<0.05),p21 mRNA相对表达量高于对照组(P均<0.05).转染48 h两组细胞p21基因H3K27位点三甲基化水平观察组、对照组分别为1.19±0.08、5.62±0.21,观察组低于对照组(P<0.05).结论 沉默ANRIL可抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖.其机制是沉默ANRIL可以降低宫颈癌HeLa细胞p21基因H3K27位点三甲基化水平,促进p21mRNA表达,抑制CDK6、CDK2 mRNA表达,从而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖.
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芦荟大黄素和吡喹酮对小鼠日本血吸虫病肝纤维化模型的影响
状细胞周期有关.
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细胞周期调控因子调控子宫内膜蜕膜化的研究进展
1 子宫内膜蜕膜化的基本过程胚胎的植入和生长要求子宫各种组织高度的重构.基质细胞快速增生和分化,腔上皮细胞逐渐凋亡,继之发生胚胎着床.胚泡滋养层与容受性子宫内膜接触后,基质细胞分化成蜕膜细胞,这一反应称为蜕膜化[1-2].人类蜕膜化一般发生于每个月经周期的第23天,受孕后持续至妊娠结束.小鼠的月经周期较短且不规则,只有接受到胚胎植入信号才会发生蜕膜化.
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PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响及其机制探讨
目的：探讨PIAsxα对鼻咽癌细胞凋亡和成瘤能力的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR，流式细胞术以及裸鼠成瘤实验分析PIAsxα在鼻咽癌组织中的表达情况，PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡和cyclin D、CDK表达及其成瘤能力的影响。结果鼻咽癌组织中PIAsxα mRNA的表达水平显著低于邻近正常鼻咽组织。过表达PIAsxα的CNE1细胞凋亡率及G2/M期细胞比例均明显增高，cyclin D1、cyclin D3、CDK4、CDK6和CDK8的mRNA表达均显著降低且在裸鼠体内的成瘤能力亦受到抑制。结论PIAsxα的表达下调可能通过增加cyclin D和CDK的表达，抑制鼻咽癌细胞的凋亡，促进鼻咽癌的发生和发展。
