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裸花紫珠提取物促血小板活化作用及其机制
目的:研究裸花紫珠Callicarpa nudiflora提取物对血小板活化的影响,并探讨其作用机制.方法:雄性SD大鼠50只,随机分为空白组,云南白药组(0.930 g·kg-1),裸花紫珠提取物低、中、高剂量(0.131,0.263,0.525 g·kg-1)组,连续给药10 d.给药结束后分别提取各组动物血小板,采用微量版法测定二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板聚集率;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血小板中血栓素(thromboxane B2,TXB2),5-羟色胺(5-serotonin,5-HT)含量.采用ELISA法检测血小板中环磷酸腺苷(cyclic adenosine 5’-monophosphate,cAMP)的释放量.采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裸花紫珠提取物对血小板中磷酸化-磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,p-PI3K)蛋白表达的影响.结果:给药后,裸花紫珠提取物可明显增强ADP诱导的血小板聚集反应(P＜0.05),可明显促进血小板释放TXB2和5-HT(P ＜0.05).另外,裸花紫珠提取物低、高剂量组血小板cAMP含量分别为(3.074±0.538),(3.340±0.265)nmol·L-1,较空白组(3.795±0.586) nmol· L-1明显降低(P＜0.05),裸花紫珠提取物中剂量组血小板中cAMP为(3.003±0.242) nmol·L-1,较空白组有显著提高(P＜0.01).裸花紫珠提取物可显著提高p-PI3K激酶蛋白表达量(P＜0.01).结论:裸花紫珠提取物可显著上调ADP诱导的血小板活化,其机制可能与其显著增强血小板ADP受体(P2Y12)所介导的信号转导有关.
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脊髓背角P2Y12受体/P38MAPK参与MRS2395对CCI大鼠的镇痛作用
目的:观察鞘内注射P2Y12受体拮抗剂MRS2395对慢性坐骨神经结扎(chronic constriction injury,CCI)大鼠机械痛阈及脊髓背焦P2Y12受体、P2X4受体和P38MAPK表达变化的影响,探讨P2Y12受体参与神经病理性疼痛的相关机制.方法:成年SD大鼠随机分为3组(n=8):假手术组、CCI模型vehicle组(鞘内注射0.005％DMSO生理盐水)、MRS2395处理组(CCI+鞘内注射MRS2395 100 pmol/L).CCI及MRS2395处理组大鼠均于鞘内置管7天之后行坐骨神经结扎,连续14天鞘内注射0.005％ DMSO生理盐水、MRS2395(100 pmol/L),每天2次,在术前1天、术后第1、3、5、7、10、14天测定给药lh后机械缩足反射阈值(mechanical withdraw threshold,MWT);在第7、14天处死大鼠,取脊髓背角,免疫印迹观察P2Y12受体、P2X4受体和P38 MAPK表达变化.结果:大鼠CCI术后l天即可出现机械痛敏;与假手术组相比,CCI组第1、3、5、7、10、14天MWT明显降低(P＜0.01);与CCI组相比,MRS2395处理组术后第1,3,5,7天MWT明显升高(P＜0.01);术后10天和14天MWT升高较缓(P＜0.05).与假手术组相比,CCI组第7、14天背角P2X4受体、P2Y12受体和P38 MAPK表达明显上调(P＜0.05);与CCI组相比,MRS2395处理组第7、14天P2Y12受体和P38MAPK表达上调均明显减弱(P＜ 0.05); MRS2395处理组不影响CCI组第7天P2X4受体表达,但可以明显抑制CCI组第14天P2X4受体表达上调(P＜0.05).各组大鼠脊髓背角P2Y12受体和P2X4受体表达之间存在正相关.结论:鞘内注射P2Y12拮抗剂MRS2211可以明显抑制CCI大鼠机械痛敏症状;而且脊髓背角P2X4受体和P38MAPK表达下调.这提示P2Y12受体拮抗剂可能通过影响脊髓背角小胶质细胞P2X4受体和P38MAPK表达,在脊髓水平发挥镇痛作用.
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替格瑞洛类似物的合成及其抗血小板聚集活性
目的 合成新的替格瑞洛衍生物并研究其抗血小板聚集活性.方法 将化合物替格瑞洛复杂的手性环丙基胺片段用相对简单的苯基烷胺或杂环烷胺类取代,设计合成了一系列非环丙基取代的替格瑞洛衍生物.以Boc保护的(R)-丙氨酸为原料,根据文献经多步反应得到中间体1;该中间体与4,6-二氯-2-正丙巯基嘧啶-5-胺缩合,环化生成三氮唑,后再与各类胺缩合生成目标化合物.测定所有目标化合物抗兔血小板聚集的活性.结果 共制得19个化合物,其化学结构由1 H-NMR和MS确证,且均未见文献报道.目标化合物表现出不同程度的抑制血小板聚集的活性,其中4f(IC50=49.7μmol·L-1)活性明显高于阳性对照药替格瑞洛(IC50=71.5 μmol ·L-1),有进一步研究价值.结论 替格瑞洛分子的手性环丙基侧链并非活性必需基团,可作为结构优化的对象深入研究.
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血小板ADP-P2Y12受体拮抗剂研究进展
血小板在动脉粥样硬化斑块破裂后血栓形成发病机制中发挥关键作用,因而针对血小板激活途径的药物成为抗栓治疗的主要手段.循证医学表明,抗血小板治疗可以有效地预防动脉粥样硬化疾病患者发生严重的心血管事件.已经成为防治急性冠脉综合征的主要方法[1].
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P2Y12受体抑制剂对骨癌痛大鼠痛阈及脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响
目的 研究脊髓P2Y12受体在大鼠骨癌痛中的作用及其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法 雌性SD大鼠40只,用随机数字表法分为5组(n=8):正常组(N)、假手术组(S)、DMSO溶剂骨癌痛组(DA)、骨癌痛组(A)、骨癌痛镇痛组(MA).大鼠左胫骨上段注入经腹水培养的Walker256癌细胞建立骨癌痛模型.建模后第9～12天分别行鞘内注药,S组、A组注射0.9％生理盐水,DA组注射5％二甲基亚砜(DMSO)溶剂,MA组注射MRS2395(400 pmol/μl,溶于5％ DMSO溶液),容量各15μl.注药前后测试大鼠左后足机械痛阈值,术后第12天测完痛阈后取L4～6脊髓,采用免疫组化及免疫荧光法测定脊髓背角磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 建模后第9天,与N组(36.1 ±4.0)g、S组(38.9±5.2)g比较,MA组机械性痛阈值下降为(19.8±5.0) g(P＜0.01),第12天p-p38MAPK表达增加(P＜0.01).与DA组(17.7±3.0)g、A组(19.1 ±2.5)g比较,MA组鞘内给药后大鼠机械痛阈值增高,峰值为(26.5±4.7)g(P＜0.05);与DA组(细胞数:43.4±3.8、IOD值:569 ±27)、A组(细胞数:45.0±2.6、IOD值:594±22)比较,MA组(细胞数:20.9±2.2、IOD值:246±25)第12天脊髓p-p38MAPK表达减少(P＜0.01)；但与N组、S组比较,MA组机械痛阈值仍低于正常(P＜0.01),脊髓p-p38MAPK蛋白表达高于N组(细胞数:9.9±2.4、IOD值:82±28)、S组(细胞数:10.9±2.2、IOD值:109 ±25)(P＜0.01).免疫荧光双标显示脊髓背角p-p38 MAPK与小胶质细胞共表达.结论 鞘内注射P2Y12受体抑制剂MRS2395可能通过抑制脊髓背角的p38MAPK磷酸化程度部分减轻大鼠骨癌疼痛.
关键词： 骨癌痛 P2Y12受体 p38丝裂原活化蛋白激酶 脊髓 -
血小板ADP受体及其拮抗剂的研究进展
二磷酸腺苷(ADP)是第1个已知的低分子血小板弱聚集诱导剂,ADP以较高的浓度储存在血小板致密颗粒中,当血小板受到刺激活化后,ADP从致密颗粒中释放出来,作为二次激动剂,通过作用于多种受体,可增强自身及其他诱导剂对血小板的诱导作用并有助于血栓的稳定化.ADP受体拮抗剂可以抑制ADP受体的表达、结合及其活性,从而有效地抑制了血小板的聚集,对治疗血栓性疾病具有重要的作用.目前,ADP受体拮抗剂类药物因为具有较好的抗栓活性和较高的安全性,已经被广泛的应用于临床.通过对血小板ADP受体的类型及重要的受体拮抗剂进行了综述,对该类药物的开发具有一定的参考价值.
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CYP2C19、P2Y12受体的基因多态性与氯吡格雷抵抗的相关性
目的:探讨CYP2C19、P2Y12受体的基因多态性与氯吡格雷抵抗的相关性.方法:从我院在2015年8月至2017年8月间收治的96例口服氯吡格雷患者为研究对象,根据胰岛素抵抗情况分为抵抗组和非抵抗组,分析CYP2C19、P2Y12受体的基因多态性与氯吡格雷抵抗的相关性.结果:两组患者在CYP2C19*2、P2Y12受体的基因分布上存在统计学差异(P<0.05);两组患者不存在CYP2C19*3和P2Y12受体上的统计学差异(P>0.05);氯吡格雷抵抗风险因素为CYP2C19*2 GA+AA型.结论:CYP2C19*2 GA+AA型与氯吡格雷之间存在明显相关性,在指导氯吡格雷临床应用上发挥着重要作用.
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鞘内注射MRS2395对慢性坐骨神经结扎大鼠脊髓背角钙离子接头蛋白-1表达的影响
目的 观察鞘内注射P2Y12受体拮抗剂MRS2395对慢性坐骨神经结扎(CCI)大鼠热痛阈及脊髓背角钙离子接头蛋白-1(Iba1)表达变化的影响.方法 成年SD大鼠40只,随机均分为五组:假手术组(A组)、CCI模型组(鞘内注射生理盐水,B组)、CCI+鞘内注射MRS2395 1 pmol/L组(C组)；CCI+鞘内注射MRS2395 10 pmol/L组(D组)；CCI+鞘内注射MRS2395 100 pmol/L组(E组).B、C、D、E组大鼠均于鞘内置管5d之后行慢性坐骨神经结扎,分别连续14d鞘内注射生理盐水、MRS2395 1、10、100 pmol/L,2次/天,分别在术后第1、7、10、14天测定首次给药1h后的热缩足潜伏期(TWL)；分别在第7、14天灌注大鼠取脊髓做冰冻切片,观察大鼠脊髓背角Iba1表达的变化.结果 术后第1、3、5、7、10、14天B、C、D、E组大鼠TWL明显短于A组,且C、D、E组TWL明显长于B组(P＜0.05).与A组相比,术后第7、14天B、C、D、E组Iba1阳性细胞个数、平均光密度值明显增加(P＜0.05).与B组比较,术后第7、14天C、D、E组脊髓背角Iba1阳性细胞数目明显减少,其平均光密度值明显降低(P＜0.05).结论 鞘内注射P2Y12受体拮抗剂MRS2395可以明显抑制CCI大鼠背角小胶质细胞激活和热痛敏症状,提示P2Y12受体拮抗剂可能通过抑制脊髓小胶质细胞的活化而发挥镇痛作用.
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抗血小板聚集药Brilinta
阿斯利康公司近期公布了一项名为PLATO研究的完整数据,宣布其开发的口服抗血小板新药—Brilinta(ticagrelor)比P2Y12受体拮抗剂氯吡格雷的作用更强、更快且更持久.
关键词： Brilinta ticagrelor 抗血小板药 P2Y12受体 -
P2Y12基因多态性与PCI术后患者氯吡格雷反应变异性的关联分析
目的:探讨P2Y12受体G52T基因多态性与经皮冠状动脉介入术(PCI)术后患者氯吡格雷反应变异性的关系.方法:提取 109例PCI术后患者外周血基因组DNA,采用DNA测序技术检测P2Y12受体G52T基因多态性.以5、20 μmol·L-1二磷酸腺苷为诱导剂,测定患者服用氯吡格雷前及服药后12、36 h血小板聚集率.结果:109例PCI术后患者中GG、GT和TT基因型分别占79.82%、17.43%和2.75%.两组患者(GG纯合子组和T基因携带组)在服用氯吡格雷前后不同时间点的大血小板聚集率差异无统计学意义.结论:P2Y12受体G52T基因多态性可能与PCI术后患者氯吡格雷反应变异性没有关联.
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氯吡格雷预处理对脓毒症大鼠心肌损伤保护作用及机制的研究
目的：探讨氯吡格雷干预对血小板聚集及脓毒症心肌损伤的影响及脓毒症时心肌损伤与血小板的聚集的关系。方法取Wistar雄性大鼠72只，随机分成3组：正常对照组（ NC组），内毒素组（ ET组），氯吡格雷＋内毒素组（ CL＋ET组）。 CL＋ET组预先给予氯吡格雷3 d后，腹腔注射LPS（10 mg· kg-1）建立急性脓毒症心肌损伤模型。在0、6、12 h采血检测血小板聚集率、心肌肌钙蛋白I（ cTnI）；酶联免疫吸附测定法（ ELISA）检测血清、心肌中TNF-α的表达水平；检测心脏干湿重比；取心肌标本，行HE染色，光镜观察大鼠心肌结构改变。结果与NC组相比，注射LPS后ET组血小板聚集率更高（ P＜0．05），且随时间延长而增加[（27．78±1．01）、（32．41±3．04）、（50．99±14．35）ohm]；CL＋ET组预先给予氯吡格雷处理后，血小板聚集率处于抑制状态（ P＜0．05）。 CL＋ET组较ET组，在相应时点对内毒素诱导的cTnI、血清及心肌TNF-α水平升高有明显的抑制作用（P＜0．05）；心肌干湿重比有差异（P＜0．05）。 ET组LPS注射6 h后心肌出现炎症细胞浸润、纤维肿胀、排列紊乱，12 h显著；与ET组比较，CL＋ET组在相应时点对心肌炎症细胞浸润和心肌纤维肿胀程度减轻。结论 LPS引起的心肌损伤过程中血小板聚集明显，氯吡格雷阻断血小板P2Y12受体，抑制血小板聚集，对LPS引起的心肌损伤具有一定的抑制作用。
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替格瑞洛增强腺苷生物学效应的研究进展
替格瑞洛是一个起效迅速、作用强效、与P2Y12受体可逆结合的抗血小板聚集药物.替格瑞洛不同于其他噻吩并吡啶类P2Y12受体拮抗剂的临床获益,与P2Y12受体拮抗以外的作用密切相关.近来研究发现,替格瑞洛可以通过抑制腺苷转运体ENT1,特别是在缺血和组织损伤处,提高血浆中腺苷的浓度,增加腺苷介导的生物学效应.本文将对替格瑞洛增加腺苷介导的生物学效应作一综述.
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CYP2C19、P2Y12基因多态性与缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗的相关性研究
目的:考察CYP2C19、P2Y12受体的基因多态性与氯吡格雷抵抗的相关性研究.方法:96例中国缺血性脑卒中患者持续服用氯吡格雷75 mg,收集全血提取DNA,采用Sequenom MassARRAY iPLEX(R)基因型分析技术进行CYP2C19* 2(681G＞A,rs4244285)、CYP2C19*3(636 G＞A,rs4986893)及P2Y12受体(52G＞T,rs6809699) (744T＞C,rs2046934)4个SNPs的基因型分析.采用二磷酸腺苷(ADP)诱导光比浊法测定血小板聚集功能.采用Chi-square检验或Fisher确切概率法分析相关性.结果:患者分为氯吡格雷抵抗(CR)组与非抵抗组,CYP2C19* 2(rs4244285)及P2Y12受体(rs2046934)基因型分布在两组间的差异有统计学意义(P=0.027,P=0.034).其中,CYP2C19*2 GA+ AA基因型为CR发生的风险因素(OR=2.607,95％CI:1.062～6.399).CYP2C19*3(rs4986893)及P2Y12受体(rs6809699)基因型分布在两组比较中差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在中国缺血性脑卒中患者中,CYP2C19*2(rs4244285) GA+ AA型与氯吡格雷抵抗的发生密切相关,该基因型检测将有助于指导氯吡格雷的临床合理应用.
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2型糖尿病与血小板P2Y12受体
ADP-P2Y12受体途径在血小板激活、血栓形成中发挥重要作用.2型糖尿病血小板P2Y12受体途径异常可能是血小板功能亢进的重要原因之一.在正常人,胰岛素对P2Y12途径有抑制作用,而2型糖尿病由于血小板存在胰岛素抵抗,导致P2Y12途径的高敏感性.许多2型糖尿病对普通剂量的抗血小板药物反应性降低,但是加太P2Y12阻断剂的剂量后可能会克服这种耐药现象.
关键词： P2Y12受体 2型糖尿病 胰岛素抵抗 P2Y12受体阻断剂 -
新型抗血小板药物替格瑞洛对鼠树突状细胞免疫功能的影响
[目的]研究体外实验中,抗血小板药物替格瑞洛对原代小鼠树突状细胞(DC)摄取吞噬抗原以及促进T细胞增殖能力的影响.[方法]以RT-PCR、Western-Blotting方法测定细胞P2Y12受体基因和蛋白水平表达.实验分为空白对照组、单纯ADPβS刺激组、替格瑞洛+ADPβS组.以FITC标记葡聚糖(FITC-Dextran)作为荧光抗原检测DC吞噬抗原能力;将DC负载卵清蛋白(OVA),与OT-2转基因鼠脾脏T淋巴细胞共培养4d,流式细胞仪检测荧光染料CFSE标记T细胞增殖情况.[结果]小鼠DC上表达P2Y12受体.替格瑞洛能够阻断ADPβS诱导的DC抗原吞噬功能(P＜0.05),以及显著抑制T细胞增殖能力(P＜0.05).[结论]抗血小板药物替格瑞洛可以通过P2Y12受体抑制鼠DC免疫功能,发挥免疫调节作用,为冠心病治疗提供新的途径.
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ADP受体阻滞剂的研究进展
ADP受体阻滞剂是一类与血小板的ADP受体特异性结合从而抑制血栓形成的一类药物.该类药物选择性的作用于血小板的ADP受体(P2Y1和P2Y12受体),抑制血小板膜ADP受体的表达、结合及其活性,从而有效的抑制了血小板的聚集和血栓的形成.目前应用于临床药物有噻氯匹定、氯吡格雷.还有多个药物正处于临床试验或临床前期实验中.现对ADP受体阻滞剂在抗血小板形成药物中的重要地位、研究进展和开发前景进行综述,为该类药物的研发提供依据.
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血小板膜P2Y12受体信号传导通路与冠心病相关性研究
目的:探讨血小板膜P2Y12受体介导的血小板活化及凝血激活与冠心病的关系及临床意义.方法:采用病例对照研究,检测238例中国四川地区[冠心病(coronay atherosclerotic heart disease,CHD)组177例,对照(control)组61例]血小板大聚集度(Maximum platelet aggregation ratio,MAR)、血浆P选择素(granule membrane protein,GMP140)及各项凝血指标.结果:冠心病组与对照组比较,MAR、GMP140、纤维蛋白原(Fibrinogen,FIB)水平显著升高,凝血酶原时间(prothrombin time,PT)显著降低(P＜0.01);多元Logistic回归分析逐步校正后,GMP140水平和冠心病密切相关(r=0.69,P＜0.1).结论:血小板膜P2Y12受体活化介导的血小板高活状态引起的血浆高GMP140水平在冠心病的发生发展中起重要作用.
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鞘内注射MRS2395及MRS2211对足烫伤大鼠机械痛及炎症因子表达的影响
目的:观察鞘内注射P2Y12受体拮抗剂MRS2395和/或P2Y13受体拮抗剂MRS2211对足烫伤大鼠机械痛以及脊髓背角炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响.方法:在烫伤前1h、烫伤后第6、12、24和48 h测定给药后机械缩足反应阈值(MWT);烫伤后24 h,取脊髓背角,实时荧光定量PCR检测Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达,ELISA技术检测背角IL-1β、IL-6和TNF-α含量.结果:与假烫伤组相比,大鼠烫伤后6h即出现MWT明显下降,持续24h处于较低水平(P＜0.01),但48 h后MWT回升.与烫伤组相比,单独鞘内注射MRS2395或MRS2211组12 h后MWT升高(P＜0.05),联合给药组MWT升高更为明显(P＜0.01).与假烫伤组相比,烫伤大鼠脊髓背角Iba-1、IL-1β、IU6和TNF-omRNA表达明显上调(P＜0.01),IL-1β3、IL-6和TNF-α水平上调(P＜0.01).单独鞘内注射MRS2395或MRS2211仅部分抑制烫伤大鼠脊髓背角Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调(P＜0.05)以及部分抑制烫伤大鼠脊髓背角IL-1β3、IL-6和TNF-α水平上升(P＜0.05).MRS2395和MRS2211联合鞘内注射几乎完全阻断烫伤大鼠脊髓背角Iba-1、IL-6和TNF-α mRNA表达上调(P＜0.01),仅部分阻断IL-1β表达上调(P＜0.05),以及几乎完全阻断烫伤引起的脊髓背角IL-6和TNF-α水平上升(P＜0.01),仅部分阻断IL-1β水平上升(P＜0.05).结论:单独鞘内注射MRS2395或MRS2211能够缓解烫伤痛大鼠机械痛敏症状,但联合用药时,镇痛效果更佳,其机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞激活以及炎症因子IL-1 β、IL-6和TNF-α表达上调有关.
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AM1241抑制ADPβS诱发培养大鼠脊髓背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体表达及炎症因子释放
目的:离体条件下,观察大麻素CB2受体激动剂AM1241对嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA表达以及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响.方法:培养纯化新生SD大鼠(＜3 d)脊髓背角小胶质细胞,荧光定量PCR技术检测AM1241(10-5 mol/L,1h)对ADPβS(10-5mol/L,3h)诱发的背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA表达的影响;ELISA技术检测AM1241(10-5 mol/L,1 h)对ADPβS(10-5 mol/L,3h)诱发的小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响.结果:与正常对照组相比,ADPβS(10q mol/L,3 h)可以刺激脊髓背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体在mRNA水平表达上调(P＜0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α释放相应增加(P＜0.05).AM1241(10-5 mol/L,1h)几乎完全阻断ADPβS刺激小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放的效应(P＜0.05);AM1241的这种抑制效应可以被CB2受体拮抗剂AM630(10-5 mol/L,1 h)反转(P＜0.05).结论:大麻素CB2受体激活可以抑制ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA水平表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放.
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P2Y12基因多态性与冠心病患者氯吡格雷抵抗的相关性研究
氯吡格雷是治疗冠心病常用抗血小板聚集药物之一,现阶段在国内医院被普遍使用,通过研究大量冠心病患者长时间用药效果发现其抗血小板聚集功能针对不同患者效果不同,有些患者对于氯吡格雷并不敏感,没有达到理想效果,目前学者们称之为氯吡格雷抵抗.现阶段研究者们对其机制进行了相当深入的研究,而基因多态性是众多研究方向的一个热点.本综述就冠心病患者氯吡格雷抵抗与受到重点关注的P2Y12基因多态性是否存在密切联系进行探讨.
