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北京市丰台区诺如病毒暴发疫情的实验室鉴定及基因特征分析
目的 对北京市丰台区2014年5-6月发生的3起诺如病毒急性胃肠炎暴发疫情进行病原体鉴定及基因分型.方法 采用实时荧光定量-聚合酶链反应法对62份病例标本进行诺如病毒核酸检测,阳性标本经反转录-聚合酶链反应扩增RNA多聚酶区部分序列,使用BioEdit及Mega 6.0软件对扩增序列进行同源性及进化分析.结果 36份标本中检出GⅡ型诺如病毒,阳性率为58.06％;序列分析表明幼儿园为GⅡ.7型,学校1为GⅡ.8型,学校2为GⅡ.6型.结论 诺如病毒是引起丰台区急性胃肠炎暴发疫情的主要病原体,丰台区流行的诺如病毒基因型存在多样性.
关键词： 诺如病毒 荧光定量-聚合酶链反应 进化分析 基因分型 -
荧光定量-聚合酶链反应法检测丙型肝炎病毒RNA
随着定量荧光定量-聚合酶链反应法(PCR)的出现,人们将定量PCR用于丙型肝炎的诊断和疗效观察.为了解ELISA法检测抗-HCV与病毒RNA的定量关系,我们用荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测丙型肝炎病毒RNA,并与ELISA法检测抗-HCV进行比较.
关键词： 荧光定量-聚合酶链反应 丙型肝炎 RNA -
原发性肝癌组织中陷井受体3基因表达与扩增的临床意义
目的观察原发性肝癌组织中陷井受体3(DcR3)基因的表达和扩增,探讨该基因在肝癌组织中过度表达的原因,分析临床病理学因素在肝癌DcR3基因表达和扩增中的作用.方法对48例病理学证实的原发性肝癌患者的组织,利用RT-PCR检测癌组织及癌旁组织DcR3基因mRNA表达,荧光定量PCR检测该基因的扩增倍数,统计分析肝癌组织中DcR3基因表达与扩增的相关性,比较不同临床病理学类型肝癌中该基因表达及扩增的差异.结果48例肝癌组织中DcR3基因mRNA阳性表达29例,阳性率为60.4%;癌旁组织无阳性表达.mRNA表达与肿瘤大小、临床分期及肿瘤的浸润和转移有关(P＜0.05).mRNA阳性表达组的基因扩增倍数为1.53±0.82,阴性组为0.75±0.33,其差异有显著意义(P＜0.01).48例患者的DcR3基因扩增倍数为0.18～3.86,平均值为1.22±0.77,扩增倍数超过2的患者共7例,占14.6%.不同扩增倍数肝癌患者该基因mRNA的表达差异有显著意义(P＜0.01);不同临床病理学特征肝癌间DcR3基因的扩增倍数差异无显著意义(P＞0.05).序列分析发现其mRNA序列与源序列有3个碱基改变.结论(1)原发性肝癌组织中存在DcR3基因的高表达,对应的癌旁组织中未见表达;(2)原发性肝癌组织中存在DcR3基因的扩增,并与其在肝癌组织中的表达相关;(3)原发性肝癌DcR3基因mRNA表达产物存在碱基改变;(4)DcR3基因的表达与肝癌的大小、临床分期及浸润和转移有相关性.
关键词： 肝细胞肿瘤 DcR3基因 逆转录-聚合酶链反应 荧光定量-聚合酶链反应 -
叉头转录因子1质粒标准品的构建
背景:研究表明叉头转录因子1是一种新的2型糖尿病易感基因,但2型糖尿病患者与健康人的叉头转录因子1基因在转录水平上差异性的研究不多.由于还没有商品化叉头转录因子1的质粒标准品,因此有必要构建其标准品.目的:构建应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测叉头转录因子1 mRNA的质粒标准品.设计、时间及地点:单一样本重复实验,于2007-1 1/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成.材料:SYBR ExScriptTM反转录-聚合酶链反应Kit试剂盒,SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒,凝胶回收纯化DNA试剂盒,质粒DNA小量纯化试剂盒,PMDl8-T Vector试刺盒等.方法:从健康志愿者血标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板应用聚合酶链反应扩增出目的片段,对其回收纯化连接到PMD18-T载体及转化JMl09,阳性克隆经测序分析,确认重组质粒正确.抽提重组质粒,用紫外分光光度仪测定其浓度,再根据公式换算成拷贝浓度,后稀释成梯度标准品.主要观察指标:重组质粒聚合酶链反应和基因测序结果,标准品标准曲线的相关系数及标准品的重复性.结果:成功构建了叉头转录因子1质粒标准品,通过聚合酶链反应及基因测序鉴定其目的片段已成功插入载体.各稀释度的标准品经荧光定量-聚合酶链反应扩增后,其循环阈值与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性范围是2.39×(105-1012)copies/mL.各稀释度标准品的批内重复性好,其变异系数范围为0.29%～1.16%.结论:实验成功构建了具有较好灵敏度和重复性的叉头转录因子1质粒标准品.
关键词： 质粒标准品 叉头转录因子1 荧光定量-聚合酶链反应 -
FQ--PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA
目的评价荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA的临床应用价值.方法用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测乙型肝炎患者血清251份和健康体检者血清116份的HBV DNA和HBV血清标志物.结果HBsAg、HBeAg和抗-HBc 3项阳性、HBsAg、抗-HBe和抗-HBc 3项阳性以及抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc同时或分别阳性的样品,HBV DNA阳性率分别为96.5%、56.6%和12.3%,HBV DNA拷贝数分别为1.12×10s/ml、1.45×106/ml和6.61×104/ml.用ELISA检测HBeAg阳性率仅为FQ-PCR检测HBV DNA阳性率的55.4%.结论FQ-PCR对乙型肝炎早期诊断,传染性的判断及疗效考核有临床实用意义.
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肺栓塞患者血浆凝血因子基因表达谱的差异
目的 应用基因芯片技术比较肺栓塞(PE)患者与健康者凝血因子基因表达谱的差异,探讨血浆中凝血因子mRNA水平与PE的关系.方法 取9例PE患者(PE组)和33名健康者(正常对照组)的静脉血5mL,抽提血液总RNA.合成9个Cy3标记的PE患者cRNA探针和1个Cy5标记的标准对照探针,与44000 Agilent人全基因组Oligo芯片杂交,用Agilent扫描仪扫描荧光信号.应用Feature Extraction软件分析、计算每点的Cy3和Cy5信号值.以9组数据中, Cy3/Cy5比值(Ratio 比值)为标准,筛选差异表达基因.并采用荧光定量-聚合酶链反应进行验证.结果 9张芯片筛选出共同差异表达的凝血因子基因13条,其中mRNA表达水平上调基因11条,分别为FⅦ、FⅪ、FⅫⅠ A1、FⅤ、FⅧ、FⅩ、FⅡ、vWF、FGG、F2R、F2RL1;表达下调基因2条,分别为FⅨ和FⅫ.结论 血浆凝血因子的差异表达可能与PE的发病有关.
关键词： 肺栓塞 遗传学 基因芯片 荧光定量-聚合酶链反应 凝血因子 -
慢性乙型肝炎346例血清学指标检测结果分析
目的：探讨慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV PreS1-Ag)、乙肝五项、HBV-DNA和肝功能之间的关系及其联合检测的临床应用价值。方法：分别采用酶联免疫法、时间分辨免疫荧光分析法、荧光定量-聚合酶链反应法、全自动生化分析仪检测346例慢性乙型肝炎患者的前S1抗原、乙肝五项、HBV-DNA含量以及肝功能指标。结果：慢性乙型肝炎346例患者中，HBV PreS1-Ag(+)214例(61.8%)，HBV-DNA (+)230例(66.5%)，两者间呈正相关(P<0.05)；HBeAg(+)和HBeAg(-)标本中HBV PreS1-Ag(+)率分别为86.1%和50.8%；慢性乙型肝炎患者肝功能指标中的ALT、AST、GGT异常率较其他指标高，其中ALT异常率高(52.6%)，AST异常率次之(49.1%)。结论：HBV PreS1-Ag与HBV-DNA相关性较好,在一定程度上HBV PreS1-Ag可替代HBV-DNA，同时与HBeAg相比，更能反映病毒复制情况。ALT、AST是较灵敏的肝功能指标。慢性乙肝患者可以HBV PreS1-Ag、ALT及AST作为长期随访指标。
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荧光定量--聚合酶链反应检测慢性非细菌性前列腺炎病原体216例结果分析
目的:了解慢性非细菌性前列腺炎(NBP)患者感染沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(UU)的状况.方法:应用荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)对216例NBP患者同时检测CT、UU.结果:NBP患者CT、UU的感染率分别为15.28%、37.50%,混合感染率为6.48%.结论:UU、CT是NBP的主要病原体.
关键词： 慢性前列腺炎 沙眼衣原体 解脲支原体 荧光定量-聚合酶链反应 -
丙型肝炎病毒RNA与血清标志物的关系
目的:探讨血清HCV RNA含量与丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、HCV抗体的关系.方法:采用荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测75例HCV抗体复检阳性无偿献血者、9例丙型肝炎患者的HCV RNA含量,并与HCV抗体、ALT的检测结果比较.结果:75例献血者中,HCV抗体(+)、ALT(-)组HCV RNA阳性率高于HCV抗体(+)、ALT(-)组.在9例丙型肝炎患者中,ALT与HCV RNA含量呈正相关,且相关性显著(r=0.72,P＜0.05).结论:在HCV感染的人群中,ALT的高低可间接反应HCV在体内的状态,这对安全输血和诊断有重要意义.
关键词： 丙型肝炎病毒 荧光定量-聚合酶链反应 丙氨酸氨基转氨酶 RNA -
不同检测方法对女性生殖道支原体感染的比较研究
目的:探讨不同检测方法对女性生殖道支原体感染检测上的优缺点.方法:对我院2006年1月～2008年1月就诊的320例女性患者的泌尿生殖道分泌物标本采取支原体培养法和荧光定量一聚合酶链反应(FQ-PCR)的检测方法,比较两种方法的检测结果.结果:支原体培养法的阳性检出率为38.1%,FQ-PCR的阳性检出率为27.5%,两种方法的检测结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论:FQ-PCR解决了目前病原体检出率低、周期长、特异性差等缺点,且克服了常规PCR技术假阳性率高的缺陷.
关键词： 生殖道支原体感染 荧光定量-聚合酶链反应 支原体培养 -
人工肝支持系统治疗前后HBV DNA水平的变化
目的探讨重型乙型病毒性肝炎HBV DNA的复制情况及其在人工肝支持系统治疗中的变化.方法采用荧光定量PCR方法检测重型乙型病毒性肝炎患者人工肝前后HBV DNA水平.结果人工肝治疗前后病人血清HBV DNA定量(1og值)分别为(6.20±0.53),(5.33±0.47)(n=36,P＜0.01);治疗后血清总胆红素、直接胆红素、总胆汁酸、丙氨酸转氨酶等明显下降(n=78,P＜0.01),凝血酶原时间明显缩短(n=78,P＜0.01).结论人工肝支持系统治疗可降低重型乙型病毒性肝炎HBV DNA水平并能明显改善其肝功能.
关键词： 重型病毒性肝炎 人工肝支持系统 乙型肝炎病毒 DNA 荧光定量-聚合酶链反应 -
FQ-PCR检测HCVRNA及其临床应用
目的评价荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HCV RNA的临床应用价值.方法用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测126例HCV感染患者血清的HCV RNA和血清标志(抗-HCV).结果 126例肝炎患者血清标本中,HCV RNA检出率为61.90%,抗-HCV检出率为92.86%.急性丙型肝炎患者HCV RNA载量均值达5.0×106拷贝/ml,慢性肝炎次之,肝硬化相对偏低,为5.3×103拷贝/ml.结论 FQ-PCR对丙型肝炎的早期诊断、病毒复制水平及抗病毒治疗的疗效评估具有重要的临床应用价值.
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SYBR Green 实时荧光定量聚合酶链反应宽范围检测人GAPDH基因体系的建立
目的：建立一种快速、灵敏的人3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）方法。方法根据GeneBank数据库中提供的人GAPDH基因（NC＿000012）mRNA序列，在其保守区域设计一对用于RT-PCR引物，通过优化反应体系和反应条件，成功建立了检测人GAPDH 基因的SYBR Green RT-PCR方法。结果实验结果表明，该检测方法检测人G A PD H基因的低检测拷贝数可达到15 co pies／μL ，在一个较宽的浓度范围内（1．5×101～1．5×107）具有良好的线性关系（r＝0．992）。溶解曲线呈现了清晰的单一峰型，Tm值为（84．5±0．2）℃。结论该研究为人GAPDH基因作为内参基因进行人功能基因与病原基因表达的定量分析提供了一种更为快速、灵敏的方法。
关键词： 内参基因 3-磷酸甘油醛脱氢酶 荧光定量-聚合酶链反应 灵敏 -
淮安地区婴幼儿人巨细胞病毒感染回顾性分析
目的：了解淮安地区人巨细胞病毒（HCM V ）感染婴幼儿的临床特征。方法对2013年11月至2015年2月确诊的HCMV感染患儿72例进行回顾性分析，包括荧光定量聚合酶链反应（FQ‐PCR）法尿 HCMV DNA检测结果，以及合并症及临床指标分布特征。结果72例患儿尿HCMV DNA检测阳性率为90．3％（65／72）；72例患儿中，合并肺炎60例（83．3％），合并肝炎34例（47．2％），合并血液系统损伤14例（19．4％），合并神经系统损伤3例（4．2％），合并两种及其以上并发症28例（38．9％）。结论 FQ‐PCR是检测HCM V感染的良好方法。HCM V感染患儿易出现肺炎、肝炎、血液系统损伤等临床表现。采用FQ‐PCR对疑似HCMV感染患儿进行 HCMV DNA检测有助于疾病的早期诊治。
关键词： 人巨细胞病毒 荧光定量-聚合酶链反应 诊断 治疗 -
FQ-PCR法检测腹腔镜结直肠癌根治术患者外周血CK20 mRNA变化
目的 检测腹腔镜结直肠癌根治术患者外周静脉血CK20 mRNA的表达, 探讨腹腔镜结直肠癌根治术对术后肿瘤细胞血循环微转移的影响.方法 应用FQ-PCR方法检测24例行腹腔镜辅助下结直肠癌根治术患者(腹腔镜组)和31例传统开腹结直肠癌根治术患者(开腹组)外周静脉血CK20 mRNA表达的变化.结果 腹腔镜组CK20 mRNA术前阳性率为29.
关键词： 结直肠癌 微转移 腹腔镜 CK20 mRNA 荧光定量-聚合酶链反应 -
丙型肝炎病毒RNA与血清标志物的检测
临床上, 诊断丙型肝炎多采用检测血清中特异性标志物抗HCV抗体及非特异性标志物丙氨酸氨基转移酶(ALT), 而检测丙型肝炎病毒RNA(HCV RNA), 则是诊断HCV感染直接、可靠的指标.随着定量PCR的出现, 人们将其用于丙型肝炎的早期诊断和治疗监测中.我们利用荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测了HCV RNA, 并与血清性标志物(抗HCV抗体、ALT)进行了对比研究, 以探讨两者之间的关系.
关键词： 丙氨酸氨基转移酶 丙型肝炎病毒 荧光定量-聚合酶链反应
