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艾灸对亚急性衰老大鼠胸腺CD4+T细胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB蛋白表达的影响
目的:通过观察IL-2及相关受体蛋白水平的变化情况,探讨艾灸对亚急性衰老大鼠胸腺CD4+T细胞的影响.方法:采用D-半乳糖致亚急性衰老大鼠模型.24只清洁级雄性SD大鼠随机分为:正常组,模型组和艾灸组.艾灸组温和灸双侧肾俞穴5 min/次,共计40 d.采用免疫磁珠法分离胸腺CD4+T细胞,并再用Western Blot方法检测各组大鼠胸腺CD4+T细胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB的蛋白表达量.结果:模型组大鼠胸腺CD4+T细胞中IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB蛋白的表达量较正常组降低,差异有统计学意义(P<0.05);艾灸组大鼠胸腺CD4+T细胞中IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB蛋白表达量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:艾灸肾俞穴可上调胸腺CD4+T细胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB的表达.
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NF-κB活化在烟雾吸入性损伤发生中的作用及地塞米松对其影响
为探讨NF-κB活化在大鼠烟雾吸入性损伤发生中的作用及地塞米松对NF-κB活化的影响,制作大鼠烟雾吸入性损伤模型,将大鼠随机分为正常对照组、烟雾致伤组及地塞米松治疗组,应用免疫组化方法观察伤前及伤后2、6、12、24、48、72h肺组织NF-κBP65、IκB-α、TNF-α、ICAM-1蛋白表达的动态变化.结果显示,烟雾吸入性损伤后肺组织NF-κBP65、TNF-α、ICAM-1蛋白表达升高,IκB-α表达降低.而地塞米松治疗组则下调NF-κBP65、TNF-α、ICAM-1表达,上调IκB-α表达.提示NF-κB活化参与了烟雾吸入损害的发生、发展,而地塞米松则抑制NF-κB活化,部分阻断细胞因子及粘附分子产生,从而减轻炎症性损害.NF-κB活化可能是烟雾吸入性损伤炎症发展的关键点,从而为从转录水平作为靶点治疗烟雾吸入性损伤提供了理论依据.
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转IκBα突变型基因永生化神经前体细胞株的构建
目的 构建转IκBα突变型基因永生化神经前体细胞株(INPCs).方法 限制性内切酶双酶切含IκBα突变型基因的质粒pBluescript/CNP/IκBαM,得到目的 基因片断IκBα突变型基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切反应及DNA测序鉴定重组载体pcDNA3.1/IκBαM.利用脂质体介导的基因转染技术分别将载体pcDNA3.1及pcDNA3.1/IκBαM转染INPCs,经G418(150μg/ml)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养,2周后用RT-PCR和Western blot检测阳性细胞株中IκBα的表达,用受NF-κB特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测阳性细胞株中NF-κB的活性.结果 经限制性酶切分析及DNA测序证实重组载体pcDNA3.1/IκBαM中含有IκBα突变型基因,转pcDNA3.1/IκBαM永生化神经前体细胞中IκBα的总mRNA表达增高,Western blot可检测到突变型IκBα蛋白的表达,且细胞中NF-κB活性下降.结论 成功构建了转IκBα突变型基因INPCs,该细胞株能通过IκBα突变型基因的表达来下调NF-κB的活性.
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大肠癌凋亡相关因子表达的研究进展
大肠癌是消化道的常见恶性肿瘤,目前发病机制尚未完全阐明.近年来,由于饮食结构的变化,大肠癌的发病率逐年升高,极大威胁着人们的健康.肿瘤的发生、生长、浸润、转移是一个极其复杂的过程,涉及正常细胞向肿瘤细胞转化、细胞凋亡、新生血管形成、淋巴管形成、细胞外基质降解等多种机制,因此,影响以上机制的基因和因子成为研究肿瘤发生、发展的热点.
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龙胆水提物对急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用及机制研究
目的 探讨龙胆水提物对急性胰腺炎(AP)大鼠肝损伤的保护作用及机制.方法 SD大鼠40只随机分为正常组(n=8)与模型组(n=32),模型组采用经十二指肠乳头逆行胆胰管注射5%牛黄胆酸钠方法制备AP大鼠模型,造模后大鼠分为4个亚组:模型对照组(n=8)、龙胆水提物12 mg/kg组(n=8)、24 mg/kg组(n=8)、48 mg/kg组(n=8),龙胆水提物低、中、高剂量组每天分别灌胃给予龙胆水提物12 mg/kg,24 mg/kg及48 mg/kg,正常组和模型对照组给予等体积的0.9%氯化钠溶液,连续给药1周,1次/d.给药结束后颈总动脉取血,分离血清,检测血清ALT、AST、AMY、IL-6、TNF-α水平,大鼠脱颈椎处死后剪取肝右叶1/2,于4%中性甲醛固定,HE染色观察肝脏结构变化,western blot 检测肝脏组织NF-κβ及I-κB表达水平.结果 与模型对照组比较,龙胆水提物24 mg/kg及48 mg/kg组血清ALT、AST、AMY水平及IL-6及TNF-α表达水平显著降低(P<0.01);肝组织NF-κβ蛋白表达水平显著降低(P<0.01),I-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.01).结论 龙胆水提物能够显著改善AP导致的肝损伤.
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藻蓝蛋白对2型糖尿病大鼠血糖的调节作用
目的 研究藻蓝蛋白对糖尿病大鼠胰岛细胞功能的影响及其可能机制.方法 健康雄性Wistar大鼠30只,应用高脂高糖饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法建立2型糖尿病大鼠模型,藻蓝蛋白灌胃治疗,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡,免疫组化技术检测胰岛细胞核因子-κB(NF-κB)和NF-κB抑制蛋白(I-κB)的表达.结果 大鼠造模成功后空腹血糖明显升高,经藻蓝蛋白治疗后空腹血糖较模型组显著降低(P＜0.05).糖尿病模型组大鼠胰岛细胞凋亡指数显著升高、NF-κB表达明显增强,I-κB表达明显下降.经藻蓝蛋白治疗后,大鼠胰岛细胞NF-κB表达较模型组明显降低,I-κB表达较显著增强,细胞凋亡指数显著降低(P＜0.05).结论 藻蓝蛋白可抑制2型糖尿病大鼠胰岛细胞中I-κB/NF-κB通路的活性,对胰岛细胞具有一定的保护作用.
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大肠癌中Survivin、NF-κB、I-κB及Caspase-3的表达及意义
目的：研究Survivin、NF-κB、I-κB及Caspase-3在大肠癌中的表达及临床病理。方法采用 MaxVision 免疫组织化学法分别检测大肠腺癌、大肠腺瘤及正常大肠黏膜组织中Survivin、NF-κB、I-κB及Caspase-3的表达，分析表达结果与患者的年龄、性别、肿瘤组织浸润程度、分化程度、Dukes分期及淋巴结转移之间的关系。结果大肠腺癌组织中Survivin和NF-κB阳性表达（100％，100％）高于大肠腺瘤（80％，90％）及大肠正常黏膜组织（25％，35％，P＜0.01，P＜0.05）。大肠腺癌中I-κB和Caspase-3的阳性表达（22％，24％）明显低于大肠腺瘤组织（80％，70％）及大肠正常黏膜组织（80％，85％，P＜0.01）。大肠腺癌中NF-κB和I-κB的阳性表达与Dukes分期及淋巴结转移密切相关（P＜0.05）。在大肠腺癌中Survivin的阳性表达与Caspase-3呈显著负相关（r＝－0.697，P＜0.01），与NF-κB呈显著正相关（r＝0.639，P＜0.01），与 I-κB 呈显著负相关（r＝－0.613，P＜0.01）；Caspase-3的阳性表达与NF-κB呈显著负相关（r＝－0.601，P＜0.01），与I-κB呈显著正相关（r＝0.616，P＜0.01）；NF-κB 的表达与 I-κB 呈显著负相关（ r＝－0.822，P＜0.01）。结论 Survivin、NF-κB高表达及I-κB与Caspase-3低表达是大肠腺癌发生的必然事件，联合检测上述指标有助于大肠腺癌的诊断。 NF-κB及I-κB在大肠腺癌的浸润生长及远处转移过程中发挥着一定的作用。联合检测该四个因子不能用于全面评价大肠腺癌的预后。
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急性肺损伤核因子-κB的活性变化及糖皮质激素的干预研究
目的观察急性肺损伤(ALI)肺组织核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α的活性变化及地塞米松(Dex)的干预作用.方法采用ALI大鼠模型,实验动物随机分为ALI模型组(8只)、Dex治疗组(8只)、正常对照组(8只),用免疫组织化学法结合原位定量分析检测肺组织NF-κB、IκB-a、TNF-α蛋白表达及相对含量,并进行肺组织的病理学光镜检查.结果 ALI大鼠肺组织NF-κB、TNF-α的蛋白表达明显升高,I-κB表达显著降低.Dex能明显下调NF-κB、TNF-α的蛋白表达,上调I-κB表达,并能减轻肺组织的损伤程度.结论 NF-κB活化在ALI的发生、发展过程中起着重要作用.Dex发挥抗炎作用,减少肺组织损害,与其对NF-κB的活性和细胞因子的调节作用密切相关.
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实时荧光定量PCR分析海水浸泡伤大鼠小肠组织NF-κB及上游受体TLR4mRNA的表达
腹部外伤海水浸泡后急性炎症反应综合征的基本病理生理变化是机体内促炎与抗炎因子失衡所致的过度炎症反应[1].核因子κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)是创伤后调节细胞炎症反应的许多基因的转录活化所必需的细胞因子.同时,作为NF-κB上游受体的Toll样受体4(TLR4),在炎症反应过程中能够激活以NF-κB为核心的信号转导途径,诱导炎症反应,促进抗原提呈细胞的活化[2].本研究旨在应用SYBR Green实时定量PCR技术,检测海水浸泡伤大鼠小肠组织NF-κB、NF-κB抑制蛋白IκB-α及其上游受体TLR4 mRNA表达水平,探讨以NF-κB为核心的炎症反应体系在海水浸泡腹部伤中的作用.
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齐墩果酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤过程中IKK/I-κB/NF-κB通路的影响
目的:探讨齐墩果酸(oleanolie acid,OA)预处理对大鼠肝脏缺血冉灌注损伤(hepatic ischemic/reperfusion injury.HIRI)过程中IKK/I-κB/NF-κKB信号转导通路的影响.方法:将128只SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、0.5%羧甲基纤维素钠组(CM组)和齐墩果酸预处理组(OA组).OA组以100 mg/kg的齐墩果酸混悬液,SH和IR组以相同容积的水,CM组以相同容积的0.5%CMC-Na分别每日灌胃1次,连续7天.第8天建立70%肝脏缺血模型,缺血60 min后再灌注.于术前、再灌注0、3、6 h取肝组织.用Western blot法测定肝脏细胞内IKK2,I-κBα及细胞核内NF-κB p65蛋白含量.结果:术前、0 h,各组胞浆未检测到IKK2,核内仪检测到极少量NF-κB,各组I-κBα蛋白量之间没有统计学差异.3、6 h时,SH组胞浆IKK2和核内NF-κB的蛋白含量均分别明显低于其余3组(P＜0.05);此时OA组该两个蛋白含量分别明显低于CM组和IR组(P＜0.05).3、6 h时,SH组I-κBα的蛋白含量均分别明显高于其余3组(P＜0.05),OA组此值分别明显高于CM组和IR组(P＜0.05),CM组和IR组各时点之间的细胞内IKK2,I-κBα及细胞核内NF-κB p65蛋白量均无统计学差异(P＞0.05).结论:HIRI能促进胞浆内IKK2蛋白的表达,使I-κB磷酸化水解,NF-κB活化进入细胞核内介导炎症反应,损伤肝细胞.缺血前使用OA可抑制IKK/I-κB/NF-κB信号传导通路的激活,这可能是OA预处理减轻HIRI的机制之一.
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健脾益肺口服液对慢性阻塞性肺疾病肺脾气虚证大鼠核因子-κB的影响
目的:观察健脾益肺口服液对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)“肺脾气虚证”大鼠肺组织核因子-κB活性的影响,探讨其是否通过核因子-κB途径抑制COPD的气道炎症及调节其免疫功能.方法:将65只SD成年雄性大鼠随机分为6组,分别为空白组,健脾益肺口服液低剂量组、中剂量组、高剂量组,模型组,地塞米松组;用香烟烟熏加脂多糖复制“肺气虚证”模型;接着用大黄液灌胃,复制“脾气虚证”;造模时间共为28 d,在第14天开始给药,造模后取大鼠肺组织,用试剂盒提取组织蛋白质,利用Western Blot方法,测定大鼠肺组织I-κB及核因子-κB的表达水平.结果:①模型组大鼠核因子-κB显著高于正常组(P＜0.01),I-κB显著低于正常组(P＜0.01).②健脾益肺口服液各剂量组及地塞米松组大鼠核因子-κB表达明显下降,与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);健脾益肺口服液高剂量组、中剂量组及地塞米松组I-κB显著升高,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);随剂量的增加,疗效亦增加,但健脾益肺口服液各组与地塞米松组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:健脾益肺口服液可增强I-κB活性,抑制COPD“肺脾气虚证”太鼠核因子-κB,从而推断其可能通过抑制核因子-κB改善COPD免疫功能,抑制其气道炎症.
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NF-кB/Ⅰ-кB在过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用
目的探讨氧化应激损伤心肌细胞的分子机制.方法采用0.5 mmol/L过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞;末端标记检测细胞凋亡;Westernblot检测蛋白质含量;免疫组化检测NF-κB在细胞内的分布.结果①H2O2损伤3 h,心肌细胞死亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率均较对照组明显升高(P＜0.01);②H2O2损伤24 h,末端标记发现大量凋亡细胞;Westemblot示NF-κB内源性抑制蛋白I-KB(inhibitor KB,I-KB)在H2O2损伤5 min即减少,15 min时减至低,而后逐渐恢复;免疫组化显示H2O2损伤0.5 h可引起心肌细胞中NF-κB从胞浆向胞核移位;与单纯损伤组比,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)能明显降低心肌细胞LDH释放率(P＜0.01).结论在H2O2所致心肌细胞损伤中,既有坏死,又有凋亡的发生,而NF-κB/I-κB信号通路的激活可能介导了H2O2所致的心肌细胞损伤.
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NF-κB、I-κB、Bcl-2在宫颈癌组织中的表达及其与人乳头瘤病毒感染的关系
背景与目的:已表明核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)及其抑制蛋白κB(inhibitor protein κB,I-κB)对凋亡基因的调控起重要作用,NF-κB在某些肿瘤中高表达,与肿瘤的发生有关,但在宫颈癌中的表达以及与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系未见报道.本研究旨在探讨宫颈癌组织中NF-κB、I-κB、bcl-2的表达及其与HPV感染的关系.方法:采用免疫组织化学SP法对46例宫颈癌和26例正常宫颈组织进行NF-κB、I-κB、bcl-2蛋白检测,用PCR技术对组织标本的HPV-DNA进行检测.结果:NF-κB、bcl-2在宫颈癌组织中的表达率分别为60.9%(28/46)和52.2%(24/46),在正常对照组的表达率分别为23.1%(6/26)和0(0/26),宫颈癌组显著高于正常对照组(P＜0.01);I-κB在宫颈癌组和正常对照组的表达率分别为30.4%(14/46)和57.7%(15/26),宫颈癌组显著低于正常对照组(P＜0.05);NF-κB与bcl-2的表达呈显著性相关(P＜0.05).HPV-DNA阳性的宫颈癌组织中NF-κB的阳性率显著高于阴性组(P＜0.05);I-κB、bcl-2的阳性率在HPV-DNA阳性和阴性组之间无显著性差异(P＞0.05).结论:NF-κB、bcl-2的高表达和I-κB的低表达与宫颈癌的发生过程可能有关;HPV感染可能与NF-κB表达有关.
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不同浓度硼替佐米对K562/DNR细胞株NF-κB,IκB及P-gp表达的影响
目的:观察不同浓度硼替佐米(商品名万珂,PS-341)对柔红霉素(DNR)诱导的K562耐药细胞株(K562/DNR)核因子-κB(NF-κB)、抑制蛋白κB(IκB)及P-糖蛋白(P-gp)表达的影响,探讨PS-341逆转耐药的分子机制.方法:四甲基偶氮唑盐微茸酶反应比色法(MIT法)进行耐药细胞株和PS-341细胞毒性的判定.以100 mg/L DNR单用或联合应用0.4,4,40μg/L PS-341作用于K562/DNR 36 h,检测各组NF-κb,IKB及P-gP表达情况,并测定NF-κB活性,检测各组细胞凋亡率.结果:与阴性对照组相比,DNR可诱导NF-κB表达上调、IκB表达下调、P-gp表达上调;加用PS-341可显著抑制NF-κB表达,同时使IκB表达增加、P-gP表达下降,上述作用随PS-341浓度增加而增强.NF-κB活性(%)检测示:DNR组为25.9±2.5,DNR+0.4μg/L PS-341组为20.3±2.0,DNR+4μg/L PS-341组为6.1±2.5,DNR+40μg/LPS-341组为4.6±1.6,加入PS-341后,NF-κB活性受抑,该作用随PS-341浓度增加而增强.细胞凋亡率(%)检测结果示:DNR组为22.5±4.6,DNR+0.4μg/L PS-341组为31.0±5.2,DNR+4μg/L PS-341组为43.6 ±7.7,DNR+40μg/LPS-341组为56.0±9.3,加入PS-341后可提高DNR引起的细胞凋亡率,该作用随PS-341浓度的增加而增强.结论:PS-341可逆转白血病细胞耐药,该作用呈浓度依赖性.
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抗氧化剂对脑缺血复灌损伤的保护作用及与NF-κB的关系
目的:观察脑缺血后两种抗氧化剂对NF-κB蛋白表达及活性变化和IκB磷酸化水平变化的调节机制.方法:采用四动脉结扎全脑缺血模型,应用p65,p50抗体进行免疫印迹分析,凝胶电泳迁移改变分析法测定NF-κB的DNA结合活性,尼氏染色观察神经元的死亡.结果:NF-κB的蛋白表达和结合活性在脑缺血复灌不同时间呈明显的时间依赖性;NF-κB的活性在缺血/复灌6小时后达到高;其活性变化均能被吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)所抑制;组织学观察也证明了两种抗氧化剂对脑缺血的保护作用.结论:抗氧化剂对脑缺血/复灌引起的损伤的保护作用是通过降低NF-κB的活性而实现的,而NF-κB的活化和失活主要受抑制蛋白IκBα磷酸化降解调控.
