参元丹对去氧肾上腺素诱发家兔主动脉环收缩的拮抗作用及与内皮功能的关系

目的观察参元丹对PHE诱发家兔离体主动脉环痉挛的拮抗作用及其是否具有内皮依赖关系.方法用家兔离体主动脉环灌流的方法,以PHE诱发组织肌条痉挛,观察参元丹对PHE的拮抗作用及不同浓度参元丹拮抗PHE引起家兔主动脉环收缩的剂量反应关系.结果参元丹对内皮完整及去内皮家兔主动脉环PHE引起收缩均有拮抗作用,对内皮完整动脉环作用明显强于去内皮动脉环,其作用明显强于香丹注射液及黄芪注射液.参元丹拮抗PHE引起家兔主动脉环收缩的作用存在量效关系.结论参元丹具有拮抗PHE引起的血管平滑肌收缩作用,其作用可能部分需要内皮功能参与.

参元丹治疗冠心病心绞痛络病理论初探

冠心病心绞痛作为心血管常见病之一,其辨证论治有着丰富的中医理论基础,而络病理论在其病机理论的形成中具有重要作用,主要体现在"络脉阻滞、络脉空虚、络毒蕴结、络脉损伤"四个方面,运用络病理论可以从血液及血管两方面指导冠心病的治疗,参元丹切合络病理论的研究内容,其通过改善血管内皮功能、预适应样心肌保护作用等方面为从络病理论论治冠心病心绞痛提供实验研究证据支持.参元丹的理法内涵由此得到进一步的扩充,并且丰富了络病现代理论研究的领域.

益气逐瘀方对心肌梗死大鼠心肌损伤标志物及miR-24基因表达的影响

目的 观察益气逐瘀方参元丹对心肌梗死大鼠心肌损伤标志物及缺血心肌组织miR-24基因表达的影响.方法 50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、参元丹高剂量组(H-SYD组)、参元丹中剂量组(M-SYD组)、参元丹低剂量组(L-SYD组),每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,H-SYD组、M-SYD组、L-SYD组从术后第2天开始参元丹药液灌胃,Sham组和Model组等剂量生理盐水灌胃,共给药2周.治疗结束时,观察各组大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及缺血心肌组织miR-24基因表达情况.结果 与Model组比较,H-SYD组、M-SYD组及L-SYD组均能显著降低血清CK、LDH水平(P＜0.05,P＜0.01),H-SYD组、M-SYD组能够显著升高缺血心肌组织miR-24表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论 益气逐瘀方参元丹能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤,其作用机制可能与上调缺血心肌组织miR-24基因表达有关.

益气逐瘀法对中华小型猪PMI模型氧化应激反应的影响

目的:探索氧化应激反应在中华小型猪PCI围手术期心肌损伤(Peri-procedure Myocardial Injury,PMI)过程中的作用,以及益气逐瘀方参元丹(SYD)的心肌保护作用及机制.方法:中华小型猪24只,随机分为假手术组(n=6),模型组(n=6),SYD低剂量组[0.06 g/(kg·d),n=6],SYD高剂量组[0.24 g/(kg·d),n=6].于小型猪冠脉狭窄处行球囊扩张+拉伤+大支架置入法建立PCI围手术期心肌损伤模型,测定并对比各组手术前1h,术后4h,12 h,24h血清肌酸磷酸激酶同工酶(ck-mb)、肌钙蛋白I(cTNI)及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(TSH).结果:各组术前心肌酶水平无统计学意义(P＞0.05),术后心肌酶升高,但低于正常参考值5倍,提示发生PCI围手术期心肌损伤,造模成功.参元丹低剂量组、高剂量术后各时间点心肌酶水平均低于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05).术后12 h、24h参元丹高剂量组心肌酶水平低于参元丹低剂量组,差异具有统计学意义(P＜0.05).模型组术后SOD、GSH水平较假手术组下降,MDA水平较假手术组升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);模型组术后SOD、GSH水平较术前降低,MDA水平较术前升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);参元丹高剂量组与低剂量组均能够升高SOD、GSH,同时降低MDA,差异具有统计学意义(P＜0.05),但仅在术后4h,参元丹高剂量组与低剂量组作用存在统计学意义(P＜0.05),高剂量组优于低价量组.结论:中华小型猪PMI模型造模成功,参元丹具有改善PMI的内源性心肌保护作用.参元丹高剂量组较低剂量组作用更加明显,提示参元丹的心肌保护作用可能呈剂量相关.氧化应激因子在手术前后存在差异,提示氧化应激反应可能参与到了PMI的发生发展过程,参元丹具有加速抗氧化因子生成,维持抗氧化因子有效浓度,降低氧化因子.参元丹的心肌保护作用可能与其抗氧化应激反应相关.

益气逐瘀方对急性心肌梗死大鼠miR-24表达及心肌细胞凋亡的影响

目的:观察益气逐瘀方参元丹对急性心肌梗死大鼠miR-24表达及心肌细胞凋亡的影响.方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参元丹高、中、低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,参元丹高、中、低剂量组从术后第2天开始给予参元丹药液灌胃,假手术组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,共给药2周.治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平及心肌组织miR-24基因表达情况,TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果:实验结束时,与模型组相比,参元丹高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P＜0.05,P＜0.01),升高心肌组织miR-24 mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01),同时降低心肌细胞凋亡指数(P＜0.05,P＜0.01).结论:益气逐瘀方参元丹能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与上调心梗大鼠缺血心肌组织miR-24基因表达有关.

体外心肌细胞缺氧/复氧模型损伤及参元丹干预的影响

目的:建立体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,观察益气逐瘀组方参元丹(SYD)对模型心肌细胞存活率和细胞损伤程度的影响,以进一步探讨其改善冠心病围手术期心肌损伤的作用机制.方法:体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,建立缺氧复氧细胞模型并予分组处理,CCK法检测心肌细胞存活率,酶法检测各组细胞培养上清波中磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果:模型组存活率低于正常组(P＜0.05),而CPK、LDH释放量高于正常组(P＜0.05);SYD含药血清组、PDTC+ SYD组以及PDTC+空白血清组细胞存活率均高于模型组和空白血清组(P＜0.05),细胞酶释放量均低于模型组和空白血清组(P＜0.05),此3组间的数据比较,差异不具有统计学意义.结论:参元丹能够提高心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的细胞存活率,降低细胞损伤程度;其机制可能通过抑制核因子NF-κB及其介导的氧化应激和炎性反应降低细胞损伤;提示参元丹可能具有围手术期心肌损伤的保护作用.

参元丹对缺血再灌注心肌细胞内质网应激相关因子GRP78、CHOP表达的影响

目的:观察参元丹对缺血再灌注心肌细胞内质网应激相关因子Grp78、CHOP表达的影响.方法:离体培养新出生1～3 d大鼠心肌细胞,并分为正常组、模型组、参元丹组及空白血清组.应用三气培养箱制造缺血(2 h)/再灌注(4 h)模型.采用RT-PCR法测定内质网应激相关因子GRP-78、CHOP因子的表达.结果:模型组细胞内Grp78、CHOP表达均明显上升(P＜0.01).与模型组比较10％参元丹组中,Grp78 (P ＜0.01)及CHOP(P ＜0.05)均有明显下降,10％空白血清组Grp78、CHOP较模型组无明显变化.结论:参元丹可以通过减轻内质网应激减少心肌细胞的凋亡,保护心肌细胞.

益气逐瘀法对AMI/抑郁大鼠神经体液的影响及其机制研究

目的:探讨参元益气活血胶囊(参元丹)对急性心肌梗死(AMI)/抑郁大鼠血清5-羟色胺(5-HT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响,以研究益气逐瘀法对心梗合并抑郁神经体液的影响机制.方法:将30只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常组、模型组、参元丹高剂量组、参元丹低剂量组、对照组,每组各6只,以冠脉结扎法及慢性轻度不可预知性刺激合并孤养法制作AMI/抑郁模型,分别予参元丹高剂量、参元丹低剂量、氟西汀或蒸馏水灌胃18 d.造模成功3 d后处死,测量各组大鼠血清5-HT、TNF-α水平.结果:血清5-HT浓度比较:与正常组比较,模型组大鼠血清5-HT浓度显著降低(P<0.05),与模型组比较,参元丹干预组大鼠血清5-HT浓度均显著升高(P<0.05).参元丹干预组与对照组比较,血清5-HT浓度均无显著性统计学意义(P>0.05).血清TNF-α浓度比较:与正常组比较,模型组大鼠TNF-α浓度无显著性统计学意义(P>0.05).同模型组比较,对照组、参元丹干预组大鼠血清TNF-α浓度差异亦未呈现出统计学意义(P>0.05),但L-SYD血清TNF-α较各组明显升高.结论:参元丹能改善AMI/抑郁的血清5-HT水平下降的情况,但对血清TNF-α水平无显著影响.

益气逐瘀法干预择期PCI围手术期对EPCs动员与归巢影响研究

目的:探讨益气逐瘀法对择期PCI围手术期EPCs动员与归巢影响.方法:采用随机、双盲、安慰剂、对照试验方法,研究对象为首都医科大学附属北京中医医院心血管科2016年7月至2016年11月成功接受PCI治疗的证属气虚血瘀证非ST段抬高急性冠脉综合征(NSTE-ACS)患者.64名符合纳入标准的患者被随机分为试验组(n=33)和对照组(n=31),对照组予常规西药治疗+安慰剂,试验组在常规西药治疗基础上加服参元丹胶囊,分别采用流式细胞仪、ELISA法进行检测2组择期PCI前后3个时点(术前、术后24 h、术后1周)外周血EPCs计数及促血管内皮生成因子VEGF水平,探索益气逐瘀法对NSTE-ACS患者择期PCI围手术期EPCs动员与归巢的影响.结果:2组受试者PCI术前外周血EPCs计数、VEGF水平比较差异无统计学意义(P=0.35、P=0.48),2组PCI术后外周血中EPCs计数及VEGF水平较术前均升高(P<0.05),但接受参元丹治疗的患者外周血中VEGF水平高于对照组.2组PCI术后7 d和术后24 h比较,外周血EPCs计数及VEGF水平均变化不大(P>0.05).结论:参元益气活血胶囊(参元丹)干预NSTE-ACS患者PCI围手术期可促进骨髓EPCs动员与归巢,其机制可能与SYD增加循环中VEGF水平有关.

益气逐瘀方改善心肌梗死大鼠心肌损伤及对miR-24/Bim通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨益气逐瘀方参元丹对急性心肌梗死大鼠心肌损伤及miR-24/Bim通路相关蛋白表达的影响.方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参元丹高、中、低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,参元丹高、中、低剂量组从术后第2天开始给予参元丹药液灌胃,假手术组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,共给药2周.治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平及心肌组织miR-24基因表达,超声心动图检测左室功能,Western-blot检测心肌组织Bim、Bcl-2、Bax、caspase-9蛋白表达.结果:实验结束时,与模型组比较,参元丹高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P＜0.05,P＜0.01),升高心肌组织miR-24基因表达(P＜0.05,P＜0.01),降低左室舒张和收缩末期内径(P＜0.05,P＜0.01),升高左室短轴缩短率及射血分数(P＜0.05,P＜0.01),升高心肌组织Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),降低Bim、Bax、caspase-9蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:益气逐瘀方参元丹可能通过调控miR-24/Bim信号通路相关细胞因子蛋白表达改善心肌梗死细胞损伤.

参元丹含药血清对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响

目的:观察参元丹含药血清对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响,探讨参元丹心肌保护作用机制.方法:建立缺氧复氧心肌细胞损伤模型,采用免疫细胞化学法观察心肌细胞微管相关蛋白1轻链3 (LC3)和磷酸肌醇-3-激酶( PI3K)表达,实时荧光定量PCR( Real-time PCR)法测定自噬相关基因(Beclin-1)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达量.结果:与正常对照组相比,缺氧复氧组LC3和PI3K荧光表达增强,参元丹含药血清组与相应浓度空白血清组相比,细胞LC3和PI3K荧光表达强度减弱,其中参元丹含药血清10％组PI3K荧光强度明显降低,具有统计学意义(P＜0.05)；缺氧复氧组细胞Beclin-1和Caspase-3 mRNA表达量明显升高,与相应浓度空白血清组相比,参元丹含药血清组Beclin-1 mRNA表达水平明显降低；参元丹含药血清5％组Caspase-3 mRNA表达量降低.结论:参元丹含药血清对缺氧复氧细胞自噬具有抑制作用,可能与抑制PI3K,下调Beclin-1和Caspase-3基因有关.

参元丹药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌梗死面积、蛋白激酶C及热休克蛋白70的影响

目的:应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白70(HSP70)表达,探讨参元丹的药理性预适应作用及其机制.方法:选取Wistar大鼠60只,随机分为6组,分别造模、取血、取心肌组织.应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积.应用免疫组化试剂盒对组织切片进行处理.20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况.结果:彩色病理图像分析参元丹能够代替心绞痛的缺血、缺氧的刺激,减小心肌梗死面积,具有药理性预适应的心脏保护作用.PKC的表达情况:假性缺血预处理组的心肌组织中偶见微弱的一处表达.缺血预处理组和药物预处理+缺血预处理组的大鼠心肌组织中PKC大量的表达,药物预处理组大鼠心肌组织的PKC表达充分,提示PKC在参元丹的药理性预适应样心肌保护过程中起作用.HSP70的表达情况:对照组、再灌注组、假性缺血预处理组、缺血预处理组HSP70没有表达,药物预处理组HSP70有表达,药物预处理+缺血预处理组HSP70表达明显,提示HSP760的表达与参元丹的作用相关.结论:参元丹具有药理预适应样作用;参元丹预适应心肌保护作用的机制可能与PKC和HSP70的介导有关.

参元丹治疗肺心病气虚血瘀型的临床观察

由于人口老龄化、吸烟人口数目庞大及工业化进程中的空气污染等因素,肺心病的发病率及病死率均呈逐年上升趋势,严重威胁人类健康.肺心病属于中医"喘证"、"肺胀"等范畴,多为气虚血瘀证.自2000年1月至2002年11月将近三年的时间里,我们应用益气破血法制成的"参元丹"治疗肺心病急性发作期患者,取得了较好的疗效,并对60例证型符合气虚血瘀型的肺心病病人进行了临床观察总结,现报告如下.

参元丹优化方对动脉粥样硬化小鼠胰岛素抵抗及血清血栓素A2/前列环素比值和DNA甲基化水平的影响

目的 观察参元丹优化方对高脂喂养ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)胰岛素抵抗及血清血栓素A2(TXA2)/前列环素(PGI2)比值和DNA甲基化(5-mC)水平的影响,探讨其相关作用机制.方法 40只8周龄雄性ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养6周,随机分为模型组、立普妥组、参元丹原方组和参元丹优化方组,各给药组给予相应药物干预6周.检测小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛素、TXA2、PGI2、DNA甲基化转移酶(DNMT1)和5-mC水平.HE染色,图像分析测量小鼠主动脉AS斑块面积.结果 与模型组比较,参元丹原方组和参元丹优化方组小鼠血清TC和TG水平明显降低,HDL-C水平明显升高(P<0.01),AS指数明显降低,校正后主动脉AS斑块面积显著降低(P<0.05),参元丹优化方组小鼠血清5-mC、DNMT1、胰岛素水平及TXA2/PGI2比值显著降低(P<0.05),参元丹优化方组优于参元丹原方组(P<0.01).结论 参元丹优化方降低血清胰岛素、5-mC水平和TXA2/PGI2比值均优于原方,改善血脂和AS效果与原方相当.

参元丹对大鼠心肌缺血预适应心肌梗死面积及一氧化氮合酶、蛋白激酶C的影响

目的 通过检测大鼠缺血心肌梗死面积的大小、血清一氧化氮合酶(NOS)变化、蛋白激酶C(PKC)的表达,探讨参元丹的药理性预适应作用及其机制.方法 选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只,雌雄各半,体重(274±42)g,鼠龄4月左右,随机分为6组,分别为对照组、再灌注组、假性缺血预处理组,缺血预处理组、药物预处理+缺血预适应组、药物预处理组,每组10只.分别造模、取血、取心肌组织.将心肌组织浸入10%甲醛溶液中固定,脱水,封蜡,切片,染色.应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积.将所取血液离心后取血清,用紫外分光光度法检测血清总NOS的活力和分NOS的活力.应用蛋白激酶C(PKC)免疫组化试剂盒对组织切片进行处理,20倍镜下观察PKC表达情况.结果 参元丹能减少大鼠的心肌梗死面积,并与缺血预适应有协同作用,能够加强彼此的抗心肌缺血的能力.各组间血清NOS的变化差异无统计学意义(P>0.05).缺血预处理组、药物预处理+缺血预适应组和药物预处理组的PKC有明显表达,其余各组没有表达.结论 参元丹能够减少心肌梗死的面积,具有药理性预适应样心肌保护作用,其作用机制可能与PKC介导有关.

参元丹胶囊对动脉内皮损伤大鼠内皮素、一氧化氮合酶、血管紧张素Ⅱ影响研究

参元丹对动脉内皮损伤大鼠血管内膜增生影响研究

参元丹晚期药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌PKC及HSP70的影响

目的 应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白(HSP70)表达,探讨参元丹(SYD) 的晚期药理性预适应作用及其机制.方法 选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只.随机分为6组,分别为对照组、再灌注组、晚期假性缺血预处理组、晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组.每组10只.分别造模,取血、心肌组织.应用HE染色方法对组织切片进行染色,彩色病理图像分析心肌梗死面积.20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况.结果 彩色病理图像分析,SYD能够代替心绞痛缺血、缺氧刺激,减小心肌梗死面积,具有晚期药理性预适应的心脏保护作用.晚期假性缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组无PKC的表达,提示PKC未参与晚期缺血预适应的细胞内信号转导.晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组均有HSP70大量表达,晚期药物预处理组亦有HSP70表达,提示晚期缺血预处理的心肌保护作用机制与HSP70有关,SYD具有独立的晚期药理预适应作用,晚期药物预处理组+缺血预处理组的HSP70表达有SYD作用存在;SYD的心肌保护作用机制与HSP70有关.结论 SYD具有晚期药理预适应样心肌保护作用;SYD晚期预适应心肌保护作用的机制可能与HSP70的介导有关;SYD晚期预适应可能与缺血预适应协同发挥心肌保护作用.

参元丹胶囊对动脉内皮损伤大鼠血管内膜增生的影响研究

目的观察参元丹胶囊对动脉内皮损伤大鼠动脉内皮损伤后内膜增生的影响.方法应用导管拉伤加高渗液损伤的方法建立大鼠主动脉内皮损伤模型,检测中药参元丹胶囊后大鼠动脉内皮内膜的增生情况.结果经导管拉伤加高渗液损伤后,动脉内膜被覆单层内皮细胞,内膜不规则增厚,血管平滑肌增生.经参元丹治疗后动脉内皮损伤后血管内膜过度增生得到抑制.结论参元丹对血管内皮功能具有一定的保护作用.

参元丹含药血清对心肌缺血保护作用及其微管相关蛋白及自噬相关基因表达的影响

目的:通过参元丹胶囊含药血清对心肌细胞活性、培养液上清乳酸脱氢酶( LDH)活性、LC3微管相关蛋白LC3及自噬相关基因Beclin1 -mRNA表达影响的研究,探讨参元丹胶囊对心肌缺血保护作用及作用机制.方法:分离1～3天龄Wistar大鼠心肌细胞进行细胞培养,采用无血清无糖培养建立心肌缺血细胞模型,于不同时间点加入参元丹胶囊含药血清,采用MTT法、比色法、蛋白免疫印迹技术(Western Blot)及逆转录PCR( RT-PCR)测定细胞活性、上清培养LDH含量、微管相关蛋白LC3蛋白(LC3Ⅰ及LC3Ⅱ)表达及哺乳动物自噬相关基因Beclin1-mRNA表达.结果:10％参元丹含药血清与相应时间点10％空白血清比较,能明显增加心肌缺血模型中3、6、18及24h心肌细胞活性(P＜0.01)、降低培养液上清LDH活性(P＜0.05)；通过计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值发现参元丹含药血清能明显抑制缺血诱导24h的细胞自噬活性(p＜0.05),而对心肌缺血模型各个时间点Beclin1 -mRNA的表达没有影响.结论:参元丹含药血清对心肌细胞缺血损伤有保护作用,并可以在心肌细胞缺血较长时间后抑制自噬的活性,但其对自噬活性的影响可能与Beclin1表达无关.