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环境军团菌的分离培养及鉴定方法探讨
目的 建立地表环境水军团菌的分离培养及种属鉴定方法.方法 在广州市内8个公园中采取了44份地表湖泊水样,进行军团菌的分离培养.同一湖泊来源的分离株以扩增片段长度多态性(amplifled fragment length polymorphism,AFLP)进行同源性分析;进一步的种属鉴定采用生化血清学鉴定、细胞脂肪酸成分分析、16 S rRNA基因测序、巨噬细胞感染增强蛋白(mip)基因测序等多种手段相结合的方法进行分析和比较.结果 8个公园内的27份水样分离出军团菌,阳性率为61.36%.初步分离的108个菌株,经AFLP同源性鉴定,得到不同菌株31株,包括嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)20株,橡树岭军团菌(Legionella oakridgensis)1株,圣海伦军团菌(Legionella sainthelensi)1株,长滩军团菌(Legionella longbeachae)4株,菲氏军团菌(Legionella feeleii)5株.其中,嗜肺军团菌可直接通过常规的生化实验、血清学鉴定得到种属鉴定结果.但包括细胞脂肪酸成分分析在内的表型鉴定方法,均存在不同程度的不稳定性因素.结论 生化实验、血清学鉴定、细胞脂肪酸成分分析等能够为军团菌的分类学鉴定提供有价值的资料,但终的种属鉴定仍必需依赖于16 SrRNA基因或mip基因的序列分析.
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双重聚合酶链反应法早期诊断军团菌肺炎的初步研究
目的探讨双重聚合酶链反应（DPCR）法检测痰及支气管肺泡灌洗液（BALF）中军团菌DNA在早期诊断军团菌肺炎的意义。方法用DPCR 对军团菌肺炎组（15例）和普通肺炎组（31例）患者病程早期留取的痰及BALF进行军团菌DNA检测。用军团菌16SrRNA基因和mip基因序列引物，可扩增386bp 16SrRNA基因片段和206bp mip基因片段。通过模拟标本来检测DPCR方法用于临床标本时的灵敏度。结果军团菌肺炎组患者痰、BALF的DPCR结果均为阳性,其中13例患者留取的23份痰、7份BALF标本386bp 16SrRNA基因片段和 206bp mip基因片段的扩增结果均阳性，余2例患者留取的2份痰和1份BALF标本单一386bp 基因片段扩增阳性。 DPCR结果与血清军团菌抗体结果相符。普通肺炎组患者痰和 BALF的 DPCR结果均为阴性。同一患者留取的多份标本呈现相同的DPCR结果。模拟痰和BALF 的DPCR低检出限均为1×103 cfu/ml。结论采用DPCR法检测痰和BALF 中的军团菌DNA，具有较好的敏感性、特异性和稳定性，在临床早期诊断军团菌肺炎方面具有一定的价值。
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某医院十年间重症社区获得性肺炎成年患者的生存状况与病原体研究
目的 探讨我院十年间重症社区获得性肺炎(SCAP)成年患者的生存状况与病原体的变迁情况.方法 选取2007年1月—2016年12月我院收治的159例SCAP成年患者资料,根据入院时间分为早期组(2007年1月—2011年12月,n=71)和晚期组(2012年1月—2016年12月,n=88).比较2组的临床资料、病原体分布和预后.结果 (1)晚期组的尿素氮(BUN)>7.1 mmol/L比例显著高于早期组(P<0.05).2组的基线资料、生命体征、影像学检查和其他实验室检查比较差异均无统计学意义(P>0.05).(2)病原体分布方面,早期组、晚期组分别有42、49例患者检出病原体,晚期组的嗜肺军团菌感染率显著高于早期组(26.5%vs.7.1%,P<0.05).(3)并发症方面,晚期组的感染性休克发生率显著高于早期组(22.7%vs.9.9%,P<0.05).晚期组住院后30 d内的病死率高于早期组(43.2%vs.25.4%,P<0.05).多因素Cox比例风险回归分析结果显示,感染性休克、呼吸性酸中毒是早期组患者死亡的独立危险因素(P<0.05);感染性休克、慢性阻塞性肺疾病、多肺叶浸润是晚期组患者死亡的独立危险因素(P<0.05).结论 我院近十年SCAP成年患者的基本临床特征变化不大,但嗜肺军团菌的检出率有升高趋势,其短期内病死率有所上升,是否合并感染性休克是影响其预后的关键因素.
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某部一起军团菌肺炎暴发的调查与处置
目的 对某部一起军团菌肺炎暴发情况进行调查.方法 采用现场流行病学调查、病例个案调查与实验室检测相结合的方法.血清标本采用嗜肺军团菌1-7 IgM抗体定量检测试剂盒,用美国产Stat Fax 2100酶标仪进行检测.洗澡水用活性炭酵母浸膏培养基进行军团菌培养.洗澡水及浴室地面污泥使用嗜肺军团菌核酸扩增检测试剂盒,用瑞士产罗氏2.0实时定量PCR仪进行检测.结果 该部队累计发病39例,罹患率为15.12%(39/258).经血清IgM抗体定量检测及细菌培养证实,本次疫情由I型军团菌所致.采用盐酸左氧氟沙星和阿奇霉素联合治疗后,均康复出院.结论 该部因太阳能淋浴系统孳生Ⅰ型军团菌导致军团菌肺炎暴发,因此,对淋浴系统进行定期消毒,并对消毒效果及相关病原体进行监测非常重要.
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老年军团菌肺炎的相关危险因素分析
目的 了解老年社区获得性肺炎(CAP)患者中军团菌肺炎的比例并探讨军团菌感染的危险因素.方法 收集146例老年CAP患者的痰液,应用聚合酶链反应(PCR)方法确定军团菌感染,同时采用病例对照研究的方法进行军团菌感染危险因素的分析.结果 ①军团菌16SrRNA基因PCR扩增阳性的为16例,阳性率为11.1％；②用病例对照研究的方法进行军团菌感染危险因素的分析,实验组与对照组比较吸烟(OR =3.441)、基础疾病(OR=5.954)、免疫调剂(OR=2.619)、空调及热水系(OR=2.389)、土木工程(OR=0.664)等因素引入回归方程.结论 ①军团菌肺炎在老年性CAP中占11.06％.②吸烟、慢性疾病史、免疫抑制剂所导致的免疫功能低下、空调及热水系统等为军团菌肺炎的危险因素.
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大兴区公共场所集中空调系统军团菌污染状况调查
目的 了解北京市大兴区大中型公共场所军团菌污染状况及管理人员相关卫生知识知晓情况,为行政部门监督执法提供依据.方法 采用分层抽样方法,选取5类13家使用中央空调系统的大中型公共场所,检测军团菌污染状况并对单位管理人员进行相关卫生知识的问卷调查.结果 5类13家大中型公共场所的军团菌总阳性检出率为15.34％,其中写字楼和超市大卖场的军团菌阳性检出率分别为28.13％和18.75％,医院、影剧院及宾馆酒店均未检出军团菌阳性菌株.结论 部分公共场所中央空调系统军团菌污染状况较为严重,提示应加强公共场所空调系统的监测与监督管理,以避免军团菌病的暴发流行.
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集中空调冷却塔水微生物污染状况调查
随着科学技术的发展,人们生活水平的不断提高,集中空调的使用日益广泛.但集中空调通风系统在呼吸道传染病传播过程中起着重要作用,随之带来的室内空气污染对人体健康的影响亦逐渐引起人们的重视.卫生部于2003年颁布了<公共场所集中空调通风系统卫生规范>,规定集中空调冷却水、冷凝水中不得检出军团菌.深圳市地处亚热带,全年气温较高,集中空调的使用率也较高,为了解深圳市集中空调冷却塔水的微生物污染状况,笔者于2004年6月～10月间采集不同公共场所的空调冷却塔水进行检测,现将调查结果报告如下.
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重症军团菌肺炎合并铜绿假单胞菌感染一例
患者,男,58岁,主诉“咳嗽1个月,加重伴发热咯血2d”于2016年5月17日入院.患者既往体健,1个月前淋雨后出现咳嗽,咳少量黄色痰,3周前患者感左上胸部隐痛,夜间不能平卧,在当地治疗后稍好转(具体不详).2d前症状加重,伴发热、畏寒寒战,体温高39℃,左上胸痛加重,伴胸闷、气促,伴咯血,次数多,量难以估计.2016年5月17日咯血量增多,晨测体温39.5℃,外院CT提示:“左肺上叶肺炎,建议纤支镜检查除外阻塞性肺炎,左侧少量液气胸,肺气肿”.为求进一步诊治,本院拟“重症肺炎”收住入院.查体:意识清,精神软,不能平卧,双侧瞳孔3.0 mm,对光灵敏,血压134/89 mmHg(1 mmHg =0.133 kPa),颈部及双侧锁骨上等处浅表淋巴结未及肿大.胸廓对称,无畸形,胸壁无压痛,两肺叩诊呈清音,两肺呼吸音粗,可闻及湿罗音,心率122次/min,律齐,未闻及杂音,腹部(-),双下肢无水肿.
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临床标本军团菌分离方法研究
目的 建立临床痰液标本军团菌分离培养标准检验方法 ,提高培养阳性率.方法 采集50例新鲜痰液标本分为两组,一组直接预处理后进行培养,另一组加入标准菌株后再预处理及培养.预处理采用液化处理,然后分别采用直接接种、酸处理或热处理后再接种军团菌选择性BCYEα-DGVPC培养基,观察菌落生长情况.根据军团菌生长缓慢及菌落形态和在缺乏L-半胱氨酸的平板、血平板上不生长的特点作初步判断、生化反应及PCR法确证.结果 50例末加菌的痰液均未分离出军团菌;50例加有军团菌的模拟痰标本直接接种的检出率为58%,其中酸处理的标本检出率为70%,热处理的标本检出率为66%.3种培养方法 进行比较,单独的热处理与直接处理相比较差异有统计学意义(P=0.261),单独的酸处理与直接处理相比较差异有统计学意义(P=0.003),而酸处理和热处理培养阳性结果 比较并不具有一致性.结论 酸处理和热处理2种方法 均可以提高军团菌检出率,其中酸处理可以湿著提高军团菌检出率.
