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番茄红素对帕金森模型小鼠氧化应激损伤及神经行为的影响
目的:探究番茄红素对鱼藤酮诱导帕金森小鼠氧化应激损伤及神经行为的影响及可能机制.方法:成年雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为空白对照、鱼藤酮、番茄红素、番茄红素+鱼藤酮4组.实验处理5周后,化学比色法检测脑组织中MDA含量及SOD、GSH-Px和CAT活力判定氧化应激损伤水平；水迷路分析小鼠神经行为改变；免疫组化分析TH、α-SYN和LC3-B阳性表达变化.结果:与空白对照比较,帕金森小鼠黑质及纹状体MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX和CAT酶活力显著下降(P＜0.05)；而番茄红素干预后,黑质及纹状体MDA含量显著下降,SOD、GSH-Px和CAT酶活力显著增加(P＜0.05).水迷路分析结果发现,帕金森小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间显著高于空白对照组(P＜0.05)；而番茄红素干预后,小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间显著下降(P＜0.05).免疫组化结果发现,番茄红素干预后帕金森小鼠黑质及纹状体TH免疫阳性神经元数显著增加(P＜0.05),α-SYN免疫阳性细胞表达显著下降(P＜0.05),LC3-B免疫抗原明显下调(P＜0.05).结论:番茄红素能有效降低氧化应激损伤及中脑黑质、纹状体多巴胺DA能神经元的自噬活性,对帕金森PD模型小鼠DA能神经元具有一定的保护作用.
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刺五加中芝麻素对鱼藤酮诱发的帕金森病大鼠行为机能障碍的作用
有研究显示,刺五加Acanthopanax senticosus Harms(ASH)对黑质纹状体的多巴胺系统有特异性活性,因而对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)引发的帕金森病(PD)运动过慢和僵住反应的发生有预防作用.芝麻素是ASH中的活性成分.作者研究了ASH和芝麻素是否对鱼藤酮诱发的PD模型大鼠的行为抑制有防治作用.
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多巴胺代谢引起氧化应激导致鱼藤酮诱导的PC12细胞毒性作用
鱼藤酮是一种常见的杀虫剂,也是线粒体呼吸链复合体Ⅰ的特异性抑制剂,大鼠长期喂鱼藤酮可以引起类似帕金森病(PD)的生化和组织水平的改变,如黑质致密部多巴胺能神经元的选择性丧失等等.该文用PC12细胞系从氧化应激的角度论证多巴胺在此细胞毒性过程中的作用.实验结果表明,加鱼藤酮组的细胞成活率有明显降低而且胞内多巴胺浓度显著升高并与加药脸始亮恳览倒叵?鱼藤酮也影响PC12细胞中与多巴胺合成和转运相关的蛋白质和酶活性的改变.在这些细胞中,单胺转运蛋白2(VMAT2)活性显著下调,多巴胺转运蛋白(DAT)活性上调,单胺氧化酶(MAO)活性增强.
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鱼藤酮对大鼠脑内多巴胺能神经元损伤的机制研究
目的：研究鱼藤酮对大鼠脑内多巴胺能神经元的毒性作用机制。方法健康成年雄性Wistar大鼠背部皮下注射鱼藤酮制备帕金森病动物模型。采用免疫细胞化学、透射电镜技术及分光光度法技术检测大鼠脑内多巴胺能神经元的损伤及纹状体中氧化应激参数的改变。结果鱼藤酮组大鼠中脑酪氨酸羟化酶（TH）免疫反应阳性神经元数明显少于对照组（P＜0．01），纹状体中TH免疫反应强度明显降低（P＜0．05），透射电镜可见鱼藤酮组黑质多巴胺能神经元内线粒体损伤，树突变性，其内微粒、微管聚集，同时纹状体发生了明显的氧化损伤。结论氧化应激和超微结构改变是鱼藤酮对大鼠脑内多巴胺能神经元损伤的主要发病机制。
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鱼藤酮处理大鼠脑内VMAT2及TPH、5-HT的表达改变
目的：观察鱼藤酮处理大鼠脑内单胺囊泡转运体2（VMAT2）。色氨酸羟化酶（TPH）及5—羟色胺（5—HT）的表达变化；探讨其对5—HT 能神经元的影响及可能机制。方法选用健康、成年雄性 Wistar 大鼠，背部皮下注射鱼藤酮3d 或28d 制作大鼠动物模型；利用免疫细胞化学分析 VMAT2在大鼠黑质、中缝背核和尾壳核以及 TPH、5—HT 在中缝背核的表达变化；以透射电镜观察轴突超微结构的改变，探讨鱼藤酮毒性作用的可能机制。结果鱼藤酮3d 组：①鱼藤酮组大鼠黑质、中缝背核 VMAT2的表达增加，免疫反应强度吸光度值显著高于对照组；尾壳核 VMAT2的表达减弱，免疫反应强度吸光度值明显低于对照组（P<0.01）；②鱼藤酮组大鼠中缝背核 TPH、5—HT 的表达减少，免疫反应强度吸光度值显著低于对照组（P<0.01）；③透射电镜观察显示鱼藤酮处理大鼠中缝背核轴突变性、其内微管解聚。鱼藤酮28d 组：①鱼藤酮组大鼠黑质、中缝背核及尾壳核 VMAT2的表达均减弱，免疫反应强度吸光度值显著低于对照组（P<0.01或 P<0.05）；②与对照组相比，鱼藤酮组大鼠中缝背核 TPH、5—HT 的表达降低，免疫反应强度吸光度值显著低于对照组（P<0.01）。结论鱼藤酮降低5—HT 能神经元 TPH、5—HT 的表达，其毒性作用可能与轴突微管解聚导致突触囊泡 VMAT2轴浆顺行转运障碍有关。
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鱼藤酮对大鼠脑内5-羟色胺能神经元损伤的机制研究
目的：研究鱼藤酮对大鼠脑内5-羟色胺能神经元的毒性作用及其机制。方法健康成年雄性Wistar大鼠背部皮下注射鱼藤酮制备帕金森病动物模型。采用免疫组化、蛋白印迹及分光吸光度法检测大鼠中脑中缝背核5-羟色胺能神经元的损伤及中缝背核氧化应激参数（丙二醛和还原型谷胱甘肽）的改变。结果和对照组相比，鱼藤酮组大鼠脑内中缝背核5-羟色胺（5-HT）免疫反应阳性神经元数明显少于对照组（P＜0．01），Western blot结果显示中缝背核5-HT表达在鱼藤酮组明显降低（ P＜0．01）；鱼藤酮组大鼠中缝背核区域丙二醛含量明显增高（ P＜0．01）、还原型谷胱甘肽（ GSH）含量明显减少（ P＜0．01）。结论鱼藤酮在损伤大鼠脑内多巴胺能神经元的同时对5-HT能神经元也具有明显的毒性作用，氧化应激可能是导致5-HT神经元损伤的主要原因。
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瓜子金皂苷己对鱼藤酮损伤PC-12细胞的保护作用及其对CREB的影响
目的：观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F，PS-F）对鱼藤酮损伤的PC-12细胞的保护作用及其对cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）表达的影响。方法：以鱼藤酮损伤的PC-12细胞为模型，通过倒置显微镜观察细胞形态，caspase 3活性检测试剂盒测定caspase 3活性，荧光素酶报告基因技术检测CREB表达的变化。结果：PC-12细胞在4μmol·L-1鱼藤酮损伤后，细胞出现萎缩变圆，折光率降低，caspase 3活性显著升高，呈现凋亡的现象。不同浓度（0.1，1.0，10.0μmol·L-1）瓜子金皂苷己能够剂量依赖性的减轻对细胞形态的影响，降低caspase 3活性。荧光素酶报告基因标记显示，瓜子金皂苷己能够增加报告基因CREB的表达。结论：瓜子金皂苷己能够抑制鱼藤酮诱导的PC-12细胞凋亡，其机制可能与增加CREB的表达有关。
关键词： 瓜子金皂苷己 鱼藤酮 凋亡 Caspase 3 cAMP反应元件结合蛋白 -
生物、化学杀虫剂混配毒饵技术研究
目的:本研究阐述苏云金杆菌以色列变种、鱼藤酮、乙酰甲胺磷、高效氯氰菊酯、硼酸生物、化学杀虫剂混配和其单用毒饵特性和毒力.方法:药量胃毒法和苏云金毒力统计法.结果和结论:毒饵双用和混配增效基理及配方、工艺过程,和其产品及包装后的稳定性、可行性.
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姜黄素对鱼藤酮诱导的黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用
目的：观察姜黄素对由鱼藤酮诱导的慢性帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法2014年12月—2015年5月，选取清洁级雄性 SD 大鼠80只按随机区组法分为溶剂对照组、姜黄素组、鱼藤酮组、治疗组，每组20只。采用脑切片免疫组化染色法检测大鼠脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数，Western blotting 法检测大鼠脑黑质区沉默信息调节因子3（SIRT3）、P47phox 表达水平，流式细胞仪检测大鼠脑黑质区活性氧（ROS）水平。结果4组大鼠脑黑质区 TH 阳性细胞数比较，差异有统计学意义（ P <0.05）。鱼藤酮组大鼠脑黑质区 TH 阳性细胞数低于溶剂对照组、姜黄素组（P <0.05）；治疗组大鼠脑黑质区 TH 阳性细胞数低于溶剂对照组、姜黄素组，高于鱼藤酮组（P <0.05）。4组大鼠脑黑质区 SIRT3、P47phox 表达水平比较，差异均有统计学意义（P <0.05）。鱼藤酮组脑黑质区 SIRT3表达水平低于溶剂对照组、姜黄素组（P <0.05）；治疗组脑黑质区 SIRT3表达水平低于溶剂对照组、姜黄素组，高于鱼藤酮组（P <0.05）。鱼藤酮组脑黑质区 P47phox 表达水平高于溶剂对照组、姜黄素组（ P <0.05）；治疗组脑黑质区 P47phox 表达水平高于溶剂对照组、姜黄素组，低于鱼藤酮组（ P <0.05）。4组大鼠脑黑质区 ROS 水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）。鱼藤酮组大鼠脑黑质区 ROS 水平高于溶剂对照组、姜黄素组（P <0.05）；治疗组大鼠脑黑质区 ROS 水平高于溶剂对照组、姜黄素组，低于鱼藤酮组（ P <0.05）。结论姜黄素可有效拮抗鱼藤酮诱导的慢性帕金森病大鼠多巴胺能神经元损伤，其机制可能与姜黄素通过促进SIRT3的表达清除小胶质细胞源性 ROS 有关。
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鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用
目的 观察鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用的特点.方法 体外培养大鼠中脑星型胶质细胞,采用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光法鉴定.观察染毒星型胶质细胞形态,检测细胞活力,通过生长曲线分析鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响以及RT-PCR检测缝隙连接蛋白(connexin43,CX43)mRNA表达.结果 0.5 μmol/L鱼藤酮染毒24 h即可引起明显的细胞形态改变;0.75,1.0,2.0 μmol/L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力明显降低,乳酸脱氢酶释放量显著增加;0.5 μmol/L以上鱼藤酮可明显抑制胶质细胞增殖,CX43 mRNA表达降低.结论 鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞可以产生明显的毒性损伤作用,但与神经元比较,星型胶质细胞对相同剂量的鱼藤酮染毒具有更强的耐受能力.
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鱼藤酮长期作用对海马NO和脂质过氧化影响
鱼藤酮(Rotenone)是典型的线粒体抑制类农药,自20世纪40年代以来一直被视为安全有效的杀虫剂而广泛应用于农业生产,抑制体内线粒体呼吸链还原型辅酶Ⅱ(NADH),导致细胞对氧的利用障碍和能量产生不足是其主要杀虫机制[1].
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鱼藤酮染毒大鼠纹状体缝隙连接蛋白43的表达及意义
目的 观察鱼藤酮对大鼠中脑纹状体组织的毒性作用及对缝隙连接蛋白43(CX43)表达的影响. 方法 建立大鼠Alzet微泵恒流给药鱼藤酮染毒模型,应用光镜和免疫组织化学染色观察纹状体神经元和星形胶质细胞的形态改变,采用RT-PCR法检测CX43mRNA的表达,Western blot技术观察CX43蛋白活性变化.结果 染毒大鼠出现类帕金森病综合征特征,中脑纹状体组织神经元形态明显改变,星形胶质细胞增生.与正常对照组比较,2.0 mg/kg鱼藤酮染毒组CX43表达明显上调(P＜0.05),而4.0 mg/kg鱼藤酮染毒组CX43表达显著降低(P＜0.05). 结论 鱼藤酮可损伤中脑神经元,诱导大鼠出现类帕金森病症状,星形胶质细胞缝隙连接蛋白43的异常表达,可能参与了鱼藤酮对大鼠纹状体组织的毒性作用.
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鱼藤酮对大鼠星形胶质细胞CaMK Ⅱ基因和蛋白表达的影响
目的 研究鱼藤酮对大鼠原代培养星形胶质细胞钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)活性的影响.方法 MTT法检测染毒星形胶质细胞活力,激光共聚焦结合Fluo-4荧光法动态测定细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),采用RT-PCR技术检测CaMK Ⅱα和CaMK Ⅱβ mRNA的表达,Western-blot技术观察磷酸化CaMK Ⅱ蛋白活性的变化.结果 1.0和2.0 μmol/L鱼藤酮染毒时星形胶质细胞活力明显降低,染毒星形胶质细胞[Ca2+]i呈浓度依赖性升高,CaMK Ⅱα亚基mRNA明显下调(P<0.05),CaMK Ⅱ蛋白活性显著降低(P<0.01).结论 鱼藤酮染毒星形胶质细胞内游离钙浓度的升高,CaMK Ⅱ基因表达和蛋白活性显著降低,可能是其诱导神经细胞变性损伤的重要原因之一.
关键词： 鱼藤酮 星形胶质细胞 钙调索依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) -
鱼藤酮对星形胶质细胞谷氨酸摄取功能的影响
目的 研究鱼藤酮对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运功能的影响.方法 应用HPLC荧光法检测鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度,同位素标记法检测Glu摄取能力,采用RT-PCR与Western blot技术观察谷氨酸转运体基因及蛋白表达.结果 鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度明显升高,Glu摄取能力显著降低,谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate/aspartate transporter,GLAST)基因和蛋白表达均明显降低,而谷氨酸转运体-1(glutamate transporter-1,GLT-1)蛋白表达升高.结论 鱼藤酮可显著降低星形胶质细胞谷氨酸摄取功能,引起胞外Glu浓度升高;GLAST表达下调可能是鱼藤酮诱导胞外谷氨酸含量增加的主要原因之一,而GLT-1上调可能为神经细胞自我保护机制,以限制谷氨酸的神经毒作用.
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脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑cAMP/PKA信号通路变化的研究
目的:探讨脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑cAMP/PKA信号通路变化.方法:30只SPF级雄性大鼠,随机分为正常组,脾气虚组,鱼藤酮高剂量组(2.0 mL/kg),中剂量组(1.5 mL/kg),低剂量组(1.0 mL/kg),每组6只.采用ELISA法检测各组大鼠下丘脑组织cAMP活性,Real Time PCR法和Westernblot法检测蛋白激酶(cyclic-AMP -dependent protein kinase,PKA)、糖原磷酸化酶(glyeogenphospholase,Gp)、磷酸化酶激酶(phosphorylase kinase,PHK)的mRNA及其表达量.结果:与正常组大鼠比较,脾气虚证组及鱼藤酮3组大鼠的下丘脑组织cAMP活性及PKA、Gp、PHK mRNA和蛋白的表达均有不同程度的减弱,鱼藤酮中剂量组的结果与脾气虚证组为相似.结论:脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑cAMP/PKA信号通路的变化存在相关性,其中cAMP-PKA信号通路可能参与调控.
关键词： 脾气虚证 鱼藤酮 下丘脑 环磷酸腺苷/蛋白激酶A 信号通路 -
激活小胶质细胞对帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的影响
目的 探讨脂多糖(LPS)激活小胶质细胞(MG)对黑质损伤多巴胺(DA)能神经元细胞存活的影响.方法 采用立体定向技术向大鼠单侧黑质(SNpc)内注入LPS激活MG后,隔48h于原位注射高、低剂量鱼藤酮(BT)分别建立重度及轻度损伤模型;采用免疫组化法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞和离子钙结合转接分子1(Ib α-1)阳性MG变化.结果 LPS处理后低剂量RT组(A2)酪羟化酶(TH)阳性细胞数较只给同剂量RT(B2)组多(P<0.05),形态较(B2)组完整;予LPS处理后给高剂量鱼藤酮组(A3)较只给同剂量RT(B3)组DA神经元死亡增多(P<0.05),形态较(B3)组损伤重.结论 LPS激活MG对轻度损伤DA能神经元具有保护作用.
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咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护
背景：咖啡酸苯乙酯可抑制大鼠脑损伤后的脂质过氧化和脑损伤，但是在帕金森细胞模型中，5-脂氧酶和白三烯的变化规律，以及咖啡酸苯乙酯是否通过抑制鱼藤酮诱导的5-脂氧酶和白三烯变化而发挥对帕金森样损伤的保护作用，仍有待进一步研究。
目的：探讨咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护作用，同时观察5-脂氧酶是否参与帕金森细胞模型的损伤。
方法：①取生长状态良好的PC12细胞，分5组培养，分别以0，0.01，0.1，1，10μmol/L鱼藤酮干预，24，48 h后，观察细胞形态及活性变化，选择佳诱导帕金森细胞模型的鱼藤酮浓度；24 h后， Western法检测5-脂氧酶表达，ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量；②取生长状态良好的PC12细胞，分6组培养，以正常培养的细胞为空白对照，其余5分别加入0，0.01，0.1，1，10μmol/L咖啡酸苯乙酯预处理30 min，之后加入1μmol/L鱼藤酮，24 h后，检测细胞活性，ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量。
结果与结论：①0.1-10μmol/L鱼藤酮可诱导PC12细胞损伤，1μmol/L鱼藤酮处理24 h后的细胞形态和细胞存活率变化适度明显，所以选择该条件作为鱼藤酮诱导PC12细胞帕金森样损伤的细胞模型；②鱼藤酮呈浓度依赖性增加5-脂氧酶的表达与半胱氨酰白三烯的生成释放；③1-10μmol/L 咖啡酸苯乙酯可降低鱼藤酮诱导的PC12细胞半胱氨酰白三烯生成释放量增加，呈浓度依赖性抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞存活率降低；④结果表明，5-脂氧酶参与鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤作用，咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤有明显保护作用。 -
EGCG拮抗鱼藤酮致PC12细胞凋亡的研究
目的:探讨表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对PC12细胞的保护作用及机制.方法:采用鱼藤酮(1μmol/L)处理PC12细胞24 h,建立帕金森病细胞模型;EGCG(5μmol/L)预处理PC12细胞30 min.采用CCK-8测定细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测Caspase-3酶活性和线粒体膜电位,并检测Bcl-2表达.结果:1μmol/L鱼藤酮处理后,细胞活力为(38.5±4.3)％,细胞凋亡率为37.7％,DHE和DHR123荧光强度均明显增加,分别为正常组的231％和335％,线粒体膜电位为正常组的45％,caspase-3活性为正常组的145％,Bcl-2表达显著下调.而5μmol/L EGCG预处理后,细胞活力为(69.6±5.6)％,细胞凋亡率降至21.4％,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的178％和287％,线粒体膜电位为正常组的57％,caspase-3活性为正常组的120％,Bcl-2表达上调,与鱼藤酮组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:EGCG对PC12细胞具有保护作用,保护机制与其抗氧化活性及抗凋亡有关.
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牛蒡苷元对鱼藤酮致大鼠脏器损伤的保护作用
目的 观察鱼藤酮对帕金森模型大鼠各脏器的损伤,探讨牛蒡苷元对其缓解与治疗作用.方法 采用颈背部皮下注射鱼藤酮葵花油乳化液4周的方法建立大鼠帕金森模型,并灌胃给予不同剂量的牛蒡苷元进行干预治疗,观察各组大鼠脏器指数.采用HE染色法和电镜法观察大鼠脏器损伤程度,检测血清中丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酐(creatinine,CRE)与尿素氮(urea nitrogen,BUN)的含量.结果 模型组大鼠的肝指数和肾指数与正常组相比显著升高,血清中ALT与BUN的含量显著升高(P≤0.01),肝脏切片显示肝脏内存在着中央静脉扩张、慢性炎症细胞浸润等病理改变,肾皮质和髓质内均有慢性出血和炎性浸润,并可见肾小球固缩.牛蒡苷元治疗后肝肾指数显著降低,血清中ALT与BUN明显降低(P≤0.01),肝肾相应损伤有所缓解.结论 牛蒡苷元能有效抑制鱼藤酮所致的大鼠肝脏和肾脏肿大,可缓解和治疗鱼藤酮所引起肝和肾的损伤.
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虫草素抑制帕金森病细胞凋亡的caspase激活途径研究
目的 研究虫草素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的caspase激活途径.方法 实验分为对照组、模型组、虫草素三个剂量组(0.4×10-6、2.0×10-6和8.0×10-6 μnol· L-1).以1.0 μmol·L-1鱼藤酮制备PC12细胞帕金森病(parkinson's disease,PD)模型,MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞内ROS水平,Western blot法检测细胞内caspase-3、caspase-8、caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和fas蛋白的表达.结果 虫草素能显著升高鱼藤酮诱导的PC12细胞的存活率(P＜0.05),降低细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量(P＜0.01).与对照组比较,模型组显著上调了caspase-3、caspase-8、caspase-9和fas蛋白的表达并促进了caspase-3和caspase-9的活化(P＜0.01).虫草素能明显减少后两者的激活,下调caspase-8和fas蛋白的表达(P＜0.01).结论 虫草素可减少细胞氧化应激,通过内源性以及fas受体途径抑制caspase-3的激活而抑制细胞凋亡.
