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小鼠对表达狂犬病毒3aG株糖蛋白的重组复制缺陷型腺病毒的免疫应答
目的研究表达狂犬病毒3aG株糖蛋白(GP)的重组复制缺陷型腺病毒Ad/GP'及Ad/GP免疫小鼠后所产生的特异性体液免疫应答,体外脾细胞增殖反应,及免疫小鼠对狂犬病毒致死性颅内攻击的保护力。方法 1×107pfu重组病毒经腹腔对小鼠进行基础和加强免疫,以快速荧光灶抑制实验(RFFIT)方法测定小鼠血清狂犬病毒特异性中和抗体滴度,[3H]TdR掺入DNA法测定体外脾细胞增殖反应;小鼠致死性CVS狂犬病毒颅内攻击测定重组病毒免疫对小鼠的保护效果。结果RFFlT方法测定免疫小鼠血清中和抗体滴度分别为Ad/GP:0.75 IU/ml,Ad/GP':2.6 IU/ml;[3H]TdR掺入法测定重组病毒免疫组小鼠脾细胞体外受到特异GP抗原刺激后,增殖增强2倍以上;86.7%的Ad/GP'免疫小鼠及66.7%的Ad/GP免疫小鼠可抵抗约30 LD50CVS狂犬病毒的颅内攻击。结论表达狂犬病毒G蛋白的重组复制缺陷型腺病毒具有用做基因工程重组病毒载体活疫苗的好前景。
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易错PCR提高人源抗狂犬病毒单链抗体的亲和力
目的 通过易错PCR技术提高1株人源抗狂犬病毒单链抗体RV08的亲和力.方法 采用Agilent公司GeneMorph Ⅱ Random Mutagenesis Kit对RV08轻、重链可变区进行易错PCR扩增,随机引入突变,通过单链抗体(Single-chain antibody fragment ScFv)噬菌体呈现技术构建随机突变抗体文库,经狂犬病毒颗粒aG株固相富集筛选,通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定.利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过非竞争ELISA测定突变抗体亲和力.结果 RV08随机突变抗体库的库容为6×106 cfu/ml,目的基因插入率为100%.重链序列突变频率约为0.95%,轻链序列突变频率约为1.2%,后获得5株高亲和力的抗体突变株,其中3株抗体HL46、HL2和HL37亲和力分别为原始克隆RV08的1.79倍、1.47倍和1.23倍.结论 易错PCR技术与噬菌体抗体库技术相结合使得抗体亲和力获得明显提高,为抗体的体外亲和力成熟提供了参考方法.
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狂犬病毒糖蛋白特点及其在中和抗体评价中的应用
狂犬病毒糖蛋白(GP)是一种跨膜糖蛋白,存在于病毒包膜表面,以同源三聚体的形式存在,构成病毒表面突起.它是狂犬病毒5个结构蛋白中.唯一能刺激机体产生中和抗体的抗原,与狂犬病毒的多种生物学特性有关.
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四株中国狂犬病病毒核衣壳蛋白和糖蛋白抗原性分析
狂犬病病毒核蛋白(NP)单克隆抗体可以清楚地区分狂犬病病毒和狂犬病相关病毒.用抗狂犬病病毒单抗还可以在同一血清型内进一步的分组以及分析毒株传播的宿主动物和地理位置,从而有可能找到流行的线索.病毒间的差异同样表现在与病毒GP单抗的特异反应中.用特异性GP单抗进行中和试验对大量毒株的分析,认识到一些狂犬病街毒在GP抗原结构上与疫苗株有明显不同,疫苗免疫的失败和疫苗株与街毒之间抗原差异的程度有关.为了解我国狂犬病毒NP和GP抗原变异情况,用抗NP和GP单克隆抗体分析的方法对我国人用狂犬病疫苗株(aG)、实验室减毒株( CTN-181)及分离自宁夏的2株街毒进行了NP和GP抗原结构的分析和研究.
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黄病毒属病毒的感染性克隆研究进展
黄病毒科包括了一大类人和动物的病毒性病原体,这些病毒均为包膜的单股正链RNA病毒,目前分三个属:经典的黄病毒属、瘟病毒属和丙型肝炎病毒属.每个属中病毒的感染性cDNA遗传学研究都使人们进一步了解病毒复制和致病性原理.对RNA病毒进行反向遗传学研究的历史,可追溯到20多年前,1978年Taniguchi首次从cDNA克隆获得了RNA噬菌体Qβ[1],1981年通过脊髓灰质炎病毒cDNA首次获得动物病毒的感染性克隆[2],从此对正链RNA病毒的反向遗传学研究系统逐步完善起来了.随后,对负链RNA病毒、分节(流感病毒)和不分节(狂犬病毒)的cDNA感染性克隆研究也获得成功.近对双链RNA病毒的反向遗传学研究也有了突破,至此,对RNA病毒的反向遗传学研究已涵括了大部分的RNA病毒.这些研究结果为疫苗开发研制提供了新途径.本文就黄病毒属病毒感染性克隆研究的技术方法和进展作一综述.
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狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗的联合免疫研究
目的研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果. 方法构建狂犬病毒糖蛋白(GP)的真核表达质粒pcDNA3.1/CVS-N2c GP作为核酸疫苗,瞬时转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1/CVS-N2c GP的表达;以基因枪方法进行初次免疫接种和首次加强免疫,以表达同一抗原的复制缺陷型重组腺病毒通过鼻腔接种进行第二次加强免疫;ELISA试验检测血清狂犬病毒特异性IgG抗体,快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测狂犬病毒中和抗体. 结果间接免疫荧光试验表明pcDNA3.1/CVS-N2c GP能有效地表达GP于转染的细胞膜上,ELISA试验表明小鼠接受基因枪核酸免疫后,仅诱导产生低水平的特异性抗体,而用重组腺病毒进行加强免疫后,特异性抗体水平显著提高. 结论联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同种抗原核酸疫苗可克服它们单独使用时各自的缺点,能有效地诱导小鼠产生抗狂犬病毒特异免疫.
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铝佐剂毫微粒的制备及其对小鼠TH2细胞亚群影响的研究
将铝佐剂改造为纳米颗粒,以常规铝佐剂为对照,物理吸附HBsAg和狂犬病毒,探讨改良后的纳米氢氧化铝作为疫苗佐剂的免疫效果.
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狂犬病毒核蛋白单抗和荧光抗体中和试验的建立与应用
目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法,以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价,指导高危人群及动物种群的免疫预防.方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗,以亲和层析法进行纯化,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体;以BHK-21细胞系培养狂犬病毒细胞适应株CVS-11,以染毒细胞测定荧光抗体的工作浓度后,通过荧光抗体染色法测定CVS-11细胞半数感染量(TCID50);利用狂犬病毒灭活疫苗免疫犬制备抗狂犬病毒血清,并以国际兽疫局标准品进行标定;参考世界卫生组织及国际兽疫局推荐方法,确定中和试验程序,对51份样品血清进行测定,并与国际狂犬病参考实验室的检测结果进行比较,评价其精确及可靠程度.以Kaber法公式和Microsoft Excel(R)软件为基础,设计被测样品中和效价计算方法.结果制备的抗狂犬病毒核蛋白单抗的亚型为IgG2a;纯化、标记后的荧光抗体工作浓度为1:400;CVS-11株的使用量为每孔100 TCID50;本研究建立的检测程序对51份人及犬血清测得的中和效价结果与国际参考实验室的测定结果一致;自行设计的计算方法操作简便,计算快捷.结论成功建立了与国际标准相当的狂犬病毒中和抗体效价测定和计算方法.
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防制狂犬病,中国须建立长效机制
中国早在2 000多年前就有狂犬病的记载,是世界上记载本病早的国家之一,也是世界上该病高发国家之一[1].狂犬病是由狂犬病毒引起的人兽共患传染病,是迄今为止人类病死率高的急性传染病,一旦发病,病死率高达100%.经过20世纪80年代的严重流行之后,狂犬病在90年代一度得到有效控制.然而,近年来我国狂犬病不但出现了第三次流行高峰,还出现了一些新的流行特征[2-4].现从以下方面浅析对我国狂犬病防制的认识及对防治策略的建议.
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孝昌县1993-2003年狂犬病疫情分析
狂犬病是由狂犬病毒引起的一种常见传染病,尚无有效治愈方法,病死率极高,严重危害人民身体健康.为了解狂犬病在孝昌县的流行情况,本文通过对孝昌县1993-2003年狂犬病疫情分析,提出了狂犬病的防治对策.
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狂犬病的预防与控制
狂犬病是由狂犬病毒所致,临床表现为特有的恐水、恐声、怕风、咽肌痉挛、进行性瘫痪等,病死率很高。通常由病兽以咬伤方式传染给人,狂犬病属乙类传染病,是须严格管理的传染病,要求发现后24小时内上报。
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动物致伤后预防治疗结果分析
狂犬病是狂犬病毒引起的一种人畜共患的中枢神经系统急性传染病.人主要通过病兽啮咬而感染.动物致伤后一旦发病,病情极为凶险.目前尚无有效治疗手段,死亡率达100%.
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针对新罗区的犬伤患者日渐增多应采取的措施
狂犬病又名恐水病,是由狂犬病毒所致的人畜共患急性传染病.狂犬病一旦发病,病情进展速度很快,病死率几乎100%.卫生部2007年上半年狂犬病疫情报告显示,1~6月全国共发病1395例,死亡1135例.狂犬病是我国目前死亡人数多、病死率高的传染病病种,已成为"传染病第一杀手",我国已属于世界上狂犬病严重流行的国家之一.
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法国预防食肉动物狂犬病策略的背景
自1968年法国出现狐狂犬病以来,红狐一直是重要的狂犬病毒媒介动物和贮主.在国内有一年多时间没有出现食肉动物狂犬病动物病例的报道.狂犬病从法国的摩泽尔地区传到法国西部和南部.1989年在法国有27个地区上报了共3487例野生动物狂犬病病例.
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关于小鼠脑内不同注射手法的探讨
目的 研究小鼠脑内不同注射部位、进针深度以及拔针方式对实验结果的影响.方法 将狂犬病毒CTN株样品和CVS株样品分别在11 ~ 13 g以及18 ~20 g的SPF小鼠脑内注射,0.03 mL/只,按不同注射部位、进针深度以及拔针方式进行滴度测定,其中注射部位分别为眼窝后缘眼角的斜上方和两眼角后缘连线的正中线;进针深度分为进针浅、中和深(2 mm,4 mm,6 mm);拔针方式有直接法和旋针法.结果 两个注射部位测出来的滴度结果没有显著性差异;3种进针深度测得的滴度结果为浅针的高,其次为中针,深针测定的滴度结果低;直接法拔针方式测出来的滴度结果比旋针法测出来的高.结论 进针深浅以及拔针方式对小鼠脑内注射的动物实验结果有显著性的影响,这很大可能是由狂犬病毒的生物学特性所决定的.
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抗狂犬病血清皮试结果判断及脱敏注射法改进
抗狂犬病血清是一种被动免疫制剂,用于被狗、猫等动物抓咬伤后48h内注射,抑制患者细胞内的狂犬病毒扩散及繁殖的速度,相对延长潜伏期,为疫苗创造自动免疫条件,从而减少狂犬病发病率[1,2].但抗狂病血清是一种异性蛋白,注射后易发生严重的过敏反应.现将我们对抗狂犬病血清皮试结果的判断及改进的脱敏方注射法介绍如下.
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全球狂犬病流行概况及其防制策略
狂犬病又名恐水症,是由狂犬病病毒引起的人畜共患传染病.野生动物是本病原的主要宿主,犬在携带和传播人狂犬病毒中起主要作用.狂犬病主要通过动物咬伤后,唾液中的狂犬病病毒经破损皮肤侵入体内传播;此外,还可通过消化道、呼吸道以及动物密切接触等途径传播.狂犬病是迄今为止人类病死率高的急性传染病,一旦发病,病死率高达100%.据WHO报道,全球每年约有4万~7万人死于狂犬病,有1000万人接受暴露后治疗,绝大多数病例发生在发展中国家.目前,世界各国均加强了对该病的监测和控制,本文主要探讨该病全球流行状况及其防制策略.
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单克隆抗体在狂犬病预防治疗中的研究进展
体液免疫是机体对抗病毒感染的自然选择之一,抗狂犬病毒(RV)抗体在狂犬病的预防和治疗中都发挥着重要作用.现在,抗RV抗体已由传统的多克隆免疫球蛋白过渡到各种单克隆抗体(mAb)、基因工程抗体,抗RV糖蛋白mAb主要应用于RV接触后预防及治疗中,其辅助狂犬病早期诊断,抗RV糖蛋白不同表位的mAb联合应用比多克隆免疫球蛋白更具优越性.目前,抗RV糖蛋白mAb在狂犬病治疗中还面临着很多困难,如血脑屏障的生理性阻隔、难以清除寄生在神经元细胞内部的病毒等.现就mAb在狂犬病预防治疗中的研究进展予以综述.
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丹东市2003~2006年狂犬病病毒抗体检测结果分析
目的:了解我市犬咬伤人群接种狂犬病疫苗后抗体产生的效果.方法:对丹东市2003~2006年狂犬病病毒抗体检测结果进行分析.结果:狂犬病病毒抗体总阳性率95.8%,年度之间有差异,其效果不同;剂型有差异,冻干阳性率高于液体;季节有差异,春夏季低于秋冬季;年龄有差异,中老年组低于青年组,性别间无显著性差异.结论:国产狂犬病疫苗质量稳定、可靠,狂犬病抗体检测应作为狂犬病疫苗注射后必检项目.
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小儿接种狂犬病疫苗的不良反应及护理对策
狂犬病又名恐水症,是由狂犬病毒引起的,以侵犯中枢神经系统为主的急性人畜共患传染病[1].本病目前没有有效的治疗方法,因此,对伤口及时、正确的处理和规范的疫苗接种是提高生存率的关键.盐城市盐都区疾病控制中心使用的是(辽宁成大)生产的冻干人用狂犬病疫苗(Verro细胞),疫苗接种后可引起一系列的不良反应.