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瘦素对小鼠Th17细胞生成的影响及相关机制研究
目的：探讨瘦素对Th17细胞生成的影响及相关机制。方法以瘦素基因敲除的ob／ob小鼠和同系野生小鼠为研究对象。流式细胞术检测Th17细胞比例，免疫磁珠法分选脾脏CD4＋T细胞，在体外培养中拮抗瘦素或添加不同浓度的瘦素以观察瘦素对Th17细胞生成的影响，实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ qPCR）和Luminex检测技术分别检测经体外培养72 h后小鼠脾脏CD4＋T细胞中与Th17细胞密切相关细胞因子等mRNA相对表达水平及培养上清液中蛋白的表达水平。结果 ob／ob鼠外周血、脾脏中Th17细胞的比例均显著低于野生鼠[（0．49±0．03）％ vs （1．29±0．1）％、（1．56±0．22）％ vs （2．47±0．11）％]；体外培养中，野生鼠脾脏CD4＋T细胞经瘦素抗体处理后，Th17细胞的比例明显减少[（2．04±0．11）％vs （3．39±0．31）％]；ob／ob鼠脾脏CD4＋T细胞加入不同浓度瘦素后，Th17细胞比例则以剂量依赖的形式增加[（2．15±0．25）％，（3．12±0．37）％ vs （1．41±0．13）％]；ob／ob鼠脾脏CD4＋T细胞经体外培养后RORγt、IL-17A和IL-6 mRNA的相对表达量及上清中IL-17A和IL-6蛋白表达水平均低于野生鼠，但TGF-β和IL-23 mRNA表达水平没有差异。结论瘦素缺乏可导致小鼠Th17细胞的生成显著减少，也造成RORγt、IL-17A和IL-6 mRNA及IL-17和IL-6蛋白的表达水平显著降低。瘦素可能通过上调RORγt和IL-6的转录，促进Th17细胞的生成及效应分子分泌。
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甘露聚糖结合凝集素对Th17细胞诱导分化的影响
目的 研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)诱导分化的影响.方法 通过MACS分选器从人新鲜脐带血液中分选获得CD4+T细胞,对照组用anti-CD3 McAb和anti-CD28 McAb活化CD4+T细胞并加入适当浓度的IL-6和TGF-β1作为诱导剂,在对照组的基础上加入不同浓度的MBL作为实验组,细胞培养72 h后,利用流式细胞术(FACS)检测各组中Th17细胞比例变化情况;Q-PCR分别检测未加MBL对照组和不同浓度MBL实验组Th17细胞核转录因子维甲酸孤儿受体-γt(retinoid-related orphan receptor-γ-t,RORγt)mRNA表达水平;ELISA检测各组细胞上清液中IL-17A的含量;FACS检测Th17细胞在MBL-/-小鼠和WT小鼠中的变化.结果 FACS分析表明,经体外72 h培养,与对照组相比,MBL能够显著降低Th17细胞的比例;Q-PCR结果显示,MBL能够显著降低RORγt mRNA的表达;ELISA结果显示,MBL能够显著降低IL-17A的表达水平;动物实验结果表明,与WT小鼠相比,MBL-/-小鼠CD4+RORγt+Th17细胞比例显著上升.结论 MBL能够抑制CD4+T细胞向Th17细胞诱导分化.
关键词： 甘露聚糖结合凝集素(MBL) CD4+T细胞 Th17细胞 诱导分化 -
外源性IL-10对变应性鼻炎大鼠Th细胞和Th17细胞相关因子表达的影响
目的：探讨外源性白细胞介素-10（ IL-10）对变应性鼻炎大鼠（ AR） Th细胞和Th17细胞相关因子表达的影响。方法 SD大鼠30只，采用随机数字表法将其分为AR模型组、IL-10组和阴性对照组，每组10只。 AR组和IL-10组采用常规卵白蛋白（ OVA）联合氢氧化铝致敏法建立AR大鼠模型，阴性对照组采用生理盐水代替，IL-10组于激发21 d后，给予OVA的同时，腹腔注射40 pg／kg的IL-101 ml，连续7 d；各组于给药后30 min内观察各组大鼠临床表现，记录大鼠的行为学得分，并于后一次激发后48 h，取血清检测IgE和OVA-sIgE含量，同时取大鼠双侧鼻腔呼吸区黏膜，用ELISA试剂盒检测IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β含量变化，同时用Western blot法检测各指标的表达水平。结果 AR组大鼠均表现出四处摩擦、涕流满面等重度AR的临床表现，与其相比，IL-10组表现明显减轻（P＜0．05）；各组血清中IgE和OVA-sIgE含量及鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β含量均明显升高（P＜0．05），经IL-10干预后，其含量明显降低，且与AR组相比，差异有统计学意义（P＜0．05）；Western blot结果显示，与对照组相比，AR组和IL-10组大鼠鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β表达水平明显升高，IL-10组大鼠鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β表达水平低于AR组（ P＜0．05）。结论用外源性IL-10的方法治疗AR，并降低鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β的表达，可在一定程度上达到治疗AR的目的。
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非肥胖性糖尿病（NOD）小鼠糖尿病发病过程中 B10细胞水平的研究
目的：观察非肥胖性糖尿病（ non-obese diabetic， NOD）小鼠自然病程不同阶段CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞及Th1、Th17细胞数量的变化，探讨B10细胞与NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系。方法采用流式细胞术分别检测4周（A组，n＝10）、8周（B组，n＝10）及糖尿病（C组，n＝10）NOD小鼠及同龄C57BL／6小鼠（对照组，n＝20）脾脏、肠系膜淋巴结、外周淋巴结、胰腺淋巴结中CD19＋CD5＋CD1dhigh B、CD19＋IL-10＋B、CD4＋IFN-γ＋Th1、CD4＋IL-17＋Th17细胞及CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞的比例；分离NOD小鼠胰腺组织作病理切片以评估胰岛炎的严重程度。结果（1）胰腺组织HE切片：A组无胰岛炎，4周；B组发生胰岛炎，8周；C组发生明显胰岛炎且无完整胰岛，糖尿病。（2）不同病程阶段NOD小鼠B10细胞比较：B及C组B10细胞较A组增高，而C组B10细胞则较B组显著下降，差异有统计学意义（P＜0．01）；A组B10细胞各组织间无明显差异（P＞0．05），B组B10细胞以胰腺淋巴结高，C组B10细胞以外周淋巴结高且胰腺淋巴结B10细胞较B组显著下降，差异有统计学意义（P＜0．01）。（3）不同病程阶段NOD小鼠效应性T细胞比较：C组Th1及Th17细胞较A、B组显著增加，差异有统计学意义（P＜0．01）。（4）不同病程阶段CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞比较：C组Treg较A、B组无明显变化，且NOD小鼠Treg较同龄C57BL／6小鼠亦无明显变化（ P＞0．05）。结论随NOD小鼠年龄增长及胰岛炎进展，B10细胞存在数量变化及组织分布的差异；B10细胞数量减少可能参与NOD小鼠自身免疫性糖尿病的发生。
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Galectin-9基因转导干预呼吸道合胞病毒感染小鼠外周血 Th17细胞的研究
目的：观察重组9型腺相关病毒（rAAV9）携带Galectin-9基因转染小鼠外周血单个核细胞（PBMCs）的可行性，探讨Galectin-9对呼吸道合胞病毒（RSV）感染后辅助性T细胞（Th17）分化的影响。方法建立RSV感染小鼠模型，HE及PAS染色观察RSV感染小鼠肺炎症反应。分离小鼠PBMCs，利用携带Galectin-9基因的 rAAV9载体转染 PBMCs，荧光显微镜观察转染效率；real-time PCR 检测RORγt mRNA的表达；流式细胞分析技术（ FACS）检测Th17和Treg的比例；ELISA检测细胞培养上清液中IL-10、IL-17及TGF-β1蛋白水平。结果与正常对照组相比，RSV感染组RORγt mRNA、Th17及IL-17的表达均明显升高（ P 均＜0．05）， Treg 及 IL-10的表达均明显降低（ P 均＜0．05）；使用 rAAV9-Galectin-9干预PBMCs后，RSV＋Galectin-9组中RORγt mRNA、Th17及IL-17的表达较RSV 组均显著下降（P均＜0．05），Treg及IL-10的表达均显著升高（P均＜0．05）。结论 rAAV9-Galectin-9成功转染PBMCs，可以通过调控Galectin-9通路影响RSV感染Th17免疫应答。
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和厚朴酚对PM2.5暴露哮喘小鼠免疫应答加剧的抑制作用
目的 探讨和厚朴酚对细颗粒物(particulate matter 2.5,PM2.5)暴露哮喘小鼠气道炎症及肺外周血单个核细胞(PBMCs)免疫应答的抑制作用.方法 使用雌性SPF级BALB/c小鼠按随机数字表法分为生理盐水组(A组)、OVA致敏组(B组)、PM2.5暴露+OVA组(C组)、地塞米松处理组(D组)、和厚朴酚灌胃组(E组).采用OVA致敏并激发建立哮喘小鼠模型,采用HE染色观察小鼠肺组织形态及炎症情况,收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和PBMCs,real-time PCR检测RORγt mRNA及Foxp3 mRNA的表达,流式细胞术(FACS)检测Th17细胞和Treg细胞比例,ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ、IL-10及IL-17蛋白水平.结果 与哮喘组相比,PM2.5暴露哮喘组RORγt mRNA与IL-17的表达水平及Th17细胞比例均明显升高(P均<0.05),Foxp3 mRNA与IL-10的表达水平及Treg细胞比例均明显降低(P均<0.05).Th1细胞比例及其相关的细胞因子的表达并无明显变化.使用和厚朴酚干预PM2.5暴露哮喘小鼠后,和厚朴酚组中RORγt mRNA与IL-17的表达水平及Th17细胞比例均显著下降(P均<0.05),Treg细胞比例及IL-10的表达水平均显著升高(P均<0.05),与地塞米松有相似的效果.结论 和厚朴酚能通过调节Th17及Treg细胞比例影响PM2.5暴露哮喘所致的气道炎症.
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甘露聚糖结合凝集素对白假丝酵母菌感染鼠体内Treg/Th17细胞免疫平衡的调节作用
目的 研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节.方法 MBL基因敲除型(MBL-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×107 CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射;感染3 d后取小鼠肝脏和肾脏病理切片,HE染色和PAS染色观察小鼠病理组织学变化;7 d后摘除小鼠眼球取静脉血流式细胞术分析小鼠体内Treg和Th17细胞;静脉抗凝血ELISA检测小鼠体内细胞因子IL-10和IL-17A的含量;颈椎脱臼处死小鼠后取脾脏细胞MACS磁性分选获得CD4+T细胞,提取总RNA,qRT-PCR检测其体内Foxp3、RORγt mRNA的表达;取小鼠脾脏CD4+T细胞,提取总蛋白,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达水平.结果 成功建立了C.albicans感染鼠模型,和WT感染组相比较:流式分析显示MBL-/-感染组小鼠体内Th17细胞亚型数目比例增高,Treg细胞亚型数目比例降低;ELISA结果显示MBL-/-感染组小鼠体内IL-17A水平明显增高,IL-10水平降低;qRT-PCR结果显示MBL-/-感染组小鼠体内转录因子RORγt mRNA表达升高,转录因子Foxp3 mRNA表达降低;Western blot印迹结果表明MBL-/-感染组小鼠体内RORγt蛋白表达量明显增多,而Foxp3蛋白表达量减少.结论 在C.albi-cans感染中,MBL促进了CD4+T细胞向Treg细胞亚型诱导分化,抑制了CD4+T细胞向Th17细胞亚型的诱导分化,从而调节了C.albicans感染鼠体内Treg/Th17细胞的免疫平衡.
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Th17/CD4+CD25+调节性T淋巴细胞失衡在EB病毒相关噬血细胞综合征中的作用及临床意义
目的 探讨Th17细胞、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)及其相关转录因子、细胞因子水平变化在EB病毒(EBV)相关噬血细胞综合征(HLH)中的作用及临床意义.方法 研究对象为2012年1月—2016年12月在我院血液肿瘤科新诊断的EBV相关HLH患儿32例,及同期来我院体检的健康儿童30例.采用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞中Th17细胞和Treg细胞的表达;用实时荧光定量PCR技术测定外周血单个核细胞中RORγt及Foxp3 mRNA的表达水平;采用ELISA法检测血清IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β1水平.结果 EBV相关HLH组患儿的Th17细胞[(1.09±0.43)％vs(0.39±0.19)％]和RORγt mRNA水平[(1.41±0.37)vs(0.67±0.13)]明显高于对照组(P<0.05),Treg细胞[(3.66±1.13)％vs(6.80±1.15)％]和Foxp3 mRNA水平[(15.97±5.11)vs(30.23±4.95)]明显低于对照组(P<0.05).在治疗后,Th17细胞和RORγt mRNA水平较治疗前明显降低,Treg细胞和Foxp3 mRNA水平则较治疗前明显升高(P<0.05).EBV相关HLH组患儿血清IL-6、IL-17水平与对照组比较明显升高,而IL-10、TGF-β1水平则较对照组明显降低(P<0.05).结论Th17/Treg细胞失衡可能在EBV相关HLH的发病过程中起到了重要作用,维持Th17/Treg平衡的相关细胞因子可作为疾病变化的观察指标.
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强直性脊柱炎患者Th17细胞与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的变化及意义
目的 探讨强直性脊柱炎( ankylosing spondylitis,AS)患者Th17和CD4+ CD25+ FoxP3+调节性T细胞比例及相关细胞因子水平的变化及意义.方法 强直性脊柱炎患者40例,正常同年龄对照37例.采用流式细胞术检测外周血Th17与调节性T细胞的比例,双抗体夹心酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平.结果 AS组患者外周血Th17细胞比例明显高于对照组[(1.02±0.34)％vs(0.68:±0.29)％,P＜0.05],CD+ CD25+ FoxP3+细胞比例明显低于对照组[(3.77±0.81)％ vs (4.69±1.23)％,P＜0.05].AS患者血清中IL-6、IL-23、IL-17水平明显高于对照组[ (6.15±2.71) ng/L vs(3.31±1.65) ng/L; (9.44±3.12) ng/ml vs (5.82±2.61) ng/ml;( 10.53±4.97) ng/L vs (6.78±3、26) ng/L,P均＜0.01]；差异有统计学意义.与对照组相比,AS组TGF-β水平有下降的趋势[(4,76±2.15) ng/ml vs(5.16±2.02) ng/ml,P＞0.05],但差异无统计学意义.AS患者血清各细胞因子含量与临床及实验室指标无相关性.结论 强直性脊柱炎患者Th17与CD4+CD35+FoxP3+调节性T细胞比例失衡,血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与强直性脊柱炎免疫发病过程.
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湖南艾滋病患者Th17和Tr细胞及IL-17在抗病毒治疗过程中的变化
目的 观察HIV感染者和AIDS患者血IL-17、CD3+CD4+IL-17+细胞(Th17细胞)和CD4+CD25+Foxp3+T细胞(Tr细胞)的平衡状态及其在1年高效抗反转录病毒治疗(HAART)中的变化.方法 选取经HAART治疗的HIV/AIDS患者33例,同时选取33例健康志愿者为对照,分别于治疗0、6、12个月采集静脉血,检测血清IL-17水平、Th17细胞及Tr细胞百分比,并对比分析其相互关系.结果 HIV/AIDS在HAART治疗前、治疗6个月、12个月及健康对照外周血的Th17细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(1.20±0.37)%、(2.50±1.03)%、(3.70±1.56)%和(4.70±1.43)%;Tr细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(9.16±3.33)%、(7.19±2.91)%、(5.53±1.88)%和(4.43±0.97)%;血清IL-17水平分别为(5.3±2.5) pg/ml、(7.7±2.4) pg/ml、(10.4±3.1) pg/ml和(17.7±6.6) pg/ml.Th17细胞水平与CD4+T细胞计数正相关,与病毒载量负相关;Tr细胞水平与CD4+T细胞计数负相关,与病毒载量正相关.结论 HIV感染导致IL-17、Th17细胞和Tr细胞的失平衡,而HAART治疗可能逐渐恢复二者的免疫平衡状态.提示三者可能在艾滋病发病机制中起作用,并有可能成为观察艾滋病进展和HAART治疗效果的有效指标.
关键词： 艾滋病 HIV Th17细胞 IL-17 高效抗反转录病毒治疗 -
CD4~+CD25~+调节性T细胞/Th17细胞失衡与婴幼儿脓毒症
目的 观察不同免疫状态下婴幼儿脓毒症CD4~+CD25~+Foxp3~(high)岫调节性T细胞(Tr)/Th17细胞的变化,探讨婴幼儿脓毒症适应性免疫紊乱可能的机制.方法 婴幼儿脓毒症48例,健康同龄儿童对照组26例.用流式细胞术榆测CD14~+单核细胞HLA-DR表达率,CD4~+CD25~+Foxp3~(high)Tr 比例及Th17细胞比例;用ELISA法检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β及IL-17A等浓度,计算IL-10/TNF-α比值;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4~+T细胞Foxp3、ROR-γt mRNA表达及IL-17A mRNA表达.以CD14~+单核细胞HLA-DR表达＞或＜30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组).结果 DR-L组IL-10/TNF-α比值明显高于DR-H组(P＜0.05)及对照组(P＜0.05).CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞比例及转录因子Foxp3基因表达DR-L组明显高于对照组及DR-H组(P＜O.05).Th17细胞比例、IL-17A血浓度、Th17细胞IL-17A基因表达及转录因子ROR-γt基因表达DR-H组及DR-L组均明显高于对照组(P＜0.05),两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).DR-H组和DR-L组Th17细胞主要分化调控因子IL-6、IL-1β血清浓度明显高于正常对照组(P＜0.05),两组问IL-6、IL-1β浓度差异无统计学意义(P＞0.05),DB-L组CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞主要调节因子TGF-β血浓度明显高于DR-H组及对照组(P＜0.05).结论 Th17持续过度活化可能是导致脓毒症前炎症细胞因子/趋化因子持续增高的原因之一;CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Th17细胞失衡可能参与脓毒症混合性拮抗反应综合征(MARS)的发生发展,婴幼儿脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Thl7细胞失衡的原因之一.
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Th17和 Treg 细胞及相关细胞因子在手足口病患儿外周血中的变化
目的：研究手足口病患儿感染初期外周血中Th17与调节性T细胞（ Treg细胞）及相关细胞因子的水平变化。方法采用流式细胞术检测75名手足口病患儿（分为重症病例组和普通病例组）和30例正常儿童外周血中（ CD3＋CD8-IL-17＋） Th17及（ CD4＋CD25＋Foxp3＋） Treg细胞的变化，采用ELISA方法检测血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β1的水平。结果手足口病患儿各组与正常对照组相比，Treg细胞百分率、Treg/Th17比率及TGF-β1、IL-10水平均明显降低（ F＝5．580、6．205、0．000、0．014，P均＜0．05），重症病例组中Th17细胞百分率明显升高（F＝3．189，P＜0．05），IL-17有增高趋势，但差异不大，各组IL-23差异也无统计学意义（ P＞0．05）；重症病例组IL-6的含量与普通病例组、正常对照组相比明显升高（F＝7．318，P＜0．05）。结论手足口病患儿感染初期外周血Treg/Th17细胞及相关细胞因子的水平出现变化，通过减少Treg细胞，增加Th17细胞，扩大炎症反应，促进抗病毒作用。
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宫颈癌患者癌组织中Th17/Tr细胞明显升高与疾病进程相关
目的 了解宫颈癌患者外周血、肿瘤组织中Th17/Tr细胞的比例,分析其与疾病发生、发展的关系,探讨Th17/Tr比值改变在宫颈癌临床检测中的意义.方法 采用流式细胞术检测32例宫颈癌患者外周血、肿瘤组织标本和15例健康者对照标本中的Th17、Tr细胞;采用直线相关检验方法对晚期宫颈癌组的Th17、Tr细胞进行相关性分析.结果 宫颈癌患者外周血、肿瘤组织中Th17、Tr细胞显著高于健康对照组(P<0.05),晚期宫颈癌组Th17/Tr比值低于早期组(P<0.01),晚期宫颈癌组Th17、Tr表达呈负相关.结论 宫颈癌患者Th17、Tr细胞比例明显升高,提示Th17/Tr比值与宫颈癌的发生发展可能存在着一定的关系,为官颈癌的免疫治疗提供新思路.
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急性期川崎病Th17细胞变化初探
目的 探讨Th17细胞在川崎病(Kawasaki disease,KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿60例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+T细胞IL-17A/F、转录因子ROR-γt、Foxp3及PBMC IL-6、TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3、IFN-γ等mRNA表达;酶联免疫吸附试验检测血浆中IL-6、TGF-β、IL-23、IL-27、IFN-γ的蛋白浓度;流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)的比例.结果 急性期KD患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01),IVIG治疗后明显降低(P<0.01);急性期KD患儿IL-17A/IL-17F与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、白细胞数目(WBC)呈正相关(IL-17A:0.70,0.85,0.80,P<0.01;IL-17F:0.63,0.65,0.69,P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6转录水平明显高于对照组(P<0.01),IVIG治疗后显著降低(P<0.01);TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3 mRNA水平及血浆蛋白浓度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);血浆IFN-γ浓度显著升高,mRNA水平无变化;急性期KD患儿CD4+ CD25+ Tr细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 急性期KD患儿Th17细胞过度活化可能参与了KD免疫发病机制.
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Th17和 Treg 细胞及其相关细胞因子在结核性胸膜炎患者中的变化及意义
目的检测健康人和结核性胸膜炎患者外周血Th17细胞和调节性T细胞（ Treg细胞）（ CD4＋CD25＋Foxp3＋）在CD4＋T细胞中的表达率以及IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β血清水平和患者胸水中的IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β水平，研究Th17细胞和调节性T细胞以及IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β在结核性胸膜炎发病机制中的作用。方法使用流式细胞术检测患者以及健康对照人群外周血Th17细胞和调节性T细胞表达率，ELSIA方法定量检测血清以及胸水中IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β水平，使用SPSS17．0统计学软件，分析健康人和结核性胸膜炎患者上述指标之间的差异以及各指标间的相关性。结果结核性胸膜炎患者外周血Th17细胞表达率（1．02％±0．20％）明显高于健康人外周血Th17细胞表达率（0．89％±0．13％，P＝0．002＜0．05）；结核性胸膜炎患者外周血调节性T细胞表达率（4．64％±0．77％）明显低于健康人外周血调节性T细胞表达率（5．10％±0．90％，P＝0．000＜0．05）；结核性胸膜炎患者Th17/Treg细胞的比率（0．25±0．07）明显高于健康人（0．17±0．05，P＝0．000＜0．05）；结核性胸膜炎患者外周血IL-17（17．49 ng/L±3．94 ng/L）和IL-23（90．42 ng/L±23．06 ng/L）水平和胸水中IL-17（26．13 ng/L±5．98 ng/L）和IL-23（122．26 ng/L±31．71 ng/L）水平显著高于对照组外周血IL-17（14．45 ng/L±3．81 ng/L）和IL-23（77．55 ng/L±20．26 ng/L）的水平，P值分别为0．022、0．039、0．000、0．000；患者胸水中IL-17和IL-23浓度也显著高于本人血液中的IL-17和IL-23浓度，P值为0．000和0．000；患者胸水中IL-6的浓度（5．31 ng/L±0．74 ng/L）显著高于患者血液中IL-6的浓度（4．54 ng/L±1．02 ng/L）和对照组血液中IL-6的浓度（4．26 ng/L±0．91 ng/L），P值分别为0．003和0．000，患者血液与对照组血液中IL-6的浓度没有显著差别（P＝0．274）；对照组外周血液TGF-β浓度（3．95 ng/L±0．79 ng/L）显著高于患者外周血液TGF-β浓度（3．32 ng/L±0．80 ng/L）及胸水中TGF-β浓度（3．12±0．77），P值分别为0．005和0．000，患者血液及胸水中TGF-β水平之间没有显著差别（P＝0．365）；结核性胸膜炎患者外周血Th17细胞的表达率与其Treg细胞在外周血的表达率呈显著负相关（r＝-0．684， P＝0．000＜0．05），结核性胸膜炎患者外周血Th17细胞的表达率与其外周血中的IL-17、IL-23、IL-6水平呈明显的正相关（r＝0．479，0．441，0．326，P＝0．013，0．015，0．017）；患者血液中TGF-β水平与Treg细胞在外周血的表达率呈明显的正相关（r＝0．297，P＝0．024），与Th17细胞表达率没有明显相关性（r＝0．091，P＝0．659）。结论 Th17和Treg细胞可能参与了结核性胸膜炎的免疫病理机制，有关细胞因子的变化可能参与了Th17和Treg细胞变化的调控以及炎症反应， Th17和Treg细胞以及有关细胞因子的变化可能是结核性胸膜炎重要的免疫病理机制。
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慢性阻塞性肺疾病患者 Th17／Treg 细胞失衡与肺功能相关性研究
目的研究慢性阻塞性肺疾病（ COPD）患者Th17细胞和Treg细胞介导的免疫应答变化及免疫失衡与肺功能下降程度的可能内在联系。方法选择2009年1月-2012年12月在本院门诊及住院治疗的COPD中重度、极重度患者和肺功能正常的吸烟者及不吸烟的正常对照者作为研究对象，分别测定肺功能，并采集外周血和诱导痰。采用流式细胞仪技术测定外周血中Th17细胞和Treg细胞比例，ELISA方法测定血清及诱导痰上清液相关细胞因子，荧光定量 PCR方法测定相应的转录因子ROR-γt 和Foxp3表达水平，并分析Th17/Treg细胞平衡与肺功能下降程度的相关性。结果与肺功能正常组和正常对照组相比，COPD患者外周血Th17细胞比例、相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17 A、TGF-β及转录因子ROR-γt表达水平升高，且重度和极重度患者升高更加明显；而Treg细胞比例、细胞因子IL-10及转录因子Foxp3表达水平则明显降低。诱导痰上清液相关细胞因子变化趋势与外周血Th17和Treg细胞的变化趋势一致。 Th17/Treg细胞比值与FEV1、FVC和FEV1/FVC呈显著负相关。结论 Th17/Treg细胞平衡失调与COPD患者的肺功能下降密切相关，可能参与了COPD的疾病进展过程。
关键词： 慢性阻塞性肺疾病 Th17细胞 调节性T细胞(Treg) 肺功能 免疫失衡 -
类风湿性关节炎患者外周血TH17细胞测定
目的 探讨新的效应T细胞TH17在类风湿性关节炎(RA)患者外周血的分布及意义.方法 选取PHA或PMA+Ion作为刺激剂,建立流式细胞术胞内细胞因子染色的方法,应用该方法检测了35例活动期、30例稳定期RA患者及正常人外周血TH17和TH1细胞百分率.结果 PlVIA+Ion联合刺激的效果优于PHA.RA患者及正常人T细胞经PMA+Ion刺激后,CD3+CD8-T细胞IL-17表达水平较相应未刺激组显著增加(P<0.05).而不论是否加刺激剂,活动期RA患者外周血CD3+CD8-IL-17+细胞明显多于稳定期,二者均多于正常对照组(P<0.05).RA患者外周血TH1细胞呈现与T<,H>17细胞类似的分布特点.结论 活动期RA患者外周血存在TH17细胞的分布异常,T1H17细胞可作为评价RA患者细胞免疫功能状态的新指标.
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慢性乙型肝炎患者核苷(酸)类似物治疗前后外周血中Treg和Th17细胞及其相关细胞因子水平的变化
目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者应用核苷(酸)类似物(NA)抗病毒治疗前后外周血中Treg、Th17细胞及其相关细胞因子水平的变化.方法 采用流式细胞术,检测44例NA治疗12周的CHB患者外周血Treg(CD4+ CD25high CD127low)和Th17(CD3+ CD8-IL-17+)细胞频率.ELISA检测血清IL-10、TGF-β1、IL-17及IL-23水平.各组间采用Mann-Whitney U检验,治疗前后采用Wilcoxon配对T检验.结果 完全应答的14例患者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1和IL-23水平及Treg/Th17比率较治疗前明显下降(Z=-2.691,-2.417,-2.237,-2.291,-2.291,P均＜0.05),Th17细胞频率及IL-17水平略有增加.部分应答的11例患者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1和IL-23水平较治疗前明显下降(Z=-1.988,-2.934,-2.756,-2.803,P均＜0.05),Th17细胞频率及IL-17水平略有增加,Treg/Th 17比率略有下降.无应答的15例患者的Treg和Th17细胞频率、IL-10、TGF-β1、IL-23、IL-17水平及Treg/Th17比率较治疗无明显变化.HBV DNA下降≥2 log拷贝/ml及ALT恢复正常时,Treg细胞频率与细胞因子IL-10、TGF-β1和IL-23水平较治疗前明显下降(P均＜0.05).Treg细胞频率与HBV DNA及ALT水平三者之间具有一定的相关性.结论 NA抗病毒治疗前后,CHB患者Treg和Th17细胞频率及IL-10、TGF-β1、IL-23、IL-17水平均发生变化；治疗后获得满意应答的CHB患者Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1、IL-23水平及Treg/Th17比率明显下降,Th17细胞及IL-17水平继续上升；且以上变化与病毒学应答及生化学应答有关.
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花粉症患者在季节发作期外周血Th17/Treg细胞的平衡变化及其临床意义
目的 探讨花粉症患者在发作期和非发作期外周血Th17/调节性T细胞(Treg)平衡变化及其临床意义.方法 纳入13例花粉症患者、10例尘螨过敏哮喘患者以及10例健康儿童,分别在发作期和非发作期采用流式细胞术检测外周血Th17/Treg平衡变化,ELISA检测血清中IL-17、IL-10和TGF-β水平.结果 (1)在发作期内,花粉症组外周血Th17细胞[(3.4±2.4)%]显著高于尘螨过敏哮喘组[(2.1±1.6)%]、健康对照组[(0.5±0.3)%](P均<0.05);花粉症组[(2.1±1.3)%]、尘螨过敏哮喘组[(3.6±1.9)%]外周血Treg细胞水平均显著低于健康对照组[(5.5±2.8)%],差异具有统计学意义(P均<0.05).在非发作期,花粉症组患者外周血Th17细胞[(3.0±1.9)% vs (3.4±2.4)%,P<0.05]、Th17/Treg比例[(1.4±1.0)% vs (1.7±1.5)%, P<0.05]均降低,而Treg水平升高[(2.4±1.6)% vs (2.1±1.3)%,P<0.05].未观察到尘螨过敏哮喘组患者在非发作期外周血Th17细胞、Treg以及Th17/Treg比例发生变化. (2)相关性分析:发作期内花粉症组外周血Th17/Treg比例与呼出气一氧化氮(FeNO)水平(r=0.321,P<0.05)、外周血嗜酸性粒细胞计数存在正相关关系(r=0.198,P<0.05).结论 花粉症患者在发作期内存在Th17/Treg免疫失衡的病理状态,这可能是导致其临床症状急性发作的重要机制之一.
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肺结核患者Th17和调节性T细胞在抗结核治疗过程中的变化
目的 观察肺结核患者CD3+ CD4+ IL-17+T细胞(Th17细胞)和CD4+ CD25+ Foxp3+T 细胞(调节性T细胞,Tr)的平衡状态及其在6个月抗结核治疗中的变化.方法 选取经抗结核治疗的肺结核患者32例,同时选取32例健康志愿者为对照,分别于治疗0、3、6个月采集静脉血,用流式检测Th17细胞及Tr细胞百分比,并对比分析其相互关系.结果 肺结核患者在抗结核治疗前、治疗3月、6个月与正常人外周血的Th17细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(1.10±0.39)％、(2.50±1.03)％、(3.90±1.34)％、(4.50±1.52)％；Tr细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(9.17±3.26)％、(6.85±2.73)％、(5.46±1.69)％、(4.35±0.86)％.结论 结核分枝杆菌感染导致Th17细胞和Tr细胞的失平衡,而抗结核治疗可能逐渐恢复二者的免疫平衡状态.免疫细胞量的变化有可能成为观察肺结核进展和抗结核疗效的参考指标.
