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神经细胞和小胶质细胞的相互作用与神经变性性疾病的关系
小胶质细胞是中枢神经系统的构成细胞之一,在很久以前它的存在就已经得到确认.从细胞起源的角度来说,它的机能还尚不清楚.近年来,随着细胞培养和细胞分离技术的不断提高,它的作用也渐渐地被发现和解明.不仅在炎症性神经疾病方面,在缺血性疾病和变性疾病发生时,在变性的神经细胞周围也发现有活化的小胶质细胞.这些来自变性神经细胞且通过特定通路被活化的小胶质细胞,可能对神经有保护作用.不过,近年来也有研究显示,变性神经细胞还有贪食、处理的作用,它可以直接作为效应器来伤害神经细胞.本文讨论小胶质细胞和神经细胞相互之间的作用,以及这些作用对神经变性性疾病的影响.
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SARS患者脾内IL-6、IFN-β和IP-10的免疫组织化学观察及定量分析
目的 通过对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾内白细胞介素6(IL-6),干扰素β(IFN-β)和干扰素γ诱导蛋白10(IP-10)的免疫组织化学结果分析,深入探讨SARS患者脾组织的病理变化及其发病机制. 方法 通过免疫组织化学技术观察6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾组织细胞内IL-6、IFN-β和IP-10的表达情况,并进行图像分析.结果 SARS患者脾红髓内含大量IL-6阳性细胞,阳性产物呈团块状分布于细胞质和细胞核.图像分析结果显示,SARS患者脾红髓内IL-6阳性细胞的平均吸光度值(AA)与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.05);SARS患者脾红髓内阳性细胞的细胞核、细胞质呈IFN-β阳性,阳性产物呈棕黄色团块状,图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IFN-β阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.05);SARS患者脾红髓内含大量IP-10阳性细胞,阳性产物呈棕黄色团块状,分布于细胞核和细胞质.图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IP-10阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.05).3种细胞因子在SARS患者残存的脾白髓内均呈阴性. 结论 SARS患者脾内细胞的IL-6、IFN-β和IP-10反应均相对增强,提示SARS患者脾组织的病理性损伤以及免疫功能缺陷可能与上述促炎症因子、免疫抑制因子及趋化因子的相对增多有关.
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应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究
目的 应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白.方法 用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析.结果 应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白.初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用.结论 应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白.
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抑制性消减杂交技术筛选重组IFNβ下调HepG2细胞靶基因
目的 利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建重组干扰素β(IFNβ)刺激人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库,筛选IFNβ下调HepG2相关基因.方法 重组IFNβ 2000 U/ml刺激对数生长期HepG2细胞,以生理盐水作用的HepG2细胞为阴性对照;制备细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后将实验组cDNA分成两份,分别与两种不同的接头连接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析.结果成功构建重组IFNβ刺激HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后,得到58个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1000 bp插入片段.随机挑选其中35个插入片段测序,并通过生物信息学分析,结果 共获得12种编码基因.结论 应用SSH技术成功构建了IFNβ刺激HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库,为进一步了解IFNβ在肝细胞内的免疫调节机制提供了依据.
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HSV-Ⅰ感染后人小胶质细胞MX1蛋白表达变化及其作用初探
目的 观察人小胶质细胞在单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染后抗黏液病毒(Mx1)蛋白表达及干扰素-α(IFN-α)、IFN-p表达变化,初步探讨Mx1蛋白在单纯疱疹病毒(HSV)性脑炎中的可能抗病毒作用.方法 应用流式细胞技术检测人小胶质细胞感染HSV-Ⅰ后4、12、48 h Mx1蛋白的相对表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测细胞培养上清液中IFN-α、IFN-β的表达.结果 HSV-Ⅰ实验组各时间点人小胶质细胞Mx1蛋白表达、IFN-α及IFN-β表达均高于正常对照组(均P＜0.01);HSV-Ⅰ实验组48h内人小胶质细胞Mx1蛋白表达及IFN-α、IFN-p表达随时间延长升高,且Mx1蛋白表达与IFN-α、IFN-p表达均存在正相关(r=0.632,P＜0.01; r=0.714,P＜0.01).结论 HSV-Ⅰ感染可引起体外培养的人小胶质细胞Mx1蛋白表达上调及IFN-α、IFN-p分泌增加,Mx1蛋白可能参与了中枢神经系统抗HSV-Ⅰ过程.
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对比干扰素β与醋酸格拉默治疗多发性硬化的新进展
醋酸格拉默（GA）和干扰素β（主要是干扰素β‐1a和干扰素β‐1b）作为治疗复发缓解型多发性硬化（RRM S ）的一线药物，二者的药理作用机制，降低RRM S患者的复发率，延缓残疾积累，不良反应及成本效用等均有明显不同。本文将通过对比以上差异，对比性地评价二者治疗RRM S的疗效。
关键词： 醋酸格拉默 干扰素β 复发缓解型多发性硬化 -
β-干扰素治疗继发进展型多发性硬化临床疗效的荟萃分析
目的 系统评价β-干扰素(interferon-β,IFN-β)维持治疗继发进展型多发性硬化的临床疗效.方法 采用Cochrane系统评价方法,通过电子检索MEDLINE、Embas、CBMdisc、Cochrane Library、ISI和美国临床试验登记中心等的数据库文献.评价纳入文献的方法学质量后,采用RevMan 4.2.10软件对提取的数据进行分析.结果共纳入4个RCTs研究.IFN-β治疗组与对照组比较,EDSS评分显示的2年疾病进展率差异有统计学意义 (P=0.02＜0.05,OR=0.82,95%CI=0.70～0.97),EDSS评分显示的3年疾病进展率差异无统计学意义(P=0.29＞0.05,OR=0.85,95%CI=0.62～1.15),平均年复发率差异有统计学意义(P＜0.00001,OR=0.48,95%CI=0.41～0.57).结论 IFN-β维持治疗继发进展型多发性硬化能降低EDSS评分显示的2年疾病进展率,不能降低EDSS评分显示的3年疾病进展率,可明显降低平均年复发率.
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多发性硬化干扰素β治疗效果初步观察
目的 初步探讨干扰素(IFN-β)用于中国早期多发性硬化(MS)的疗效.方法 对6例MS患者采用IFN-β治疗,并随访4～27个月.根据扩展的功能缺损状况量表评分(EDSS)、磁共振(MRI)T2加权病灶演变及持续缓解的时间,综合评价IFN-β的治疗疗效.结果 6例患者随访期EDSS评分明显改善,T2W病灶负荷明显缩小,无复发者.结论 IFN-β用于中国MS患者能改善其神经功能障碍,并减少复发.
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β-干扰素对多发性硬化患者趋化因子mRNA表达的影响
目的观察干扰素β-1b(IFN β-1b)在体外对多发性硬化(MS)患者趋化因子mRNA表达的影响.方法取MS患者外周血,分离单个核细胞(MNC),以其他非炎性神经系统疾病(OND)及健康人(HC)为对照组.MNC在完全培养基中分别与自身抗原髓鞘碱性蛋白(MBP)、对照抗原AChR及不加抗原组,加或不加药物IFN β-1b共同培养,3 d后收集细胞,涂片,用地高辛标记的寡核苷酸探针进行原位杂交(ISH),检测C-C趋化因子单核细胞炎性蛋白-1α/β(MIP-1α/β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和正常T细胞表达及分泌的调节活化因子(RANTES) mRNA的表达.结果 MBP刺激的MIP-1α及自发产生的MIP-1α mRNA均受到IFN β-1b的抑制,但差异无显著意义(P>0.05).RANTES mRNA的表达受到IFN β-1b的抑制,在MBP诱导下无药物处理时为30.2±15.0(细胞数/105,下同),有药物处理为11.1±5.3,差异有显著意义(P<0.01);在无抗原诱导下无药物处理时为18.5±3.3,有药物处理为5.1±3.2,差异亦有显著意义(P<0.01).IFN β-1b在10 U/ml浓度下,可对MBP刺激的MCP-1 mRNA的表达产生抑制作用(分别为158.4±104.3和63.2±36.9,差异有显著性意义,P<0.01),而对自发产生的MCP-1 mRNA作用不明显;对MBP刺激产生及自发产生的MIP-1β mRNA均无明显作用.结论 IFN β-1b可在体外抑制RANTES、MCP-1 mRNA的表达.IFN β-1b抑制趋化因子的产生可能是其对MS患者产生治疗作用的机制之一.
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干扰素β-1b治疗385例多发性硬化患者的回顾性研究
目的 观察干扰素β-1b(IFNβ-1b)治疗中国多发性硬化(MS)患者的疗效、安全性和依从性.方法 收集2011年1月至2014年2月在我国北方地区22家医院神经科就诊并接受IFNβ-1b治疗的MS患者385例,对其疗效、安全性和依从性做一回顾性分析.结果 (1) 27例临床孤立综合征(CIS)患者治疗后,92.6％的患者无临床复发;MRI显示96.3％的患者无新增T2病灶,100.0％的患者无强化病灶;14例患者与治疗前扩展残疾状况量表(EDSS)评分相比,治疗后EDSS评分差异无统计学意义(t=1.344,P=0.202).(2) 346例复发缓解型MS(RRMS)患者治疗后,164例患者用药时间≥1年,中位年复发率由治疗前的1.0降至治疗后的0(Z=-9.667,P=0.000);MRI显示,309例(89.3％)患者无新增T2病灶,321例(92.8％)患者无强化病灶;178例患者平均EDSS评分(分)由治疗前的3.3±1.8降至治疗后的2.9±1.9(t=4.603,P=0.000).(3) 12例继发进展型MS患者治疗后,7例患者用药时间≥1年,中位年复发率由治疗前的0.3降至治疗后的0(Z=-1.690,P=0.091);MRI显示,11例(91.7％)患者无新增T2病灶,12例(100.0％)患者无强化病灶;7例患者平均EDSS评分(分)由治疗前的5.4±2.2变为治疗后的5.6±2.2(t=-0.795,P=0.457).(4) 385例患者至随访时,25.4％的患者停药,主要停药原因为经济原因(25.5％)、不良反应(19.4％)和自觉无效(15.3％);常见不良反应为流感样症状、注射部位反应、肝酶升高和血象异常.结论 IFNβ-1b可减少中国CIS和RRMS患者临床复发和MRI病灶活动,改善RRMS患者残疾程度,安全性好.经济原因是患者停药的主要原因.
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乙型肝炎病毒攻击肝细胞对β-干扰素表达的影响
目的 探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)攻击肝细胞对β-干扰素表达的影响.方法 构建β-干扰素启动子调控的荧光素酶报告载体,与参比质粒共同转染细胞,用双荧光素酶报告系统检测poly(I∶C)和血清中HBV攻击HepG2和L-O2两种肝细胞对细胞中β-干扰素转录活性的影响,并结合PCR技术检测HBV攻击肝细胞后β-干扰素的转录变化.结果 血清中HBV攻击肝细胞能够引起细胞中β-干扰素的转录,但转录水平较低.此外,HBV对肝细胞中β-干扰素的转录有促进作用.结论 自然感染状态下,HBV能引起肝细胞中以β-干扰素表达为代表的天然免疫反应.
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人β干扰素基因的改构及其融合表达和纯化
目的:通过基因改构来提高人β干扰素基因原核表达产物的稳定性和比活性.方法:用RT-PCR法从人外周血淋巴细胞中获得人β干扰素基因.定点突变后,克隆至表达载体pGEX-2T.IPTG诱导该基因的表达,亲和层析和原位裂解法纯化表达产物.结果:获得大量纯化产物,且稳定性和活性获得极大提高.结论:基因改构可以提高人β干扰素基因原核表达产物的稳定性和活性.
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RNF34调控天然免疫的初步研究
目的：研究环指蛋白34（RING finger protein 34， RNF34）对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建 pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID 和 pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒，并在HEK293 T细胞中瞬时表达；利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒（ SeV）和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒；发现在SeV刺激下，RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用， RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性，RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。
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S632A3通过抑制GSK-3β活性促进LPS诱导巨噬细胞产生IFN-β
LPS刺激巨噬细胞产生IFN-β在抵御外来病原微生物的免疫反应中发挥重要作用.本研究探讨新抗生素S632A3促进LPS诱导巨噬细胞产生IFN-β及其分子机制.采用实时定量PCR检测mRNA含量,ELISA检测细胞因子含量,激酶分析检测GSK-3β活性,Western blotting检测蛋白磷酸化水平.结果表明:S632A3可显著促进LPS诱导的巨噬细胞产生IFN-β,其分子机制是抑制细胞内GSK-3β活性,降低转录因子c-Jun苏氨酸239位点的磷酸化并增加c-Jun稳定性.结果提示,S632A3是一个新的抗炎先导化合物,通过抑制GSK-3β活性促进LPS诱导巨噬细胞产生IFN-β.
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多发性硬化治疗的研究进展
多发性硬化是一种中枢神经系统的自身免疫性脱髓鞘疾病,好发于青壮年.目前对其尚无肯定有效的治疗方法 ,主要的治疗方法 有:①皮质类固醇激素;②干扰素β;③醋酸格拉太咪尔;④盐酸米托蒽醌;⑤硫唑嘌呤;⑥环磷酰胺;⑦免疫球蛋白;⑧血浆置换;⑨干细胞移植.
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干扰素β-1a治疗慢性丙型肝炎对肝纤维化的影响
目的 用干扰素β-1a(IFN-β-1a)单独或联合利巴韦林(RBV)治疗慢性丙型肝炎患者,比较治疗前后的肝组织学的变化.方法 慢性丙型肝炎患者21例,其中男14例、女7例,平均年龄(50±7)岁,随机分入IFN-β-1a单独治疗组(13例)和IFN-β-1a联合RBV治疗组(8例).共治疗24周,停药后观察24周.治疗前1年内行第1次肝组织活检,后1次随访时(第48周)行第2次肝组织活检.对治疗前后的肝活检组织进行炎症坏死(HAI)积分、纤维化评分以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原的免疫组化染色.结果 (1)21例患者7例获得了持续病毒学应答(SVR).(2)21例患者治疗前HAI(6.6±2.2)分,治疗后(4.3±2.2)分,治疗后HAI积分有明显改善(t=4.77,P＜0.01);SVR组与非SVR组患者的HAI改善程度的差异有统计学意义(t=2.04,P＜0.05).(3)治疗前纤维化评分为(1.7±1.2)分,治疗后(1.1±1.1)分,治疗后纤维化评分较治疗前有明显改善(t=1.92,P＜0.05).SVR中有71.40%的患者获得了肝纤维化改善,未获得SVR的患者中有42.96%获得了肝纤维化改善.(4)21例患者治疗前后α-SMA和Ⅲ型胶原的表达有差异(t值分别为2.15、1.83,均P＜0.05).(5)联合治疗的患者肝组织学评分更易获得改善.(6)肝组织纤维化评分与肝组织HAI积分、α-SMA评分和Ⅲ型胶原积分光密度值之间均呈正相关,相关系数分别为0.805、0.942、0.949,均P＜0.01).结论 无论患者是否获得了病毒学应答,IFN-β-1a能有效改善慢性丙型肝炎患者的肝组织情况.α-SMA评分和Ⅲ型胶原积分光密度值能较好地反映肝纤维化程度.IFN-β-1a不仅能抗丙型肝炎病毒,还能直接抑制和扭转肝纤维化的进展.
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TLR3在宫颈HPV16持续性感染及宫颈病变中的作用
目的：探讨Toll样受体3（TLR3）在宫颈人乳头瘤病毒16（HPV16）持续性感染及宫颈病变中的作用。方法：选取宫颈液基细胞学检查正常的HPV16阳性者157例，其中40例6个月后复查仍为HPV16阳性（HPV16持续感染组），117例6个月后复查转为阴性（HPV16非持续感染组）。同时选择同期就诊的宫颈HPV16阳性、临床病理资料完整的宫颈疾病患者共206例，其中A组119例（慢性宫颈炎102例、CINⅠ17例）、B组66例（宫颈CINⅡ~Ⅲ57例，原位癌9例）和C组21例（宫颈浸润癌）。以聚合酶链反应（PCR）方法检测TLR3及β干扰素（IFN-β）DNA相对表达量，应用基因测序方法进行TLR3基因突变分析。结果：HPV16持续感染组TLR3、IFN-βDNA相对表达量低于HPV16非持续感染组（均P＜0.05）。 HPV16持续感染组与非持续感染组TLR3与IFN-βDNA相对表达量均呈正相关（均P＜0.001）。在HPV16持续感染组与非持续感染组中均未检测到TLR3扩增片段的基因突变。 HPV16阳性宫颈病变的3组患者TLR3及IFN-βDNA相对表达量差异有统计学意义（均P＜0.05）。 TLR3、IFN-βDNA相对表达量均为A组高于B组及C组（均P＜0.05），B组高于C组（P＜0.05）。在不同级别宫颈病变中TLR3与IFN-βDNA相对表达量呈正相关（均P＜0.001）。结论：TLR3可能通过调控IFN-β表达而调节宫颈局部免疫功能，TLR3表达减低不仅与宫颈HPV16持续性感染有关，而且在宫颈癌前病变及宫颈癌发生及进展中发挥重要作用。
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干扰素-β治疗复发-缓解型多发性硬化系统评价
目的 评价干扰素-β (IFN-β)治疗复发-缓解型多发性硬化的有效性和安全性.方法 检索Cochrane临床对照试验中心注册库、美国国立医学图书馆、荷兰医学文摘、CINAHL、LILACS、PEDRO、中国生物医学文献数据库、临床试验注册中心和世界卫生组织国际临床试验注册平台(检索截止时间:2014年6月);并通过阅读相关论文参考文献,联系参与IFN-β治疗多发性硬化临床试验的研究者和企业,进一步获取研究信息或未发表的数据.由两名评价人员独立筛选研究、提取研究信息和数据、评价偏倚风险.应用Review Manager软件(Version 5.3.3)进行Meta分析,GRADEpro软件评价研究设计和实施过程中的局限性(偏倚风险)、结果的不一致性和不精确性、证据的间接性和发表偏倚对主体证据质量的影响.结果 共检索相关文献576篇,阅读标题和摘要后初步筛选出26项研究;进一步阅读全文后纳入5项研究(共2129例复发-缓解型多发性硬化患者:高剂量IFN-β组1076例、安慰剂组1053例).所有纳入的研究均为IFN-β单药治疗且随访时间≥1年的随机双盲安慰剂对照平行临床试验.大多数研究存在方法学局限性,主要缺陷为随访偏倚风险较高,且数据分析未使用意向治疗原则,仅919例受试者(43.17％)的数据可用于分析随访2年时的主要结局.Meta分析显示,IFN-β可轻微减少随访2年时复发病例数(RR=0.810,95％CI:0.740 ～ 0.890;P=0.000)和残疾进展病例数(RR=0.700,95％CI:0.550 ～0.880;P=0.002);敏感性分析(差情况的演示分析)显示,IFN-β治疗无效(RR=1.110,95％CI:0.730 ～1.680,P=0.620;RR=1.310,95％CI:0.600 ～ 2.890,P=0.500).共1581例患者(74.26％)的数据可用于分析随访1年时至少复发1次的病例数(RR=0.740,95％CI:0.590 ～ 0.930;P=0.010),绝对危险降低率为13.24％,需治疗的病例数为8例,表明需要治疗8例患者才可防止1例在第1年内复发.但在年复发率方面,IFN-β治疗无效.IFN-β常导致注射部位局部反应、寒颤、发热、肌肉疼痛、流感样症状、头痛、血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平升高等不良事件,但并不增加外周血淋巴细胞和中性粒细胞减少、抑郁、自杀行为或自杀观念的发生.结论 高质量证据显示,IFN-β治疗复发-缓解型多发性硬化可轻微降低第1年内的复发病例数,但超过1年的疗效尚不能确定.目前尚无足够证据证明IFN-β在减少残疾进展病例数方面的疗效,尚待高质量的随机对照临床试验评价其长期有效性.
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对复发-缓解型多发性硬化患者:大剂量干扰素β-1b治疗未显优势
加拿大学者的一项研究显示,对于复发-缓解型多发性硬化患者而言,500μg干扰素β-1b的临床疗效并不优于250μg的标准剂量,且与醋酸格拉替雷的临床疗效相似.
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干扰素β对继发—缓解型多发性硬化的疗效评价
目的 探讨继发-缓解型多发性硬化(RRMS)患者应用干扰素β(IFNβ)治疗的临床效果.方法 选取40例RRMS患者给予IFNβ治疗,250μg/次,隔日1次,疗程1年；治疗6个月及1年后残疾状态量表评分(EDSS)判定,观察治疗效果、复发情况及不良反应.结果 40例患者治疗总有效率77.50％,复发率15.00％；治疗6个月、1年EDSS均低于治疗前(P＜0.01),治疗后1年EDSS低于治疗后6个月(P＜0.05)；未见严重不良反应发生.结论 应用IFNβ治疗RRMS效果满意,值得临床推广应用.
