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金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠RIG-Ⅰ信号传导通路的影响
目的:研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中RIG-Ⅰ信号传导通路的影响,探讨其可能的抗病毒机制.方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,不同剂量金欣口服液灌胃给药进行干预,于首次滴鼻后24 h、72 h、144 h取各组小鼠肺组织,Real time RT-PCR分别检测RSV-M、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β在mRNA水平的表达情况,Western Blot检测RIG-Ⅰ和IPS-Ⅰ在蛋白水平上的表达情况.结果:RSV感染24 h和72 h后,其肺组织中RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β的表达均较正常组显著升高,金欣口服液不同剂量组RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β表达较RSV组明显下调;144 h后,RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β表达量显著下调,金欣口服液不同剂量组能上调RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β的低表达.结论:RSV能诱导RIG-1信号传导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而金欣口服液能通过调控RIG-1信号通路从而调节IFN-β的表达.
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RNF34调控天然免疫的初步研究
目的：研究环指蛋白34（RING finger protein 34， RNF34）对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建 pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID 和 pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒，并在HEK293 T细胞中瞬时表达；利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒（ SeV）和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒；发现在SeV刺激下，RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用， RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性，RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。
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甘露消毒丹及其挥发油对流感病毒感染小鼠RIG-Ⅰ/NF-κB信号通路的影响
目的 观察甘露消毒丹及其挥发油对流感病毒感染小鼠血清中白细胞介素4 (IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α/β(IFN-α/β)含量及肺组织中非结构蛋白1(NS1)、维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)mRNA、核因子κB(NF-κB)蛋白的影响,以探讨甘露消毒丹及其挥发油抗病毒作用的分子机制.方法 选择SPF级BALB/c小鼠36只,雌雄各半,随机分为6组,分别为正常组、模型组、灌胃组、滴鼻组、灌胃滴鼻合用组、奥司他韦组,每组6只.除正常组外,其余5组以流感病毒FM1-6-E2滴鼻造模.于造模后第7天,摘眼球放血处死小鼠,通过透射电子显微镜对肺组织进行检测以及图像分析,采用ELISA法测定血清中IL-4、TNF-α、IFN-α/β含量,qRT-PCR检测各组小鼠肺组织中NS1、RIG-Ⅰ mRNA的表达,Western blot方法测定各组小鼠肺组织NF-κB蛋白的表达.结果 (1)流感病毒感染后模型小鼠肺组织超微结构可见Ⅱ型细胞坏死、肺泡结构破坏,肺泡腔内纤毛增粗、脱落,形成肺部炎症;各治疗组均可改善肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的异常改变.(2)流感病毒感染小鼠后,血清中IL-4、TNF-α、IFN-α/β的含量及肺组织中的NS1、RIG-Ⅰ mRNA、NF-κB蛋白表达均高于正常组,模型组与正常组比较,差异显著;与模型组比较,灌胃组、滴鼻组、灌胃滴鼻合用组、奥司他韦组血清中IFN-α/β含量显著升高,IL-4、TNF-α含量及NS1 mRNA、RIG-Ⅰ mRNA、NF-κB蛋白表达明显下调(P＜0.05),甘露消毒丹各治疗组不同剂型抗流感病毒作用差异有统计学意义(P＜0.05),灌胃滴鼻合用组＞灌胃组＞滴鼻组.结论 甘露消毒丹具有抗流感病毒感染的作用,通过抑制RIG-Ⅰ/NF-κB信号传导通路的活化,阻止炎症的病理反应,提高免疫因子含量,降低流感病毒引起的免疫炎性损伤.
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岗藿抗感汤治疗流感临床疗效观察及其对RIG-Ⅰ、Th1/Th2影响
目的:研究岗藿抗感汤对流感患者临床症状及调节免疫的影响.方法:本研究选择流感患者60例,随机分为岗藿抗感汤组30例、磷酸奥司他韦胶囊组(可威)30例.通过使用岗藿抗感汤治疗流行性感冒,并对患者进行感冒症状分级量化评分及测定患者外周血RIG-Ⅰ(IFN-α、IFN-β)、Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)细胞比值表达,从而了解岗藿抗感汤在流行性感冒发生发展中如何参与调节免疫及对临床症状的影响,为指导临床治疗提供依据.结果:岗藿抗感汤组连续给药5d,可缩短患者退热时间,改善其感冒症状,升高RIG-Ⅰ(IFN-α、IFN-β)(P＜0.05),也对增高的IFN-γ及IFN-γ/IL-4比值有降低作用(P＜0.05).结论:岗藿抗感汤具有抑制流感病毒Th1细胞亚群优势反应的作用,同时可激活RIG-Ⅰ诱导Ⅰ型干扰素的产生,抑制流感病毒的复制.
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RIG-Ⅰ在抗病毒感染中作用的研究进展
RNA解旋酶维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)是新发现的细胞内重要的模式识别受体,能识别胞内的dsRNA进而诱导IFN的产生,激活特异性免疫而发挥抗病毒作用.研究发现,病毒感染中存在RIG-Ⅰ通路的缺陷.对RIG-Ⅰ通路及其在病毒感染中作用的研究方兴未艾,此文就RIG-Ⅰ信号通路及其在病毒感染中的研究进展作了综述.
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IRF-7在干扰素诱导中作用的研究进展
IFN调节因子(interferon regulation factor,IRF)家族在IFN的诱导表达中起着重要的调节作用.近来研究表明IRF-7是诱导IFN表达的主要的调节因子,此文对IRF-7在TLR9亚家族和RIG-Ⅰ介导的诱导IFN-αβ表达中的调节作用作了综述.
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灵猫方通过增强天然免疫功能抑制乙型肝炎病毒复制的研究
目的:研究灵猫方对pHBV1.3转染HepG2细胞的天然免疫功能的影响,探讨灵猫方抗乙肝病毒(HBV)的作用机制.方法:制备0.25mg/ml和0.5mg/ml灵猫方水提物干预HBV质粒转染HepG2细胞,以0.9％ NaC1溶液作为空白对照组,72h后收集培养上清液,ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平;收集细胞提取总RNA,RT-PCR法检测细胞内IFN-α、IFN-β、IFN-λ1及干扰素效应蛋白OAS1、MxA、PRKmRNA表达水平,RIG-Ⅰ mRNA表达水平.结果:与空白对照组比较,0.5mg/ml灵猫方干预pHBV1.3转染HepG2细胞分泌的HBsAg和HBeAg水平明显降低,细胞内IFN-α、IFN-β、IFN-λ1 mRNA及OAS1、MxA、PRKmRNA表达水平表明显升高(P＜0.01),RIG-Ⅰ mRNA表达水平明显升高(P＜0.01).结论:灵猫方通过促进pHBV1.3质粒转染HepG2细胞的Ⅰ、Ⅲ型干扰素产生,增强天然免疫功能,从而抑制HBV复制,可能是通过RIG-Ⅰ通路诱导干扰素产生,增加干扰素的形成.
