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简易RHCE基因定型方法用于Rh配型输血的可行性探讨
目的 探讨简便易的RHCE基因分型技术用于Rh配型输血的可行性.方法 采用PCR-SSP技术对481名定期输血的β-地中海贫血(简称地贫)患者进行RhCcEe表型的基因分型(实验组),对其中≥3个月连续输注RhCcEe同型血的患者使用微柱凝胶卡法复查其RhCcEe表型;对照组取400名献血者,以微柱凝胶卡法检测其RhCcEe表型,对其中164例做RHCE基因分型;分析比较2组RhCcEe表型频率和基因定型方法的可行性.结果 实验组中203名连续接受CcEe同型输血的地贫患者,微柱凝胶卡法检测均获得RhCcEe血清学清晰的结果,并与PCR-SSP的基因分型结果一致.对照组中164名献血者的RHCE基因分型结果亦均与其血清学结果一致,对其中7名血清学c、E或e抗原弱阳性个体所做RHCE基因编码区序列分析:仅l例观察到1059G/A杂合峰(GenBank KT957625),其余6例未发现异常.2组均以CcEe和CCee表型为主,分别为实验组的55.3％(266/481)和24.9％(120/481),对照组的49.3％(197/400)和31.3％(125/400).结论 简易PCR-SSP RHCE基因分型方法可初步用于中国人Rh配型输血.
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四川江油地区孕产妇β-地中海贫血基因结果分析
目的 了解四川江油地区孕产妇β-地中海贫血基因类型及其分布特征,探讨地中海贫血产前筛查的临床意义.方法 对2013年1月—2014年12月在我院门诊产科就诊的孕产妇进行血常规及血红蛋白电泳筛查,β-地中海贫血阳性指征者采用PCR结合反向斑点杂交法(RDB)进行β-地中海贫血基因分析.结果 3835例孕产妇,β-地中海贫血初筛阳性者100例,其中92例被基因分析确诊为地中海贫血(92/3835,2.40%).基因突变类型10种,其中CD41-42、CD17、IVS-Ⅱ-654、-28是江油地区主要的基因突变类型,分别占28.12%、26.04%、16.67%、10.42%.结论 加强江油地区孕前检查及产前诊断,是有效降低重型地中海贫血患儿出生的重要预防手段和措施.
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四川地区重型β-地中海贫血患儿及双亲基因突变的研究
目的探讨四川地区重型β-地中海贫血患儿及其双亲突变基因类型的特点.方法对27例β-地中海贫血患儿及双亲采用盐水渗透性试验测定红细胞渗透脆性、碱变性法测定抗碱血红蛋白(HbF)、醋酸纤维薄膜电泳比色法测定血红蛋白A2(HbA2)和氰化高铁血红蛋白法测定Hb等β-地中海贫血血液学检查.用常规方法抽提外周血白细胞DNA,多重等位基因特异聚合酶链反应(MASPCR)分析其基因类型. 结果 27例重型β-地中海贫血患儿及其双亲共81例标本中检测出常见的3种基因突变是CDl7(A→T)、CD41-42(-TTCT)、IVS-Ⅱ-654(C→T),占总数的94.54%.结论采用MASPCR法进行基因诊断,具有操作简单、快速准确,一次可检测多种突变基因型,提高了基因诊断率.
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血红蛋白电泳及PCR-反向斑点杂交法诊断β-地中海贫血
目的:探讨血红蛋白电泳与突变基因检测诊断β-地中海贫血的临床意义.方法:应用醋酸纤维薄膜电泳对100例小细胞低色素贫血病人进行血红蛋白电泳分析,将检测结果中MCV＜80%,HbA2＞3.2%,或HbF>3.1%的判为β-地中海贫血表型阳性,对阳性患者进一步应用聚合酶链反应(PCR)结合反向斑点杂交技术(RDB)检测其基因突变类型.结果:47例病人经血红蛋白电泳定量检测为β-地中海贫血表型阳性,其中22例为β-地中海贫血,阳性率为46.8%,检出5种突变基因,依次为:IVS-Ⅱ-654(C-T)、CD41-42(-TTCT)、CD17(A-T)、TATAbos-28(A-G)、CD14-15(+G).以IVS-Ⅱ-654(C-T)突变类型占首位.结论:血红蛋白电泳联合基因诊断是目前诊断β-地中海贫血可靠的实验方法.
关键词： β-地中海贫血 血红蛋白电泳 PCR-反向斑点杂交 -
贵州黔西部分少数民族β-地中海贫血血液学筛查
目的: 研究贵州省黔西县少数民族β-地中海贫血的发病率和杂合子的血液学状态,为提高人口素质服务.方法: 用血液学方法对贵州省黔西县6个少数民族共1 223名当地常住居民进行β-地中海贫血筛查.结果: 从1 223名少数民族中共检出β-地中海贫血携带者44例,检出率3.6%.其中,以布依族检出率高,为7.4%.其余依次是满族、白族、苗族、仡佬族及彝族.同时在检出的44例阳性标本中发现7例疑属HbE/β-地中海贫血,满族6例,彝族1例.结论: 贵州省黔西县6个少数民族为β-地中海贫血的高发人群,而且具有显著的民族特征,是我国一个较为特殊的β珠蛋白生成障碍性贫血分布区域.
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贵州地区重型β-地中海贫血基因突变类型分析
目的：了解贵州地区重型β-地中海贫血基因突变类型及分布情况。方法：1980例疑诊的β-地中海贫血贵州籍患者，采用反向斑点杂交技术对中国人群中8种常见和9种少见β-地中海贫血基因突变类型进行检测，对检出的突变基因型及其分布频率进行分析。结果：共检出128例重型β-地中海贫血，其中纯合子62例，双重杂合子66例；共检出14种突变基因型，按分布频率大小前4种依次为CD17/CD17（28.13％）、CD41-42/CD17（23.44％）、CD41-42/CD41-42（17.19％）、IVS-Ⅱ-654/CD17（7.81％）；共检出等位基因突变类型8种，前4种依次为CD17（46.09％）、CD41-42（35.16％）、IVS-Ⅱ-654（10.55％）和-28（5.08％）。结论：贵州地区重型β-地中海贫血基因突变类型以CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654常见。
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贵阳地区育龄人群HbA2筛查轻型β-地中海贫血截断值的确定
目的:建立贵阳地区育龄人群血红蛋白A2(HbA2)筛查轻型β-地中海贫血的截断值.方法:对152例育龄期男性,129例育龄期女性非孕妇和110例孕妇进行血红蛋白电泳和β-地中海贫血基因检测;以基因检测为金标准,绘制HbA2的ROC曲线,确定各组HbA2筛查轻型β-地中海贫血的截断值.结果:整体的截断值为3.95％,敏感度、特异度和准确度分别为94.8％、99.3％和98.5％;男性组的HbA2截断值(4.40％)明显高于女性非妊娠组(3.75％)和女性妊娠组(3.70％),女性妊娠状态对HbA2截断值无明显影响.结论:建立了贵阳地区育龄人群HbA2筛查轻型β-地贫的截断值,不同性别育龄人群的HbA2截断值存在差异.
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β-地中海贫血患者血脂及载脂蛋白分析
目的观察β-地中海贫血患者血脂(TC、TG、HDL-C、LP(a))及载脂蛋白(APOAI、APOB100)与健康人之间的变化情况.方法采用酶法和免疫化学法对20例β-地中海贫血的患者和20例性别相同,年龄一致的健康人的血脂及载脂蛋白进行了测定.结果除了APOAI值增高,差异具有显著意义(P＜0.05)外,其他各项指标(TC、TG、HDL-C、LP(a)、APOB100)与健康人比较均差异无显著意义(P＞0.05).结论提示可能β-地中海贫血患者APOAI增高具有抗动脉粥样硬化的血脂优势.
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β-地中海贫血448例的基因型与临床分析
[目的]探讨β-地中海贫血(β-地贫)基因突变与临床病情的关系.[方法]应用PCR-RDB技术对448例β-地贫患儿进行基因诊断.[结果]检测出12种基因突变类型,有24种基因组合形式.[结论]β°纯合子及β°/β°双重杂合子临床表现重,发病年龄、输血年龄均较早,β°/β+双重杂合子表现为中间型或重型,发病年龄及输血年龄均较晚.
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湖南地区206例儿童β-地中海贫血基因突变类型分析
目的 分析湖南地区儿童β-地中海贫血患儿珠蛋白基因缺陷类型,为开展相关的研究与治疗提供依据.方法 通过血液常规检查、血红蛋白电泳和红细胞渗透脆性分析筛查地中海贫血患儿,用PCR法扩增目的基因,使用反向膜杂交技术检测靶基因,判断基因突变类型,检测中国人8个常见及9个罕见β-地中海贫血基因突变位点.结果 206例儿童β-地中海贫血中突变基因类型共有17种,分别为纯合子13例,基因型是CD41-42(2.43 %),IVS-2-654(3.39 %)和CD17(0.49 %);杂合子175例,常见的基因型是CD41-42(40.77 %),IVS-2-654(22.81 %),CD17(7.76 %),-28(7.28 %),CD71-72(2.43 %);双重杂合子18例,基因型是CD41-42/IVS-2-654(2.43 %),IVS-2-654/-28(1.94 %),CD41-42/CD17(1.46 %),IVS-2-654/CD17(0.97 %),CD41-42/CD27-28(0.49 %),IVS-2-654/CD71-72(0.49 %),IVS-2-654/-29(0.49 %),CD41-42/-28(0.49 %).结论 本研究发现湖南地区儿童β-地中海贫血患儿β-珠蛋白基因缺陷类型共有17种,β-地中海贫血基因突变类型分布存在区域差异.
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中国大陆首例血红蛋白C病的检出
目的:报道在中国大陆首次诊断出血红蛋白C(hematoglobin C,HbC)病的病例.方法:在广东省妇幼保健院行产前筛查的一对夫妇,男方临床疑似HbE病基因携带者(非洲多哥人),女方临床疑似轻型β-地中海贫血基因携带者(中国人),应用聚合酶链反应联合反向点杂交技术及DNA测序技术,检测β血红蛋白基因,并取羊水对其胎儿进行产前诊断.结果:男方的基因型为CD6(GAG→AAG)/N,为HbC病.女方的基因型为IVS-2-654(C＞T)/N.胎儿基因型与其父亲的相同.结论:在中国大陆首次诊断出HbC病的病例.DNA测序技术能准确、快捷地诊断血红蛋白病.
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2种新的中国人β-地中海贫血基因突变类型CD13/14(-C)和beta nt1582(A>G)突变
目的:报道2种新的中国人β-地中海贫血(β-thalassemias,β-地贫)基因突变类型CD13/14(-C)和beta nt1582(A>G)突变.方法:疑似β-地贫患者10例,其中7例为临床疑似轻型β-地贫基因携带者,1例为临床疑似重型β-地贫患者,2例为父母双方均为β-地贫基因携带者的胎儿.应用聚合酶链反应联合反向点杂交技术(PCR-RDB),以及基于PCR技术的DNA测序技术检测β血红蛋白基因.根据患者表型和以往文献报道,对新发现的基因突变性质进行分析.结果:检测出2种β-地贫常见基因突变型,分别是IVS-2-654(C>T)和-28(A>G).检测出5种β-地贫稀有基因突变型,分别是beta nt1582(A>G),PolyA(AATAAA>GATAAA);CD13/14(-C);beta nt 1586(A>G),PolyA(AATAAA>AATAGA);IVS-1-1(G>T);IVS-2-2(-T);其中前2种为新发现的β-地贫基因突变类型.结论:发现了2种新的β-地贫基因突变类型,其表型效果可能为β0或β+.对常规基因检测技术不能诊断的β-地贫疑似病例,可作DNA测序进行确诊.
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海南地区地中海贫血产前基因诊断的临床研究
目的:研究检测α-地中海贫血及β-地中海贫血在产前基因诊断中的临床应用价值.方法:对孕妇夫妇携带地中海贫血的48例风险胎儿的羊水(或脐血)应用单管多重PCR体系和反向点杂交法,进行α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断.结果:共检测出地中海贫血胎儿,8例.其中α-地中海贫血14例,包括东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)2例,东南亚缺失型纯合子(--SEA/--SEA)8例,左缺失型杂合子(-α42/αα)1例,右缺失型杂合子(-α3.7/αα)2例,非缺失型点突变(ααT/αα)1例;β-地中海贫血24例,包括CD 41-42杂合子16例,CD 41-42纯合子2例,-28(A-G)杂合子3例,双重杂合子(IVS2nt654/CD41-42,-28(A-G)/CD71-72(+A),CD41-42/-α3.7)3例.其中10例重型地贫儿引产,1例重型地贫儿产后新生儿死亡,其余均足月分娩存活.所有病例经引产或正常分娩后留取脐带血,作地贫基因诊断,与产前诊断结果一致.结论:应用单管多重PCR体系及反向点杂交法能快速、准确进行α-和β-地中海贫血产前基因检测,这对于有效预防重型地中海贫血胎儿出生具有重大临床意义.
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KLF1基因对地中海贫血的影响分析
成人血红蛋白A (HbA2)和胎儿血红蛋白F(HbF)水平是一种鉴定β-地中海贫血携带者可靠的诊断方法.HbA2含量的升高是由β-株蛋白基因的突变或者β-株蛋白簇外部的分子机能障碍引起的,这种分子机能障碍可能归因于β-株蛋白簇的调控基因所致,例如KLF1基因.本实验的目的是鉴定KLF1基因对地中海贫血病的影响.本研究从中国南部地区招募40名健康的人和100名中重型β-地中海贫血患者作为实验对象(67例重型和33例中间型).研究发现,14％的β-地中海贫血患者中存在KLF1基因的特异性突变,这些患者选择性的出现于中间型地中海贫血病例中.KLF1基因突变的患者血液中HbA2和HbF水平较健康人群和未发现KLF1基因突变的患者有较大的升高.对这些患者的8-株蛋白基因和y-株蛋白基因的表达进行实时定量分析,结果显示携带KLF1基因突变的患者其δ-株蛋白和γ-株蛋白基因的表达明显升高,这支持HbA2和HbF水平升高的表型变化.这些结果说明KLF1基因缺陷可以通过改变血液参数来调节β-地中海贫血患者临床表型的严重性.本实验的研究结果也需要在不同种族人群中进行进一步的验证.
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慢病毒介导炭疽毒素受体1基因靶向沉默对γ珠蛋白基因表达的影响
目的 探讨沉默炭疽毒素受体1 (anthrax toxin receptor 1,ANTXR1)基因对γ珠蛋白基因表达的影响.方法 构建ANTXR1基因特异性序列的shRNA重组质粒及阴性对照重组质粒,经酶切验证及测序鉴定后,将干扰载体和慢病毒质粒共转染入293T细胞后收集病毒上清液,再将其转染至K562细胞中,并经puromycin筛选稳转细胞株.通过实时荧光定量PCR技术检测各组ANTXR1基因和γ珠蛋白基因mRNA的表达情况;通过Western蛋白印迹技术检测各组ANTXR1蛋白和γ珠蛋白的表达情况.采用t检验进行统计分析.结果 获得有效干扰ANTXR1基因的K562稳转细胞株,实时荧光定量PCR结果显示,ANTXR1-shRNA实验组中ATXR1基因和γ珠蛋白基因mRNA相对表达水平分别为0.19±0.02和1.46±0.24;Western蛋白印迹技术结果显示,蛋白相对表达水平分别为0.20±0.01和1.45±0.14.ANTXR1-shRNA实验组与阴性对照组、空质粒载体组和空白对照组相比,ANTXR1基因相对低表达,γ珠蛋白基因相对高表达,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向沉默ANTXR1基因后,促进γ珠蛋白基因mRNA和蛋白水平的表达.
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1768例地贫基因型分析
目的:讨论1768例地中海贫血患者的基因型分布,探究贺州市地贫基因的遗传携带特征.方法:对2011年4月14日至2016年12月29日贺州市共2864例临床疑似地中海贫血携带者进行地中海贫血基因检测,包括使用Gap-PCR进行三种α缺失型分析,用反向点杂交法对三种α点突变和17种β突变进行地贫基因检测,结果共确诊携带地中海贫血基因患者1768例,以他们的基因型作为讨论样本,进行针对本市地贫基因分布特征分析探讨;结果:α型地中海贫血基因阳性病例总为1006例,所占比例为56.90％;β型地贫基因阳性病例共为595例,所占比例为33.65％;α型和β型地中海贫血基因阳性病例的比值约为1.69:1.α地贫阳性病例中,其基因型以——SEA/αα为主,共629例,占比62.52％.共595例β型地中海贫血病例,βCD41-42/βN,βCD17/βN,βIVS-Ⅱ-654/βN,β-28/βN,βCD71-72/βN这5类基因型病例数总558例,占比93.78％.另外检出167例α、β基因复合携带地贫病例,占比9.45％.复合类型中α-地中海贫血以——SEA/αα基因型为主,而β地中海贫血主要以βCD41-42/βN基因型为主;结论:贺州市的地中海贫血基因型α型地中海贫血为主,以——SEA/αα较多,β型地中海贫血基因型以βCD41-42/βN,βCD17/βN,βIVS-Ⅱ-654/βN,β-28/βN,βCD71-72/βN较多,复合地贫基因检出率为9.45％.基因检测对于地中海贫血的预防诊断治疗具有十分重要的临床意义,对于各地区及人群需进行有效的预防计划制定,遗传咨询及产前诊断.
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浅析β-地中海贫血
β-地中海贫血是一种临床常见的由于β-珠蛋白基因重要功能区的突变引起遗传性溶血性贫血疾病.首先在地中海沿岸地区发现,并在遭受疟疾感染的国家高度流行,但随着人类居民的相互迁移已导致世界许多地区出现这种疾病.中国主要在南方地区常见.
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反向点杂交技术应用于β-地中海贫血基因研究
目的应用反向点杂交技术(RDB)建立敏感、特异、简便的检测方法来同时检测17种不同的β-珠蛋白基因突变.方法应用反向点杂交技术对734例来我院做产前检查的高危患者进行检测,发生突变位点共68例,占9.26%.其中,654/N 18例占2.45%,41-42/N31例占4.22%,22-28/N 5例占0.68%,BE/N 5例占0.41%,-28/N 4例占0.54%,17/N 4例占0.54%,14-15/N 1例占0.14%,-29/41-42 1例占14%,71-72/N 1例占0.14%.结论反向点杂交方法应用于进行β-地中海贫血的血液学筛查、基因诊断、携带者检出具有简便、快捷、准确的特点.
