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PCR-反向斑点杂交膜芯片技术在遗传性非综合征耳聋患儿基因检测中的应用
目的 探讨PCR-反向斑点杂交(PCR-RDB)膜芯片技术在遗传性非综合征耳聋患儿基因诊断中的应用价值.方法 收集东莞市康复学校38例排除耳聋高危因素的先天性耳聋患儿的外周血2 mL,提取基因组DNA,采用自行研究设计的多重PCR扩增结合RDB膜芯片技术针对中国人群4个常见耳聋致病基因20个热点突变进行检测.以Sanger测序技术作为金标准对阳性样本进行验证.结果 38例耳聋患儿中,共有16例患儿检出耳聋基因突变,检出率为42.11%,耳聋基因突变的患儿均行家系验证.16例耳聋患儿基因突变中GJB2基因突变6例,检出率为15.79%,其中纯合子3例、杂合子3例;SLC26A4基因突变4例,均为杂合子,检出率为10.53%;MTRNR基因m.1555 A＞G突变位点2例,检出率为5.26%;复合突变4例,检出率10.53%;未检出GJB3基因突变.16例耳聋基因突变患儿DNA样本经Sanger测序法验证,结果符合率为100%.结论 应用针对4个常见耳聋致病基因20个热点突变设计的PCR-RDB膜芯片技术检测先天性耳聋患儿易感基因具有检出率高、快速、准确、经济等特点,是遗传性非综合征耳聋患儿基因筛查的理想方法,具有较好的临床应用前景.
关键词： 遗传性非综合征耳聋 PCR-反向斑点杂交 膜芯片 基因突变 -
广西钦州地区结核分枝杆菌相关耐药基因变异特征分析
目的 分析广西钦州地区结核分枝杆菌(M TB)相关耐药基因rpoB、katG、inhA、rpsL及embB的变异特征.方法 应用聚合酶链式反应(PCR)-反向斑点杂交法对237例M TB-DNA 阳性的痰液标本进行结核分枝杆菌5种常见耐药突变基因检测.结果 对4种一线抗结核药物耐药菌株占30.38%,其中单耐利福平(RIF)占2.53%,单耐异烟肼(IN H)占13.92%,仅对链霉素(STR)耐药占3.80%,对两种及以上抗结核药物耐药(PR)占3.80%,同时对RIF和IN H耐药(M DR)占6.33%.5种耐药基因的13个突变位点中,IN H inhA基因的-15M 位点多见,其次为RIF的S531L位点和STR的43M位点.结论 广西钦州地区的主要耐药菌株为IN H耐药,其中又以inhA基因突变为主.
关键词： 结核分枝杆菌 耐药基因 基因突变 PCR-反向斑点杂交 -
血红蛋白电泳及PCR-反向斑点杂交法诊断β-地中海贫血
目的:探讨血红蛋白电泳与突变基因检测诊断β-地中海贫血的临床意义.方法:应用醋酸纤维薄膜电泳对100例小细胞低色素贫血病人进行血红蛋白电泳分析,将检测结果中MCV＜80%,HbA2＞3.2%,或HbF>3.1%的判为β-地中海贫血表型阳性,对阳性患者进一步应用聚合酶链反应(PCR)结合反向斑点杂交技术(RDB)检测其基因突变类型.结果:47例病人经血红蛋白电泳定量检测为β-地中海贫血表型阳性,其中22例为β-地中海贫血,阳性率为46.8%,检出5种突变基因,依次为:IVS-Ⅱ-654(C-T)、CD41-42(-TTCT)、CD17(A-T)、TATAbos-28(A-G)、CD14-15(+G).以IVS-Ⅱ-654(C-T)突变类型占首位.结论:血红蛋白电泳联合基因诊断是目前诊断β-地中海贫血可靠的实验方法.
关键词： β-地中海贫血 血红蛋白电泳 PCR-反向斑点杂交 -
滤纸干血斑用于昆明地区人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变的应用性研究
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症是以G6PD基因单个碱基突变为分子基础的X－连锁不完全显性遗传性疾病,是我国南方常见的遗传性疾病,云南省是我国G6PD缺乏症的高发区,某些地区发病率高达13％[1].由于酶缺陷性质及酶活性降低水平的不同,在某些诱因的情况下如生时冷刺激,或者在不知情的情况下食用了可能引起溶血的药物和食物,其表现可以从无症状到急性溶血性贫血、核黄疸等一系列病理改变,而大多数平时可无临床症状[2,3],因此早期准确诊断对于该病的预防和控制非常重要.本文建立了一种采用滤纸干血斑,用改良的DNA提取技术,结合PCR-膜反向斑点杂交法(RBD)的方法,对昆明地区确诊G6PD缺乏症的人群进行G6PD基因突变检测,现将结果报告如下.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因突变 PCR-反向斑点杂交
