首页 > 文献资料
-
胎兔动脉导管平滑肌细胞的原代培养及鉴定
目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法.方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养细胞的进行鉴定.结果:经10～14天培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞.结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便,可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础.
-
胎兔伤口无瘢痕愈合的形态学和胶原构成研究
目的探讨胎兔伤口无瘢痕愈合的可能机理及条件.方法用22～23d的孕兔建立胎兔伤口无瘢痕愈合的动物模型,并与孕兔、成年兔伤口愈合进行比较,对各组兔皮肤切口组织进行光镜和透射电镜检查,胶原含量测定(羟脯氨酸法)及分型.结果①胎兔切口无急性炎症反应,成纤维细胞(FB)出现早,伤口无瘢痕一期愈合.②胎兔伤口中胶原含量及构成变化不显著;孕兔、成年兔胶原在术后7d时升高(P＜0.05).结论无急性炎症反应、皮肤中的FB及胶原构成是胎兔伤口无瘢痕愈合的重要因素.
-
胎兔及成兔耳软骨创伤愈合的形态学观察
软骨创伤愈合是整形外科的一个重要问题.关节软骨破坏后依靠纤维组织愈合,直接影响到关节的抗压性能及关节活动,甚至造成关节强直.我们从胎儿皮肤无瘢痕愈合现象得到启示,在怀孕23 d的胎兔耳上制作了胎兔软骨创伤愈合模型,并比较观察了胎兔和成兔耳软骨创伤愈合的过程.
-
胎兔、孕兔、成年兔伤口愈合中肿瘤坏死因子和表皮生长因子含量分析
目的探索胎兔伤口无瘢痕愈合的可能机理及条件.方法采用孕22～23d的母兔及所孕胎兔皮肤伤口无瘢痕愈合的动物模型及成年兔皮肤伤口愈合模型,以放射免疫法测定其表皮生长因子(EGF)和肿瘤坏死因子(TNF)含量.结果胎儿伤口中的EGF和TNF术后3d明显升高(P＜0.05),并维持至术后7 d;孕兔及成年兔仅在术后3 d升高(P＜0.05),术后7d降到接近正常水平.结论胎兔皮肤伤口中特有的细胞因子水平是胎儿伤口无瘢痕愈合的重要因素.
-
妊娠期缺氧对胎兔颈总动脉全基因表达谱的影响
缺氧是影响内环境稳态的常见应激之一,也是胎儿遭受的重要的与临床相关的应激[1].许多情况可引起妊娠期缺氧,并进一步造成胎儿缺氧,诸如孕妇居住在高海拔地区、吸烟以及一氧化碳污染环境暴露等[2];此外,许多临床疾病可导致胎儿长期慢性缺氧,如贫血、胎盘功能不良、脐带受压、子痫前期、心肺肾等脏器疾患和血红蛋白病等.胎儿对缺氧的代偿反应包括心率降低、血液重新分布及某些基因表达改变等[3].目前国内外仅见缺氧诱导胎鼠动脉组织个别基因表达变化的报道[4-5],而通过基因芯片技术检测缺氧对胎儿动脉组织基因表达的影响,尚未检索到相关文献.本研究利用基因芯片技术,对孕兔常氧和缺氧环境下胎兔颈动脉全基因表达情况进行对比分析,探讨妊娠期缺氧对胎兔血管组织基因表达的影响.
-
MgSO4对急性胎兔宫内窘迫脑损伤NMDAr1表达影响的病理学研究
目的 建立孕兔宫内窘迫模型,探讨硫酸镁(MgSO4)胎兔脑损伤后NMDAr1表达的影响.方法 新西兰大白兔孕兔39只,随机分为空白对照组(n=12)、假手术组(n=9)、缺血缺氧脑病组(n=9)和MgSO4保护组(n=9),缺血缺氧组和MgSO4保护组建立孕兔开腹子宫动脉结扎胎兔宫内窘迫缺血缺氧模型,并且MgSO4保护组在建立模型前给予腹腔注射MgSO4(100mg/kg),分别开腹取各组胎兔脑组织做病理及NMDAr1表达检测.结果 与空白对照组和假手术比较,缺血缺氧脑病组和MgSO4保护组NMDAr1表达强阳性,脑组织结构层次被破坏,神经细胞变性坏死,间质出血;MgSO4保护组NMDAr1免疫反应强度低于缺血缺氧脑病组,而脑组织结构层次完整性优于缺血缺氧脑病组.结论 MgSO4在一定程度上能减轻NMDAr1导致的胎儿宫内窘迫缺血缺氧病理性脑损伤,对NMDA脑损伤具有一定的保护作用.
-
冷冻预处理温度对胎兔许旺细胞活性的影响
背景:许旺细胞作为周围神经损伤修复的重要桥接材料,其活性对临床修复周围神经损伤成功与否具有重要影响.目的:观察不同维持温度冷冻预处理超深低温保存对胎兔许旺细胞活性的影响.方法:设计胎兔许旺细胞冷冻维持温度为-30~-70 ℃,每间隔-5 ℃为一组,以10%二甲基亚砜为低温保护剂,对胎兔许旺细胞进行上述温度冷冻预处理,液氮中保存48 h,快速复温后继续培养48 h,透射电镜观察细胞超微结构改变,MTT法和3H-TdR掺入法检测细胞活性.结果与结论:透射电镜下见-45 ℃处理的细胞超微结构良好,其余各温度组细胞均出现细胞器肿胀、坏死等轻重不同的冷冻损伤表现.MTT法和3H-TdR检测结果均显示-45 ℃冷冻预处理对许旺细胞的生长抑制率低,分别为(3.83±0.56)%、(4.41±0.71)%,和其余各温度组之间相比,差异有显著性意义(P < 0.05).提示-45 ℃是胎兔许旺细胞冷冻预处理的佳维持温度值,对细胞活性影响小,可较好保持其生物学活性.
-
右归饮诱导胎兔骨髓基质细胞向软骨细胞分化的实验研究
目的:探讨中药复方右归饮体外诱导骨髓基质细胞分化为软骨细胞的可行性.方法:采用机械分离法从胎兔的双侧股骨髓腔中分离出骨髓基质细胞,传代培养.取第3代细胞,培养24h,换含药培养液,继续培养72h.应用MTT法、HE染色及免疫组织化学染色方法观察右归饮含药血清对骨髓基质细胞体外培养的增殖及向软骨细胞诱导分化的影响.结果:不同浓度右归饮含药血清对培养骨髓基质细胞均显示增殖刺激作用(P＜0.05),其中10%含药血清组的增殖刺激作用较为显著;经右归饮含药血清诱导后,HE染色后见细胞形态由原先的长梭形,纺锤形逐渐变为圆形,椭圆形.Ⅱ型胶原免疫组化染色显示呈现阳性,可见棕黄色的颗粒分布于细胞胞浆内.结论:右归饮可以有效地诱导骨髓基质细胞定向分化为软骨细胞.
-
血清对肺表面活性物质功能的影响
目的探讨血清对肺表面活性物质(PS)功能的影响.方法用血清将PS稀释溶解配制成2.0、4.0、6.0、8.0、10、12、24mg/ml的实验液体.同时作为对照将PS溶解于醋酸林格液中配成相同的浓度.用表面张力计测定实验液体的表面张力.未成熟胎兔37只随机分为4组(每组9只):A组,经气道内注入溶解于醋酸林格液的PS 24mg/ml;B组,注入溶于血清的PS 24mg/ml;C组,注入溶于醋酸林格液的PS 4.0mg/ml;D组,未注入任何物质,进行人工通气.通气后5、10、15、20min测定动物的潮气量.结果溶解于醋酸林格液的PS浓度在2.0mg/ml时,小表面张力(γmin)小于3.0mN/m.溶剂为血清时,γmin增至30mN/m(P<0.01).PS的浓度增加到6.0mg/ml时,γmin降至9.0mN/m.人工通气20min时,A组动物的潮气量大于15ml/kg,而B组小于8.0ml/kg(P<0.05),C组未超过5.0ml/kg,D组未超过2.0ml/kg.结论血清明显抑制PS的功能,抑制程度与PS剂量有关.
-
TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用
目的:探讨TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用.方法:显微相差动态观察、细胞增殖计数、ALP活性测定及骨结节计数观察TGF-β体外成骨作用.结果:TGF-β对该细胞的增殖,低剂量有促进作用,高剂量有抑制作用.TGF-β(在3～7d)对ALP活性有促进作用,并呈一定的时效和量效关系.TGF-β低剂量对骨结节形成有促进作用,高剂量时为强有力的抑制作用,与剂量有相关关系.结论:TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨表现为双相作用.
-
孕晚期应用高压氧对孕兔及胎兔脂质过氧化的影响
自20世纪70年代将高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)用于治疗分娩期急性缺氧及胎儿宫内发育迟缓后,人们发现HBO在改善胎盘血流及促进细胞水平氧扩散方面有不可替代的作用.有研究表明,孕期应用HBO能明显改善晚发型胎儿生长受限胎儿的脐动脉血流波形及血液黏稠度,增加新生儿平均出生体重[1],可见HBO治疗为临床产科提供了一种有效的治疗手段.目前,有关妊娠期应用HBO对母儿的影响及其安全性的报道甚少.Hink等[2]提出,为更全面的探讨HBO的临床治疗潜能,研究过氧化作用与HBO治疗机理之间的关系是非常必要的.本研究利用新西兰大白兔进行动物实验,以探讨妊娠晚期应用HBO对母兔及胎兔脂质过氧化的影响.
-
兔胎仔部分取出宫腔外模型制作可行性研究
目的探讨将兔胎仔部分取出宫腔外,制作动物模型的可行性及方法.方法取16只日本长耳大白兔孕兔,体重2.6～4.0kg,于孕22 d行宫内手术,每只母兔选一远离子宫颈的胎仔,将其部分取出官腔外,切除一侧下腹壁皮肤、皮下及部分肌肉组织后,放回子宫.术后密切观察母兔有无流产,术后第8 d以剖宫产方式取出胎仔,观察手术胎仔的存活情况.结果16只母兔,2只术后1 d内死于气温过高.其余14只母兔均存活至妊娠足月,无一流产.14只手术胎仔在剖宫产时存活9只.手术胎仔存活率64.3%.结论通过本实验方法,将兔胎仔部分取出宫腔外手术,制作相对复杂的动物模型是可行的.
-
胎兔动脉导管平滑肌细胞氧敏感性钾通道mRNA的表达
目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法,并检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)mRNA的表达.方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定,用RT-PCR的方法检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)的表达.结果:经10-14 d培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞,其细胞膜存在Kv1.5基因表达.结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便、可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础.同时,动脉导管平滑肌细胞膜上存在氧敏感性钾通道mRNA的表达,从而为从氧敏感性钾通道层面来研究动脉导管未闭的发生机制提供了实验基础.
关键词： 氧敏感性钾通道(Kv1.5)mRNA 平滑肌细胞 动脉导管 细胞培养 胎兔 -
胎兔骨髓基质前成骨细胞的培养及鉴定
为了证实体外培养的胎兔骨髓基质骨祖细胞具有成骨细胞系特征.采用胎兔长管骨骨髓细胞,加入DMEM培养,传代四代后,用活体相差显微镜、透射电镜、组织化学染色、免疫组化等方法进行观测.结果显示体外培养的基质细胞具有成骨细胞系特征.提示胎兔骨髓基质骨祖细胞,可以作为修复骨缺损的种子细胞.
-
早产、足月胎兔动脉导管平滑肌细胞中胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达及意义
目的:研究早产和足月胎兔动脉导管平滑肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)mRNA的表达情况.方法:选取日本大耳白胎兔早产组(孕25 d)、足月组(孕30 d)各10只,分离动脉导管平滑肌组织,采用组织块改良贴壁法进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,半定量逆转录集合酶链(RT-PCR)检测胱硫醚-γ-裂解酶mRNA的表达.结果:经10～ 15 d培养后,倒置显微镜下观察,动脉导管平滑肌细胞呈梭形或放射状生长,高低起伏形成典型的“峰-谷”样,早产组和足月组CSE mRNA的表达值分别为(29.67 +6.7)和(10.35±4.5),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:早产及足月胎兔动脉导管平滑肌细胞均表达CSE mRNA,表达量可能与胎龄有关,提示动脉导管组织可能内源性生成H2S气体,且在宫内低氧环境中H2S可能是维持动脉导管开放状态的一个重要因素.
-
TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达影响的研究
目的探讨TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达的影响.方法采用ALP活性测定及骨结节计数方法观察TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外的成骨作用,BMP-McAb免疫组化染色及其定量分析观察TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞BMP蛋白表达的影响.结果 TGF-β(3～7 d)对ALP活性有促进作用,并呈一定的时效和量效关系.TGF-β对骨结节形成低剂量时有促进作用,高剂量时有较强的抑制作用;TGF-β对成骨细胞BMP蛋白表达表现为抑制作用;二者均有显著性差异.结论 TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨及BMP蛋白表达表现为双相作用.
-
胎兔皮肤无瘢痕愈合相关蛋白的筛选与初步分析
目的:筛选胎兔皮肤组织无瘢痕愈合相关蛋白,并初步分析其在无瘢痕愈合过程中的作用.方法:建立胎兔背部切割伤模型,运用蛋白质组双向电泳技术筛选胎兔皮肤伤后差异表达的蛋白质,并进行质谱和数据库检索分析.结果:筛选出20个在伤后胎兔皮肤组织中特异高表达的蛋白质点,经过质谱和数据库检索分析后确定:伴侣素或线粒体蛋白P1前体、弹性蛋白(Vi-mentin,Vim)、微管蛋白β多肽、核不均一核糖核蛋白H(异质性胞核核糖核蛋白H)、α-烯醇酶(α-磷酸丙酮酸水合酶)等无瘢痕愈合相关蛋白在胎兔皮肤伤后表达增加.结论:上述无瘢痕愈合相关蛋白可能通过对基因转录和翻译的调控,促进胶原蛋白等的合成和正确的折叠、装配,以及促进细胞的增殖、分化和发育等,促进胎兔皮肤创伤的修复,参与其无瘢痕愈合过程.
-
不同麻醉方法及羊水补充量对手术胎兔成活率的影响
目的探讨胎兔手术麻醉的合理方法及不同羊水补充量对手术胎兔成活率的影响. 方法采用硫喷妥钠iv与846合剂im两种麻醉方法,比较其麻醉效果及手术胎兔成活率;按胎兔羊水总量的50.0%,70.0%和100.0%补充手术中损失的羊水,比较术后第5日胎兔成活率. 结果两种麻醉方法的麻醉效果均满意,手术胎兔成活率均达到83.0%以上;手术胎兔羊水损失量达到总量的50.0%时,胎兔成活率下降到60.9% (0.01〈P〈0.05). 羊水损失量低于总量的25.0%时,对胎兔成活率影响不明显. 结论两种麻醉方法均能满足胎兔手术要求,补充损失的羊水能提高胎兔成活率.
