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PTEN基因蛋白在胆囊癌组织中表达的研究
目的: 探讨抑癌基因PTEN蛋白在胆囊癌组织中的表达情况及其临床病理意义.方法:应用免疫组化对28例胆囊腺癌,4例胆囊鳞癌及其相应癌旁组织中PTEN蛋白进行检测,并结合患者的临床病理资料进行分析.结果:PTEN蛋白在32例癌旁组织中全都呈阳性表达,而癌组织中PTEN阳性表达率仅34.4%.胆囊癌组织中PTEN蛋白阳性表达与患者性别、年龄及组织类型无明显相关性,但与组织分化程度明显相关.结论:PTEN蛋白在胆囊癌组织中阳性表达率较低,说明该基因失活可能在胆囊癌发生发展中起重要作用.PTEN阳性表达对胆囊癌患者的预后有一定意义.
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胃癌中PTEN基因异常甲基化的检测
目的探讨抑癌基因第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)启动子区域甲基化状况与胃癌的关系.方法采用甲基化特异的PCR(MSP)法检测70例胃癌组织及相应癌旁组织中PTEN启动子区域甲基化状态.结果胃癌组织检测到程度不等的甲基化,其中低分化胃癌甲基化发生率为62.5%,与高中分化胃癌甲基化发生率(20.0%、22.2%)有显著性差异(P＜0.05).并且有淋巴结转移的19例胃癌组织中,有12例PTEN基因启动子甲基化,远高于无淋巴结转移组(P＜0.05).癌旁正常组织未检测到甲基化.结论 PTEN基因启动子的甲基化与胃癌的发生、转移有关.PTEN甲基化是胃癌患者诊断及预后的候选标志物之一.
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FHIT、PTEN在人脑胶质瘤中的表达和意义
目的检测人脑胶质细胞瘤中脆性组氨酸三联体基因(FHIT)、第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)的表达情况.方法采用S-P免疫组织化学法.结果 FHIT和PTEN阳性染色定位于细胞浆,52例胶质瘤标本中,有39例FHIT呈阳性表达,低度恶性肿瘤(Ⅰ～Ⅱ级)的阳性表达率明显高于高度恶性(Ⅲ～Ⅳ级)肿瘤(P《0.05);而有37例PTEN呈阳性表达,低度恶性肿瘤的阳性表达率明显高于高度恶性肿瘤(P《0.05).FHIT与PTEN在脑胶质瘤细胞中的表达呈正相关.结论 FHIT与PTEN的表达与脑胶质瘤的发生、发展密切相关,联合检测FHIT、PTEN在胶质瘤中的表达有助于对肿瘤细胞增殖能力、分化程度做出正确评价.
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新疆阿魏乙酸乙酯部位对人结肠癌Caco-2细胞周期和凋亡的影响术
目的:探讨新疆阿魏乙酸乙酯部位对人结肠癌Caco-2细胞周期和凋亡的影响,并对抑癌基因PTEN、p53进行考察.方法:将新疆阿魏乙酸乙酯部位用完全培养液配成高、中、低浓度的溶液(15、30、60 μg/mL),分别作用于Caco-2细胞,采用流式细胞仪对各组细胞所处周期和凋亡情况进行检测,采用RT-PCR、Western Blot方法检测调控细胞周期、凋亡的PTEN、p53基因和蛋白的表达水平.结果:新疆阿魏乙酸乙酯各剂量组使Caco-2细胞大量阻滞在G0/G1期(P＜0.05),并且各给药组Caco-2细胞的凋亡率均明显高于空白组(P＜0.01);RT-PCR、Western B10t检测结果显示各给药组Caco-2细胞的PTEN、p53的基因表达水平均显著增高(P＜0.01),PTEN、p53的蛋白相对表达水平显著增高(P＜0.05或P＜0.01),与顺铂对Caco-2细胞的作用效果相似.结论:新疆阿魏乙酸乙酯部位可以使人结肠癌Caco-2细胞分裂阻滞在G0/G1期,促进Caco-2细胞凋亡,并且显著提高抑癌基因PTEN、p53的表达.
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PTEN基因在泌尿系统肿瘤中的研究进展
PTEN基因是迄今为止发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,该基因的突变失活与多种肿瘤的发生有密切的关系.PTEN基因突变失活在泌尿系统肿瘤发生、发展中起着重要的作用.
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PTEN基因与子宫内膜增生及内膜癌的研究进展
PTEN是近年来发现的一种新的抑癌基因,位于染色体10q23.3上,具有抑制细胞增殖、介导凋亡及抑制肿瘤细胞扩散的作用.PTEN基因突变与子宫内膜增生及子宫内膜癌关系密切,在后者的发病中起重要作用.检测PTEN的表达缺失对诊断子宫内膜癌及癌前病变具有重要价值.
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抑癌基因PTEN与髓母细胞瘤
FTEN／MMAC1／TEP1是1997年3月以来发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，具有调节细胞生长、增殖、迁移、信号传导等多种效应。大量研究表明该基因的突变和失活与肿瘤发生及进展关系密切。髓母细胞瘤是发生于儿童常见的恶性脑肿瘤，迄今对其发生、发展的分子及病理机制所知相当有限，现已知髓母细胞瘤的发生与10号染色体上的基因突变有关。定位于10号染色体上的抑癌基因PTEN在髓母细胞瘤中可发生突变和失活，但发生率不高。
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抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及对人卵巢癌细胞系SW626增殖的影响
目的 构建抑癌基因PTEN的真核表达载体,研究外源性PTEN基因稳定表达对人卵巢癌细胞系SW626体外增殖的影响.方法 构建PTEN基因的真核表达载体pcDNA3.1/PTEN,转染重组质粒pcDNA3.1/PTEN于体外培养的人卵巢癌细胞系SW626,筛选并获得稳定表达PTEN基因的细胞克隆,应用RT-PCR和western blot分析PTEN基因的mRNA及蛋白质表达,MTT实验分析细胞增殖能力.结果 稳定转染PTEN基因的细胞系有外源目的 基因的mRNA及其蛋白表达.MTT实验表明,pcDNA3.1/PTEN 转染组细胞增殖能力低于pcDNA3.1(-)转染组和对照组 (P＜0.05).结论 外源性抑癌基因PTEN的稳定表达可抑制人卵巢癌细胞系SW626的增殖.
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前列腺癌中PTEN基因突变
目的分析PTEN基因在前列腺癌中的突变情况. 方法对80例前列腺癌冰冻组织(60例来自前列腺癌原发部位,20例来自盆腔淋巴结转移灶)中PTEN基因进行聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP),检测PTEN基因突变.结果共有32例发生PTEN基因突变,突变发生率为40%(32/80).来自前列腺癌原发部位的60例标本中有18例发生PTEN基因突变,突变发生率为30%(18/60);来自盆腔淋巴结转移灶的20例标本中共有14例发生PTEN基因突变,突变发生率为70%(14/20).后者PTEN基因突变发生率显著高于前者(χ2=10, P<0.005). 结论 PTEN基因突变在前列腺癌发生、发展、转移中起重要作用.PTEN基因可作为完善前列腺癌诊断的指标及前列腺癌联合基因治疗方案中的目的基因.
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胆管癌浸润转移过程中PTEN与P53的表达及相互关系的研究
目的 探讨PTEN及P53的表达与胆管癌发生发展的关系,两者表达的相关性及其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法对40例胆管癌标本,12例正常胆管组织和30例胆管癌旁组织中PTEN及P53蛋白表达情况进行研究.结果 胆管癌中PTEN蛋白的阳性表达率为,45.0%(18/40),明显低于正常胆管组织(100.0%,12/12)和癌旁组织90.0%(27/30),其表达与胆管癌的分化程度及有无转移有关而与部位无关.P53蛋白在胆管癌中的阳性表达率为40.0%(16/40),明显高于正常胆管组织0.0%(0/12)和癌旁组织3.3%(1/30).两者的表达与胆管癌部位无关,但均与胆管癌的病理分级相关,PTEN与P53蛋白在胆管癌中表达具有相关性.结论 PTEN蛋白在胆管癌中表达下降,并且其表达与胆管癌的分化程度及有无转移有关而与肿瘤部位无关.P53蛋白在胆管癌中表达升高,其表达与胆管癌的分化程度及有无转移有关而与肿瘤部位无关.胆管癌中PTEN与P53蛋白表达具有相关性.PTEN蛋白在胆管癌中低表达而P53蛋白在胆管癌中高表达,提示PTEN及P53在胆管癌的发生发展中起重要作用,P53突变可能下调PTEN的表达.
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LY294002联合Ad-PTEN对肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤的治疗作用
目的 观察PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮(LY294002)联合Ad-PTEN(合PTEN基因的重组腺病毒)对人肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,初步探讨其可能的作用机制,为临床有效治疗肺癌脑转移提供实验资料.方法 将实验裸鼠24只随机分为4组,即DMSO对照组、空载病毒组、LY294002治疗组及LY294002与Ad-PTEN联合治疗组.肿瘤组织块直接皮下种植法建立肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,定期测量动物体重及肿瘤直径;应用Western blotting法检测肿瘤细胞的PTEN、p-Akt、PI3K、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3、MMP-2、9、p-FAK的表达水平;结果 LY294002与Ad-PTEN联合治疗组对人肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤抑制作用较对照组及LY294002治疗组均明显增强(均P＜0.01);与对照组及LY294002治疗组比较联合治疗组Caspase-3、PTEN表达显著升高(均P＜0.05),PI3K、p-Akt、CyclinD1、MMP2、9、p-FAK、Bcl-2的表达均显著下降(均P＜0.05).结论 LY294002与Ad-PTEN联合治疗可以显著提高对人肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤的抑制作用.其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路下游蛋白有关.
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PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1在前列腺癌及前列腺增生中的表达及其意义
目的 研究PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1在前列腺癌及前列腺增生中的表达探讨前列腺癌组织中PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β的表达与临床病理特征和生物学行为的关系及其意义.方法 前列腺癌标本26例,前列腺增生标本18例,均为存档石蜡切片.应用原位杂交技术研究PTEN/MMAC1/TEP1表达水平,应用免疫组化研究PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1表达.结果 用原位杂交方法:前列腺癌组织中PTEN/MMAC1/TEP1表达42.31%,前列腺增生组织中的表达94.44%(P<0.01).而免疫组化方法前列腺癌组织表达为34.62,前列腺增生为94.44(P<0.01).组织学分级为Ⅰ、Ⅱ级的表达为72.72高于Ⅲ级的20.00%,(P<0.05).临床分期A-C期的表达为66.67%,D期为21.43%(P<0.05).表达为阳性的血清PSA浓度均值为(29.36±1.74)高于阴性的(15.92±2.06)(P<0.01);TGF-β1表达在前列腺癌组织为50.39%,在前列腺增生组织为11.11%(P<0.01).组织学分级为Ⅰ、Ⅱ级的表达为27.27%低于Ⅲ级的73.33%(P<0.05).临床分期A-C期的表达为25.00%,D期为78.57%(P<0.05).表达为阳性的血清PSA浓度均值为(27.71±2.39),阴性的为(22.65±3.15)(P0.05);前列腺癌组织中PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1表达呈负相关(P<0.01).结论 用免疫杂交和原住杂交方法:前列腺癌组织中PIEN/MMAC1/TEP1表达低于前列腺增生组织中的表达(P<0.01).表达与组织学类型、临床分期及血清PSA浓度有关(P<0.05);TGF-β1表达在前列腺癌组织高于前列腺增生组织(P<0.01).TGF-β1表达与组织学类型及临床分期有关(P<0.05),而与血清PSA浓度无关(P0.05);前列腺癌组织中PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1表达呈负相关(P<0.01);PTEN的低表达可能增强了前列腺癌的侵袭和转移.
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胆囊腺瘤癌变的病理观察及PTEN基因表达研究
目的观察胆囊腺瘤癌变的病理形态改变,研究PTEN与胆囊腺瘤恶变的关系.方法观察14例胆囊腺瘤癌变的病理形态改变,并应用原位杂交(DNA-RNA)技术与免疫组化SP法分别检测其PTENmRNA和PTEN蛋白.结果胆囊腺瘤癌变肿块平均直径15 cm,可出现实性、筛状、乳头状增生、致密纤维间质和坏死;与腺瘤相比,其PTEN转录水平下调、蛋白表达减少.结论异型、坏死、致密纤维间质和肿瘤大小是胆囊腺瘤恶变的主要病理指标.PTEN低表达参与了胆囊腺瘤的恶变,可作为胆囊腺瘤癌变的辅助诊断指标.
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胶质母细胞瘤PTEN基因突变和ki-67表达的研究
目的:研究胶质母细胞瘤中PTEN基因突变及Ki-67表达情况,并探讨其与两者之间的关系.方法:对102例胶质瘤(包括42例胶质母细胞瘤)石蜡切片中PTEN基因进行聚合酶链反应～单链构象多态性分析(PCR-SSCP),检测PTEN基因突变.同时采用免疫组化S-P法,检测胶质瘤中Ki-67的表达.结果:42例胶质母细胞瘤中有11例发生PTEN基因突变,突变率为26%(11/42),显著高于其它60例胶质瘤(χ2=11.62,P＜0.01);胶质母细胞瘤Ki-67的平均标记指数为24.61±6.81,其它胶质瘤的平均标记指数为6.72±4.68,后者Ki-67指数显著小于前者(u=5.6783,P＜0.01).结论:PTEN基因突变在胶质母细胞瘤的发生、发展中起重要作用;胶质瘤中Ki-67的表达程度与病理恶性程度呈正相关;胶质母细胞瘤中PTEN基因突变与Ki-67表达强度呈正相关.
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外源性PTEN基因稳定转染对大肠癌LS1747细胞周期及凋亡的影响
目的:研究外源性基因PTEN对人类大肠癌LS1747细胞周期及凋亡的影响.方法:以携带有PTEN基因的真核表达载体体外转染人类大肠腺癌细胞LS1747,筛选阳性克隆的细胞并扩增培养,鉴定转染成功后采用流式细胞仪、透射电镜、DNA琼脂糖电泳,检测转染PTEN基因后LS1747细胞的凋亡以及观察三种细胞生长曲线.结果:流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰.透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现.细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的"梯状"条带.转染空载体及未转染的LS1747细胞未见凋亡表现.转染PTEN的LS1747细胞与空白质粒载体转染的LS1747细胞和LS1747细胞的生长速度相比,后两者生长速度较快.结论:将外源性PTEN基因导入LS1747细胞后,可以抑制细胞周期,并可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制大肠癌细胞增殖的重要机制之一.
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Quercetin调节肝癌HepG2细胞PTEN基因表达诱导细胞凋亡的实验研究
目的 探讨三磷酸肌醇(IP3)和PTEN基因表达变化在quercetin诱导肝癌细胞凋亡中的作用.方法 以肝癌HepG2细胞为空白对照,以不同浓度quercetin作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,RT-PCR分析PTEN mRNA表达,Westernblotting分析细胞PTEN蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 各浓度的quercetin作用于肝癌HepG2细胞,IP3含量显著低于对照组(17.9±1.5、15.5±1.1、5.7±0.9、5.5±0.8 VS 29.4±0.5),PTEN mRNA表达与对照组无显著差异,mN蛋白表达显著高于对照组(0.55±0.02、0.67±0.02、0.94±0.04、0.95±0.03 VS 0.02±0.002),细胞凋亡率显著高于对照组.60 μmol/L quercetin作用于肝癌HepG2细胞6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,各时相IP3含量显著低于对照组(23.3±1.4、12.0±1.4、7.5±0.8、5.6±0.5、4.3±0.6 v8 29.2±0.6,P<0.01).PTEN mRNA表达与对照组无显著差异,12 h后各时项PTEN蛋白表达显著高于对照组,24 h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组(P<0.01).结论 Quercetin能减少IP3生成,上调PTEN蛋白,诱导肝癌细胞凋亡.
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抑癌基因PTEN对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖和转移的抑制作用
背景与目的:研究表明,抑癌基因PTEN不仅能抑制肿瘤细胞的增殖,还能抑制其转移,但其机理还不甚明了.本文研究抑癌基因PTEN对人乳腺癌ZR-75-1细胞增殖和转移的作用.方法:以脂质体介导法分别将野生型PTEN质粒和磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染人乳腺癌ZR-75-1细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制率:转染后用嘌呤霉素筛选阳性克隆.用Western blot法检测细胞中PTEN蛋白的表达.通过细胞-基质粘附实验和人工重组基底膜侵袭实验,检测细胞粘附抑制率与侵袭抑制率.结果:野生型PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞增殖明显被抑制,并伴有部分细胞凋亡;该细胞与未经转染的和磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞比较.细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(42.7% vs.0%及2.7%,P＜0.01),细胞增殖抑制效应随细胞培养时间与质粒浓度的增加而增强.而磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染的与未经质粒转染的ZR-75-1细胞比较,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(2.7%vs.0%,P＞0.05).在两种PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞中PTEN蛋白均明显表达,其中转染野生型PTEN质粒的细胞的粘附抑制率与侵袭抑制率分别达65.7%和70.4%,而转染磷酸酶缺陷的PTEN质粒的ZR-75-1细胞的粘附抑制率与侵袭抑制率分别只有8.8%和6.9%(P＜0.05).结论:具有双特异磷酸酶活性的野生型PTEN基因对ZR-75-1细胞的增殖和转移有一定的抑制作用.
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PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响
背景与目的:PTEN(phosphatase and tensin homologue deleted from chromosome 10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关.本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变.方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化.结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(P＜0.05),以正常BIU87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%.细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-BIU87细胞明显少于两对照组(P＜0.05).结论:抑癌基因PTEN转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性.
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子宫内膜癌组织中PTEN基因突变及蛋白表达的检测
背景与目的:肿瘤抑制基因--第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)被称为子宫内膜的看家基因.但有关PTEN基因在子宫内膜癌发生发展中的确切作用尚不清楚.本研究旨在检测子宫内膜癌组织中PTEN基因的突变及蛋白表达情况.方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA序列分析法,检测52例子宫内膜癌组织和10例正常子宫内膜组织中PTEN基因第5和第8外显子的突变;免疫组织化学法检测PTEN蛋白的表达,并结合临床病理特征进行分析.结果:子宫内膜癌组织的PTEN基因突变率和蛋白缺失率分别为25%和60%,高于正常子宫内膜组织(0%),差异有显著性(P＜0.05).病理学分级为G1、G2及肌层浸润深度＜1/2的组织的PTEN基因突变率高于病理学分级为G3及肌层浸润深度≥1/2者,而病理学分级为G1、G2组织的PTEN蛋白表达缺失率低于病理学分级为G3者,差异有显著性(P＜0.05).PTEN基因突变率和蛋白表达缺失率在子宫内膜样腺癌和其它组织类型之间比较,差异有显著性(P＜0.05),而在不同手术分期之间差异无显著性(P＞0.05).结论:PTEN基因突变和蛋白阳性表达常发生在病理学分级较低的子宫内膜癌病例中.
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上海地区汉族PTEN基因多态性与精神分裂症伴发2型糖尿病的关联分析
目的 探讨中国上海地区汉族人群第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(gene of phosphate and tension homology deleted on chromosometen,PTEN)的多态性与精神分裂症(schizophrenia,SCZ)伴发2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)易感性的关联. 方法 选取上海地区长期住院的精神分裂症伴发2型糖尿病(合并组,304例)或不伴发2型糖尿病患者(单纯SCZ组,287例),上海地区单纯2型糖尿病患者(T2DM组,206例)及正常人群(对照组,205名)为研究对象,用Taqman基因分型技术对PTEN基因的SNP位点(rs1234225、rs12569998及rs1234223)进行基因分型,比较各组的等位基因、基因型及单体型分布频率. 结果rs1234223基因型频率(P=0.01)、等位基因(P=0.02)分布在合并组和单纯SCZ组间有统计学差异,经Bonferroni检验校正后,基因型分布组间差异仍有统计学意义(P=0.03),等位基因分布组间差异没有统计学意义(P=0.06).单体型分析示,TTC单体型在合并组中少于单纯SCZ组(P=0.02). 结论 PTEN基因可能是中国上海地区汉族人群精神分裂症合并2型糖尿病的易感基因,TTC单体型可能是精神分裂症合并2型糖尿病的保护因素.
