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当归四逆汤对糖尿病血瘀症大鼠周围神经病变及水通道蛋白1、RhoA/ROCK信号通路的影响
目的:研究当归四逆汤对糖尿病血瘀症大鼠周围神经病变及水通道蛋白1 (AQP1)、RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:65只健康雄性SD大鼠,12只作为正常对照组(A组),其余53只制备2型糖尿病大鼠血瘀症模型.48只成模大鼠再分为:糖尿病血瘀症组(B组)、甲钴胺治疗组(C组)、当归四逆汤低剂量治疗组(D组)和当归四逆汤高剂量治疗组(E组),每组12只.检测各组大鼠坐骨神经传导速度、坐骨神经含水量;背根神经节AQP1和RhoA/ROCK信号通路相关因子mRNA/蛋白表达水平变化.结果:造模大鼠体重明显下降,血糖、血脂、血流变指标水平明显异常(P＜0.01);B组大鼠坐骨神经含水量显著高于A组(P＜0.01),C组与A组接近(P＞0.05),E组与C组相当(P＞0.05),好于D组(P＜0.05);各组坐骨神经传导速度差异无统计学意义(P＞0.05);各组大鼠背根神经节信号通路因子mRNA表达比较,B组AQP1高于A组,RhoA、ROCKⅡ低于A组(P＜0.05),C组AQP1、RhoA、ROCKⅡ表达水平接近A组(P＞0.05),E组接近C组(P＞0.05),D组AQP1表达高于E组,RhoA、ROCKⅡ表达量低于E组(P＜0.05),各组ROCKⅠ mRNA表达未见统计学差异(P＞0.05);各组大鼠信号通路因子蛋白表达,B组AQP1、RhoA、ROCKⅡ较A组显著下调(P＜0.01),C组AQP1、RhoA、ROCKⅡ表达接近A组(P＞0.05),E组接近C组(P＞0.05),D组表达低于E组(P＜0.05),各组ROCKⅠ蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:当归四逆汤治疗糖尿病周围神经病变有效,且高剂量组效果更好,作用机理可能与其调节AQP1及RhoA/ROCK信号通路表达水平有关.
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食用酒精对大鼠肾组织中水通道蛋白1表达的实验研究
目的 观察水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP 1)在酒精灌胃大鼠肾组织中的表达,探讨酒精性肾损伤的机制.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量酒精组和高剂量酒精组,喂养6周,检测血清学指标.用HE染色观察肾脏组织学改变.免疫组化方法检测AQP 1的表达,计算机分析技术计算AQP 1的平均光密度.结果 ①低剂量和高剂量酒精组丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)明显高于对照组(P＜0.05);②苏木精伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色与对照组相比,低剂量酒精组和高剂量酒精组光镜下观察相似,近曲小管管壁上皮细胞形状不规则,细胞核排列无秩序,近曲小管管腔变大;③免疫组化染色AQP 1在对照组、低剂量酒精组和高剂量酒精组肾组织中均有表达,定位于肾小球毛细血管内皮细胞、近曲小管的上皮细胞,在对照组中染色较深呈棕黄色,在低剂量酒精组染色颜色变浅,在高剂量酒精组染色浅;④对照组平均光密度为(0.055±0.384),低剂量酒精和高剂量酒精组平均光密度分别为(0.278±0.047)、(0.279±0.044),对照组与低剂量和高剂量酒精组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);低剂量酒精和高剂量酒精组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大量饮酒可导致肾小管中AQP 1表达减少,AQP 1表达减少可能是酒精性肾损伤机制之一.
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丙泊酚对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨丙泊酚对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制.方法 用噻唑蓝(MTT)法检测丙泊酚对肺癌A549细胞增殖作用的影响,采用流式细胞技术检测丙泊酚对A549细胞细胞凋亡的影响,Western blot测定丙泊酚对A549细胞水通道蛋白1(AQP1)表达的影响,应用Transwell小室实验检测AQP1蛋白表达对肺癌A549细胞迁移的影响.结果 MTT法和流式细胞法显示不同浓度丙泊酚作用A549细胞株48h后,细胞抑制率和凋亡率分别为(52.8±5.2)％、(61.2±5.9)％、(69.4±6.1)％;(42.8±4.1)％、(59.8±11.2)％、(71.4±13.4)％.Western blot结果显示不同浓度丙泊酚作用A549细胞48h后,AQP1蛋白的表达水平为0.87±0.12、0.54±0.07、0.31 ±0.04;ranswell小室实验显示不同浓度丙泊酚作用于A549细胞后,迁移细胞数分别为(61.35±8.98)、(51.78±7.58)、(40.35±5.12)个.结论 丙泊酚对人肺癌A549细胞的生长有明显的抑制作用,诱导肿瘤细胞凋亡,并能抑制肺腺癌细胞的迁移能力,其机制可能与下调AQP1蛋白表达有关.
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降钙素基因相关肽对脑死亡大鼠肺组织水通道蛋白1及肺水含量的影响
目的 观察降钙素基因相关肽(CGRP)对脑死亡大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP-1)及肺水含量的影响.方法 大鼠15只随机分为对照组(A组)、脑死亡组(B组)及CGRP处理组(C组),每组5只.A组持续麻醉维持12h,B组呼吸、循环支持下维持脑死亡状态12h.C组于脑死亡模型建立后静脉输注CGRP 3 μg/kg,随后给予CGRP 0.5μg/(kg·h)持续输注维持12h,维持脑死亡状态12 h.于脑死亡后12h取肺脏组织,测肺系数及肺水含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肺脏组织结构变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织AQP-1 mRNA水平,Western blot法检测肺组织AQP-1蛋白表达.结果 肺系数及肺水含量B组(7.16 ±0.58、0.91 ±0.07)均较A组(4.12±0.39、0.70±0.08)增高,C组(5.28±0.43、0.80 ±0.05)较A组增高,但较B组低,3组间差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色A组肺组织结构基本正常;B组出现损伤性改变,C组损伤性改变较B组减轻.肺组织AQP-1 mRNA及蛋白表达水平B组(0.51 ±0.05、0.32±0.05)较A组(0.76±0.03、0.49±0.04)降低,C组(0.98±0.04、0.53 ±0.02)较A、B组增高,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用CGRP可提高脑死亡大鼠肺组织AQP-1表达水平,降低肺水含量,减轻肺水肿.
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水通道蛋白1在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的表达及其意义
目的 探讨水通道蛋白1(AQP1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺的表达及其意义.方法 将48只雄性SD大鼠随机分为对照组和ANP组,制模后3、6、12、18 h各时间点分别处死6只.记录腹水量,测定血清淀粉酶;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清AQP1含量;苏木素-伊红(HE)染色观察胰腺组织病理改变;伊文思兰染料(EB)血管外渗法检测胰腺组织毛细血管通透性;免疫组织化学和Westem blot法检测胰腺组织AQP1蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测AQP1基因mRNA表达.结果 (1)对照组3、6、12、18 h血清淀粉酶水平分别为(1308±759)、(1077±508)、(1325±761)、(1328±762)U/L,ANP组分别为(9102±2199)、(8799±1634)、(9398±1473)、(9484±862)U/L;对照组胰腺组织EB含量分别为(205.61±32.99)、(141.46±27.18)、(96.94±26.79)、(61.43±24.82)mg/L;ANP组分别为(273.59±23.47)、(253.51±31.68)、(221.15±73.68)、(185.28±42.35)mg/L;血清AQP1含量对照组为(74.08±11.80)、(78.49±9.06)、(75.77±7.37)、(72.75±13.87)mg/L,ANP组为(73.29±9.61)、(62.85±7.28)、(62.07±4.39)、(46.33±11.91)mg/L,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01).(2)对照组3、6、12、18 h免疫组织化学灰度值分别为114.13±7.92、122.39±7.99、145.98±6.48、113.98±6.48,ANP组分别为80.07±14.89、110.54±4.45、103.77±10.48、99.18±6.95;对照组Western blot蛋白含量分别为1.19±0.33、1.02±0.25、0.90±0.33、1.06±0.20,ANP组分别为0.83±0.11、0.96±0.21、0.58±0.28、0.72±0.14.结果 均显示ANP组胰腺AQP1蛋白表达低于对照组(P<0.05);(3)对照组3、6、12、18 h荧光定量PCR检测ANP组胰腺AQP1基因mR-NA表达分别为2.13±0.63、2.02±1.40、2.07±0.86、2.49±2.47,ANP组为0.91±0.22、1.01±0.83、0.48±0.23、0.61±0.51,ANP组较对照组减弱(P<0.01).结论 ANP大鼠胰腺组织AQP1表达明显减弱,这可能在毛细血管渗漏综合征的发生中起重要作用.
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幼鼠双侧输尿管梗阻24 h后肾脏水通道蛋白1-4的变化
目的 探讨4个月大白鼠双侧输尿管急性梗阻24 h后肾脏水通道蛋白1-4的变化.方法 14只大白鼠随机分为梗阻组(bilateral ureteral obstruction,BUO,n=7)及对照组(Sham,n=7),梗阻组行双侧输尿管结扎,对照组仅游离输尿管而不结扎,24 h后收集动脉血和肾标本,在显微镜下将肾脏分离出内髓(IM)及外髓外带加肾皮质(OSOM+C)后,分别行免疫杂交实验,检测水通道蛋白1-4(AQP1-4)的变化.结果 BUO 24 h使血浆渗透压明显增高至(338±3.0)mOsm,原为(300±0.6)mOsm,P＜0.01,血钾显著上升至(5.4±0.2)mmol/L,原为(4.0±0.1)mmol/L,P＜0.01;血浆肌苷(372±5.3)μmol/L,原为(30±2.8)μmol/L,P＜0.01和尿素氮(40.7±1.4)mmol/L,原为(5.8±0.2)mmol/L,P＜0.01明显高于对照组,而血钠低于正常(138.9±0.3mmol/L,原为(141.0±0.3)mmol/L,P＜0.01.免疫杂交结果发现近端小管上皮细胞AQP1明显降低,下降到对照组的46.6%(P＜0.01);在肾脏集合管主细胞顶膜上,AQP2的表达明显下降,为对照组的68.1%(P＜0.01);而基底膜上分布的AQP3和AQP4也明显下调,分别为对照组的76.3%和73.2%(P＜0.01).结论 双侧输尿管梗阻24 h显著影响肾脏AQP1在近端小管和AQP2-4在集合管的表达,使其明显下调.该变化可能对梗阻后水分重吸收障碍并引发低渗性多尿的病理生理过程起重要作用.
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水通道蛋白1及其mRNA在胸膜恶性肿瘤进展中的作用
目的 探讨胸膜恶性肿瘤的进展对水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP1)及其mRNA的影响.方法 通过胸膜腔注射法建立胸膜恶性肿瘤的动物模型,按肿瘤种植时间分组(T6,T8,T10),记录各组胸水量,采用免疫组织化学法、Real-Time PCR的方法测定AQP1及AQP1-mRNA水平.结果 肿瘤小鼠胸水量随时间而增长;壁层胸膜AQP1及其mRNA水平随肿瘤进展而增高,且与胸水量呈正相关.结论 在胸膜恶性肿瘤的进展中,胸膜壁层AQP1及其mRNA水平升高,胸水量与AQP1、AQP1-mRNA水平呈正相关,进而提示AQP1参与了胸膜恶性肿瘤的构建和进展.
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喉癌组织中水通道蛋白1的表达与微血管生成的相关性研究及意义
目的:明确水通道蛋白1(AQP1)在喉癌组织中的表达及分布与微血管形成的关系,并探讨其临床意义.方法:应用免疫组织化学技术检测喉癌组织及癌旁正常组织中AQP1蛋白的表达.通过CD105单克隆抗体标记肿瘤新生血管,检测肿瘤内微血管密度(IMVD),并结合临床病理资料进行系统分析.结果:喉癌组织AQP1阳性细胞表达率和IMVD明显高于癌旁正常组织;AQP1的表达量随着喉癌分化程度的降低,其表达量逐渐升高;有淋巴结转移组AQP1的表达量明显高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义.结论:①喉癌组织中AQP1的表达及IMVD与癌旁正常组织相比具有明显的特征性;②AQP1的高表达不仅与喉癌组织中IMVD呈明显的正相关性,且与喉癌有无淋巴结转移和细胞的分级密切相关;③推测AQP1在喉癌上皮和血管内皮细胞中表达增高能促进血管渗透性增强,在肿瘤的生长、浸润和转移中具有重要作用.
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水通道蛋白1和血管内皮生长因子在喉鳞状细胞癌组织中的表达及相关性研究
目的:探讨水通道蛋白1(AQP1)和血管内皮生长因子(VEGF)在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达及生物学意义,并探讨其相关性.方法:采用免疫组织化学方法对60例LSCC(喉癌组)、22例声带息肉组织(声带息肉组)及30例正常喉组织(对照组)中AQP1和VEGF的表达进行检测.结果:AQP1和VEGF在喉癌组的表达高于声带息肉组及对照组,3组之间差异有统计学意义;AQP1和VEGF的表达与LSCC的临床分期、病理分级以及淋巴结转移均相关,二者的表达随临床分期的增高而逐渐升高; 组织分化程度越差,二者的表达越高;在有淋巴结转移的喉癌组织中二者的表达高于无淋巴结转移组;不同临床分型以及不同性别、年龄患者喉癌组中AQP1和VEGF的表达均差异无统计学意义;AQP1与VEGF在LSCC组织中的表达存在正相关.结论:LSCC组织中AQP1和VEGF蛋白的高表达及与LSCC临床病理参数的相关性,提示2个因子在LSCC发生、发展过程中起促进癌细胞生长、转移和血管生成的作用.
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复活草提取物调控雪旺细胞损伤后水通道蛋白1的表达作用的研究
目的:探讨缺氧诱导雪旺细胞膜水通道蛋白1(AQP1)表达机制及复活草提取物对缺氧损伤细胞的修复作用.方法:以不同浓度的CoCl2(2、4、6、8、10 μl/ml)培养细胞贴壁24 h后,显微镜下观察细胞形态变化拍照并以Western Blot检测AQP1变化,确定适浓度的CoCl2进行后续试验.以不同浓度的复活草提取物(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 μl/ml)培养贴壁细胞,24 h后进行CCK-8检测.选取适浓度的CoCl2及复活草提取物进行后续试验,分为空白对照组、缺氧模型组、复活草提取物修复组观察7d,Western Blot检测7d的细胞AQP1及HIF-1α变化.结果:选取6μl/ml CoCl2为适浓度缺氧模型,细胞形态变化明显但对细胞生长未见明显抑制作用,AQP1表达含量高.选取2.5 μl/ml复活草提取物为适浓度,能够明显促进细胞增殖.HIF-1α诱导雪旺细胞AQP1表达增加,复活草提取物能下调AQP1及HIF-1a的表达.结论:周围神经水肿与雪旺细胞AQP1的表达有明显相关性,细胞缺氧后HIF-1α诱导AQP1表达增加;复活草提取物能够明显下调缺氧的雪旺细胞中AQP1的变化从而减轻水肿.
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水通道蛋白1的表达对卵巢癌细胞C13K顺铂耐药影响的体外研究
目的 研究水通道蛋白1 (aquaporin 1,AQP1)在卵巢癌耐药细胞株C13K化疗耐药中作用.方法 构建AQP1正义真核表达载体,稳定转染卵巢癌耐药细胞株C13K,实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析AQP1的表达；CCK-8细胞毒性试验和流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 ①转染AQP1真核表达载体的细胞经顺铂作用后细胞凋亡率高于转染空载体和未转染的细胞；②转染AQP1真核表达载体细胞相对于转染空载体和未转染的细胞对顺铂敏感性更高.结论 上调AQP1表达,可一定程度逆转卵巢癌耐药细胞株C13K对顺铂的耐药.
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黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠肺水通道蛋白1表达的影响
目的:观察黄芪甲苷干预对急性肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白( AQP1)表达的影响,并探讨其可能的机制.方法:SPF级雄性SD大鼠63只,随机分为模型组(acute lung injury,ALI组)、正常对照组(normalsaline,NS组)、黄芪甲苷干预组(astragaloside,AS组).ALI模型复制方法为舌下静脉注射LPS4mg·kg -1；注射前AS组给药0.6 mg·kg-1 AS连续灌胃7d,ALI组给予NS7d,NS组不做任何灌胃处理,7d后舌下给药NS.观察注射后2,6,12h肺组织湿干重(W/D)、肺组织病理学改变、支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞总数及中性粒细胞百分比、免疫组化与Western blot法肺组织AQP1蛋白表达的变化.结果:ALI组各个时点W/D值、BALF细胞总教及中性粒细胞百分比升高较NS组上升,AQP1、蛋白表达较ALI组下降,以6,12h明显,ALI组与NS组各时点间的差异均具有统计学意义(P＜0.05).AS组各个时点W/D值、BALF细胞总数及中性粒细胞百分比升高较ALI组降低,AQP1、蛋白表达较ALI组上调,以6,12h明显、具有统计学意义(P＜0.05).结论:AS能减轻LPS致大鼠肺炎症损伤反应,其机制与上调肺AQP1的表达有关.
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水通道蛋白-1在大鼠急性心肌缺血再灌注损伤中的表达
目的:观察水通道蛋白1(AQP-1)在大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中表达水平的变化,探讨其与心肌损伤以及损伤程度的关系.方法:采用SD大鼠复制心肌缺血再灌注模型,观察心肌缺血区域颜色和运动的变化,心电图记录心肌急性损伤情况,应用心肌酶学的变化判断大鼠心肌损伤的程度,并通过免疫组织化学方法检测心肌AQP-1的表达.结果:①心肌缺血再灌注损伤后AQP-1水平迅速上升;②AQP-1表达水平与心肌损伤程度存在着正相关性.结论:①心肌缺血再灌注损伤过程中AQP-1水平的迅速上升,其上升水平与心肌损伤程度呈正相关;②应用AQP-1调节剂调节AQP-1的表达水平有望成为心肌保护的新方法.
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AQP1在非小细胞肺癌中的表达及其与HIF-1α、VEGF表达的关系
目的 探讨水通道蛋白1(AQP1)在非小细胞肺癌中的表达和意义,以及与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系. 方法 应用免疫组织化学方法 检测78例非小细胞肺癌组织中AQP1的表达,分析其表达与临床病理特征、预后以及与HIF-1α、VEGF表达的关联性. 结果 78例非小细胞肺癌中,腺癌、腺鳞癌和大细胞癌的AQP1阳性表达率分别为57.5%(23/40),33.3%(1/3)和20.0%(1/5),鳞癌无阳性表达.阳性物质呈均质细颗粒状定位于胞质和(或)胞膜,亦见细胞核着色,瘤体边缘与正常组织交界处表达增多.肺腺癌中AQP1的表达与N分期、复发/转移和生存时间存在关联性(P＜0.01或P＜0.05),与HIF-1α、VEGF的表达亦存在关联性(均P＜0.01). 结论 非小细胞肺癌中存在AQP1的表达,与HIF-1α和VEGF之间可能存在协同作用,促进肺腺癌的侵袭和转移.
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透明晶状体和老年性白内障晶状体上皮细胞水通道蛋白1的表达
目的探讨透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)的表达水平.方法收集5例透明晶状体和40例老年性白内障患者的前囊膜. 应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对前囊膜下晶状体上皮细胞AQP1进行检测.结果 AQP1阳性表达在透明晶状体和老年性白内障患者前囊膜下晶状体上皮细胞的细胞膜. 图像分析透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值差异有显著性意义(P<0.05). 老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值低于透明晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值.结论透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞的细胞膜表达AQP1,AQP1可能在老年性白内障发生发展中起一定作用.
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压力对培养人眼小梁细胞水通道蛋白1mRNA表达及蛋白质合成的影响
目的 研究人眼小梁细胞水通道蛋白1(AQP1)在不同压力下mRNA表达及蛋白质合成的变化,探讨AQP1在青光眼发病中的作用.方法 培养人眼小梁细胞,分别给予20、40、60及80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)的压力,以不加压组为对照组,用RT-PCR和Western blot对小梁细胞AQP1 mRNA和蛋白质含量变化进行定性及定量观察.结果 压力持续48 h后,人眼小梁细胞中AQP1 mRNA及蛋白质含量随压力增高先增高后下降.压力20 mmHg与40 mmHg组AQP1 mRNA及蛋白质含量较对照组逐渐增多,压力60 mmHg和80 mmHg组AQP1 mRNA及蛋白质含量较对照组逐渐减少,各组AQP1 mRNA及蛋白质与对照组比较差异均有统计学意义(F=251.95,P<0.01;F=447.23,P<0.01).组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 压力改变培养人眼小梁细胞AQP1 mRNA表达及蛋白质合成,可能成为导致或加重青光眼的因素之一.
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颈椎舒颗粒对椎间盘退变大鼠模型AQP1的影响
目的:探讨颈椎舒颗粒治疗颈椎病作用的机制.方法:以动静力失衡方法建立颈椎间盘退变模型,测定椎间盘含水量了解颈椎间盘退变情况,用免疫印迹法检测大鼠椎间盘中AQP1含量,观察模型大鼠给药4周、8周后的变化.结果:其中用药4周后,与模型组相比,各组组均能增加椎间盘的含水量,差异有显著性意义(P<0.05).各药物干预组,以高剂量组疗效佳,高剂量组含水量高,模型组低.用药8周后,与模型组相比,各组组均能增加椎间盘的含水量,差异有显著性意义(P<0.05).各药物干预组,以高剂量组疗效佳,高剂量组含水量高,模型组低.用药4周后,与模型组相比,各组均能增加颈椎间盘AQP1的含量,差异有显著性意义(P<0.05).各药物干预组,以高剂量组疗效佳,高剂量组颈椎间盘AQP1的含量高,模型组低.用药8周后,与模型组相比,各组组均能增加颈椎间盘AQP1的含量,差异有显著性意义(P<0.05).各药物干预组,以高剂量组疗效佳,高剂量组AQP1高,模型组低,并且随着治疗时间的延长,效果有增加的趋势.结论:颈椎舒具有改善颈椎间盘退变的作用,对水通道蛋白1的调节作用是其疗效机制之一.
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水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定
目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1(aquaporin-1, AQP-1)基因敲除小鼠.方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雄性纯合子,将其与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠.结果 AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功,并得到较多的基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径.
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不同剂量肝素对高糖诱导后的人腹膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响
目的：研究不同剂量肝素对高糖诱导后的人腹膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP1）mRNA和蛋白表达水平的影响。方法分离并培养人腹膜间皮细胞，并用高糖（2.5%葡萄糖溶液）诱导4、8、12和24 h；采用逆转录-聚合酶链反应（RT- PCR）检测AQP1 mRNA的表达水平，从而确定表达量达峰值的诱导时间。将不同剂量的肝素添加至人腹膜间皮细胞培养液中，并经2.5%高糖溶液诱导后，用RT- PCR及免疫组织化学法检测实验组与对照组AQP1 mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较，实验组AQP1 mRNA和蛋白表达明显增加，且mRNA表达呈时间依赖性，且在高糖诱导24 h时表达量达峰值，差异有统计学意义（<0.05）；RT- PCR与免疫组织化学结果具有一致性，均提示AQP1 mRNA和蛋白表达水平在2.5%葡萄糖+1.5×10-2 mg/ml肝素组呈现明显上调，差异有统计学意义（<0.05）；免疫组织化学染色提示2.5%葡萄糖+1.5×10-2 mg/ml肝素组细胞可见胞核及胞浆有空泡样改变。结论肝素在高糖环境中诱导24 h后可显著增加人腹膜间皮细胞水通道蛋白AQP1 mRNA和蛋白的表达，且大剂量的肝素能使胞浆及胞核出现明显的空泡样改变。
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脊髓水通道蛋白1在大鼠神经病理性疼痛中的作用
目的 探讨脊髓水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)所致神经病理性疼痛中的作用.方法 雄性SD大鼠25只,随机分为5组,每组5只:A组:大鼠建立CCI模型后观察4天:B组:大鼠建立CCI模型后观察7天；C组:大鼠建立CCI模型后观察14天；D组:正常对照组,正常饲养观察16天(术前2天+术后观察14天)；E组:假手术组:暴露左侧坐骨神经中段仅绕线,不结扎,术后观察14天.各组大鼠在建模前1天、建模后第1、4、7、14天测量所有未处死大鼠双后肢的热痛阈(PWTL)和机械痛阈(PWMT).达到观察时间取大鼠L4～5节段脊髓,免疫组化法观察AQP1在脊髓的定位分布和表达变化,Real time PCR法检测脊髓AQP1的mRNA表达变化.结果 与同组右侧脊髓背角比较,和C组大鼠左侧脊髓背角AQP1阳性颗粒的平均光密度和面积增高(P＜0.05).A、B、C组大鼠的脊髓背角AQP1阳性颗粒的面积高于正常对照组和假手术组(P＜0.05),D组与E组之间无差别(P＞0.05).与正常组和假手术组比较,A、B和C组大鼠脊髓AQP1 mRNA含量显著增高(P＜0.05),D组与E组之间无差异(P＞0.05),A组、B组、C组大鼠脊髓AQP1的mRNA含量分别为D组含量的1.688、4.876和5.806倍.结论 大鼠脊髓AQP1可能参与神经病理性疼痛的形成和发展.
