首页 > 文献资料
-
黄芪甲苷对高糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞表达致纤维化因子的影响
目的：观察黄芪甲苷对高糖腹膜透析液(PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨黄芪甲苷对致纤维化因子的调节作用。方法选用 HMrSV5细胞株,培养至第5代,随机分为对照组(10%FBS 培养液)、模型组(4.25%PDS 和10%FBS培养液)和黄芪甲苷低、中、高剂量组(含黄芪甲苷终浓度为10、20、40μg/mL的4.25%PDS和10%FBS培养液)。采用MTT法检测细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液TGF-β1、CTGF、VEGF水平。结果除5μg/mL浓度组外,HPMCs的活性均较空白组不同程度增强,以40、45、50μg/mL浓度组作用较显著(P＜0.05)；与空白组比较,模型组 TGF-β1、CTGF、VEGF 表达增加；与模型组比较,黄芪甲苷各组 TGF-β1、CTGF、VEGF表达明显减少,呈量效关系(P＜0.05)。结论黄芪甲苷通过减少高糖刺激下HPMCs TGF-β1、CTGF、VEGF表达,达到延缓腹膜纤维化的发展。
-
川芎嗪抑制TNF-α诱导的人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达
目的 探讨川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导后转化细胞生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 胰蛋白酶消化法分离人腹膜组织间皮细胞进行原代培养并传代,分为5组(每组 n=3):对照组(完全培养液)、单纯TNF-α(1μg/L)诱导组和TNF-α诱导加低、中、高剂量川芎嗪(10、20和40 mg/L)组.用MTT法检测间皮细胞的活性;RT-PCR法检测TGF-β1和CTGF mRNA表达;ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1和CTGF的蛋白质水平,细胞沉淀用BCA法检测细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果 .结果 川芎嗪呈量效关系显著降低TNF-α诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达(P＜0.05);中、高剂量川芎嗪能显著改善TNF-α诱导后人腹膜间皮细胞的活性(P＜0.05).结论 川芎嗪能够抑制炎症状态下人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的过度表达.
-
活性氧在高糖诱导人腹膜间皮细胞产生IL-8、MCP-1中的作用
目的研究高糖对培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMC)产生趋化蛋白IL-8(白介素-8)、MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)的影响以及内源性活性氧(过氧化氢)在其中的作用. 方法分别用不同浓度的葡萄糖、高渗甘露醇、葡萄糖加抗氧化剂(丙酮酸)刺激细胞,用半定量RT-PCR的方法测定趋化蛋白的基因水平,用ELISA的方法测定蛋白水平.结果高糖可以使HPMC产生IL-8、MCP-1增加,且呈浓度依赖性,而高渗甘露醇的作用则不明显;高糖中加入抗氧化剂(丙酮酸)后,IL-8的表达下降,而MCP-1的表达未见明显的改变. 结论高糖可以使HPMC表达IL-8、MCP-1增加,从而在透析液生物不相容性及腹膜纤维化中起作用;在IL-8的产生中,内源性的活性氧可以作为信号传导分子,起到一定的作用.丙酮酸能够通过对抗内源性氧化应激,对HPMC具有保护作用.
-
腹膜透析液对于腹膜间皮细胞的影响
作为治疗尿毒症的有效手段之一,腹膜透析可以有效地纠正尿毒症患者的部分生理异常.而在此治疗过程中,由于腹膜透析液的组成有别于人体的体液,因而具有一定程度的生物不相容性,其非生理性的主要因素包括低pH、高糖、高渗、缓冲剂的组成等.这些因素可以导致腹膜细胞发生形态、功能的改变,腹膜透析效能降低,损害宿主的防御机制.以往的研究较多关注腹腔内的中性粒细胞、巨噬细胞;近年来,通过对于腹膜透析时人腹膜间皮细胞(HPMC)形态与功能的研究,发现HPMC在腹腔局部的炎症防御、腹膜转运、腹膜纤维化形成方面起着重要的作用,而有关腹膜透析液对于间皮细胞影响的研究较少,近年来才逐步受到人们的重视,本文拟重点介绍含糖乳酸盐透析液对间皮的影响.
-
胰岛素对人腹膜间皮细胞增殖、损伤及凋亡的影响
目的明确胰岛素是否对人腹膜间皮细胞具有毒性或者保护作用.方法使用人腹膜间皮细胞细胞株,传代培养.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定HPMC的增殖程度.采用全自动生化分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶LDH水平示细胞损伤,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化及计算凋亡细胞百分比.分为单纯培养基对照组,4.25%葡萄糖组,不同浓度胰岛素组和不同浓度的胰岛素加4.25%葡萄糖组.结果与对照组相比,4.25%葡萄糖致LDH水平明显增高,并显著降低MTT渗入量,明显增加凋亡细胞百分比;不同浓度的胰岛素对HPMC增殖无影响,不同浓度胰岛素24h后可明显升高LDH水平(P《0.05),不同浓度胰岛素作用12h均后导致凋亡细胞百分比显著升高(P《0.05);不同浓度葡萄糖胰岛素组12h、24hMMT渗入量较葡萄糖组明显升高(P《0.05),组间差异无显著性(P》0.05),浓度大于25U/L胰岛素加葡萄糖组作用24h后与葡萄糖组相比显著降低LDH水平(P《0.05);不同浓度胰岛素加葡萄糖组作用12h后与葡萄糖组相比凋亡细胞百分比明显下降(P《0.05).结论胰岛素能导致HPMC损伤、诱导凋亡,同时在一定范围内可缓解高糖对HPMC的毒性作用.
-
钙对人腹膜间皮细胞损伤、增殖及纤维连接蛋白合成的影响
目的 研究不同浓度钙对体内外人腹膜间皮增殖、损伤和间质纤维化的影响.方法 体外试验:以人腹膜间皮细胞永生化细胞株(HMrSV5)为研究对象,予不同浓度钙(0、0.25、0.75、1.25、1.75、2.25mmoI/L)处理该细胞12、24h.采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)评估细胞的增殖能)力和损伤.蛋自免疫印迹法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达.临床试验:随机选择47例既往使用低钙透析液(BaxterPD4,含钙1.25mmol/L)的稳定维持性腹膜透析患者,平均透析时间为(18.5±11.7)个月.采用前后自身对照法进行研究.以患者刚入选本研究时作为对照组,入选后换)用含钙1.75Imno1/L的PD2进行透析(其他成份均与PD4相同)4周,其他治疗(降压、降磷、活性维生素D3等)不变.患者使用PD2透析后的每一周末作为组(分别为第1,2,3,4周组).酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测腹膜透析引流液中的FN和LDH,电化学发光法(electrochemiluminescence assay,ECLA)检测CA125.同时检测血清钙、磷及全段甲状旁腺激索(intact parathyroid hormone,iPTl1)水平.结果 体外试验:钙皱时间及浓度依赖性促进HMrSV5增Wl,含钙1.75mmol/L组高:不同浓度钙呈时间依赖性U著诱导LDH上调,其中钙1.25mmol/L组LDH低(P<0.05);FN亦呈钙浓度及时间依赖性表达上调.临床试验:4个试验细腹膜透析引流液中LDH值均与对照组有显著差异且呈时间依赖性升高.第4周组的FN和LDH水平显著高于其他组,CA125水平明显低于其他组,差异均有统计学意义(均P<0.01).第4周组的血清钙高于对照组,血磷低于对照组差异均有统计学意义(均P<0.05),iPTH与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 在体内外试验中,高钙(1.75mmol/L)可促进人腹膜间皮细胞增殖,同时加重细胞损伤,促进FN合成,而生理浓度钙(1.25mmol/L)对人腹膜间皮细胞有定保护作用并可能预防IN膜纤维化.
-
TGFβ1反义寡核苷酸对人腹膜间皮细胞增殖和纤维连接蛋白的影响
目的探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASON)对人腹膜间皮细胞(HPMC)体外增殖及其分泌纤维连接蛋白(FN)的影响,初步探索腹膜间皮细胞对腹膜纤维化影响和TGFβ1反义寡核苷酸对其的干预作用,为临床防治腹膜纤维化寻找有效途径. 方法①人腹膜间皮细胞原代培养,第三代用于实验;②合成特异性针对TGFβ1mRNA转译起始区ASON及正义、错义寡核苷酸,并和阳离子脂质体形成复合物;③将合成的寡核苷酸与第三代腹膜间皮细胞共同孵育24、48h,分为对照组(F12培养基组)、TGFβ1反义寡核苷酸组、TGFβ1正义寡核苷酸组和TGFβ1错义寡核苷酸组,采用MMT法观察细胞增殖,ELISA法测定细胞上清液内FN蛋白含量以及RT-PCR测定FNmRNA表达.结果①TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后,其细胞增殖率明显低于其它各组(P均<0.05);②TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后其上清液中FN蛋白质的含量明显降低;TGFβ1正义寡核苷酸组明显升高(P<0.05);③正义、反义和错义各组寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24h时FNmRNA表达与对照组比较,正义组上调22%,而反义组和错义组分别下调22%和11%.结论 TGFβ1反义寡核苷酸能够抑制人腹膜间皮细胞增殖和FN的过度表达.
关键词： TGFβ1反义寡核苷酸 人腹膜间皮细胞 细胞增殖 纤维连接蛋白 -
短发夹结构RNA对人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1表达和超微结构的影响
目的 研究靶向转化生长因子-β1(TGF-β1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表达TGF-β1的影响,并观察其对HPMC超微结构的影响. 方法 利用pcDU6质粒构建两个靶向TGF-β1的shRNA真核表达载体pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2,使用脂质体介导转染腹膜透析液刺激下的HPMC,采用半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)检测shRNA表达载体对于TGF-β1基因和蛋白质表达水平的抑制效果,使用透射电镜观察HPMC超微结构的改变. 结果 HPMC暴露于4.25%腹膜透析液中48小时后,其上清中TGF-β1的浓度与对照组相比显著增高分别为(39.71±6.60)pg/105 cells和(16.32±2.71)pg/105 cells,P＜0.01),1.5%腹膜透析液对于TGF-β1蛋白合成无明显影响;而预先转染了shRNA载体的两组与转染pcDU6载体(空载体)的组相比,其由4.25%腹膜透析液诱导的TGF-β1蛋白增高幅度明显减少,分别下降了39.2%和47.2%(P＜0.01);两组转染不同的shRNA载体的HPMC之间相比TGF-β1浓度无显著差异,pcDU6载体(空载体)转染组与4.25%腹膜透析液刺激组TGF-β1浓度亦无显著差异.透射电镜显示HPMC暴露于4.25%腹膜透析液可导致细胞扁平、微绒毛减少和线粒体水肿等,而转染shRNA载体组细胞的改变相对较轻. 结论 pcDU6质粒载体介导的短发夹结构RNA(shRNA)能够明显抑制腹膜透析液刺激下的人腹膜间皮细胞TGF-β1的高表达,并减轻其超微结构的异常,提示shRNA表达载体可能有益于腹膜纤维化的防治.
-
miR-29对腹膜间皮细胞EMT的作用
目的 观察miR-29a对高糖刺激人腹膜细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)导致上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 应用高糖刺激HPMCs,建立HPMCs EMT模型,运用Real time PCR检测高糖刺激HPMCs不同浓度及不同时间后上皮细胞标志物E-cadherin及间充质细胞标志物α-SMA和FN信号分子的表达水平及miR-29a表达水平变化.然后用miR-29a inhibitor转染HPMCs下调miR-29a表达,运用Real time PCR检测miR-29a表达水平及EMT相关标志物E-cadherin、α-SMA、FN等信号分子的变化水平.结果 Realtime PCR结果显示,不同浓度及不同时间葡萄糖刺激均可使HPMCs的间充质细胞标志物α-SMA(不同浓度:1.5％ 1.970±0.153比1,F=7.692,P=0.008;2.5％3.291±0.265比1,P=4.479,P＜0.001;4.25％4.301±0.346比1,F=-5.496,P＜0.001;不同时间:6h 2.161±0.202比1,F=6.563,P=0.001;12h 2.820±0.285比1,F=5.111,P＜0.001;24h 3.291±0.265比1,P=4.479,P＜0.001;48h 3.980±0.407比1,F=9.377,P=0.006) 、FN(不同浓度:1.5％ 1.630±0.157比1,F=7.092,P=0.002;2.5％2.910±0.199比1,F=4.000,P＜0.001;4.25％3.601±0.301比1,F=5.575,P＜0.001;不同时间:6h 1.761±0.172比1,F=7.144,P=0.002;12h 2.390±0.170比1,F=4.499,P＜0.001;24h 2.910±0.199比1,F=4.000,P＜0.001;48h 3.601±0.300比1,F=4.570,P＜0.001)表达逐渐增加,上皮细胞标志物E-cadherin(不同浓度:1.5％ 0.693±0.065比1,F=4.665,P=0.001;2.5％0.452±0.045比1,F=4.994,P＜0.001;4.25％0.302±0.030比1,F=-4.000,P＜0.001;不同时间:6h 0.802±0.084比1,F=4.000,P=0.012;12h 0.630±0.070比1,F=7.030,P=0.001;24h 0.452±0.045比1,F=4.994,P＜0.001;48h 0.290±0.030比1,F=4.000,P＜0.001)表达逐渐减少,提示HPMCs发生EMT改变.并且随着葡萄糖浓度升高及作用时间延长,miR-29a(不同浓度:1.5％1.452±0.147比1,F=13.411,P =0.001;2.5％ 3.120±0.320比1,F=10.372,P＜0.001;4.25％ 4.130±0.368比1,F=12.497,P＜0.001;不同时间:6h 1.330±0.114比1,F=5.788,P=0.001;12h2.310±0.173比1,F=5.546,P＜0.001;24h 3.100±0.236比1,F=10.372,P＜0.001;48h 3.310±0.211比1,F=4.929,P＜0.001)表达逐渐升高.Real time PCR结果表明,与高糖组相比,应用miR-29a inhib-itor转染HPMCs后,α-SMA(1.871±0.206比3.291±0.265,F=0.104,P=0.002)、FN(1.782±0.156比2.910±0.199,F=0.091,P=0.002)表达减少,E-cadherin(0.873±0.085比0.452±0.045,F=0.760,P=0.002)表达升高. 结论 高糖以浓度依赖及时间依赖的方式诱导EMT,并且EMT与miR-29a表达正相关.应用miR-29a inhibitor下调miR-29a表达能够部分逆转HPMCs EMT的发生.
-
pcDU6质粒载体介导的TGFβ1shRNA及pcDNA3.1介导的TGF-β1反义RNA抑制人腹膜间皮细胞TGFβ1的表达及细胞外基质的分泌
目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和TGF-β1反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达及细胞外基质分泌的影响.方法利用带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6)构建TGF-β1短发夹RNA的产生质粒,用pcDNA3.1(-)载体构建反义TGF-β1基因真核表达载体,采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF-β1RNA的pcDNA3.1(-)的载体质粒人高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-β1mRNA的表达以及纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)和胶原Ⅰ(ColⅠ)的mRNA表达.采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-β1蛋白质水平.结果HPMC在高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)的刺激下可明显上调TGF-β1的表达(P＜0.01),TGF-β1反义RNA转染HPMC后,与对照组相比,转染24小时后,FN、ColⅠ、PAI-1 mR-NA分别下调17.0%、26.0%、9.6%(P＜0.05).pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA干扰组较Gs+LPS组及pcDU6空载体组明显下调TGF-β1的表达(P＜0.01),pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组与pcDU6空载体组比较差异无显著性(P＞0.05),pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA干扰组较pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组明显下调TGF-β1的表达(P＜0.01).结论pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA能够明显抑制在高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)的刺激下的HPMC转化生长因子β1的基因表达,可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法.
-
高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响
目的高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法来观察高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响.结果高糖、尿毒症血清组VEGF表达明显高于正常对照组.结论高糖、尿毒症血清可促进人腹膜间皮细胞VEGF的表达,可能导致腹膜新生血管的形成,从而引起腹膜超滤衰竭.
-
外源性硫化氢对高糖诱导人腹膜间皮细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 外源性硫化氢(H2S)对高糖诱导人腹膜间皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用4.25％D-葡萄糖(高糖)和5×10-5、10-4、5×10-4、10-3和5×10-3 mol/L的外源性H2S供体硫化氢钠(NaHS)处理人腹膜间皮细胞株HMrSV5细胞24 h,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内的内活性氧(ROS)水平,检测细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果 与对照组比较,高糖组HMrSV5细胞活力显著降低(t=-3.67,P＜0.05),细胞培养液中LDH水平显著增加(t=2.94,P＜0.05),ROS水平显著增加(t=4.28,P＜0.01),MDA含量显著增加(t=-2.84,P＜0.05)而SOD活性降低(t=3.57,P＜0.01).与高糖组比较,5×10-4、10-3和5×10-3 mol/L的NaHS显著抑制了高糖诱导的HMrSV5细胞活力的降低(t1=2.43; t2=3.68;t 3=3.12,均P＜0.05)和细胞培养液中LDH水平的增加(t1=2.83; t2=3.71; t3=3.44,均P＜0.05).与高糖组比较,l0-3mol/L的NaHS显著抑制了高糖诱导的细胞内ROS(t=-3.12,P＜0.05)和MDA水平的增加(t=2.59,P＜0.05)和SOD活性降低(t=-2.61,P＜0.05). 结论 外源性H2S抑制了高糖诱导的人腹膜间皮细胞损伤,其机制可能与外源性H2S抑制氧化应激有关.
-
硫化氢通过抑制自噬保护高糖诱导人腹膜间皮细胞的损伤
目的 探讨硫化氢(H2S)对高糖诱导人腹膜间皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用4.25％ D-葡萄糖(高糖)和10-3 mol/L的外源性H2S供体硫化氢钠(NaHS)处理人腹膜间皮细胞株HMrSV5细胞24 h,MTT比色法检测细胞活力,分光光度法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平.Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达. 结果 与对照组比较,高糖组HMrSV5细胞活力显著降低(t=4.85,P＜0.05),细胞培养液中LDH水平的显著增加(t=3.49,P＜0.05).与高糖组比较,NaHS (10-3 mol/L)组细胞活力显著增加(t=3.42,P＜0.05)和培养液中LDH水平显著降低(t=4.02,P＜0.05).与对照组比较,高糖组HMrSV5细胞中Beclin-1 (t=4.95,P＜0.05)和LC3-Ⅱ(t=5.21,P＜0.05)的表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(t=5.72,P＜0.05)均显著增加,而p62的表达显著降低(t=4.67,P＜0.05).与高糖组比较,NaHS (10-3mol/L)组Beclin-1(t=4.36,P＜0.05)和LC3-Ⅱ(t=4.19,P＜0.05)的表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(t=4.83,P＜0.05)显著性降低,而p62的表达显著增加(t=4.78,P＜0.05).结论 H2S保护了高糖诱导的人腹膜间皮细胞损伤,其机制可能与H2S抑制细胞自噬有关.
-
舒洛地特对高糖作用下人腹膜间皮细胞炎症及纤维化因子表达影响
目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)糖萼组成成分透明质酸(hyaluronic acid,HA)、核心蛋白聚糖(decorin,DCN)和炎症及纤维化因子(白细胞介素6,interleukin-6,IL-6);转化生长因子-β1,transforming growth factor-β1,TGF-βl)表达的影响,以及观察舒洛地特(sulodexide,SLX)对上述因子表达的影响.方法 将HPMCs随机分为以下各组:1.对照组;2.高糖组:①不同浓度组:1.5％,2.5％,4.25％葡萄糖作用48h;②不同时间组:2.5％葡萄糖作用不同时间(0,6,12,24,48,72h);3.高糖+SLX组:2.5％高糖+不同浓度舒洛地特(50 μ g/ml,400 u g/ml,800μg/ml,1200 μ g/ml)作用48h.ELISA法检测各组上清液中HA、DCN、IL-6及TGF-β 1的蛋白表达情况.结果 1.与对照组相比,不同浓度的高糖作用下HPMCs HA表达增多[(172.074±3.223)pg/ml比(147.000±1.667) pg/ml,F=20.410,P=0.036],DCN表达增多[(2.435±0.150) ng/ml比(1.021±0.138)ng/ml,F=219.555,P＜0.001],IL-6表达增多[(67.981±1.655ng/l)比(45.637±1.143ng/l),F=160.674,P＜0.001],TGF-β1表达增多[(204.691±2.829)ng/l比(112.716±7.484) ng/l,F=1692.284,P＜0.001];不同时间的高糖作用下HPMCs HA表达增多[(205.986±2.746) pg/ml比(147.000±1.667) pg/ml,F=1225.533,P＜0.001],DCN表达增多[(1.422±0.134) ng/ml比(1.021±0.138)ng/ml,F=112.124,P=0.001],IL-6表达增多[(68.078±2.944) ng/l比(45.637±1.143) ng/l,F=69.690,P＜0.001],TGF-β1表达增多[(194.816±1.854) ng/l比(112.716±7.484) ng/l,F=1160.819,P＜0.001].2.与高糖组相比,SLX作用后能明显上调HA[(196.119±2.260) pg/ml比(172.074±3.223)pg/ml,F=120.845,P=-0.013]和DCN[(3.227±0.067) ng/ml比(2.859±0.175) ng/ml,F=15.413,P=0.008]的表达,明显下调IL-6[(67.927±2.467) ng/l比(75.371±2.386) ng/l,F=50.643,P=0.002]及TGF-β1[(232.778±31.029) ng/l比(292.347±3.857) ng/l,F=21.458,P=0.002]的表达. 结论 HPMCs存在HA和DCN的表达;高糖刺激可以反应性上调HPMCs的HA和DCN表达,但其表达不足以保护腹膜,而补充舒洛地特后HA和DCN表达显著上调,具有修复受损糖萼的作用;高糖可以显著上调IL-6及TGF-β1的表达,舒洛地特可以抑制高糖刺激下HPMCs IL-6和TGF-β1表达,从而抑制炎症和纤维化,保护腹膜功能.
-
辛伐他汀对炎症状态下人腹膜间皮细胞促纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF表达的影响
目的 探讨辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞在肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导后转化细胞因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响.方法 胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代,分为五组(每组设3个样本):空白对照组(完全培养液)、单纯TNF-α(1000ng/L)诱导组和TNF-α(1000ng/L)诱导加低、中、高剂量辛伐他汀(2.5、5和10μmol/L)组.采用MTT(单四唑)检测各组间皮细胞的活性;半定量RT-PCR检测细胞内TGF-β1和CTGF mRNA表达;ELISA检测细胞上清液中TGF-β1和CTGF的蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果.结果 辛伐他汀能显著改善TNF-α诱导后人腹膜间皮细胞的活性(P<0.05),并能显著降低TNF-α诱导后人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达(P<0.05),两者在蛋白质和基因水平均呈剂量依赖关系.结论 辛伐他汀能抑制炎症状态下人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达.
-
晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的表达
目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)对转化生长因子(TGF-β1)表达的影响及内源性活性氧(ROS)在此过程中的调节机制.方法 体外制备AOPP-HAS模型,原代培养人腹膜间皮细胞.采用ELISA法检测TGF-B,蛋白水平,采用RT-PCR半定量分析HPMCs中TGF-β1mRNA的基因表达水平,同时应用流式细胞仪检测细胞内活性氧的水平.结果 AOPP-HAS能显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β,的分泌与基因表达,同时增加细胞内ROS的生成,呈时间与剂量依赖关系(P＜0.01),不同浓度的抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸预处理细胞,可明显地降低细胞内ROS的生成量,同时显著地抑制AOPP-HAS诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达,呈剂量依赖关系(P＜0.01),其中维生素E(50 μ mol/L)组和NAC(10mmol/L)组抑制更加显著.结论 体外制备的AOPP可显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达,部分可能通过内源性ROS介导细胞内信号转导途径调节此过程,抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸可显著降低细胞ROS的生成量和显著抑制TGF-β1的分泌与基因表达.此研究揭示抗氧化剂在防治腹膜纤维化发生过程也许是一种可行的治疗策略.
-
维生素E对高糖诱导人腹膜间皮细胞纤维连结蛋白表达及活性氧生成的影响
持续不卧床腹膜透析(CAPD)是目前治疗终末期肾病(ESRD)的主要替代治疗方法之一,以往的研究已表明高糖可导致腹膜间皮细胞损伤,细胞外基质产生增多,终导致腹膜纤维化.
-
SRF-miRNA-143-KLF-4信号通路在高糖诱导的人腹膜间皮细胞表型转换中的作用
目的 探讨Kruppel样因子4(KLF-4)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表型转换中的作用.方法 以50mmol/L葡萄糖刺激HPMC 72h后,分别采用Real-time PCR及Western blotting检测KLF-4、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)及miRNA-143的表达.以LV-KLF-4及inhibitor转染高糖刺激72h后的HPMC,shRNA-KLF-4及mimic转染正常的HPMC,采用Real-time PCR及Western blotting检测KLF-4、E-cadherin、α-SMA、CTGF及miRNA-143的表达.结果 高糖刺激HPMC 72h后,Real-time PCR检测结果显示,KLF-4表达无明显变化,E-cadherin表达下降,α-SMA、CTGF及miRNA-143表达增加.Western blotting检测结果显示,KLF-4、E-cadherin表达下降.上调KLF-4表达后,HPMC中E-cadherin表达增加,而α-SMA、CTGF表达下降;下调KLF-4表达后,HPMC中E-cadherin表达下降,而α-SMA、CTGF表达增加(p＜0.05).结论 高糖刺激可以下调KLF-4蛋白的表达,SRF-miRNA-143-KLF-4信号通路轴参与了高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞表型转换过程.
关键词： 细胞表型转换 Krüppel样因子4 人腹膜间皮细胞 -
PUMA-α蛋白在高糖诱导的人腹膜间皮细胞凋亡及纤维化中的作用
目的 探讨pS3上调凋亡调节因子(PUMA)-α蛋白在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡及纤维化中的作用.方法 以50mmol/L D型葡萄糖和甘露醇分别刺激HPMC 72h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡及纤维化相关蛋白的表达.分别以Lenti-PUMA-α和shRNA-PUMA-α转染正常的HPMC和高糖刺激72h后的HPMC,采用流式细胞仪检测凋亡细胞数目,Western blotting检测凋亡及纤维化相关蛋白的表达.结果 高糖刺激HPMC 72h后,流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率增加;Western blotting检测结果显示,促进凋亡及纤维化的蛋白表达增加,而抑制凋亡及纤维化的蛋白表达减少.上调PUMA-α的表达可促进HPMC的凋亡及纤维化;下调PUMA-α的表达可抑制HPMC的凋亡及纤维化(P＜0.05).结论 高糖刺激通过上调PUMA-α的表达,促进了HPMC的凋亡及纤维化.
-
LncRNA-ATB在高糖诱导的人腹膜间皮细胞表型转换及增殖中的作用
目的 探讨长链非编码RNA-ATB (LncRNA-ATB)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)表型转换及增殖中的作用.方法 将HPMCs分为对照组、甘露醇组和高糖组3组.对照组不予任何处理;高糖组和甘露醇组分别采用50mmol/L D型葡萄糖和同等渗透压的甘露醇刺激72h.采用Real-time PCR检测各组LncRNA-ATB、E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子4(CDK4)、蛋白质p27(p27)及增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达,Western blotting检测各组E-cadherin、α-SMA、CTGF、Cyclin D1、CDK4、p27及PCNA蛋白的表达,并采用流式细胞仪检测细胞周期.利用慢病毒转染技术,将Lenti-LncRNA-ATB和shRNA-LncRNA-ATB导入HPMCs中,分别上调及下调LncRNA-ATB的表达,采用Real-time PCR检测E-cadherin、α-SMA及CTGF mRNA的表达,Western blotting检测E-cadherin、α-SMA、CTGF蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期.结果 Real-time PCR、Western blotting及流式细胞仪检测结果显示,高糖刺激后,LncRNA-ATB、α-SMA、CTGF、CyclinD1、CDK4及PCNA表达增加,E-cadherin及p27表达减少(P＜0.05).上调LncRNA-ATB表达可促进细胞表型转换及增殖,下调LncRNA-ATB表达可抑制细胞表型转换及增殖.结论 高糖刺激可通过上调LncRNA-ATB的表达促进人腹膜间皮细胞表型转换及增殖.
关键词： 细胞表型转换 LncRNA-ATB 人腹膜间皮细胞
