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酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白
目的 应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白.方法 构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白.结果 构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性.经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用.结论 经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础.
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乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体的制备及初步应用
目的 制备乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体,应用于猪源性生物制品中JEV的检测.方法 提纯病毒抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA方法筛选和有限稀释法三次克隆获得4株杂交瘤细胞,并应用琼脂扩散、酶联免疫吸附试验和免疫荧光方法进行抗体鉴定和样品检测.结果 获得4株稳定分泌JEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株G10、F4、C10、A5,免疫荧光抗体实验证实是特异的抗JEV抗体,其免疫球蛋白亚类G10和F4为IgG1,A5为IgM,C10未鉴定出其亚类.G10和F4腹水效价为105以上,C10和A5腹水效价为102以上.结论 成功制备了抗JEV单克隆抗体,建立了以单抗介导的间接ELISA和间接IFA检测方法,并应用于猪源性生物制品中JEV的检测.
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乙型脑炎病毒结构蛋白C+pre M和E基因的克隆与序列分析
目的 对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)结构蛋白基因进行扩增、克隆和序列测定.方法 根据GenBank中发表的乙脑病毒结构蛋白基因C + pre M基因和E 序列,设计合成两对引物,以JEV Nakayama-NIH株RNA为模板,反转录并扩增目的 cDNA,然后与 pGEM-T easy载体连接并转化大肠杆菌DH5α菌株,提取的重组质粒用电泳、PCR和酶切鉴定后并进行测序.将JEV Nakayama-NIH与GenBank中报道的多株JEV结构蛋白C + pre M 基因和E基因序列进行了比较.结果 Nakayama-NIH与其他参考株C + pre M和E基因的核苷酸同源性为99%,证实扩增克隆的是JEV的结构蛋白C + pre M和E基因.结论 对JEV分子生物学特征进行了分析,为JEV特异性核酸探针的研制奠定了基础.
关键词: 乙型脑炎病毒 结构蛋白C + pre M基因 E基因 克隆 测序 -
实验用小型猪乙型脑炎病毒的分离鉴定
目的 了解小型猪感染乙型脑炎病毒株的特点.方法 猪脑组织经过处理,接种BHK21细胞,进行病毒培养、间接免疫荧光试验、中和试验、电镜观察,及通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离毒株E区段和PrM区段核苷酸序列,测序后进行基因型鉴定.结果 25只猪脑组织接种BHK21细胞,有3个组织处理液能使BHK21细胞发生圆缩、集聚等病变;3个组织接种的BHK21病变细胞滴片进行免疫荧光试验,均产生强绿色荧光反应;中和实验结果显示3株新分离株中和效价均为1∶64;电镜下可见直径40nm左右球型病毒粒子;RT-PCR产物测序结果与疫苗株E区段核苷酸比较同源性均为95%;3株新分离株均为GIII型乙脑病毒.结论 实验表明小型猪场存在乙型脑炎病毒感染,为GIII型乙型脑炎病毒.
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2014年山西运城临床患者乙型脑炎病毒E分子生物学特征及基因分型研究
目的 初步了解2014年山西省运城地区病毒性脑炎患者中乙型脑炎病毒E基因分子生物学特征和基因型别分布特征.方法 采集19例临床诊断为病毒性脑炎患者的脑脊液标本, 提取核酸通过巢式聚合酶链式反应(nPCR)扩增乙型脑炎病毒基因片断, 采用生物信息学软件对病毒E基因区段核苷酸和氨基酸序列进行分子生物学特征分析并与通过构建系统进化树与国内外不同年代和地域分离的覆盖5个基因型别的乙型脑炎病毒进行基因型别研究.结果 19例山西运城脑炎患者标本中有2例为乙型脑炎病毒核酸阳性, 基因分型结果显示均为基因Ⅰ型乙型脑炎病毒.结论 2014年山西运城地区病毒性脑炎患者中乙型脑炎病毒为基因Ⅰ型, 与毒力相关的8个位点与乙型脑炎病毒P3一致, 没有发生突变, 不会影响病毒毒力.理论上表明, 目前使用的乙型脑炎病毒疫苗对当地的乙型脑炎病毒仍具有保护力.
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病毒唑治疗流行性出血性结膜炎
病毒唑是一种人工合成的新型广谱抗病毒药物,对流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、乙型脑炎病毒、肠病毒、鼻病毒、单纯疱疹病毒均敏感.实验证明,它对12种RNA病毒、10种DNA病毒有抑制作用,其抗病毒作用强于阿糖腺苷、阿糖胞苷、金刚烷胺、盐酸吗啉呱、碘苷等抗病毒剂.
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睢宁县1990~1999年流行性乙型脑炎流行病学分析
流行性乙型脑炎(以下简称乙脑)是由乙型脑炎病毒引起的蚊媒急性中枢神经性传染病.其病情重,病死率高,严重危害人民(尤其是儿童)的身体健康.为掌握乙脑的流行规律、探讨流行因素、制定防治对策、进一步控制乙脑的发生和流行,现将我县1990~1999年10年间确诊为乙脑病例的流行病学调查结果分析报告如下.
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流行性乙型脑炎的护理
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒所致.病变以中枢神经系统为主,病情重、发展迅速,重型乙脑病死率较高,常留有一定的后遗症,为了提高治愈率,减少后遗症.现将护理体会报告如下:
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流行性乙型脑炎的护理
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒所致.病变以中枢神经系统为主,病情重、发展迅速,重型乙脑病死率较高,常留有一定的后遗症,为了提高治愈率,减少后遗症.
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流行性乙型脑炎极期的观察和护理体会
流行性乙性脑炎是由乙型脑炎病毒引起的以脑实质炎症为主要病变的急性传染病,本病经蚊虫传播,临床上以高热、意识障碍、抽搐、病理反射及脑膜刺激征为特征,以2—6岁儿童发病率高。因此,在发病后极期的合理准确及时用药、加强基础护理、密切观察生命体征对疾病预后好坏是非常重要的。
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丙型病毒性肝炎及其检测研究进展
丙型肝炎属黄病毒科丙型肝炎病毒属[1],其基本结构与人类黄病毒如黄热病病毒、登革热病毒和乙型脑炎病毒相似,由结构蛋白和非结构蛋白组成.
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乙型脑炎病毒E蛋白毕赤酵母表达系统的构建
目的:构建乙型脑炎病毒E基因毕赤酵母表达系统.方法:应用RT-PCR法扩增乙型脑炎病毒E蛋白表达基因,定向克隆入载体pPICZαA,将重组质粒以Pme Ⅰ线性化并电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,用Zeoein筛选转化子进行鉴定.结果:PCR扩增产物约为1 350 bp,定向克隆获得pPICZαA-E表达载体.经测序结果与Genbank相应序列比较,核苷酸序列同源性为100%,电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株GS115-E.提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符.结论:成功构建乙型脑炎病毒E基因毕赤酵母表达系统,为进一步进行E蛋白真核表达研究奠定基础.
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38例流行性乙型脑炎的临床观察与护理
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒引起的中枢神经系统急性传染病, 本病多见于儿童, 好发于夏秋季. 我院自1996年7月-2001年6月共收治流行性乙型脑炎患儿38例, 笔者根据发病期的不同临床特点, 进行细致观察, 对症治疗, 精心护理, 取得了满意的疗效. 现将临床观察及护理体会介绍如下.
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揭示乙脑病毒入侵机制对乙脑病毒说不
中科院武汉病毒研究所研究员肖庚富领导的科研团队在乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)囊膜蛋白介导病毒入侵宿主细胞分子机制研究方面取得重要进展。相关研究结果在病毒学领域重要期刊《病毒学杂志》上在线发表。
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某部100名战士麻疹、乙型脑炎和肾综合征出血热抗体检测结果分析
为了解某部战士麻疹、乙型脑炎(简称乙脑)和肾综合征出血热感染情况,对该部100名战士进行了麻疹病毒IgG抗体、乙型脑炎病毒IgG抗体和肾综合征出血热病毒IgG抗体的检测,现将结果报告如下.
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40例乙型脑炎患者的临床护理体会
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒引起的,是以脑实质炎症为主要病变的中枢神经系统急性传染病.临床上主要以高热、意识障碍、抽搐以及脑膜刺激症为特征,重者甚至出现呼吸衰竭.乙型脑炎的临床观察及护理如果不及时、迅速,可直接影响到预后,甚至危及生命,作者对40例乙型脑炎患者的护理体会进行了总结,现报道如下.
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流行性乙型脑炎20例护理
流行性乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的以脑实质炎症为主要病变的急性传染病.临床上以高热、意识障碍、抽搐、病理反射及脑膜刺激征为特征.本病经蚊传播,夏秋季流行[1].我院自2005年-2007年共收治20例患者,经过积极治疗和护理,取得了满意的效果,现将护理体会总结如下.
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32例重型流行性乙型脑炎治疗体会
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒经蚊虫叮咬而传播的一种急性自然疫源性传染病.潜伏期4~21天.一般为10~14天.临床以高热、头痛、呕吐、意识障碍、抽搐、病理反射、脑膜刺任为特征.
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老年性重型流行性乙型脑炎13例治疗体会
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒引起的中枢神经系统传染病,通过蚊虫叮咬传播,好发于夏秋季,临床上以高热、意识障碍、抽搐、病理反射及脑膜刺激征为特征.儿童多见,但近年来儿童和青少年广泛接种乙脑疫苗,故成人和老年人发病率相对增高,尤其是65~80岁之间的老年人,发病急、病情重、死亡率高,是临床治疗上的一个难题.四年来,笔者救治了13例老年重型乙脑病人,有经验,也有教训,现总结如下:
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流行性乙型脑炎病人的护理
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是乙型脑炎病毒所致的以中枢神经系统病变为主的急性传染病,夏秋季为发病高峰期,临床以高热、意识障碍、抽搐、呼吸衰竭为特征[1],主要表现为突然起病、高热(大多在39℃以上)、头痛、恶心、呕吐,病情重者体温可迅速升至40℃以上,颈项强直、昏迷不醒.对乙脑病人的治疗宜越早越好,而且护理更为重要,及时得当的护理能够有效减少或减轻后遗症.我院今年收治了9例乙脑病人,其中儿童2例,成人7例.现将护理措施报告如下.