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大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质化的影响
目的:探讨大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法:常规培养胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别以10 μg·L-1转化生长因子-β1(TGF-β1),10 μg·L-1TGF-β1+5 mg·L-1大蒜素,5 mg·L-1大蒜素处理PANC-1细胞,另设空白组,镜下观察细胞形态学改变.细胞划痕实验检测大蒜素是否能降低胰腺癌细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学法及免疫印迹法(Western blot)检测各组钙黏附蛋白-E(E-cadherin),波纹蛋白(Vimentin)的表达变化.结果:TGF-β1能够刺激PANC-1细胞发生典型的EMT形态变化,并伴有E-cadherin表达的上调及Vimentin的下调.划痕实验表明大蒜素能降低胰腺癌PANC-1细胞的迁移能力.免疫荧光细胞化学法及Western blot结果显示,与空白组及TGF-β1组比较,大蒜素组的E-cadherin 表达明显上调(P＜0.05),Vimentin明显下调(P＜0.05),这表明大蒜素具有抑制PANC-1细胞产生EMT的效应.结论:大蒜素可抑制胰腺癌细胞发生EMT,进而可能在抑制肿瘤浸润与转移过程中发挥重要作用.
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大蒜素对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的治疗作用及TNF-α蛋白,SREBP-1c蛋白的影响
目的:观察大蒜素对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠治疗作用及肝组织内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白、固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)蛋白的影响,并探讨其作用机制.方法:76只雄性SD大鼠随机分为正常组(n=12)和造模组(n=64),采用高脂饮食法诱导构建NAFLD大鼠模型,模型大鼠随机分为非诺贝特组(50 mg·kg-1 ·d-1),模型组,大蒜素低、中、高剂量组(10,30,60 mg·kg-1·d-1),每组12只.非诺贝特组及大蒜素组灌喂相应剂量药物,正常组和模型组灌喂等体积生理盐水.药物干预4周后处死动物,检测各组大鼠血清及肝组织内总胆固醇(TG),甘油三酯(TC),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化,免疫组化检测肝组织中TNF-α,SREBP-1c蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织及血清TG,TC,肝组织ALT,AST活性,肝组织中TNF-α,SREBP-1c蛋白表达均明显升高(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,非诺贝特组、大蒜素低、中、高剂量组均明显降低大鼠肝组织及血清TG,TC,肝组织ALT,AST活性,肝组织中TNF-α,SREBP-1c蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01)结论:大蒜素对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠模型具有降脂护肝的作用,其机制与下调TNF-α及SREBP-1c有关.
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大蒜素口服液抗氧化及延缓衰老作用的试验研究
我们根据大蒜的某些生理生化特点,采用了简单易行的科学方法,对大蒜中的主要活性成分--大蒜素(二烯丙基三硫化物)进行提取,制备成大蒜素口服液,该产品经上海药品标准质量检验所经验,大蒜素含量为0.015%,本文主要报道大蒜素口服液的抗脂质过氧化以及延缓衰老等方面的试验研究.
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3种中药单体对卵巢癌端粒酶活性与放射敏感性的影响
目的:研究中药单体对人卵巢癌细胞(SKOV3)增殖、端粒酶活性、细胞周期相关基因表达以及对放射治疗的增敏作用.方法:利用齐墩果酸(OA)、姜黄素(Curcumin)和大蒜素(Allicin)3种中药单体作用于SKOV3细胞,MTT法检测中药单体对SKOV3细胞的杀伤作用,端粒重复序列扩增法(TRAP)法检测中药单体对SKOV3细胞端粒酶活性的抑制作用,实时荧光定星PCR(Real-Time PCR)法研究中药单体对SKOV3细胞增殖和细胞周期相关基因的表达情况,中药单体联合放射治疗观察中药单体对放射线杀伤作用的增敏作用.结果:齐墩果酸、姜黄素和大蒜素对SKOV3细胞有较强的杀伤效果;中药单体对肿瘤SKOV3细胞端粒酶活性有抑制作用,且有一定的时相性;齐墩果酸对SKOV3细胞周期依赖性激酶抑制素1A(P21)基因的表达有明显的促进作用,可明显抑制周期素D1(Cyclin-D1)和周期素依赖性激酶4(CDK4)基因的表达;中药单体联合射线作用于SKOV3细胞有明显的杀伤作用,且有一定协同作用.结论:中药单体对SKOV3细胞杀伤的同时可抑制其端粒酶活性和细胞周期相关基因的表达,增加放射治疗的敏感性.
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大蒜素长循环脂质体的研制及血管刺激性与缓释性研究
目的:制备大蒜素长循环脂质体(ALL),与大蒜素脂质体(AL)和大蒜素注射液在血管刺激性、缓释性方面进行比较.方法:①用反相蒸发法制备ALL,并对其包封率、形态、平均粒径、稳定性进行考察.②通过观察注药后兔耳缘静脉的色泽形态及组织切片判断药物对血管的刺激性.③注药4h后,检测大鼠血浆中大蒜素的浓度判断药物的缓释性.结果:①制备的ALL包封率为(84.57±5.21)％,其平均粒径为103.9nm,电镜下呈圆形或椭圆形,4℃冰箱中放置3个月无沉淀.②ALL对血管的刺激性评分与0.9％氯化钠溶液相当(0分),明显低于大蒜素注射液(4分).③注药后4h,ALL组大鼠血浆大蒜素浓度是AL组的30倍(P＜0.05),是大蒜素注射液组的40倍(P＜0.05).结论:研制的ALL有较高包封率,性质稳定,无血管刺激性,缓释性优于大蒜素其它剂型.
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大蒜素对豚鼠心房肌电生理的作用
大蒜(Allium Sativum L.)作为药物,在中国及世界其他国家均被广泛使用[1].<本草纲目>云:"捣汁饮,治吐血心痛."其良好的防治心血管疾病的药理,已不断被现代研究所证实.大蒜素(Allitridi)是从大蒜中提取的一种稳定的有效成分,结构式为CH2=CH-CH2-S-S-S-CH2-CH=CH2,目前已合成并批量生产[2],其抗心律失常作用也有报道[3],但机理不清.本研究拟探讨其抗心律失常的机制及其应用前景.
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大蒜素对乳鼠心肌细胞延迟预处理保护作用及其信号转导机制的研究
目的:研究大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的延迟保护作用及其部分信号转导机制.方法:采用细胞存活率、乳酸脱氢酶活性、丙二醛含量作为心肌细胞受损指标,观察终浓度为20μg/ml的大蒜素预处理24h后对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及蛋白激酶抑制剂H-7、丝裂素激活蛋白激酶抑制剂PD 98059对大蒜素预处理作用的影响;并通过免疫印迹技术(Western blot analysis)测定大蒜素预处理24h后,nPKC-ε、热休克蛋白70(HSP70)和核因子-кB(NFкB)的表达情况.结果:大蒜素预处理能显著提高缺氧复氧损伤心肌细胞存活率,减少LDH漏出和MDA生成,H-7、PD 98059可完全取消这种心肌保护作用.大蒜素预处理可明显增加nPKC-ε、HSP70的表达,H-7能抑制此作用,而PD98059仅对HSP70表达有抑制,NF-кB在各组间均无明显表达.结论:大蒜素能够模拟缺血预处理延迟保护作用,其机制涉及PKC及MAPKs信号途径,可能通过活化nPKC-ε,使下游靶蛋白MAPKs磷酸化而诱导HSP70的高度表达产生延迟预处理心肌保护作用.
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大蒜素对压力负荷大鼠心肌纤维化的影响
目的:观察中药大蒜素对压力负荷大鼠心肌纤维化的影响.方法:采用缩窄腹主动脉造成大鼠压力负荷模型.将50只SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、大蒜素组、氯沙坦组.各组大鼠于术后第3天开始给药,给药4w超声心动检测完成后取材,测定Ⅰ型前胶原羧基端肽(PI CP)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN);心肌组织天狼猩红染色,偏振光显微镜下照相并进行图像分析.结果:大蒜素治疗后降低了压力负荷大鼠心脏/体重比值,改善了腹主动脉缩窄引起的心脏指数(CI)的降低,使血清P工CP、PⅢNP和LN降低,并抑制了心肌血管周围胶原的增多和排列紊乱.结论:大蒜素可减缓压力负荷大鼠心肌胶原的沉积,具有心脏保护作用.
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大蒜素治疗心血管疾病临床与实验研究进展
大蒜素(garlicin)是从大蒜中提取的一种含硫化合物,化学名称为二烯丙基三硫化物.该成分在大蒜挥发油中的含量较高,是大蒜的主要有效成分,大蒜的许多药理作用都与其有关.
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高效液相色谱法测定大蒜油缓释片中大蒜素的含量
目的 建立大蒜油缓释片中大蒜素的含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法,DiamonsilTM(钻石)C18色谱柱(4.6mm×200 mm,5 μm),以甲醇-水-甲酸(80:20:0.1)为流动相,检测波长为218 nm,流速1.0 mL/min,柱温25℃.结果 大蒜素在0.05～0.25 μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,加样回收率为99.5%(RSD=1.7%).结论 本法简便,准确、灵敏度高、重复性好,为该制剂的质量控制提供了依据.
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大蒜素对心肌缺血再灌注犬冠脉血流量和血氧的影响
目的:探讨大蒜素对心肌缺血再灌注犬冠脉血流量和血氧的影响.方法:健康杂种犬9只,随机分为大蒜素组5只,生理盐水组4只.给药30min阻断左冠状动脉前降支,10min恢复灌流,观察1 2min.实验中记录冠流量、主动脉血氧饱和度、冠状静脉窦血氧饱和度、心输出量.结果:大蒜素具有以下三方面药理作用:①降低心肌耗氧量;②对心肌具有药物性缺血预适应作用;③避免过度再灌注,防止再灌注损伤.结论:大蒜素可用于心肌缺血再灌注损伤的防治.
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大蒜素及联合CPT-11对人结肠癌LoVo细胞的杀伤作用
目的:探讨大蒜素对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响及其与CPT-11联合使用时的化疗增敏作用.方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的LoVo细胞,采用MTT法检测大蒜素对LoVo细胞增殖抑制能力;Annexin V-FITC标记流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞的凋亡抑制率;流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞周期影响;4.0,8.0 mg·L~(-1)大蒜素联合CPT-11使用,观察CPT-11抗肿瘤活性的改变.结果:大蒜素可抑制LoVo细胞增殖,具有明显量效和时间依赖性,24,48,72 h IC_(50)分别为32.23,10.74,6.58 mg·L~(-1),大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,作用24 h细胞凋亡随着大蒜素浓度增高而增高,作用48h凋亡作用峰值质量浓度为8 mg·L~(-1),大蒜素作用LoVo细胞24 h,质量浓度低于4 mg·L~(-1)时细胞周期被阻滞于G_2/M;而高于4 mg·L~(-1)时细胞周期被阻滞于C_2/M和G_1期,4.0,8.0 mg·L~(-1)大蒜素预处理24 h后,CPT-11作用LoVo细胞24 h IC50分别由单独使用的47.5 mg·L~(-1)下降为7.4,7.2 mg·L~(-1),使CPT-11杀伤肿瘤效率分别提高6.4,6.6倍.结论:大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖;低剂量大蒜素与CPT-11联合使用具有协同抗肿瘤作用.
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P38MAPK信号转导通路在大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中的作用
目的:探讨大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中P38MAPK及Fas基因表达的变化.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;免疫细胞化学法观察大蒜素处理后细胞内磷酸化P38MAPK(P-p38MAPK)表达及分布变化;Western blot检测大蒜素处理前后细胞内P-p38MAPK和Fas蛋白表达量的变化.结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性.其72h中效浓度(IC_(50))为12.8 mg·L~(-1).Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加.免疫细胞化学法检测药物处理后P-p38MAPK表达增加,主要分布于细胞核与细胞浆,而阴性对照组仅弱表达.Western blot结果分析P-p38MAPK,Fas蛋白表达量随大蒜素浓度的增加而增加,呈剂量依赖性.其阴性组、72 h的1/2 IC_(50)组、IC_(50)组P-p38MAPK蛋白表达水平(相对灰度值)分别为0.259 8±0.013 2,0.361 2±0.008 3,0.505 6±0.005 5;Fas蛋白表达水平分别为0.287 4±0.008 9,0.426 8±0.007 9和0.597 1±0.010 9,差别均有显著性意义(P<0.01).结论:大蒜素可诱导THP-1细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能是通过激活P-p38MAPK/Fas途径实现.
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大蒜素对局灶性脑缺血再灌注血液流变学改变的影响
目的:探讨大蒜素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血液流变学改变的影响.方法:用栓线法复制大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型,于脑缺血2 h,再灌注24h时,观察不同剂量大蒜素对脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量及血液流变学改变的影响.结果:与模型对照组比较,大蒜素高、中剂量(15,25 mg·kg-1)能明显提高大鼠脑缺血再灌注的神经功能学评分,减轻大鼠脑缺血再灌注后的脑组织含水量的增加,减小脑缺血再灌注后大鼠的脑梗死体积;大蒜素高、中剂量(15,25 mg·kg-1)对脑缺血再灌注后大鼠全血黏度、高切还原黏度、高切相对黏度、低切相对黏度的升高有显著的抑制作用.结论:大蒜素对局灶性脑缺血再灌注损伤具有良好的保护作用,其机制可能与其抑制脑缺血再灌注后血液流变学改变有关.
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大蒜素抑制胰岛素诱发血管平滑肌细胞增殖和迁移实验研究
目的:探讨大蒜素(alliein)抑制胰岛素(insulin)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移及其作用机制.方法:采用组织贴块法培养大鼠的VSMCs,并进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光鉴定,取3～5代细胞进行实验.建立胰岛素刺激的VSMCs模型.实验分5组:对照组、胰岛素组、大蒜素组、ERK抑制剂PD98059组、大蒜素+PD98059组.噻唑蓝(CCK8)比色法检测VSMCs的增殖;细胞计数法检测VSMCs的迁移;免疫印迹实验(Western blotting)测定total ERK,Phospho-ERK(p-ERK),PCNA蛋白表达的情况.结果:原代培养的VSMCs生长良好,光镜下呈长梭形及“峰与谷”样生长.α-SMA免疫荧光显示培养的细胞具有典型的VSMCs特征.胰岛素能刺激VSMCs的增殖和迁移,且以100 nmol·L-1浓度时效果明显.大蒜素预处理能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移,且呈剂量依赖性.PD98059、大蒜素+PD98059预处理亦能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移.胰岛素可明显促进VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白.大蒜素能显著抑制VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白,且呈剂量依赖性.结论:大蒜素能显著抑制胰岛素诱导的VSMCs的增殖与迁移,其作用机制可能是抑制ERK信号通路的激活.
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大蒜素对KG-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制
大蒜素是大蒜中主要的生物活性物质,具有抗菌、降血脂等多种药理作用.该研究通过凋亡相关指标的检测,来探讨大蒜素对KG-1细胞增殖抑制的分子生物学机制.采用流式细胞术检测大蒜素诱导KG-1细胞的凋亡率;采用RT-qPCR法检测大蒜素对KG-1细胞Bax,Bcl-2,survivin,ERK基因mRNA表达水平的影响;通过Western blot法检测大蒜素对KG-1细胞caspase 3,cleaved caspase 3,ERK1/2,p-ERK1/2,survivin蛋白表达水平的变化.结果表明,与对照组相比,大蒜素能够显著抑制KG-1细胞的增值活性,并且呈显著浓度依赖性和时间依赖性;流式细胞术检测显示大蒜素能够诱导KG-1细胞的凋亡,并且主要是晚期凋亡.RT-qPCR结果显示,大蒜素作用于KG-1细胞后,与凋亡相关的基因Bax的mRNA表达升高,Bcl-2,survivin,ERK基因的mRNA表达降低;Western blot法结果显示,大蒜素作用于KG-1细胞后执行凋亡的蛋白caspase 3及其活性形式cleaved caspase 3升高,促生存的相关蛋白survivin,ERK1/2和其活性形式p-ERK1/2表达下降,其中p-ERK1/2的下调呈剂量依赖性.以上结果提示,大蒜素主要通过诱导KG-1细胞的晚期凋亡来抑制其增殖;凋亡的执行有cleaved caspase 3的参与;凋亡的诱导涉及到蛋白水平,ERK1/2,survivin表达的降低和p-ERK1/2剂量依赖性的减弱;mRNA水平涉及到Bax的升高,survivin,Bcl-2,ERK1/2的下调.
关键词： 大蒜素 KG-1细胞 凋亡 cleaved caspase 3 p-ERK -
胃镜下局部注射大蒜素对进展期胃癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨胃镜下大蒜素局部应用对进展期胃癌的影响及作用机制.方法 进展期胃癌患者80例,胃镜及病理均证实为腺癌,分为两组;大蒜素组40例,术前48 h胃镜下病变处局部注射大蒜素,对照组40例局部注射生理盐水;手术切除胃癌组织,采用美国Becton Dickinson公司产的FACS-420型流式细胞仪检测,观察胃癌组织周期(Go/G.期、S期、G2/M期)各时相百分比、细胞凋亡率、增殖指数(proliferation index,PI),以及胃癌组织细胞凋亡相关基因(Fas、Bax、Bcl-2)蛋白表达.结果 大蒜素组与对照组细胞凋亡率(%)分别为9.60±1.52、2.20±0.58,G0/G1期(%)分别为72.12±8.35、69.56±5.15,G2/M期(%)分别为9.54±3.20、13.20±3.05,P/值分别为27.80±8.35、30.40±5.15;两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);大蒜素组可增加凋亡促进基因Bax基因蛋白、凋亡始动基因Fas基因蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01),降低凋亡抑制基因Bcl-2基因蛋白的表达(P＜0.05).结论 本项研究初步证明胃镜下局部注射大蒜素能够抑制进展期胃癌组织细胞生长、增殖,并促进胃癌细胞凋亡.
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大蒜素对急性脑梗死患者外周血白细胞表面粘附分子表达及变形性的影响
目的:观察大蒜素对急性脑梗死患者外周血白细胞粘附分子(CD11a)表达及白细胞滤过指数(变形性)的影响.方法:取患者及健康人外周血,分离粒细胞于体外37℃孵育,采用抗体荧光标记,测定CD11a表达率;并测定粒细胞通过核孔滤膜的时间,并计算滤过指数.结果:CD11a表达率(%)健康人组(34.64±25.34)与空白对照组(55.35±30.54)比较,差异有显著性(P＜0.05);大蒜素组(49.16±31.68)较空白对照组明显下降(P＜0.05).粒细胞滤过指数健康人组、空白对照组、大蒜素组及尼莫地平组分别为0.87±0.46、6.42±6.40、3.47±3.67及5.03±3.72,大蒜素组与空白对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:大蒜素可有效地抑制急性脑梗死患者外周血粒细胞CD11a表达率及改善其变形性.
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大蒜素注射液对机械通气相关性下呼吸道深部真菌感染的预防效果及临床意义
目的探讨大蒜素注射液对机械通气相关性下呼吸道深部真菌感染的预防效果及临床意义.方法回顾分析近3年在我科ICU接受机械通气治疗的147例患者,其中79例下呼吸道深部真菌感染危险度评分≥25,根据是否使用大蒜素注射液作预防性用药,将79例分为预防组和对照组,比较分析两组在基础情况、机械通气相关性下呼吸道深部真菌感染的发生率及后结局方面的差别.结果预防组和对照组在年龄、性别、APACHEⅡ评分、SAPSⅡ评分和WVUH评分方面差异无显著性.对照组机械通气相关性下呼吸道深部真菌感染的发生率显著高于预防组(P＜0.01),其相对危险度RR为2.06(95%CI,1.25～3.38).两组在病死率上差异无显著性(P＞0.05).结论大蒜素注射液可有效降低机械通气相关性下呼吸道深部真菌感染的发生率,而且价格低廉,是理想的预防性抗真菌药.
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大蒜素对PM2.5诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究
目的 探讨PM2.5对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及大蒜素(Allicin)的抑制作用及可能机制.方法 采集大气PM2.5并分别以0(空白对照组)、20、100、200、400 mg/L(PM2.5 20、1 00、200、400 mg/L组)作用小鼠VSMCs 24 h,检测VSMCs增殖情况,一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量和VSMCs中磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;VSMCs分别加入Allicin 5、20、40 mg/L(Allicin 5、20、40 mg/L组)、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580 20 μmol/L(SB203580 20μmol/L组)和Allicin40 mg/L与SB203580 20 μmol/L(Allicin+ SB203580组),检测Allicin的干预作用及机制.结果 与空白对照组比较,PM2.5 100、200、400 mg/L组均诱导VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量升高,NO分泌减少(P ＜0.05,P＜0.01),细胞内p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达增加(P＜0.05),尤其200 mg/L组效果显著(P ＜0.05,P＜0.01);与PM2.5 200 mg/L组比较,Allicin 20、40 mg/L组、SB203580 20 μmol/L组、Allicin+SB203580组可抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P＜0.01),VSMCs中p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01);与Allicin 20 mg/L组比较,Allicin+SB203580组可进一步抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P ＜0.01,P＜0.05),VSMCs中p-p38MAPK及PCNA蛋白表达降低(P＜0.01).结论 Allicin可能通过抑制p38 MAPK信号通路,抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖.
关键词： PM2.5 大蒜素 p38 MAPK信号通路 血管平滑肌细胞
