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人牙龈上皮细胞诱导分泌β-防御素的信号通路研究
目的：研究牙龈上皮细胞在炎症因子IL-1β，TNF-α诱导下分泌β-防御素1，2，3的信号通路。方法取30岁以下因拔除第三磨牙或助萌需切除的牙龈，原代培养人牙龈上皮细胞，并用10μmol/L MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂BAY 11-7082孵育2 h，而后用150 ng/ml IL-1β或TNF-α诱导抑制剂孵育过的细胞24 h，实时荧光定量PCR检测β-防御素1，2，3的基因表达水平。结果在MAPK或NF-κB抑制剂存在的情况下，人牙龈上皮细胞经炎症因子IL-1β，TNF-α诱导后，HBD-1的表达量无明显变化；但HBD-2的表达量明显降低，MAPK抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-2的量分别下降81%和76%，NF-κB抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-2的量分别下降93%和95%；两种抑制剂对HBD-3的表达量表现出不同效应， MAPK抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-3的量分别下降65%和66%，而NF-κB抑制剂对HBD-3的表达量无明显影响。结论人牙龈上皮细胞较稳定的分泌HBD-1，不受外界炎症因子及信号通路抑制剂的影响。MAPK和NF-κB信号通路在HBD-2的诱导分泌中起了非常重要的作用；本研究中MAPK信号通路与HBD-3的诱导表达密切相关。
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龈下菌斑表面抗原对牙龈上皮细胞 IL-1β、MMP-8表达的影响
目的：评价龈下菌斑微生物表面抗原对人牙龈上皮细胞（HGECs）白细胞介素-1β（IL-1β）及基质金属蛋白酶-8（MMP-8）表达的影响。方法收集慢性牙周炎患者的龈下菌斑，经γ射线灭活制备表面抗原，按不同浓度稀释分为B、C、D、E、F组，A组为空白对照组。刺激人牙龈上皮细胞24 h后，采用ELISA检测细胞培养液中IL-1β和MMP-8含量，统计分析各组细胞因子的变化。结果龈下菌斑表面抗原刺激HGECs 24 h后，两种细胞因子表达的平均水平明显高于空白对照组（P＜0.05）。IL-1β和MMP-8随抗原浓度的增加而升高，但达到峰值后下降。结论γ射线灭活可有效保留龈下菌斑微生物表面抗原；在细菌尚未侵入牙龈上皮细胞时，龈下菌斑表面抗原已促使细胞表达IL-1β和MMP-8，诱导牙周组织的炎症和免疫反应。
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不同处理的人血清白蛋白对人牙龈上皮细胞粘附作用的影响
目的:探讨人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGE)粘附作用的影响.方法:使用角化细胞无血清培养基、分离酶原代培养HGE并用广谱细胞角蛋白单抗作细胞鉴定,细胞接种24 h内MTT法连续观测HSA聚苯乙烯表面预孵育组、培养基含HSA组HGE的粘附,在含HSA培养基中观测HGE的生长曲线.结果:HGE免疫组化染色阳性.HSA预孵育组,8 h以内粘附的细胞数量显著少于培养基含HSA组及对照组,10 h至24 h两实验组与对照组无显著性差异;生长曲线中各时间点细胞的数量,实验组与对照组相比无显著性差异.结论:HSA预孵育于聚苯乙烯表面,对HGE的粘附在早期产生抑制作用.
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米诺环素对人牙龈上皮细胞的生物学作用
目的:通过检测米诺环素对体外培养的人牙龈上皮细胞增殖、蛋白合成、碱性磷酸酶活性的影响,探讨米诺环素局部给药的效应浓度范围.方法:将不同浓度的米诺环素(0,10,20,40,100,200 mg·L-1)分别作用于第5代(P5代)牙龈上皮细胞,孵育1,4,7,10,14 d后采用MTT法检测其对细胞增殖的影响及对细胞的碱性磷酸酶活性、蛋白合成的影响.实验结果采用SPSS13.0软件包进行分析.结果:10～200 mg·L-1米诺环素显著促进P5代人牙龈上皮细胞增殖活性(P＜0.05),100mg·L-1为大效应浓度；20～200 mg·L-1明显促进P5代牙龈上皮细胞蛋白合成(P＜0.05)；10 mg·L-1显著促进碱性磷酸酶活性(P＜0.05),20～200 mg·L-1显著抑制碱性磷酸酶活性(P＜0.05).在10～20 mg·L-1的浓度范围内,米诺环素刺激细胞增殖、促进细胞分化及蛋白合成.结论:10～20 mg·L-1可作为米诺环素局部给药的效应浓度范围.
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不同浓度人血清白蛋白对人牙龈上皮细胞粘附作用的影响
目的探讨不同浓度的人血清白蛋白(hunlan serum alburnm,HSA)对人牙龈上皮细胞(humangmgwalepithdian cells,HGE)粘附作用的影响.方法使用角化细胞无血清培养基、分离酶原代培养HGE,并用广谱细胞角蛋白单抗作细胞鉴定;l、10、50、100mg/ml的HAS预孵育于细胞培养板表面,细胞接种4h时MTT法观测HGE在聚苯乙烯表面的粘附.结果HGE可成功的原代及传代培养,HGE免疫组化染色阳性,各处理组A490值显著少于对照组(P＜0.001).结论1～100mg/mLHSA预孵育于聚苯乙烯表面,对HGE的粘附在早期产生抑制作用.
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硝苯地平对人牙龈上皮细胞bcl-2基因表达的影响
目的:体外观察硝苯地平(nifedipine,NIF)对人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)bcl-2基因转录水平的调节,探讨NIF诱导的药物性牙龈增生(drug-induced gingival overgrowth,DGO)与凋亡抑制基因bcl-2的相关性.方法:采用牙周手术切除的健康牙龈组织.用酶消化法分离培养HGECs;免疫组织化学方法对培养细胞进行细胞鉴定;实时定量PCR技术检测不同浓度NIF(1 μg/ml、2 μg/ml和3 μg/ml)刺激下HGECs中bcl-2 mRNA水平,以0 μg/ml NIF为空白对照.采用SPSS 11.0软件包对所得数据进行单因素方差分析.结果:酶消化法获得的HGECs在体外培养中生长状态良好;免疫组织化学显示,HGECs抗角蛋白染色阳性,抗波形蛋白染色阴性;NIF处理24h后的HGECs bcl-2 mRNA水平随NIF浓度的增高而上升,3 μg/ml浓度组与空白对照组有显著差异(P＜0.05);NIF处理48h后.2 μg/ml、3 μg/ml浓度组HGECs bcl-2 mRNA水平与空白对照组差异明显(P＜0.05).结论:NIF调节体外培养的HGECs中bcl-2基因转录的水平.
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Toll样受体2/4在人牙龈上皮细胞的表达研究
目的:探讨Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)的表达情况,以及上述受体在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激下表达水平的改变.方法:采用逆转录PCR技术检测TLR2、TLR4在HGECs的基因表达,采用real-time PCR技术和流式细胞技术检测1μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)、LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia col,E.coli)LPS刺激后,该细胞TLR2、TLR4表达水平的改变.结果:来自不同个体的HGECs均表达TLR2,TLR4 mRNA.1μg/ml P.gingivalis LPS刺激后,TLR2基因和蛋白表达水平均明显增高(P＜0.05)；1 μg/ml E.coli LPS刺激后,TLR4基因和蛋白表达水平明显增高(P＜0.05).结论:TLR2、TLR4在HGECs存在稳定表达,并能被LPS的刺激活化,提示上述两种受体可能参与了牙周组织的炎症和免疫反应.
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角质细胞生长因子对人牙龈上皮细胞迁移的影响
目的:分析角质细胞生长因子对人牙龈上皮细胞迁移中的影响.方法:选取1例下颌阻生牙拔除术患者的健康牙龈组织块,经相关处理获取牙龈上皮细胞进行培养,于观察组培养基中加入角质细胞生长因子,对照组培养基中不添加,分析细胞培养结果,比较48 h、96h、144h后两组上皮细胞迁移距离.结果:原代培养人牙龈上皮细胞3～5 d后,可见细胞贴壁生长,细胞展开后为多角形,呈典型铺路石样,上皮细胞的培养特征较为明显.观察组在48 h、96h、144h后的人牙龈上皮细胞迁移距离均大于对照组(P＜0.05).结论:角质细胞生长因子能够促进人牙龈上皮细胞迁移.
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内毒素耐受对人牙龈上皮细胞分泌IL-1β、IL-6和IL-8的影响
目的:观察脂多糖( lipopolysaccharides,LPS)反复刺激细胞,诱导产生的内毒素耐受对人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)分泌细胞因子IL-1β、IL-6和IL-8的影响.方法:采用1 mg/L牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis.P.gingivalis) LPS或1 mg/L大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli) LPS刺激HGECs 24 h,洗涤细胞后,分别采用相同的LPS再次刺激24 h,构建内毒素耐受模型.采用ELISA技术检测细胞条件培养液中IL- 1β、IL-6和IL-8分泌水平的变化.结果:P.gingivalis LPS或E.coli LPS刺激HGECs 24 h后,3种细胞因子的分泌水平均较刺激前明显增高(P＜0.05).2种LPS重复刺激,诱导细胞耐受后,IL-6和IL-8的分泌水平较第1次刺激后明显降低(P＜0.05),但P.gingivalis LPS重复刺激后,IL- 1β的分泌水平与第1次刺激后无明显差别.结论:内毒素耐受能抑制HGECs分泌细胞因子IL-6和IL-8,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应.
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脂多糖对人牙龈上皮细胞β-防御素表达的影响及其机制研究
目的:研究脂多糖(LPS)对人牙龈上皮细胞(HGECs)β-防御素(hBD)-1、hBD-2、hBD-3表达的影响及其分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测不同浓度(0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L) LPS作用后HGECs hBD-1、hBD-2、hBD-3mRNA的相对表达量.选用10 mg/L LPS诱导p38MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂PDTC孵育2h后的细胞,24 h后再次检测hBD-2 mRNA的表达量.结果:不同浓度LPS作用下的HGECs hBD-1 mRNA相对表达量比较,差异均无统计学意义(均P ＞0.05).hBD-2 mRNA相对表达量随LPS浓度升高而增加,10 mg/L LPS作用下细胞hBD-3 mRNA相对表达量显著升高(P＜0.001).在p38MAPK或NF-κB抑制剂存在的情况下,LPS诱导的HGECs hBD-2 mRNA相对表达量明显降低(P＜0.001).结论:LPS可能通过激活p38MAPK和NF-κB信号通路诱导HGECs hBD-2的表达.
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人血清白蛋白对人牙龈上皮细胞在纯钛表面粘附作用的影响
目的:探讨人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对人牙龈上皮细胞(human gingivalepith-elial cells,HGE)在种植体材料表面粘附作用的影响.方法:HGE原代培养,免疫荧光染色法标记细胞,观察人牙龈上皮细胞在人血清白蛋白预孵育及普通纯钛试件表面的粘附.结果:使用角朊细胞无血清培养基和分离酶成功地培养出HGE;HGE经广谱细胞角蛋白单抗免疫组化染色为阳性;浓度为50 mg/ml的HSA预孵育于纯钛表面,4 h时处理组粘附的HGE的数量显著少于对照组,12、24 h处理组与对照组相比,粘附的细胞数量无显著性差异.结论:HSA预孵育于纯钛表面,对HGE的粘附在早期产生抑制作用.
