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程控降温与非程控降温冷冻法对脐带血干祖细胞影响的研究
本研究旨在探讨不同冷冻方法 是否会对脐带血中干祖细胞产生影响.主要采用羟乙基淀粉离心沉淀的方法,去除成熟红细胞及血浆,收集有核细胞悬液,并分别采用标准的程控降温及非程控降温方法 对有核细胞悬液进行冷冻保存,对冷冻前后的细胞悬液进行有核细胞总数检测,CD34+细胞检测,细胞活力以及各系祖细胞集落形成单位检测等.结果:经过对两种冷冻方法 比较:脐带血中有核细胞总数回收率,细胞活率,CD34+细胞回收率,祖细胞集落形成单位的回收率无明显差别.结论:在目前的情况下,两种冷冻方法 都可以进行脐带血标本的深低温冷冻保存.
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骨髓细胞液氮保存21-25年后的细胞活力体外研究
为探讨适合临床应用的骨髓细胞保存方法,揭示细胞长期低温保存效果,将20人份骨髓加入DMSO-AuP(10%二甲亚砜、10%自体血浆)或DMSO-HES-HuA(5%DMSO、6%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白)保护剂,分装2毫升/管,600-800管/人份,自控程序降温仪或-80℃低温冰箱预冻降温、液氮中保存21-25年.取冷冻骨髓细胞于38℃复温,检测细胞相关指标.结果表明:加保护剂的细胞标本在-80℃低温冰箱中为低速降温,-30℃前,与自控程序降温仪设定1℃/min的低降温速率接近.DMSO-HES-HuA与DMSO-AuP比较,红细胞形态畸形率分别为(3.5±1.5)%和(12.6±4.8)%;溶血率分别为(3.3±1.6)%和(23.1±5.1)%(p＜0.05);前者渗透性脆性不变,后者减低;红细胞、血小板、粒单系造血祖细胞、长期培养起始细胞回收率,前后者对比分别为(96.1±1.8)%、(70.0±9.5)%、(49.2±10.9)%、(54.2±13.8)% vs(76.3±5.6)%、(52.7±8.1)%、(43.5±12.3)%、(47.2±13.6)%.用上述保护剂配合上述降温法保存后,细胞在间充质干细胞培养上,生长特性良好.同一保护剂用上述两种降温法保存后,细胞各种回收效果差异不显著(p＞0.05).结论:细胞在液氮中保存21-25年,其细胞形态和回收活力(率)良好;保存如骨髓这种细胞成分并非单一的标本时,用5% DMSO-6%HES-4%HuA为保护剂的-80℃冰箱预冻降温后液氮保存,方法简便、经济、易操作,适合临床应用.
关键词： 骨髓细胞 低温保护剂 程控降温 -80℃低温冰箱降温 -
同种带瓣管道的研究和应用进展
Ross于1962年首次将异体同种主动脉瓣成功地用于主动脉瓣替换术以来[1],抗生素灭菌、程控降温、深低温保存等方法的应用推动了同种带瓣管道在心脏外科手术中的广泛应用,成为复杂先心病重建右室流出道的主要材料之一.本文就同种瓣研究和应用的进展作一简要综述.
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两种冷冻方法保存造血干细胞技术的评价
骨髓移植已经成为治疗恶性血液病及实体瘤等疾病的有效手段,我室分别采用传统的造血干细胞体外保存方法(程控降温/液氮贮存)和-80℃冷冻保存外周血造血干细胞技术[1].现介绍如下:
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26例动员外周血干细胞的程控降温冷冻保存效果评价
目的 评价程控降温冷冻保存高浓度外周血干细胞的效果.方法 采集动员的患者外周血干细胞,用程控降温系统降温至-80℃后保存于液氮中.冷冻前和解冻后均做有核细胞计数、粒单-集落形成单位(colony forming unitgranulocyte/macrophage,CFU-GM)培养和苔盼蓝拒染率实验.结果 冷冻的外周血有核细胞终浓度平均为1.405×108/ml,融化后有核细胞和CFU-GM回收率分别为80.64%±11.51%和94.01%±25.42%;拒染率为84.69%±8.72%.26例患者除1例死于预处理毒性不能进行评价外,余者均获得快速稳定造血功能重建.结论 程控降温冷冻保存高浓度的外周血干细胞是一种安全有效的方法.
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低温保存对同种动脉瓣膜活性的影响
同种带瓣膜动脉因其不可替代的优点,近年在国外受到高度重视.我们应用液氮深低温保存兔子的同种带瓣动脉,利用葡萄糖消耗试验及形态学观察冷冻保存对动脉瓣膜活性的影响.
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同种生物瓣膜低温保存效果的评价
目的从功能代谢角度评价深低温保存生物瓣膜的实际效果,观察冷冻保存对同种带瓣膜动脉活性的影响.方法主动脉瓣膜取自空气栓塞处死的兔子,修剪后程控降温,液氮长期保存.复温后光镜检查,体外培养检测糖消耗量,同时采用组织块贴壁法进行原代细胞培养检测细胞生长活性.结果带瓣动脉解冻后弹性纤维结构基本完整,有轻度水肿和黏膜变性,动脉壁结构大致正常;体外培养葡萄糖消耗量平均为＞16mmol/dl·d;复温后材料有生长和代谢活性.结论同种生物瓣膜低温保存技术较稳定较理想.
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家兔同种异体管道深低温保存的实验研究
目的:从功能代谢角度评价深低温保存生物管道的实际效果,观察冷冻保存对同种动脉活性的影响.方法: 主动脉取自空气栓塞处死兔子,修剪后程控降温,液氮长期保存.复温后光镜检查,体外培养检测糖消耗量,同时采用组织块贴壁法进行原代细胞培养检测细胞生长活性.结果:动脉解冻后弹性纤维结构基本完整,有轻度水肿和黏膜变性,动脉壁结构大致正常;体外培养葡萄糖消耗量平均大于16 mg·dL-1·24 h-1;复温后材料有生长和代谢活性.结论: 表明同种动脉低温保存技术已经达到比较理想的要求,可为临床应用提供相关的实验依据.
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程控降温后液氮保存对自体外周血造血干细胞含量和活性的影响
目的:观察程控降温后液氮保存对自体外周血干细胞含量和活性的影响.方法:13例接受APBSCT患者分离的造血干细胞利用程控降温仪进行冷冻,然后置液氮液相内(-196℃)保存,检测患者冻存前后的有核细胞数,CFU-GM,CD34+细胞.结果:冻存前后CFU-GM,有核细胞数,CD34+细胞统计学之间无显著性差异.结论:自体外周血干细胞体外冷冻处理和保存是有效和适当的.
