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荧光定量聚合酶链式反应法在常见食源性致病细菌检测中的应用价值
目的 探究荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在常见食源性致病细菌检测中的应用价值.方法 将菌株及样品经培养基增菌后,分别采用荧光定量PCR和常规的细菌培养检测致病菌,比较两组检出情况.结果 720个样品,采用细菌培养方法检测出了沙门氏菌、单核细胞增生性李斯特菌、金黄色葡萄球菌及副溶血性弧菌等几种常见致病菌;细菌培养法与荧光定量PCR法对致病菌的阳性检出率分别为11.94％和12.50％,差异无统计学意义(P＞0.05),在不同种类食品中两种方法的检出率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 荧光定量PCR检测应用于食源性致病菌检测,检测速度快,准确性高.
关键词： 荧光定量聚合酶链式反应 致病菌 食源性 -
同源异型盒基因5在急性髓细胞性白血病中表达的研究
目的研究同源异型盒基因5（HOXA5）在急性髓细胞性白血病（AML）中表达情况。方法使用荧光定量聚合酶链式反应法检测108例 AML 中 HOXA5表达，分析 HOXA5表达与 AML 的相关性。结果 HOXA5在初诊 AML 与正常人群中，表达差异无统计学意义（P ＞0.05）；在原发性 AML 和继发性 AML 患者中，表达差异无统计学意义（P ＞0.05）；在初次诱导治疗完全缓解和未缓解患者中，表达差异有统计学意义（ P ＜0.05）；在年龄≥60岁和＜60岁患者中，差异无统计学意义（P ＞0.05）；男性与女性AML 患者相比，HOXA5表达差异有统计学意义（P ＜0.05）。HOXA5表达与 CD34、HLA-DR、CD33、WBC 计数、LDH 的无相关性（P ＞0.05），与骨髓原始细胞数有相关性（P ＜0.05）。结论 HOXA5高表达可造成 AML 较差的治疗反应。
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多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究
目的 利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法.方法 根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度.利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性.通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证.结果 应用多重TaqMan荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR低检测下限均约为102copy/μL(13~24 fg /μL),是常规PCR灵敏度的100倍.结论 建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌.
关键词： 布鲁氏菌 荧光定量聚合酶链式反应 鉴定 评价 -
丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏CYP450酶的影响
目的 研究丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏细胞色素P450主要亚型mRNA及蛋白表达水平的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、丁香酸组、柠檬苦素组和苯巴比妥组,连续灌胃给药2周,末次给药后处死,提取小鼠肝脏总RNA及肝微粒体,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术和蛋白质免疫印迹(Western blot)测定CYP450酶主要亚型mRNA和蛋白表达水平.结果 在mRNA水平上,丁香酸对Cyp1a2、Cyp2c37、Cyp2d9 mRNA表达没有明显作用,柠檬苦素对Cyp1a2 mRNA的表达有显著诱导作用;在蛋白水平上,丁香酸对CYP1A1、CYP1A2、CYP3A、CYP2D和CYP2E1蛋白的表达有明显的诱导作用,柠檬苦素对CYP1A1、CYP1A2、CYP2A、CYP2D和CYP2E1有显著的诱导,对CYP2B和CYP2C蛋白表达产生抑制作用.结论 丁香酸和柠檬苦素对细胞色素P450主要亚型均具有不同程度的诱导和抑制作用.
关键词： 丁香酸 柠檬苦素 细胞色素P450 荧光定量聚合酶链式反应 蛋白质免疫印迹 -
丙型肝炎抗体ELISA弱反应性样本与PCR检测结果对比分析
目的：对丙型肝炎抗体（抗-HCV）酶联免疫吸附实验（ ELISA）法检测为弱反应性样本应用荧光定量聚合酶链式反应（ PCR）法再分析，以减少临床误诊及漏诊的发生。方法选择ELISA法检测抗-HCV吸光度值/临界值（ S/CO）﹤3.8的样本152例为研究对象，将患者分为A组80例（ S/CO﹤0.3）、B组32例（0.75≤S/CO﹤1.0）、C组40例（1.0≤S/CO﹤3.8），所有样本应用荧光定量PCR（FQ-PCR）法进行复检，比较两种方法的检测结果。结果 A组FQ-PCR复检均为阴性；B 组 FQ-PCR 复检2例 HCV-RNA 阳性；C 组 FQ-PCR 复检14例 HCV-RNA 阳性，26例 HCV-RNA 阴性。结论 ELISA法检测抗-HCV为弱反应性样本，应进一步对患者进行确认试验，以减少临床误诊和漏诊的发生。
关键词： 丙型肝炎病毒抗体 荧光定量聚合酶链式反应 弱反应性 -
乙型肝炎病毒DNA检测及其与血清标志物的关系探讨
目的:利用荧光定量聚合酶链反应方法定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量及探讨其乙型肝炎病毒标志物表现模式的关系.方法:36 1份临床血清标本,采用荧光定量聚合酶链反应及ELISA分别检测其乙型肝炎病毒DNA 和乙型肝炎病毒标志物.结果:HBsAg (+) ,HBeAg (+) ,HBcAb(+)患者血清乙型肝炎病毒DNA阳性率为99%,平均浓度为1.78×107拷贝/mL;HBsAg (+), HBe Ab (+),HB cAb(+)患者中血清乙型肝炎病毒-DNA阳性率为30%,平均浓度为1.56×104拷贝/mL;两者之间乙型 肝炎病毒DNA浓度有显著性差异. HBsAg (+), HBcAb(+)患者血清乙型肝炎病毒DNA 阳性 率为21%,平均浓度为1.27×104拷贝/mL.结论:血清乙型肝炎病毒平均水平 与乙型肝炎病毒标志物表现模式有关,荧光定量聚合酶链反应具有快速,特异,灵敏等优点 ,可检测乙型肝炎病毒的真实感染及复制情况,对乙型肝炎的诊断、治疗及预防具有较大的临床意义.
关键词： 乙型肝炎病毒 荧光定量聚合酶链式反应 乙肝标志物 -
甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR标准阳性模板的构建
目的 制备甲型H1N1流感病毒核酸检测标准阳性模板,将其应用于日常甲型流感病毒荧光定量PCR(RT-PCR)检测中.方法 根据甲型H1N1流感病毒基因序列设计出M、HA、NA片段的全基因扩增引物,采用RT-PCR方法扩增以上3个基因片段,将3个目标片段分别连接到PGM-T载体上构建重组质粒,筛选出分别含M、HA、NA基因阳性质粒,将以上阳性质粒两两连接,后制备成含M、HA、NA基因的标准阳性模板.结果 此模板在-20℃保存3个月对荧光定量PCR结果无显著影响,具有较好的稳定性,Ct值大变异系数为1.30％.使用该模板建立的定量范围为1×1010 copy/ml～1×1019 copy/ml,标准曲线方程为:y=-2.7232x +40.99.检测方法表明该标准阳性模板具有良好的特异性.结论 本次制备成的标准阳性模板适用于各甲型H1N1流感病毒检测实验室的质量控制,可用于临床诊断.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 标准模板 荧光定量聚合酶链式反应 -
2013年-2015年舟山海岛地区人乳头状瘤病毒E6/E7基因变迁分析
目的 调查和分析2013年-2015年舟山地区妇女的人乳头状瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA阳性率变迁.方法 选取2013年1月-2015年12月在本院就诊的本地常住妇女503例,采集宫颈脱落细胞,荧光定量PCR法检测HPV E6/E7 mRNA表达,以HPV E6/E7 mRNA＞ 103为阳性.结果 共计HPV E6/E7 mRNA阳性88例,总阳性率为17.49％.≤30岁组中,2015年的HPV E6/E7 mRNA阳性率高于2014年,差异有统计学意义(x2=4.08,P＜0.05),≥41岁组中,2015年的HPV E6/E7 mRNA阳性率高于2014年,差异有统计学意义(x2=8.92,P＜0.01).2015年的乡村组HPV E6/E7 mRNA阳性率高于2014年,差异有统计学意义(x2=11.14,P＜0.01).结论 舟山地区≥41岁和乡村妇女是HPV E6/E7 mRNA阳性高发人群,有必要对其加强宫颈癌病变监控.
关键词： 人乳头状瘤病毒 荧光定量聚合酶链式反应 E6/E7基因 -
2012年-2013年宁波地区小海产品肠道病毒污染调查
目的 调查宁波地区所售小海产品诺如病毒和甲型肝炎病毒的污染情况,为腹泻和甲肝的暴发作出预警.方法 2012年和2013年,分别从宁波市5个地区的市场共采集小海产样品220份和274份,利用荧光PCR反应来检测诺如病毒和甲型肝炎病毒的核酸.结果 2012年在220份样品中检测到10份被诺如病毒污染的样品,未检测到被甲型肝炎病毒污染;2013年在274份样品中检测到3份被诺如病毒污染的样品和1份被甲型肝炎病毒污染的样品.结论 宁波地区所售小海产品甲型肝炎病毒污染情况并不严重,但是要加强对诺如病毒的监测.
关键词： 诺如病毒 甲型肝炎病毒 荧光定量聚合酶链式反应 海产品 -
温州市首例X群流行性脑膜炎奈瑟菌的病原学分析
目的 了解和掌握温州市首例X群流行性脑脊髓膜炎病例中分离到的脑膜炎奈瑟菌病原学特征.方法 对标本进行常规培养和鉴定后,利用血清学和荧光定量PCR方法鉴定分群,采用K-B纸片扩散法进行体外药敏实验.结果 该病例证实为X群脑膜炎奈瑟菌引起的脑膜炎病例.采用荧光定量PCR方法对该菌株进行分群,结果与血清学鉴定一致.该菌株对替卡西林、呱拉西林、氨苄青霉素、阿莫西林、头孢噻吩、头孢噻肟、先锋必、美罗培南、红霉素、强力霉素、氧氟沙星、利福平12种抗生素敏感;对萘啶酸、吡咯酸、甲氧苄胺嘧啶、新诺明、多黏菌素B、万古霉素则耐药.结论 该病例为温州市首例X群流脑,荧光定量PCR方法对流脑菌株进行分群具有一定的意义,同时应关注流脑新血清群的耐药性变化趋势.
关键词： X群脑膜炎奈瑟菌 荧光定量聚合酶链式反应 药敏试验 血清分群 -
河北省2012年-2013年流脑病例病原学监测及分子分型研究
目的 对河北省2012年-2013年流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例病原学监测结果进行分析,了解脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)的菌群种类及分子分型特征.方法 对2012年-2013年从流脑病例中分离的脑膜炎奈瑟菌菌株进行培养、生化鉴定、血清学鉴定、种属及分群的荧光定量PCR检测以及多位点序列分型(MLST)和porA基因分型研究;并对2012年-2013年流脑病例的脑脊液和血清标本进行种属、分群的荧光定量PCR检测及MLST分析.结果 2012年-2013年,从流脑病例中共检测出B群5例,C群14例,W135群2例;MLST结果显示除1例没有所属的克隆群外,其余16例标本均属于ST-4821克隆群;6株Nm菌株的porA基因分属于不同的型别.结论 河北省2012年-2013年流脑病例以C群为主,B群流脑呈现增长趋势,本省首次出现了W135群流脑病例,病例大都为高致病性ST-4821克隆群,提示应加强本省Nm的监测.
关键词： 流行性脑脊髓膜炎 脑膜炎奈瑟菌 荧光定量聚合酶链式反应 多位点序列分型 porA -
太原地区乙肝病毒基因分型与临床指标的相关性分析
目的 了解太原地区乙肝病毒感染者HBV基因型分布情况,分析HBV基因型与HBeAg、HBV DNA载量等临床指标之间的关系.方法 采用TRFIA技术检测103例乙肝病毒感染者的血清标志物;实时荧光法检测HBV基因型;荧光定量PCR法测HBV DNA载量;统计学分析HBV基因型与其临床指标之间的相关性.结果 所有感染者中,94例被分型,C型占70.2％,B型占24.5％.HBeAg阳性56例,HBeAg阴性38例,其中B型感染者HBeAg阳性有7例(30.4％),C型48例(72.7％);HBV DNA高载量感染者共检出62例,B型检出率为65.2％,C型检出率为66.7％;统计学结果表明HBV基因分型与感染者的性别、年龄差异无统计学意义(P＞0.05),但与HBeAg及HBV DNA载量差异有统计学意义(P＜0.05).另大三阳感染者中47例为HBV DNA高载量,检出率显著高于小三阳感染者.结论 太原地区乙肝病毒感染者HBV基因型以C型为主,且基因分型与HBeAg和HBV DNA载量有一定相关性.
关键词： 乙型肝炎病毒 基因分型 荧光定量聚合酶链式反应 乙肝病毒e抗原 乙肝病毒基因载量 -
婴儿癫(癎)与人巨细胞病毒感染的关系
目的 探讨婴儿癫(癎)与人巨细胞病毒(HCMV)感染的关系.方法 采用荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿癫(癎)52例及健康儿童20例尿HCMV-DNA,比较HCMV阳性与HCMV阴性癫(癎)患儿头颅CT、脑干听觉诱发电位(BAEP)异常率.结果 婴儿癫(癎)组HCMV-DNA检出率为59.62%(31例),对照组为30%(6例),二者比较有显著差异(P＜0.05).HCMV阳性癫(癎)组头颅CT、BAEP异常率(54.84%、25.81%)远高于HCMV阴性癫(癎)组(23.81%、4.76%)(Pa＜0.05).结论 HCMV感染可能是婴儿癫(癎)的重要致病因子之一,其感染导致的脑组织损伤在婴儿癫(癎)的发生发展中可能起重要作用.
关键词： 巨细胞病毒 人 癫(癎) 婴儿 荧光定量聚合酶链式反应 -
荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿尿液人巨细胞病毒DNA对人巨细胞病毒感染的诊断意义
目的 探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测婴儿尿液人巨细胞病毒(HCMV) DNA水平对婴儿HCMV感染的诊断价值.方法 采用FQ-PCR检测348例临床疑似HCMV感染婴儿尿液中HCMV DNA水平.同时采用化学发光免疫分析法(CLIA)检测婴儿血清HCMV-IgM抗体.在尿液HCMV DNA检测阳性患儿中比较血清HCMV-IgM抗体检测阳性与阴性患儿尿液中HCMV DNA拷贝数差异.结果 FQ-PCR检测尿液HCMV DNA的阳性率为 41.74%,CLIA检测婴儿血清HCMV-IgM抗体的阳性率为19.83%.2种方法对HCMV感染诊断的符合率为76.7%.前者诊断阳性率显著高于后者(χ2=69.44 P＜0.01).在尿液HCMV DNA检测阳性患儿中,IgM抗体阳性组尿液HCMV DNA拷贝数显著高于阴性组(P＜0.01).结论 FQ-PCR检测尿液HCMV DNA是早期诊断婴儿HCMV感染的敏感有效的方法.HCMV感染婴儿尿液中高HCMV DNA拷贝数与活动性HCMV感染密切相关;FQ-PCR方法检测尿液HCMV DNA水平对于判断是否为HCMV活动性感染具有一定意义.
关键词： 荧光定量聚合酶链式反应 化学发光免疫分析法 巨细胞病毒 人 -
FQ-PCR检测小鼠肝癌模型中Cyclin E mRNA方法的建立
目的:建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测小鼠肝癌模型中细胞周期蛋白cyclin E mRNA的方法.方法:以cyclinE和β-actin的PCR产物为阳性模板,分别将二者cDNA产物进行10倍梯度稀释,建立双标准曲线,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测cyclin E和β-actin mRNA含量,对熔解曲线进行分析确定扩增产物的特异性.结果:建立的标准曲线线性关系良好,相关系数r均为-1.00,cyclin E和β-actin扩增效率分别为0.91和0.93,熔解曲线分析显示均为单峰,特异扩增产物的Tm值分别为(81.84±0.28)℃和(89.15±0.26)℃.10-4 Cyclin E和β-actin cDNA标本日间变异系数(CV)和批内CV分别为1.02％、1.45％和0.90％、1.48％.结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测cyclin E mRNA是一种方便快捷、经济实惠、灵敏度高、特异性好的方法,为cyclin E的进一步研究奠定方法学基础.
关键词： 荧光定量聚合酶链式反应 SYBR Green Ⅰ 细胞周期素E 肝癌 -
荧光定量PCR测定端粒长度
目的 应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)方法测定端粒长度.方法 选取9种人类细胞株,提取基因组DNA,采用Q-PCR方法测定相对T/S比率,DNA印迹法测定末端限制性片段(TRF)长度,进行二者之间的相关性分析.结果 定量PCR测定端粒长度相对T/S比率为0.68±0.57,DNA印迹法测量平均TRF值为8.57±2.34,两种方法测定结果的相关性分析R~2=0.7807(P＜0.01).结论 采用荧光定量PCR方法测量端粒长度具有重复性好、省时、简便、可靠的特点,可高通量处理大量样品.
关键词： 荧光定量聚合酶链式反应 端粒长度测定 T/S比率 -
两种检测乙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应比较
目的:评价普通聚合酶链式反应(C-PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)的临床应用价值.方法:用C-PCR和FQ-PCR分别检测249例乙型肝炎患者和51例健康体检者血清HBV DVA.乙型肝炎血清学标志物用ELISA测定.结果:用C-PCR和FQ-PCR检测HBV DVA阳性率分别为:HBeAg(+)组80.50%和100.00%(P<0.01);抗HBe(+)组17.39%和82.60%(P<0.01);HBeAg(-)抗HBe(-)组14.51%和40.32%(P<0.01).健康体检者两法均为阴性.结论:FQ-PCR对乙型肝炎诊断、传染性的判断和抗病毒药物疗效评价方面比C-PCR更具有临床应用价值.
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血清CMV DNA荧光定量PCR方法的建立与初步应用
人巨细胞病毒(CMV)检测方法多样,各有优缺点,适合不同的检测目的[1-4].寻找能区分CMV潜伏性感染与活动性感染的常规检测方法是目前临床CMV检测亟待解决的问题.本研究使用TaqMan探针定量检测技术,建立了血清CMV DNA定量检测方法.
关键词： 巨细胞病毒 荧光定量聚合酶链式反应 -
Alzheimer病相关基因及其分子生物学诊断的研究进展
与Alzheimer病有密切关系的基因有载脂蛋白E基因、淀粉样蛋白前体基因、早老素1和2基因、α2巨球蛋白基因、低密度脂蛋白受体相关基因、α1抗凝乳蛋白酶基因等,这些基因本身的频率、突变、多态性或表达对Alzheimer病的发病机制和基因诊断有重要意义.近年来,从实验方法中寻找一种无创性的生前诊断方法已初见成效,荧光定量PCR法将有望成为更有效的检测Alzheimer病的诊断方法.
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HBV-DNA定量与乙肝标志物结果对比分析
目的探讨血清中HBV-DNA定量与乙肝标志物(HBV-M)之间的关系及临床意义.方法采用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)和ELISA法分别检测535例病人的血清HBV-DNA含量和HBV-M,并对结果进行对比分析.结果HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率88.8%(207/233),平均拷贝教1.0×108/m1.HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率31.6%(50/158),平均拷贝数6.2×106/m1.HBsAg(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率21.7%(15/69),平均拷贝数1.8×106/m1.HBeAb(+)、HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率6.2%(1/16),平均拷贝数3.2×103/ml.全阴性组血清HBV-DNA检出率5%,平均拷贝数2.0×103/ml.结论同时检测血清乙肝标志物和HBV-DNA,对临床HBV感染、复制及传染性的判断具有重要意义.
关键词： HBV-DNA 荧光定量聚合酶链式反应 乙肝标志物 ELISA
