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2009-2014年深圳市甲型H1N1流感病毒系统进化及分子变异研究
目的 了解2009-2014年深圳市甲型H1N1流感病毒的系统进化及分子变异情况.方法 选取深圳市2009-2014年间分离的41株甲型H1N1流感病毒毒株,提取核酸后利用RT-PCR对其HA基因进行扩增,测序后利用ClustalW 2和MEGA 5.2软件进行序列分析.结果 2009-2014年深圳市分离毒株出现了多个遗传分支,其中2011年同时出现了2个分支.2014年分支与疫苗株"A/California/7/2009"在进化树上相距较远,HA1片段出现了多个氨基酸位点的变异,但变异的位置较为散乱,在抗原决定簇区域内只有N125S、K163T/N/Q、S185T、S203T四个变异,在受体结合区222位的D出现了与重症相关联的N/G/E多元突变.结论 随着年份的递增,甲型H1 N1流感病毒在不断的变异,未来很可能会进化形成一个新的优势流行株.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 流感病毒 系统进化 分子变异 -
甲型H1N1流感病毒感染患者气管插管的护理探讨
目的 研究甲型H1N1流感病毒感染患者气管插管的护理探讨分析.方法 选择回顾性研究方法,选取2010年10月到2014年11月之间来我院进行甲型H1N1流感病毒感染治疗的患者42例,其中男25例,女17例,年龄28 ～ 48岁,平均年龄(34.5±1.4)岁.按1∶1的随机方式分为治疗组和对照组,每组21人.接受气管插管护理后比较2组患者的并发症情况.结果 治疗组经气管插管后发生并发症有3例(14.3％),未发并发症的有18例(85.7％);对照组经气管插管后发生并发症有10例(47.6％),未发并发症的有11例(52.4％),治疗组患者在接受气管插管护理后并发症少于对照组(P＜0.05).结论 甲型H1N1流感病毒感染患者气管插管的护理可能与插管气道评估、气管清洁及医患之间的配合等因素有关.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 气管插管 护理 -
2011-2017年河北省甲型H1N1流感流行特征分析
目的掌握河北省甲型H1N1流感的流行特征,为流感防控提供科学依据.方法通过中国流感监测信息系统收集河北省2011年4月至2017年3月流感及流感样病例(influenza-likeillness,ILI)监测数据进行统计分析.结果共检测ILI标本77 008份,甲型H1N1流感病毒核酸阳性2 699份,阳性率3.50％.对2 699例甲型H1N1流感病例进一步分析显示:全省11个地市均有该病例检出,男女比例为1.09:1,各年龄组均可发病,检出率高的是25～59岁组,低0～4岁组.2011年11月至2017年3月共出现4次流行,具有明显的季节性,且呈单峰性.各年度均有甲型H1N1流感病例检出,甲型H1N1流感分别是2012-2013、2013-2014和2016-2017年度的优势病原.结论河北省甲型N1N1流感流行具有明显的季节性,冬春季流行,近年来感染以5～14岁年龄组为主.
关键词： 流感样病例 甲型H1N1流感病毒 流行特征 -
4种甲型H1N1流感病毒试剂盒检测效果对比分析
目的 对比分析4种甲型H1N1流感病毒检测试剂盒的实际检测效果,为试剂盒的开发和改良提供参考.方法 采用Real-time RT-PCR法检测甲型H1N1流感病毒,利用SPASS 13.0软件进行数据分析.结果 不同检测试剂盒其检出阳性率不同,其中试剂盒A和试剂盒C的检出阳性率均为100％,试剂盒B为95％,而试剂盒D检出阳性率仅为80％.以单个指标为研究对象,经方差分析及SNK检验,显示4种检测试剂盒对每个指标的检测效果都存在显著差异,其扩增效率有明显不同.结论 试剂盒A、B和C均可检测甲型H1N1流感病毒而试剂盒C灵敏性稍高更适宜用于初筛,试剂盒D技术上需要进一步改进.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 试剂盒 检测效果 逆转录聚合酶链反应 -
浙江省近年甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因序列分析
目的 分析浙江省2009-2013年初甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因(NA)序列进化特征.方法 提取浙江省2009-2013年初29株甲型H1N1流感病毒基因组RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NA基因,测序并拼接出ORF.以浙江省不同年份与地域15份代表性毒株NA序列和GenBank数据库中选取的22株2009-2012年国内外甲型H1N1流感病毒NA基因序列,采用MEGA 5.1软件对其进行序列比对并构建种系发生树.结果 扩增并测序获得29株甲型H1N1流感病毒的NA基因ORF的全长序列,与国内外甲型H1N1流感病毒NA序列比对后显示序列的同源性较高,浙江省毒株与北美早期甲型H1N1流感病毒典型代表株A/California/04/2009(H1N1)的同源性为98.20％ ～99.50％,其中采集于2012年末和2013年初的4份病毒NA与A/California/04/2009(H1N1)的同源性为98.63％ ～99.14％.在1株采集于2010年1月的甲型H1N1流感病毒NA的基因序列中发现可导致奥司他韦耐药的H275Y突变基因型.结论 虽然浙江省后期的甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因累积了更多的变异,但所有毒株之间基因同源性仍然较高,所有毒株的神经氨酸酶基因同源性达到98.20％及以上,序列分析结果证实1份毒株携带奥司他韦耐药基因型突变.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 神经氨酸酶 序列分析 种系发生树 -
2009年北京市昌平区甲型H1N1流行性感冒病毒监测结果分析
目的 及时了解北京市昌平区2009年流感样病例中甲型H1N1流感病毒感染情况.方法 依据<甲型H1N1流感病毒RT-PCR检测技术标准操作规程>,应用一组寡核苷酸引物和双重标记的TaqMan(R)探针,对呼吸道鼻咽拭子标本中的甲型H1N1流感病毒核酸进行定性检测[实时荧光定量(RT-PCR)法检测甲型H1N1流感病毒].结果 2009年5月18日至11月29日共检测流感样病例标本3647份,检测出甲型H1N1流感病毒核酸阳性标本214份(阳性检测率为5.87%),7月27日检出首例甲型H1N1流感病毒核酸阳性标本,9月14-27日阳性检出数多(112例).发病年龄集中在5～岁、10～岁、15～岁和20～岁组,发病人群学生占76.62%,97.40%的病例具有发热症状,其次为咳嗽(42.86%)和咽痛(31.17%)等.结论 2009年昌平区流感样病例中甲型H1N1流感病毒感染以学生为主,发病具有明显年龄、人群差异.开展甲型H1N1流感病毒核酸检测,有助于了解甲型H1N1流感病毒感染情况,为临床的诊治以及合理制定甲型H1N1流感病毒防控策略提供依据.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 流感样病例 监测 -
2013年宜春市甲型H1N1流感病毒分离鉴定及HA基因分子进化分析
目的 对2013年江西省宜春市甲型H1N1流感病毒HA基因序列及其编码的氨基酸序列进行分子进化分析,为防控甲型H1N1流感大流行和常规监测提供科学根据.方法 随机选择11株2013年宜春市疾病预防控制中心流感监测实验室分离到的甲型H1N1流感病毒毒株,提取病毒RNA,One-step RT-PCR扩增HA基因并双向测序.以世界卫生组织疫苗推荐株A/California/07/2009(H1N1)(GenBank:CY121680)和几株国内外近几年分离的流感甲型H1N1毒株的HA基因为参考序列,采用DNAStar7.0和Mega 5.0软件对HA基因及其编码的氨基酸序列进行比对,绘制分子进化树,进行HA变异分析.结果 2013年宜春市11株所测甲型H1N1流感病毒与疫苗推荐株亲缘性较近,进一步参考几株国内外近几年分离到的流感甲型H1N1毒株,HA没有发生较大变异;其HA基因序列二硫键、糖基化位点未发生变异;尽管有7株毒株同时在抗原决定簇区A区和受体结合位点130环或其附近发生单个位点氨基酸替换变异,但未形成流行病学变异新种.结论 目前的甲型H1N1流感疫苗仍对人群有保护作用,而抗原决定簇和受体结合位点的变异提示仍需要密切关注甲型H1N1流感的再次流行.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 HA基因 序列分析 分子进化 -
输入性甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因变异分析
目的 分析口岸输人性甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因特征及变异趋势,及早发现变异株.方法 选取广东口岸入境人员中检出的64份输入性甲型H1N1流感阳性样本,对其病毒NA基因进行核苷酸序列测定.与2009年甲型H1N1流感代表株A/California/04/2009/H1N1的NA基因序列进行对比,对甲型H1N1流感病毒的NA基因进化树、核苷酸序列同源性、氨基酸序列的变异及蛋白分子结构变化等进行分析.结果 NA基因进化树分为3个分支,其中2009年、2010年病毒聚集成簇位于分支1,2011年病毒则与部分2010年检出的病毒位于较远距离的分支2和3.检出的1例病毒NA氨基酸的抗原决定簇上发生Y155H的变异,部分病毒NA蛋白在42位点上新增了一个糖基化位点,在68、386位点出现了糖基化位点的缺失.氨基酸G41R、V106I、V241I、N248D、I365T、N369K等位点的变异较为显著,但未见耐奥司他韦病毒的出现.结论 甲型H1N1流感病毒NA基因已发生一定程度的变异.随着突变的不断积累,病毒极可能会通过改变其抗原性和耐药性,从而引起新的流行.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 NA基因 变异 输入性 分析 -
焦磷酸测序技术在检测甲型H1N1血凝素基因裂解位点突变中的应用
目的 基于焦磷酸测序技术建立甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因裂解位点突变的快速检测方法,探讨其临床应用价值.方法 采用RT-PCR扩增甲型H1N1病毒血凝素基因中的HA片段,在生物信息学分析的基础上,针对甲型H1N1病毒血凝素基因含有裂解位点序列片段,分别设计一套生物素标记的PCR引物和测序引物,运用焦磷酸测序技术对含甲型H1N1病毒裂解位点基因片段进行序列测定,同时分析青岛地区甲型H1N1流感病毒流行株的裂解位点基因特征.结果 建立了基于焦磷酸测序技术检测甲型H1N1流感病毒裂解位点突变方法,实现甲型H1N1流感病毒HA基因裂解位点的高通量检测,青岛地区甲型H1N1流感病毒裂解位点344氨基酸序列没有发生变异.结论 本研究所建立的方法具有自动化程度高和结果准确等特点,适用于甲型H1N1流感病毒裂解位点进行快速高通量检测.
关键词： 焦磷酸测序技术 甲型H1N1流感病毒 血凝素(HA)基因 突变 裂解位点 -
焦磷酸测序技术在检测甲型H1N1流感病毒基因突变中的应用
目的 基于焦磷酸测序技术建立一种快速、简单、高通量检测甲型H1N1流感病毒HA基因受体结合多突变位点的方法,以分析其基因变异的情况.方法 用狗肾传代细胞(MDCK细胞)分离病毒,用RT-PCR扩增H1N1病毒血凝素基因中的HA1片段,在生物信息学分析的基础上,针对血凝素基因含有受体结合位点的序列,分别设计一套生物素标记的PCR引物和测序引物,运用焦磷酸测序技术对含H1N1病毒受体结合位点基因片段进行序列测定,同时分析青岛地区甲型H1N1流感病毒流行株的受体结合位点基因特征.结果 建立了基于焦磷酸测序技术的甲型H1N1流感病毒多突变检测方法,实现甲型H1N1流感病毒HA1基因受体结合位点的高通量检测.青岛地区甲型H1N1流感病毒受体结合位点204、239氨基酸序列还没有发生变异.结论 本方法可准确、高通量、快速检测甲型H1N1流感病毒HA1基因受体结合位点突变,为甲型H1N1流感病毒的监测提供一种有效的方法.
关键词： 焦磷酸测序技术 甲型H1N1流感病毒 突变 HA1基因受体结合位点 -
三种实时荧光RT-PCR试剂在检测甲型H1N1流感病毒中的应用
[目的]结合WHO公布的甲型H1N1流感病毒的检测引物和探针,探索合适的实时荧光RT-PCR试剂应用于国境口岸甲型H1N1流感病毒疑似标本的检测.[方法]通过对连续梯度稀释阳性对照品进行检测,从而分析AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript 3种常用实时荧光RT-PcR试剂的灵敏度、信号强度、反应效率等因素.[结果]3种试剂的检测下限均为1:1000倍稀释阳性对照品;AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript检测的线性斜率分别为-5.517、5.214和-4.600;信号强度上Qiagen QuantiTect相对于其他2种明显偏弱.[结论]为国境口岸输入性甲型H1N1流感病例的检测和监控提供了有力的技术保障.
关键词： 实时荧光RT-PCR 甲型H1N1流感病毒 灵敏度 斜率 阈值循环 -
甲型H1N1流感患者的护理现状与发展
目的:为了提高甲型H1N1流感患者的护理水平,有效控制甲型H1N1流感的传播.方法:根据近期甲型H1N1流感相关信息进行了收集和分析,在此理论基础上提出了甲型H1N1流感患者护理的相关理论和经验.结果:甲型H1N1流感是可防、可控的.结论:提高甲型H1N1流感患者的护理水平,能有效控制甲型H1N1流感的传播.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 护理 -
2009-2011年杭州地区甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因的遗传进化分析
目的 了解2009年7月以来杭州地区甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因(NA)的变异情况,分析其遗传进化特征.方法 在流行季节采集发热病人咽拭子样本,经病毒分离培养及亚型鉴定后,用特异性引物扩增NA基因,测序并分析其遗传进化特征.结果 2009年7月至201 1年3月,共检测监测样本1 898份,流感病毒阳性率为37.9%.期间经历了两次甲型H1N1流感病毒流行高峰.各时间段分离株间NA基因高度同源,序列相似性97.9%～100%,但2010/2011年流行株在进化树上分为两支,且与2009/2010年流行株遗传距离相对较远.进一步分析后发现,虽然耐药位点、酶活性位点及其附近氨基酸相对保守,但多个氨基酸变异发生于抗原决定簇上,且增加了NA蛋白茎部第42位糖基化位点.结论 结果预示着酶抑制剂类药物对预防和治疗甲型H1N1流感病毒仍将有效,但在开发新疫苗时应该尽可能的避开已经发生漂变的抗原决定簇.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 神经氨酸酶 遗传进化 突变 -
北京市甲型H1N1流感病毒病原学监测分析
目的 分析北京市2009年5-12月甲型H1N1流感病毒检测结果,探讨流感大流行时期甲型H1N1流感病原流行病学特征.方法 2009年5月1日至2009年12月27日,共采集101 852份咽拭子样本,北京市传染病网络实验室利用荧光定量PCR方法检测,并做统计分析.结果 101 852份检测样本中,甲型H1N1流感病毒核酸阳性9843份,总阳性率为9.66%,其中5-6月阳性率为2.85%,7-8月阳性率为3.32%,9-10月阳性率为8.35%,11月阳性率为29.67%,12月阳性率为24.33%.可疑病例排查阳性率为8.40%,病例密切接触者阳性率为4.75%,门诊流感样病例(ILI)阳性率为11.46%,聚集性发热病例及其他病例阳性率为7.33%.年龄分布以5～14岁和15～24岁年龄段为主,男女性别构成比为1.5:1.结论 北京市2009年5-11月甲型H1N1流感病毒感染呈持续上升,12月呈下降趋势,具有一定的流行病学特征.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 荧光定量PCR 病原学 -
长沙市2009年甲型H1N1流感病毒血凝素基因特性分析
2009年4月21日,美国疾病预防控制中心(CDC)检出2名儿童感染新甲型H1N1流感病毒~[1],该病毒属于正黏病毒科(orthomyxoviridae),甲型流感病毒属(influenza virus A),单股负链RNA病毒,由大小不等的8个独立片段组成,共编码11种蛋白,主要通过飞沫或气溶胶经呼吸道传播,极易造成流行.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 血凝素 基因特性 -
甲型H1N1病毒感染后中枢神经系统广泛脱髓鞘一例
患者女性,56岁,主诉"发烧(体温39.8 ℃)、嗓子痛",就诊时血白细胞计数14×109/L,中性粒细胞76.5%.给予头孢美唑钠抗感染治疗.入院后第一天体温正常,但仍感头痛、四肢乏力.第5天出现排尿费力,胸背部疼痛.病程第7天时主诉胸闷、气短,双下肢无力.随后2 d肢体无力加重,伴精神差、嗜睡、纳差.神经系统检查:神志清,能够清晰问答,颅神经未见异常.双上肢肌力5级,左下肢肌力4级,右下肢3级.
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七味清咽喷雾剂防治流感的药理作用
目的:观察七味清咽喷雾剂对H1N1流感病毒的防治作用及与达菲联合应用的效果.方法:体外试验采用组织细胞培养法,观察不同浓度药物对流感病毒FM1病毒株致细胞病变(CPE)的作用;体内试验采用甲型H1N1流感病毒FM1株滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,观察药物的疗效;达菲与七味清咽喷雾剂(剂量均降低50%)联合应用,观察中药的增效减毒作用.结果:①七味清咽喷雾剂对Hela和Hep-2细胞的大无毒浓度(TC0)为0.192 g·L-1,该浓度有一定缓解流感病毒的致细胞病变作用,但作用较弱;②七味清咽喷雾剂高剂量经7 d连续给药,可明显降低H1N1流感病毒感染肺炎模型小鼠血清中TNF-α含量,提高IL-2水平;③七味清咽喷雾剂中剂量与达菲(较单独应用剂量降低50%)联合应用可降低感染小鼠肺脏指数,肺脏组织病变程度明显减轻;④二者联合应用降低感染动物血中神经氨酸酶(NA)活性的作用强于单用达菲组.结论:七味清咽喷雾剂通过影响小鼠免疫功能,改善流感病毒引起的小鼠肺炎症状,降低H1N1感染小鼠的肺指数;与达菲联合应用具有增效减毒作用.
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银葛双解剂抗甲型H1N1流感病毒的作用机制
目的:研究银葛双解剂体内外抗甲型H1N1流感病毒作用机制.方法:体外实验以利巴韦林为阳性对照药物,采用流式细胞术检测银葛双解剂对甲型H1N1流感病毒所致狗肾细胞凋亡的抑制作用;体内试验以SPF级小鼠滴鼻建立肺炎模型,随机分为6组,正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、银葛双解剂高剂量组、银葛双解剂低剂量组、银葛双解剂预防+治疗组,用流式细胞术检测各组小鼠全血中T细胞亚群分类、放射免疫法测定小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.结果:在体外试验中,银葛双解剂可抑制甲型H1N1流感病毒诱导的MDCK细胞凋亡,药物浓度越高,细胞凋亡抑制率越大,银葛双解剂浓度越高,抑制作用越强;体内实验中,银葛双解剂可通过下调甲型H1N1流感病毒感染小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6的表达水平,升高甲型H1N1流感病毒感染小鼠全血中CD3+、CD4+T细胞的表达百分比,降低CD8+T细胞的表达,上调CD4+/CD8+比值.结论:银葛双解剂具有良好的抗甲型H1N1流感病毒的作用.
关键词： 银葛双解剂 甲型H1N1流感病毒 IL-6 TNF-α T细胞亚群分类 -
防感煎剂对甲型H1N1流感病毒感染小鼠死亡干预和抑制病毒的实验研究
目的:研究防感煎剂对甲型H1N1流感病毒感染小鼠死亡干预作用和体内抑制病毒效果.方法:建立甲型H1N1流感病毒感染小鼠模型,观察防感煎剂对感染小鼠死亡干预情况,血凝试验及实时荧光定量RT-PCR动态检测体内病毒含量.结果:防感煎剂对流感病毒感染小鼠有较好的死亡干预和延长存活时间作用,低、中、高剂量组的死亡率分别为66.67%、33.33%和25.0%,平均存活时间分别为8.75、11.41、12.33d.感染后第5d病毒含量达到峰值,防感煎剂各剂量组病毒含量均低于模型组,中高剂量组作用较为明显.结论:防感煎剂有较好的体内抑制甲型H1N1流感病毒作用,可以减少死亡率,延长存活时间,在2倍左右剂量浓度时抗病毒量效关系为理想.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 防感煎剂 抗病毒 -
槲皮素对甲型H1N1流感病毒诱导的A549细胞凋亡效应酶Caspase-3的影响
目的 观察银杏叶主要活性成分槲皮素对甲型H1N1流感病毒感染的人肺上皮瘤细胞A549凋亡效应酶Caspase-3的影响.方法 采用MTT法测定H1N1毒力、槲皮素细胞毒性作用、槲皮素对H1N1致A549细胞病变的抑制作用.然后用100 TCID50甲型H1N1感染A549 2 h后换用含10 mg/L槲皮素维持液继续培养,于感染后4、12、24、48 h收集细胞,提取细胞总蛋白,采用Western blot方法,应用Image-Pro Plus测定Caspase-3与β-actin灰度值,两者灰度比值为Caspase-3的相对表达量.结果 甲型H1N1 A549的TCID50为10-4.75,槲皮素A549的大无毒浓度为40 mg/L,槲皮素抑制甲型H1N1致A549细胞病变的小有效浓度为10 mg/L.在甲型H1N1感染A549细胞后4～ 48 h内,槲皮素可显著抑制Caspase-3蛋白表达,具有明显的抗凋亡作用.结论 槲皮素可通过抑制Caspase-3含量或活性而发挥抗病毒感染作用.
关键词： 银杏 槲皮素 甲型H1N1流感病毒 A549细胞 Caspase-3
