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MicroRNA-595在炎症性肠病中的表达及其意义
背景：MicroRNAs 调控异常与肠黏膜屏障损伤、肠道炎症以及肠道功能紊乱的发生有关。炎症性肠病（IBD）患者存在 microRNAs 表达异常。目的：探讨 microRNA-595（miR-595）在 IBD 中的表达及其意义。方法：纳入2012年7月—2014年7月南京军区南京总医院收治的 IBD 患者100例，其中溃疡性结肠炎（UC）63例，克罗恩病（CD）37例，根据疾病活动性分为活动期 UC（aUC）组、缓解期 UC（rUC）组、活动期 CD（aCD）组、缓解期 CD（rCD）组，选取42例同时期健康体检者作为正常对照（NC）组。采集入选者的血清和肠黏膜组织标本，采用荧光定量 PCR 检测血清和肠黏膜组织 miR-595表达水平。将分别含神经细胞黏附分子1（NCAM1）、成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）3’UTR 序列的荧光素酶报告基因质粒与 miR-595质粒共转染人结肠癌细胞株 HCT116，检测 miR-595对 NCAM1、FGFR2转录活性的影响。结果：UC 组和 CD 组血清和肠黏膜组织 miR-595表达水平较 NC 组显著升高（P <0.05）， aUC 组、aCD 组分别显著高于 rUC 组、rCD 组（P <0.05）。MiR-595可结合 NCAM1、FGFR2的3’UTR 序列以抑制两者的转录活性。结论：MiR-595在 IBD 患者血清和肠黏膜组织中表达升高并与疾病活动性相关，其通过抑制紧密连接蛋白 NCAM1和 FGFR2表达，导致肠黏膜屏障受损，促进肠道炎症发生。MiR-595可作为诊断 IBD 及其活动性评估的血清生物学标记物。
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儿童青少年精神分裂症与NCAM1基因的关联研究
目的 对通过Affymetrix Genome-Wide SNP Array 6.0全基因组芯片扫描发现,国外曾经报道与精神分裂症关联的NCAM1基因在儿童青少年精神分裂症家系中进行验证.方法 选择了100例儿童青少年发病的精神分裂症患者及其父母,通过5个NCAM1基因内的单核甘酸多态性位点(rs10891495,rs1245133,rs1821693,rs686050,rs12794326)经高分辨率溶解曲线(High Resolution Melting,HRM)进行基因分型后,用HaploView4.1软件进行统计分析.结果 未证实上述位点及所构建的单倍型与精神分裂症关联(P>0.05).结论 (1)不支持NCAM1基因与精神分裂症病因关联;(2)Affymetrix6.0全基因组SNP芯片关联分析产生的假阳性结果可经家系连锁不平衡分析验证.
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抗痫促智药物对认知功能障碍致痫大鼠海马细胞外信号调节激酶2及神经细胞黏附分子1表达的影响
目的 探讨细胞外信号调节激酶2(ERK2)及神经细胞黏附分子1(NCAM1)在癫痫认知功能障碍中的作用及抗痫、促智药物对二者作用.方法 将120只Wistar大鼠分为对照组、致痫组和卡马西平组、奥卡西平组、茴拉西坦组、盐酸多奈哌齐组治疗30 d,对照组用生理盐水造模,其余5组用匹罗卡品诱导癫痫模型,将造模成功的大鼠给予上述成药物干预模型,大鼠的学习记忆能力通过Morris水迷宫实验测试,记录逃避潜伏期和原平台象限游泳时间；并用RT-PCR法检测NCAM1、ERK2在大鼠海马组织中的mRNA表达,免疫组化法检测大鼠海马组织中NCAM1和ERK2的蛋白表达.结果 定位航行试验中,与对照组大鼠逃避潜伏期相比,致痫组[(67.14±7.37)s]＞对照组[(35.78±4.84)s](P＜0.01),其中卡马西平组与盐酸多奈哌齐组与致痫组比较,卡马西平组[(81.23±9.46)s]＞致痫组[(67.14±7.37)s](P＜0.01),盐酸多奈哌齐组[(53.75±6.74)s]＜致痫组[(67.14±7.37)s](P＜0.01).各组ERK2蛋白表达及mRNA比较为:卡马西平组＜奥卡西平组＜致痫组＜茴拉西坦组＜多奈哌齐组＜对照组.与对照组比,多奈哌齐组＞对照组(P＜0.01),茴拉西坦组＞对照组(P＜0.05).结论 ERK2在癫痫发作30 d时在海马的表达水平下降,NCAM1则相反,ERK2活性的减低和NCAM1的过度表达可能是癫痫后认知功能损害的潜在机制.卡马西平能加重癫痫认知功能障碍程度,盐酸多奈哌齐可明显改善癫痫鼠的认知功能.
关键词： 癫痫 神经细胞黏附分子1 细胞外信号调节激酶2 认知功能障碍 -
EP-CAM、N-CAM1及C-KIT与原发性肝癌分级、转移及患者预后的关系
目的 探讨上皮细胞黏附分子(epithelial cellular adhesion molecule,EP-CAM)、 神经细胞黏附分子1(neural cell adhesion molecule1,N-CAM1)及C-KIT与原发性肝癌分级、 转移及患者预后的关系.方法 收集2008年1月～2014年9月重庆三峡中心医院收治的80例原发性肝癌患者作为观察组,选择同期行手术治疗的50例肝硬化及乙型肝炎患者作为对照组,均收集患者病理组织标本,采用免疫组化法测定肝癌及对照组织EP-CAM、N-CAM1、C-KIT表达情况,并收集所有肝癌患者的临床及随访资料,分析EP-CAM、N-CAM1、C-KIT与原发性肝癌临床病理特点及患者预后的关系.结果 观察组EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性表达率均高于对照组(P<0.05);高AFP水平、 无包膜或包膜不完整、 低中分化肿瘤、 临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、 病理类型为胆管上皮癌、 混合型肝癌及出现肝内外转移的肝癌患者EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性率较高(P<0.05);Pearson相关分析显示:肝癌患者肝组织EP-CAM与N-CAM1、C-KIT表达呈正相关(P<0.05),肝组织N-CAM1与C-KIT表达呈正相关(P<0.05);肝癌患者1、2、3年生存率分别为72.50％、53.75％、37.50％,随访3年存活患者,EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性率低于1年及2年存活患者(P<0.05).结论 EP-CAM、N-CAM1、C-KIT表达水平与原发性肝癌患者AFP水平、 肿瘤包膜情况、 分化程度、 临床分期、 组织学类型及预后均有一定的关系,且参与肝癌侵袭、 转移过程.
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神经细胞黏附分子1和骨调蛋白在神经管畸形中的变化
目的 初步探究神经细胞黏附分子1和骨调蛋白在神经管畸形中的变化.方法 20只健康成年SD孕大鼠随机分为正常对照组和神经管畸形实验组,每组10只.通过胃饲维甲酸建立胚胎大鼠神经管畸形模型,检查了神经管畸形鼠体重的变化;用HE染色观察神经管畸形鼠神经管结构的变化;通过Western blot分析神经管畸形鼠组织中神经细胞黏附分子1和骨调蛋白的变化.结果 神经管畸形鼠形态偏小,体质量为(0.34±0.45)g,明显低于正常对照组(0.53±056)g.胚胎鼠在第9天神经管处于未闭合状态,在第11天已完全闭合.胚胎第9天和11天神经管畸形大鼠的神经细胞黏附分子1比正常组表达均明显增加(P＜0.01).骨调蛋白在胚胎第9d神经管畸形大鼠中的表达比正常明显增高(P＜0.01),但在胚胎第11天的表达与正常相比没有差异(P＞0.05).结论 神经细胞黏附分子1和骨调蛋白的变化可能与神经管畸形形成有密切关系.
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pHBAd-MCMV-GFP-NCAM1真核表达质粒的构建和鉴定
目的 将目的基因NCAM1与质粒载体pHBAd-MCMV-GFP进行连接,得到重组质粒pHBAd-MCMV-GFP-NCAM1.方法 对目的基因和质粒载体分别用内切酶NotI和Nsil进行双酶切,产物回收后进行连接、转化,得到重组质粒pHBAd-MCMV-GFP-NCAM1.转化后的菌液进行PCR阳性克隆鉴定,并对阳性样本进行测序.结果 首先对NCAM1进行扩增,从实验结果看符合预期效果,在双酶切、连接和转化实验后,对构建完成的重组质粒进行鉴定,PCR阳性克隆鉴定结果显示重组质粒构建成功,NCAM1已连接进入重组质粒中,测序的结果进一步印证阳性鉴定结果.结论 带有目的基因NCAM1的重组质粒构建成功.
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NCAM1与致痫大鼠认知功能障碍发病机制之间相关性的研究
目的 研究神经细胞黏附分子1(NCAMl)与癫痫大鼠认知功能障碍发病机制之间的相关性,探讨其在癫痫认知功能障碍中发挥的作用. 方法 采用随机数字表法将120只Wistar大鼠分为实验组和对照组.实验组又分为致痫组、卡马西平治疗组、奥卡西平治疗组、茴拉西坦治疗组、盐酸多奈哌齐治疗组,每组20只；采用匹罗卡品诱导癫痫模型,后4组并灌服相应药物.对照组(n=20)不造模,灌服生理盐水造模.通过Morris水迷宫实验测试大鼠的学习记忆能力,并通过RT-PCR法检测大鼠海马组织中NCAM1 mRNA表达,免疫组化法检测大鼠海马组织中NCAM1蛋白表达. 结果 各组大鼠水迷宫实验逃逸潜伏期差异有统计学意义(F=91.920,P=0.000),按长短排序为:卡马西平组＞奥卡西平组＞茴拉西坦组＞致痫组＞盐酸多奈哌齐组＞对照组.各组大鼠免疫组化及RT-PCR结果差异亦有统计学意义(F=324.510,P=0.000; F=81.160,P=0.000),按表达量多少排序为:盐酸多奈哌齐组＞茴拉西坦组＞致痫组＞奥卡西平组＞卡马西平组＞对照组. 结论 癫痫发作30d后海马的NCAM1表达水平升高,参与了癫痫认知功能障碍的发病；抗癫痫药物能加重癫痫认知功能障碍的发生,促智药物可明显改善癫痫的认知功能.
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胶原纤维、NCAM1和RUNX1在心肌桥供血心肌的表达
目的：探讨胶原纤维、神经细胞黏附分子1（NCAM1）和Runt相关转录因子1（RUNX1）在心肌桥（MB）供血心肌的表达情况。方法用Massion′s染色检测胶原纤维在无动脉粥样硬化MB供血心肌（A组）、动脉粥样硬化MB供血心肌（B组）、冠状动脉粥样硬化心脏病心肌（C组）、非心源性即刻死亡心肌中的（作为对照组，D组）分布；免疫组化检测NCAM1在上述心肌的表达情况；Western bolt检测其转录因子RUNX1的表达水平。结果 Massion′s染色显示B、C组心肌间质有较多胶原纤维，部分心肌坏死，形成纤维瘢痕；A、D组心肌间质几乎无胶原纤维。NCAM1在B组心肌表达呈阳性，呈棕黄或棕褐色，主要在细胞质及细胞膜表达；C组瘢痕灶附近心肌细胞膜及细胞质中呈阳性；A组和D组心肌表达呈弱阳性或阴性。NCAM1在A、D组供血心肌表达与B、C组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。Western bolt检测RUNX1亦有相似的表达。结论 MB存在动脉粥样硬化将导致慢性心肌缺血。
关键词： 心肌桥 供血心肌 胶原纤维 神经细胞黏附分子1 Runt相关转录因子1
